Fas/FasL途径在柔红霉素诱导HL-60及U937细胞凋亡中作用的研究

目的；研究柔红霉素（DNR）诱导白血病细胞凋亡的机制，进一步探讨Fas/FasL 途径在DNR诱导白血病细胞凋亡中的作用。并评价sFAsL与DNR联用的致凋亡效应。方法：将DNR作用于白血病细胞系HL－60，K562，U937细胞，并用流式细胞术（FCM）检测其Fas抗原表达的改变。sFasL,DNR诱导白血病细胞凋亡，以抗Fas单抗（IgG1)阻断Fas/FasL 途径，借助原位末端标记法（TUNEL）和FCM检测白血病细胞凋亡率。结果：DNR处理HL－60，K562，U937细胞18h后，Fas表达阳性率无明显变化（P＞0．05），与sFasL联合作用后显示出协同效应，。IgG1不能阻断DNA致白血病细胞凋亡的作用，但可阻断sFasL致白血病细胞凋亡的作用。结果：DNR致白血病细胞株U937，HL－60凋亡的作用不依赖于Fas/FasL 途径，但sFasL与DNR联合应用可协同增强抗肿瘤效应。     

三氧化二砷对人髓性白血病HL-60细胞作用机制

目的：为临床治疗提供实验依据；方法：用MTT方法检测了不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对人髓性白血病HL－60细胞的生长抑制作用。结果：As2O3对HL－60细胞的抑制作用主要发生于一定浓度［（1～5）×10－5M）］和一定时间（24h内），在此期间形态学出观凋亡小体，DNA电泳可见典型的梯状带，流式细胞学分析出现亚二倍体峰；且发现低浓度的As2O3（10－6～10－7M）对HL－60细胞有诱导分化作用，As2O3对耐维甲酸的HL－60细胞亚系仍有诱导凋亡及分化作用。结论：As2O3主要通过诱导凋亡而使HL－60细胞死亡，低浓度也有诱导分化作用，且与维甲酸之间无交叉耐药性。     

苯乙酸钠诱导人白血病细胞HL60凋亡及其机制

目的探讨苯乙酸钠（NaPA）诱导人粒单核系白血病细胞株HL60细胞凋亡机制及对细胞周期各时相的影响。方法检测不同浓度NaPA对HL60细胞存活率、细胞周期、上清血小板衍化生长因子β（PDGF-β）分泌水平、凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax表达的影响。结果不同浓度NaPA作用后,HL60细胞存活率降低,PDGF-β的分泌量减少,HL60细胞阻滞在G0/G1期,Bcl-2蛋白水平降低,Bax蛋白水平上升。结论推测调节PDGF-β分泌水平及Bcl-2和Bax的表达为NaPA诱导人白血病细胞HL60凋亡的机制之一。     

三氧化二砷协同肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体抗胃癌细胞的作用及其机制

目的研究三氧化二砷（As2O3）联合肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TRAIL）对胃癌细胞生长和凋亡的影响及其机制。方法人胃腺癌细胞株SGC7901以As2O3、rsTRAIL及两者联用处理；用MTT法检测细胞生长；用双染色流式细胞仪检测细胞凋亡；用间接免疫荧光染色结合流式细胞技术检测细胞表面TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5分子表达；RT—PCR方法检测TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达。结果As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以抑制胃癌细胞SGC7901生长，并在一定范围内呈时间、剂量依赖性；联合用药组抑制率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01），金正均方法分析提示两药联用有协同抑制细胞生长效应。As2O3和rsTRAIL在单用或联用时均可以诱导胃癌细胞SGC7901凋亡，联合用药组细胞凋亡率显著高于单用As2O3或rsTRAIL组（P〈0．01）。As2O3单独或联合rsTRAIL作用于SGC7901细胞24h后，死亡受体TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5在细胞表面的表达明显上调（P〈0．01），其mRNA表达水平亦相应增加（P〈0．01）。结论As2O3联合rsTRAIL可以协同抑制胃癌细胞SGC7901生长并显著增强两药诱导胃癌细胞凋亡的作用，其机制可能是As2O3增加细胞TRAIL R1／DR4和TRAIL R2／DR5 mRNA表达、上调细胞表面TRAIL死亡受体从而增加胃癌细胞SGC7901对rsTRAIL的敏感性。     

