中药健胎液对围着床期小鼠IL-6表达的影响

目的:探讨细胞因子IL-6在胚胎着床障碍发生发展中的作用,以及中药健胎液促进胚胎着床对子宫内膜IL-6的影响。方法:用吲哚美辛建立胚胎着床障碍的动物模型,动物分为正常对照组(正常组),胚胎着床障碍组(模型组),中药治疗组(中药组)。观察各组着床率和着床点数,用ELISA方法检测了妊娠第5天各组小鼠子宫内膜IL-6的蛋白含量,用RT-PCR方法检测妊娠第5天小鼠子宫内膜IL-6的mRNA水平。结果:模型组的胚胎着床数、着床位点数同正常组比较显著降低(P<0.01);中药组胚胎着床数、着床位点数同模型组比较明显升高(P<0.05),但仍低于正常组(P<0.05)。模型组子宫内膜IL-6蛋白量同正常组、中药组比较明显升高,中药组IL-6蛋白量同正常组比较没有显著差异(P=0.211)。模型组IL-6 mRNA表达水平同正常组、中药组比较显著升高(P<0.01),中药组IL-6 mRNA表达水平同正常组比较没有显著差异(P>0.05)。结论:中药健胎液通过调节IL-6的表达促进着床。     

健胎液对胚胎着床障碍小鼠子宫炎性细胞因子表达的影响

目的探讨中药健胎液对子宫内膜着床微环境改善的可能分子机制。方法 90只受孕小鼠随机分为正常组、模型组、中药组各30只,模型组和中药组采用吲哚美辛皮下注射建立胚胎着床障碍小鼠模型。中药组从妊娠第1天开始用健胎液(144%无菌煎剂)灌胃,每天每只0.5ml;模型组和正常组每天用等量生理盐水灌胃。在妊娠第5天检测各组小鼠(每组10只)子宫内膜白介素-1β(IL-1β)、白介素1受体Ⅰ型(IL-1RⅠ)、白介素-6(IL-6)、白血病抑制因子(LIF)、集落刺激因子-1(CSF-1)mRNA水平,妊娠第8天检查各组小鼠(每组20只)子宫内胚胎发育情况,记录胚胎着床率和着床位点数。结果中药组和模型组的胚胎着床率、着床位点数同正常组比较显著降低(P0.01),中药组胚胎着床率、着床位点数同模型组比较明显升高(P0.05)。与正常组比较,模型组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著升高(P0.01);与模型组比较,中药组IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1 mRNA含量均显著降低(P0.05或P0.01)。结论中药健胎液通过降低胚胎着床障碍小鼠子宫内膜IL-1β、IL-1RⅠ、IL-6、LIF、CSF-1细胞因子的基因表达,改善子宫内膜微环境,促进着床。     

健胎液改善胚泡着床障碍模型小鼠实验研究

目的:观察中药健胎液对胚泡着床障碍模型小鼠胚泡着床以及子宫内膜形态学影响。方法:采用吲哚美辛引起的胚泡着床障碍动物模型,将实验动物分为正常组、中药组、模型组,观察妊娠第5天、第8天子宫内膜形态结构变化和妊娠第8天胚泡着床率、着床位点数。结果:中药组胚泡着床率、着床位点数同模型组比较明显升高。中药组妊娠第5天子宫内膜与模型组比较,内膜血管明显比模型组增加,炎性细胞明显减少,基质出现明显蜕膜样变,子宫内膜空泡、脂滴明显少于模型组。模型组妊娠第5天子宫内膜腔上皮受损,妊娠第8天腺上皮受损,中药组子宫内膜腔上皮、腺上皮均未见结构改变。结论:中药健胎液能改善子宫内膜微环境,促进胚泡着床。     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫血管生成相关因子表达的影响

目的：探讨二补助育汤对胚胎着床障碍模型小鼠子宫内膜形态及血管生成素-1（Ang-1）mRNA、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达和定位的影响。方法：24只ICR雌性小鼠随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇组、二补助育汤组,每组6只,用米非司酮建立胚胎着床障碍动物模型,各组给予相应药物灌胃,妊娠第5天处死小鼠后,检测各组妊娠率、平均着床位点数、子宫内膜Ang-1和VEGF mRNA表达量及其蛋白定位。结果：模型组小鼠平均胚胎着床位点数、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表达量明显低于空白组（均P<0.05）;与模型组比较,二补助育汤组平均胚胎着床位点数、Ang-1 mRNA、VEGF mRNA表达量显著提高（均P<0.05）。结论：二补助育汤可提高子宫内膜Ang-1和VEGF蛋白表达量,促进子宫内膜血管生成,从而提高子宫内膜容受性。     