RGD活性肽对环磷酰胺诱导HL7702正常肝细胞损伤的保护作用

目的 探讨含RGD序列的抗肿瘤多肽T30肽对环磷酰胺诱导HL7702细胞凋亡的保护作用.方法 将HL7702细胞按一定密度分别接种于96孔板和24孔板,培养24h后向各孔中分别加入环磷酰胺(CTX)(浓度为4μg/ml),CTX+ RGD-T30(浓度依次为20、40、60 μg/ml),继续培养24 h,进行WST-1、AO/EB双染、Annexin-V-FTTC/PI流式细胞染色.结果 RGD-T30肽与CTX共处理HL7702细胞生长抑制明显改善,当RDG-T30肽浓度达到40μg/ml时,促进生长作用呈现正比例曲线特征.RDG-T30肽组凋亡细胞明显减少,绝大多数细胞形态饱满,几乎没有死亡细胞.CTX单独处理的HL7702细胞组24h晚期凋亡细胞占30.2％,CTX与RDG-T30共处理细胞组凋亡细胞分别占19.2％和13.1％、7.1％.结论 T30肽对CTX诱导的HL7702凋亡具有拮抗作用.     

紫杉醇对TRAIL诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响。方法采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Western blot检测蛋白表达。结果在胃癌SGC7901细胞中,100 ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL（100 ng/ml）联合紫杉醇（7.19μg/ml,24 h的IC50剂量）引起明显的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用（P〈0.05）。TRAIL单药没有改变死亡受体5（DR5）的蛋白表达,而7.19μg/ml紫杉醇作用于胃癌SGC7901细胞后明显上调了DR5的蛋白表达。TRAIL和紫杉醇联合作用后,也有DR5蛋白的明显上调。结论紫杉醇通过上调DR5的蛋白表达增强了TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡。     

氧化苦参碱对肿瘤坏死因子诱导的人L02肝细胞凋亡的影响

观察氧化苦碱（Oxy）对rhTNF-a诱导的L02肝细胞凋亡的影响。体外培养人L02肝细胞,采用H^3-TdR法、台盼蓝染色及流式细胞仪观察Oxy对rhTNF-a引起的L02肝细胞的毒性作用影响。以rhTNF-a15ng/ml作用于细胞24h,细胞出现细胞核固缩,染色体凝集等凋亡样改变,台盼蓝染色阴性率在95%以上,应用流式细胞仪检测分析细胞周期,出现亚G1期峰（凋亡AP峰）,G2-M期细胞明显减少。同时加入Oxy时,细胞生长率明显高于rhTNF-a处理组,并呈剂量相关性,在细胞周期图上未出现明显亚G1期峰。Oxy对rhTNF-a诱导的细胞凋亡有抑制作用。     

青蒿素衍生物SM1044对急性髓系白血病细胞株HL60作用的研究

目的:探讨青蒿素衍生物SM1044对人急性髓系白血病细胞株HL60细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用及其相关机制。方法:细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测SM1044对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测SM1044对细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响;Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化。结果:SM1044能有效抑制HL60细胞的增殖,且抑制作用明显强于其他几种青蒿素衍生物,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.053μmol/L;SM1044能有效地呈剂量依赖性地诱导HL60细胞凋亡及促进线粒体跨膜电位丢失,不同浓度SM1044(0、0.05、0.1和1μmol/L)作用24 h,细胞凋亡率分别为3.15%、16.75%、32.53%和49.33%(r=0.947,P<0.05)。SM1044能活化凋亡外在途径和内在途径关键蛋白胱天蛋白酶-8(caspase-8)和胱天蛋白酶-9,进而激活凋亡执行蛋白胱天蛋白酶-3及剪切凋亡底物蛋白聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)。结论:SM1044能显著抑制HL60细胞增殖,诱导HL60细胞凋亡,其机制可能与凋亡内在途径和外在途径有关。     

Fas抗体介导的嗜酸细胞凋亡及其清除机制

目的探讨Fas单抗对嗜酸细胞(EOS)凋亡的诱导作用及凋亡EOS的清除机制。方法分离正常人外周血EOS,加入白细胞介素(IL)5与不同浓度(1～1000ng/ml)Fas单抗培养,台盼蓝拒染法和末端标记法分别检测细胞存活和凋亡变化,观察凋亡EOS能否被巨噬细胞(MΦ)吞噬。结果Fas单抗对IL-5介导的EOS存活呈浓度和时间依赖性抑制作用。高浓度的IL-5(106U/L)不能抑制Fas单抗的作用。Fas单抗(100ng/ml)处理24h后EOS即有明显的凋亡［（35±6）%］,72h后增至(96±3)%,前后比较差异有显著性（P<0.01）。Fas单抗(100ng/ml)处理24、48和72h的EOS与MΦ培养,吞噬凋亡EOS的阳性MΦ百分率分别为(20±5)%、(38±6)%和(45±6)%,MΦ吞噬新分离的EOS阳性百分率为（1±2）%,与前者比较差异均有显著性（P<0.01）。结论Fas抗体能有效诱导EOS凋亡,凋亡EOS能被MΦ所吞噬清除。     

炔类黄酮对白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响

在体外设定的不同浓度梯度和作用时间，以炔类黄酮分别作用于白血病HL-60细胞，倒置相差显微镜观察细胞形态学变化；MTT法检测细胞生长抑制率；流式细胞仪检测细胞凋亡率；琼脂糖凝胶电泳（DNA ladder）检测染色体DNA断裂情况。发现实验组细胞出现皱缩、黏附性降低、染色体凝集和边集现象；细胞生长受到明显抑制；细胞凋亡率为29．74％；DNA Ladder可见明显梯形条带。提示炔类黄酮对HL-60细胞具有显著的抑制增殖及诱导凋亡作用。     

紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制

目的 探讨紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制。方法胃癌BGC823细胞传代堵养后,取对数生长期细胞用于实验。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测Akt、p-Akt蛋白表达。结果在胃癌BGC823细胞中,100ng／ml的TRAIL可致少量的细胞凋亡,同时检测到Akt的磷酸化。紫杉醇作用胃癌BGC823细胞24h,IC50剂量为8．97μg／ml。与单药TRAIL和紫杉醇相比,TRAIL（100ng／m1）联合紫杉醇（8．97μg／ml,24h的IC50剂量）对细胞的诱导凋亡作用明显增强（P〈0．05）。免疫印迹结果显示,TRAIL（100ng／ml）作用BGC823细胞24h,活化了Akt蛋白,而8．97μg／ml的紫杉醇抑制了Akt的磷酸化。TRAII（100ng／ml）联合紫杉醇（8．97μg/ml）作用后,TRAIL引起的Akt磷酸化被抑制。结论紫杉醇通过抑制TRAIL引起的Akt磷酸化,从而增强了TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡。     

三氧化二砷对5种人类白血病细胞体外效应的比较研究

目的了解三氧化二砷(AS2O3)在体外对K562、BV173、 HL60、U937等白血病细胞生长增殖、凋亡、细胞周期的影响,并与NB4细胞进行比较.方法体外培养上述细胞株,在不同浓度AS2O3作用不同时间后以锥虫蓝拒染计数法计数细胞,绘制生长曲线;通过PI和Annexin V双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率;PI染色、流式细胞仪检测药物作用前后白血病细胞的周期分布改变.结果AS2O3明显抑制实验所用NB4、K562、BV173、U937、HL60等 5种白血病细胞的生长增殖,且其效应在2～10 μmol/L的浓度范围内均呈剂量依赖性和时间依赖性;5 μmol/L 浓度AS2O3处理48 h后细胞凋亡率分别为K562(14.6±2.5)%、BV173(19.4±3.1)%、U937(13.8±3.6)%、HL60(18.2±4.0)%,与NB4细胞(41.8±2.6)%比较,差异有统计学意义(均P＜0.01). 以5 μmol/L 浓度的AS2O3经24 h处理,NB4细胞的周期改变以亚G1峰增加为主(5.2%∶36.2%);BV173细胞以G0/G1期细胞比例的增加为主(55.2%∶71.7%),K562细胞及U937细胞以G2/M期细胞比率增加最为明显(分别为22.6%∶45.8%,15.7%∶48.6%).结论在本实验浓度范围内AS2O3对5种白血病细胞株均具有明显生长抑制作用,对不同白血病细胞抑制生长的机制不同,NB4细胞以诱导凋亡为主,K562、BV173、U937白血病细胞以诱导周期停滞为主.提示周期停滞而凋亡不足是AS2O3对NB4以外白血病细胞体外效应的普遍特点;探讨周期停滞及凋亡耐受的机制对提高这些白血病细胞的AS2O3敏感性具有重要意义.     