健胎液对小鼠子宫内膜LIF表达的影响

目的 :探讨小鼠围着床期子宫内膜LIF的表达规律及健胎液对小鼠子宫内膜LIF表达的影响。方法 :小鼠胚胎着床障碍模型诱导方法及对各组小鼠干预处理同第一部分 ,取正常组、中药组、模型组小鼠妊娠第 5天子宫内膜 ,应用超敏免疫吸附法检测内膜LIF的表达情况。比较 3组小鼠子宫内膜LIF的表达情况 ,结合整合素α4,β3 亚基的表达情况 ,分析 3者在围着床期中表达的联系。结果 :中药组LIF的表达较模型组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,模型组水平最低 ,明显低于正常组 (P <0 .0 1)。中药组LIF的表达水平与正常组相近 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 0 )。结论 :健胎液对小鼠围着床期子宫内膜的LIF的表达有促进作用 ,与健胎液对α4,β3 的表达影响相同。     

电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导及胚胎着床的影响

目的观察电针对COH小鼠子宫内膜IGF-1-MAPK/ERK1/2信号转导的影响,探讨电针改善胚胎着床的作用机制。方法将昆明纯种性成熟雌性小鼠随机分成自然周期组、COH组、电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组,每组20只,每组又分为供体鼠和受体鼠。采用控制性超促排长方案制备动物模型,并行胚胎移植,电针组、电针+BMS-536924组、电针+LY-294002组于HCG注射日行电针治疗,观察临床妊娠率和胚胎着床位点数,检测子宫内膜IGF-1mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达。结果 COH组妊娠率、平均着床位点数和子宫内膜IGF-1mRNA、IGF-1R mRNA及p-IGF-1R、p-ERK1/2蛋白表达均低于自然周期组,经电针治疗后,电针组、电针+LY-294002组各项指标均显著性增高。电针+BMS-536924组p-IGF-1R和p-ERK1/2蛋白表达虽较COH组增加,但仍显著性低于其他电针治疗组,且妊娠率、平均着床位点数未见改善。结论电针调控IGF-1改善COH小鼠胚胎着床可能与上调p-IGF-1R蛋白表达,激活MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。     

少腹逐瘀汤对子宫内膜容受性不良大鼠的改善作用及机制研究

目的探讨少腹逐瘀汤对子宫内膜容受性不良大鼠的改善作用及机制。方法随机选取10只雌性SD大鼠作为对照组,其余雌性大鼠建立血瘀型子宫内膜容受性不良大鼠模型。造模大鼠随机分为模型组、戊酸雌二醇(0.27 mg/kg)组及少腹逐瘀汤低、高剂量(144、288mg/kg)组,每组9只。给药后按2∶1安排雌性、雄性大鼠合笼,妊娠第5天剖腹观察胚胎着床率、平均胚胎着床数;采用ELISA法检测子宫内膜组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平;DCF荧光法检测子宫内膜组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测子宫内膜组织丙二醛水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察子宫内膜组织病理变化,记录子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜厚度;Western blotting法检测子宫内膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体2(vascular endothelial growth factor receptor 2,KDR)蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠子宫内膜TNF-α、IL-6、IL-8、ROS、丙二醛水平均显著升高(P<0.05),胚胎着床率和平均胚泡着床数显著降低(P<0.05),子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜厚度显著降低(P<0.05),子宫内膜VEGF、KDR蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠子宫内膜TNF-α、IL-6、IL-8、ROS、丙二醛水平均显著降低(P<0.05),胚胎着床率和平均胚泡着床数显著升高(P<0.05),子宫腺体数、子宫血管数、子宫内膜厚度显著升高(P<0.05),子宫内膜VEGF、KDR蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。HE染色结果显示,相较于模型组,各给药组大鼠子宫内膜组织较为完整,少量子宫内膜上皮细胞空泡变性,腺上皮细胞排列较为规则,固有层间质内炎性细胞浸润减少,肌层肌纤维排列较整齐,其中少腹逐瘀汤高剂量组改善更显著。结论少腹逐瘀汤可减轻子宫内膜容受性不良大鼠氧化应激、炎症反应,改善子宫内膜容受性,提升胚胎着床率,其作用机制可能与调控VEGF/KDR通路有关。     

健胎液对小鼠着床期子宫内膜孕激素受体及mRNA的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫孕激素受体(PR)的影响.方法:将受孕小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,采用米非司酮诱导小鼠胚泡着床障碍,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,观察子宫内膜形态学变化,采用免疫组化技术检测子宫PR的表达,Western印迹和RT-PCR技术检测子宫PR及PR mRNA表达.结果:模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;中药组子宫内膜腺体、间质PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P＜0.05),与正常组无显著性差异(P＞0.05);中药组PR蛋白及基因表达均较模型组显著提高(P＜0.05),与正常组无显著性差异(P＞0.05).结论:健胎液通过调节胚泡着床障碍小鼠子宫PR及mRNA的表达,促进子宫内膜发育,改善胚泡着床.     