NF-κB p65 siRNA对肝癌细胞株SM-7721凋亡和Bcl-2、Atg5、Beclin-1基因表达的影响

目的探讨NF-κB p65小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞的凋亡诱导作用及其分子机制。方法取对数生长期肝癌细胞株SM-7721转移、铺板于6孔板中,待细胞生长至满60%~80%视野时随机分为siRNA组、5-氟尿嘧啶（5-Fu）组及对照组,siRNA组先采用NF-κB p65 siRNA进行转染试验,48 h后加入质量浓度为100 ng/ml的5-Fu作用24 h;5-Fu组仅予同质量浓度的5-Fu作用24 h;对照组不行特殊处理。用流式细胞仪检测三组肝癌细胞凋亡率,用RT-PCR法检测三组Bcl-2、Atg5和Beclin-1基因表达。结果 siRNA组、5-Fu组及对照组细胞凋亡率分别为82.3%±5.6%、50.6%±4.5%、8.3%±2.4%,两两比较P均〈0.05;与5-Fu组和对照组比较,siRNA组Bcl-2基因表达显著降低,Atg5和Beclin-1基因表达显著升高（P均〈0.05）。结论 NF-κB p65 siRNA可通过下调凋亡抑制基因表达、上调自噬基因表达诱导肝癌细胞凋亡、增强化疗敏感性;此为肝癌的靶向治疗提供了理论依据。     

人参皂甙-Rh2对Ara—c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响

目的探讨人参皂甙单体Rid（GS—Rh2）对阿糖胞苷（Ara—c）抗白血病作用的影响。方法体外培养人髓性白血病细胞株（HL60）并随机分为三组,其中Ara．C组加入终质量浓度分别为5．0-40．0μg／ml的Ara-c,GSRh2组加入终质量浓度为4．0～32．0μg／ml的GS-Rh2,联合组加入终质量浓度为4．0μg／ml的GS—Rh2及上述质量浓度Ara—C。48h后采用MTT法测定三组HL60细胞的增殖抑制率（IR）,并计算半数抑制浓度（IC50）、合用指数（CI）、增效倍数及合并效应与期望合并效应的比值（q）;倒置显微镜及常规瑞-吉染色法观察细胞凋亡形态。结果Ara-c组、GSRh2组的IC如分别为32．0、13．0,联合组Ara-c的IC50为14．5μg／L,显著低于Ara-c组（P〈0．001）;联合组CI为0．76,4．0μg／ml GSRh2对Ara—c的增效倍数为2．21,Ara-c质量浓度为5．0、10．0、20．0、40．0μs／ml时的q分别为1．42、1．39、1．36、1．21;联合组细胞凋亡形态较其他两组明显。结论GSRh2可提高HL60细胞对Am-c的敏感性,减少Ara—C的临床用药剂量和毒副作用,加强Ara-c的疗效;此为临床治疗白血病提供了新的思路。     

放线菌素D诱导人离体HL7702肝细胞株凋亡及其作用机理

目的 探讨放线菌素D（ActD）诱导正常人HL7702肝细胞凋亡及PI3K／Akt信号通路对此过程的作用。方法 采用HL7702正常人肝细胞株，MTT法检测ActD对其存活力的影响；Hoechst33342形态学染色；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；Western blot方法检测细胞总Akt（丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶）及p-Akt蛋白表达。结果 ActD可诱导HL7702肝细胞凋亡，其浓度在0．25～8μg／ml范围内呈现剂量效应关系；PI3K／Akt特异性抑制剂wortmannin能够增强ActD诱导的肝细胞凋亡。结论 ActD可诱导肝细胞凋亡，其机理可能是抑制PI3K／Akt信号通路。     

TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用

目的探讨人恶性胶质瘤细胞株LN215细胞对TRAIL的敏感性及TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用。方法培养LN215细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特性,应用酸性磷酸酶法检测LN215细胞对TRAIL单独及联合环磷酰胺作用诱导凋亡的程度。结果 LN215细胞在TRAIL低浓度时无明显的凋亡发生,甚至出现轻微的增殖现象;TRAIL浓度达到1 ng/ml时,细胞开始出现凋亡;随TRAIL浓度升高,凋亡水平逐渐升高,在300 ng/ml时,凋亡率可达到12%。TRAIL与环磷酰胺联合作用组(0.11±0.01)与对照组(0.29±0.02)相比具有显著性差异(P﹤0.01)。结论 LN215是TRAIL耐药细胞株,与环磷酰胺联合后可发挥协同作用,引起细胞发生明显的凋亡反应。     

香芹芥酚诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的探讨香芹芥酚对人白血病K562细胞凋亡作用的影响。方法采用不同浓度的香芹芥酚处理体外培养的K562细胞,MTT比色法观察细胞存活率;Hoechst染色法观察细胞凋亡形态学变化,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果人白血病K562细胞存活率随着香芹芥酚作用时间延长和浓度增高而降低（P〈0.05）。香芹芥酚处理K562细胞48 h后出现较典型的细胞凋亡特征形态学改变,Annexin-V/PI双染法显示随着香芹芥酚作用浓度增大,凋亡细胞比例增大。West-ern-blot结果表明,香芹芥酚可以浓度依赖性降低凋亡相关基因Bcl-2的表达和增加Bax基因的表达。结论香芹芥酚具有诱导人白血病K562细胞凋亡的作用,其分子机制可能通过调控Bcl-2、Bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。     

南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

目的探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对HepG2细胞增殖和诱导凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡;采用分光光度计检测凋亡细胞胞浆caspase-3的活性变化。结果不同浓度的南蛇藤提取物能抑制HepG2细胞增殖,呈剂量效应和时间效应关系;药物作用24h时,其IC50为111.8μg/ml,作用48h时,其IC50为99.7μg/ml,作用72h时,其IC50为43.0μg/ml;药物干预24h时,HepG2细胞停滞在G0-G1期,并产生细胞凋亡亚二倍峰。在药物为15μg/ml、30μg/ml和60μg/ml时,细胞凋亡率分别为44.91%、31.95%和21.94%,与对照组比较,均有显著性差异（F=5.449,P〈0.05）;在药物浓度为30μg/ml、60μg/ml和120μg/ml并分别作用24h和48h时,Caspase-3活性逐渐增强。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物抑制HepG2细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用可能与其增强Caspase-3活性有关。     

阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用的研究

目的：研究阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用,及其相关的凋亡蛋白和细胞周期的变化,为临床治疗淋巴细胞白血病提供新的研究思路。方法：应用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡并用流式细胞术进行细胞周期分析,MTT法检测阿奇霉素对Jurkat细胞的增殖抑制作用,利用West-ern-blotting检测凋亡途径相关蛋白的表达。结果：用阿奇霉素处理Jurkat细胞48h后300mg/L剂量组早期凋亡率显著增高达到（88.0&#177;3.3）%,而25mg/L剂量组为（11.5&#177;2.7）%,与对照组（10.6%&#177;1.8）%无明显差异。MTT法检测结果IC50值为88.4mg/L,200mg/L抑制率达到89.27%。细胞周期显示150mg/L时G1期细胞增加,G2期和S期细胞下降。Western-blotting结果表明Bcl-2蛋白高表达,处理前后无明显变化,而Bax蛋白表达随药物浓度提高而上升,活化的Caspase3在100mg/L表达最高。结论：阿奇霉素可以有效的诱导Jurkat细胞凋亡并呈明显的浓度依赖性,其凋亡途径可能是通过Bax蛋白表达上升诱导下游效应分子Caspase3活化实现。细胞增殖抑制试验表明200mg/L以上时细胞增殖明显受抑制,细胞周期分析提示细胞增殖阻滞在了G1期。     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

目的：观察熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制及诱导其凋亡作用。方法：MTT法检测5、10、20、30、40、50μmol/L UA对SMMC-7721细胞生长的抑制作用,吖啶橙（AO）荧光染色、电镜和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：UA能显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,其作用呈剂量依赖性。35.2μmol/L UA作用SMMC-7721细胞48小时后AO染色,荧光显微镜下可见细胞出现体积缩小,核碎裂,染色质凝集等凋亡形态改变;电镜下SMMC-7721细胞出现明显的细胞凋亡的形态学改变,细胞核染色质出现边聚和中聚,细胞内部分线粒体肿胀;SMMC-7721细胞凋亡率为（67.91±5.24）%,与对照组（2.95±0.56）%比较差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：UA通过诱导SMMC-7721细胞凋亡抑制其生长。