二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响

目的 观察二补助育汤对胚胎着床障碍小鼠子宫内膜自噬作用的影响.方法 将24只ICR妊娠小鼠随机分为空白组、模型组、补佳乐组、二补助育汤组,每组小鼠6只.胚胎着床障碍小鼠模型采用米非司酮制备,每组予以相应药物灌胃,妊娠第5天脱颈处死.计算各组小鼠平均胚胎着床位点数,检测自噬标志物微管相关轻链蛋白3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin-1表达,透射电镜观察子宫内膜细胞中自噬小体的表达.结果 模型组平均着床位点数低于空白组(P<0.05),补佳乐、二补助育汤组高于模型组(P>0.05).各组小鼠子宫内膜细胞中均见自噬小体,空白组见少量自噬小体表达;模型组部分细胞有破坏、坏死,内膜发育不良,细胞内自噬小体多于其他组;补佳乐组和二补助育汤组子宫内膜腺体和血管较模型组丰富,细胞内自噬小体表达虽多于空白组,但较模型组少.模型组LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白水平均低于空白组,其中LC3-Ⅱ有显著差异(P<0.05);补佳乐组和二补助育汤组LC3-Ⅱ表达高于模型组(P>0.05);二补助育汤组Beclin-1表达高于模型组和补佳乐组(P<0.05).结论 二补助育汤能够通过调节子宫内膜自噬作用,维持细胞稳态,从而利于胚胎着床.     

烟酰胺对椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原的调控作用

目的：考察烟酰胺对白介素-1β诱导的体外兔腰椎间盘退变模型中Ⅰ、Ⅱ型胶原的保护作用，并初步探讨其机制。方法：构建兔腰椎间盘组织凝胶培养模型，将其分为正常对照组，烟酰胺对照组（加入0．5mg／ml烟酰胺），退变组（加入10ng／mlIL-1β）和3个烟酰胺治疗组（加入IL-1β的同时，并分别加入0．5mg／ml，0．25mg／ml和0．05mg／ml烟酰胺）。培养3天及1周时取各组髓核和纤维环分别行Ⅰ、Ⅱ型胶原基因RT—PCR检测，培养2周时行Ⅰ、Ⅱ型胶原、iN—OS、TGF—J31及Caspase--3免疫组化检测。结果：①RT—PCR显示3天及1周时，各治疗组Ⅰ、Ⅱ型胶原表达均强于退变组，烟酰胺的保护作用随浓度增加而增强。②Ⅰ、Ⅱ型胶原免疫组化显示，各治疗组椎间盘正常结构和胶原含量均优于退变组，以大剂量烟酰胺治疗组最显著。③iNOS、Caspase--3免疫组化显示，治疗组阳性细胞染色率均低于退变组（P〈0．01）。TGF—β1免疫组化显示，治疗组阳性细胞染色率高于退变组（P〈0．01）。结论：烟酰胺能够抑制IL-1β诱发的椎间盘Ⅰ、Ⅱ型胶原表达及含量的下降，这种保护机制与其抑制iNOS、Caspase--3表达和维持TGF-β1表达的作用有关。     

天麻素对同型半胱氨酸诱导的细胞因子表达的影响

目的：研究天麻素对同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响,并对其结果与银杏叶提取物EGb761进行比较。方法：将体外培养的小鼠小胶质瘤细胞（BV-2细胞）分成空白对照组、同型半胱氨酸组、EGb761组（100mg／L）和天麻素低、中、高（2．5、5、10mmol／L）剂量组,培养72h。应用RT—qPCR方法评价IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达,酶联免疫吸附法（ELISA）测定培养上清中上述细胞因子的蛋白浓度。结果：与对照组相比,同型半胱氨酸组细胞内IL—18、IL-6和TNF—dmRNA表达和细胞培养上清液中蛋白浓度明显增加;与同型半胱氨酸组相比,EGb761组和天麻素各组细胞因子mRNA表达及培养上清液中蛋白浓度均降低,尤其是高剂量天麻素组与EGb761组作用相当,结果均具有统计学意义（P〈0．05）。结论：天麻素能抑制同型半胱氨酸诱导的小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α表达,在一定浓度条件下其作用不亚于银杏叶提取物。     

健胎液对胚泡着床障碍小鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的探讨健胎液促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜发育的机制。方法采用米非司酮诱导的小鼠胚泡着床障碍模型,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,留取血清及子宫标本,采用放免法检测血清和子宫局部雌二醇(E₂),孕酮(P)含量,采用免疫组化技术检测子宫雌,孕激素受体(ER,PR)表达。结果各组血清和子宫组织E₂,P含量无显著差异(P>0.05);中药组子宫内膜腺体、间质ER,PR表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无差异(P>0.05)。结论健胎液通过促进胚泡着床障碍小鼠子宫内膜腺体、间质的ER,PR表达,改善子宫内膜的发育,利于胚泡着床。     

杜仲苷对炎性环境下软骨细胞的增殖和Ⅱ型胶原蛋白分泌的影响

目的：观察杜仲苷对IL-1β刺激大鼠体外软骨细胞的增殖及Ⅱ型胶原蛋白分泌的影响。方法：利用IL-1β刺激建立体外大鼠软骨细胞炎性模型,实验分为空白组、IL-1β组、10μM杜仲苷组、100μM杜仲苷组、500μM杜仲苷组、1000μM杜仲苷组;空白组加入10%FBS培养液,IL-1β组加入10ng/mL IL-1β＋10%FBS培养液,4个不同浓度杜仲苷组分别加入10μM、100μM、500μM、1000μM杜仲苷＋10ng/mL IL-1β＋10%FBS培养液,分别培养48小时,采用CCK8检测软骨细胞增殖活力及Ⅱ型胶原蛋白的分泌。结果：IL-1β组的OD值低于空白组（P〈0.05）;4个不同浓度杜仲苷组的OD值均高于IL-1β组（P〈0.05）,且存在一定的量效关系;4个不同浓度杜仲苷组的Ⅱ型胶原蛋白表达均高于IL-1β组（P〈0.05）,且存在有一定的量效关系。结论：杜仲苷可以提高体外大鼠软骨细胞炎性环境下的增殖活力,促进Ⅱ型胶原蛋白的分泌,表明杜仲苷对体外大鼠软骨细胞有一定的抗炎保护作用。     

电针对人重组白介素-1β诱导的气囊炎性反应模型大鼠环氧合酶基因和蛋白表达的影响

目的:探讨电针对环氧合酶(COX)-2的干预与前炎性反应细胞因子调控途径的相关性。方法:大鼠背部埋植一个经灭菌的聚四氟乙烯空心圆柱体(容积1.5 ml)建立气囊模型,10 d后将确认无感染合格大鼠90只随机分为空白对照组、模型组、电针组。模型组与电针组向囊内注射1 ml人重组白介素-1β细胞因子造模,电针组即刻电针"曲池"穴30 min。于造模后1、52、4 h抽取各组囊内液体,分别采用RT-PCR法和Western Blot法检测各时间点COX-2 mRNA和蛋白表达。结果:注射后1 h,模型组COX-2 mRNA和蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.01),电针组COX-2 mRNA和蛋白表达明显低于模型组(P<0.05);注射后5 h,模型组、电针组COX-2 mRNA表达明显高于空白对照组(P<0.01),模型组COX-2蛋白表达明显高于空白对照组(P<0.05);注射后24 h,模型组、电针组COX-2 mRNA表达明显高于空白对照组(P<0.01),电针组COX-2 mRNA和蛋白表达与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:电针能干预人重组白介素-1β诱导的COX-2 mRNA和蛋白的表达,且即时效应明显。     

参麦注射液关节腔注射对兔骨关节炎细胞因子影响的实验研究

目的:研究参麦注射液关节腔注射对兔骨关节炎作用的机理。方法:将30只雄性清洁级新西兰白兔随机分为空白组、治疗组及对照组,治疗组及对照组予改良Hulth法造模,造模成功后,治疗组予参麦注射液关节腔注射,对照组予生理盐水注射,8周后抽取3组关节液,用Elisa法检测TNF-α、IL-1β、MMP-3。结果:对照组的IL-1β、TNF-α、MMP-3水平与空白组比较均偏高,差异有统计学意义(P0.01)。治疗组IL-1β、TNF-α、MMP-3水平高于空白组,但低于对照组,2组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:参麦注射液关节腔注射可通过降低关节液中的TNF-α、IL-1β、MMP-3来缓解骨性关节炎症状。     

当归贝母苦参煎剂对实验性慢性细菌性前列腺炎大鼠前列腺中IL-1β的影响

目的：观察当归贝母苦参煎剂对CBP大鼠前列腺组织中IL-1β含量和mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法：雄性SD大鼠60只,随机分为空白对照组、模型组、西药对照组、当归贝母苦参煎剂高、中、低剂量组6组,每组10只,前列腺背叶注射大肠埃希菌制备CBP动物模型。观测各组大鼠前列腺中IL-βl的含量和mRNA表达。结果：与模型组相比,当归贝母苦参煎剂高剂量组能明显降低CBP大鼠前列腺组织中IL-1β含量（P〈0.01）;当归贝母苦参煎剂各剂量组均能明显降低IL-1βmRNA的基因表达（P〈0.01）,且高剂量组的效果优于西药对照组,有极显著性差异（P〈0.01）。结论：减少炎症细胞因子IL-1β的产生可能是当归贝母苦参煎剂治疗慢性细菌性前列腺炎的作用机理之一。