高效液相色谱法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸含量

[目的]建立熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸的含量测定方法.[方法]采用高效液相色谱法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸的含量,色谱柱为Allsphere-ODS-C18柱(4.6mm×250.0mm,5μm),流动相为甲醇-30mmol/L磷酸二氢钠溶液(65∶35,pH值为3.0),检测波长为205nm.[结果]样品中各成分分离良好,进样量在10~35μg范围内呈较好的线性关系(r=0.9996).[结论]利用高效液相色谱法测定熊胆粉中牛磺熊去氧胆酸的含量具有专属性强及结果准确等特点,可作为熊胆粉的质量控制方法.     

一测多评法测定猪胆粉中4种指标成分的含量

【目的】建立一测多评法同时测定猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸钠4种指标成分的含量，并完成方法学验证。【方法】采用Agilent 1260型高效液相色谱仪、DAD检测器和Agilent ZORBAX SBAq C18(4.6 mm×250 mm,5μm)，以乙腈-0.03 mol/L磷酸二氢钠（p H3.45）为流动相梯度洗脱，检测波长为200 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25℃。以牛磺猪去氧胆酸为内参物，通过外标法测定内参物含量，建立相对校正因子计算牛磺鹅去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸钠的含量，同时对比一测多评法与外标法测定11批猪胆粉中4种指标成分的含量。【结果】猪胆粉中牛磺猪去氧胆酸与牛磺鹅去氧胆酸、甘氨猪去氧胆酸、甘氨鹅脱氧胆酸钠的相对校正因子（f）分别为1.214、1.260、1.243；各指标成分依次在0.181 6～4.540 6、0.162 9～4.073 4、0.746 1～18.653 0、0.495 9～12.397 5μg范围内线性关系良好（r>0.999）；平均加样回收率分别为100.00%、1...     

四种动物胆粉中胆酸类成分分析及药理作用比较

目的:采用HPLC法分别测定熊胆粉与猪胆粉、牛胆粉和鸡胆粉的胆酸类成分并进行药理作用的比较。方法:采用HPLC法对胆酸类成分分析。应用Lichrospher C18(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.001 mol/L KH2PO4溶液为流动相,梯度洗脱(0～20 min,乙腈30%→30%;20～40 min,乙腈30%→40%;40～70 min,乙腈40%→50%),流速:1.0 ml/min,柱温30℃,DAD检测器,检测波长为215nm。以小白鼠为实验研究对象,利用扭体法,观察四种胆粉的镇痛作用,利用制备二甲苯致炎模型,观察四种胆粉的抗炎作用。结果:①胆酸类成分含量牛胆粉>鸡胆粉>熊胆粉>猪胆粉,四种胆粉中有相同的胆酸类成分,其中熊胆粉与牛胆粉的化学成分更为接近,共有峰重叠率达52.941%,相似度达0.540;②四种胆粉均能有效抑制二甲苯引起的小鼠耳朵肿胀,对炎症的抑制率依次为牛胆粉>熊胆粉>猪胆粉>鸡胆粉;③四种胆粉也能明显减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数,延长潜伏期,作用强弱依次为熊胆粉>牛胆粉>鸡胆粉>猪胆粉。结论:熊胆粉与猪胆粉、牛胆粉和鸡胆粉相比较有相同的胆酸类成分,抗炎及镇痛作用接近,该方法为熊胆代用品的寻找提供了依据。     

几种常见熊胆伪品的鉴别

熊胆为熊科动物棕熊ＵｒｓｕｓａｒｃｔｏｓＬ．或黑熊ＳｅｌｅｎａｃｔｏｓｔｈｉｂｅｔａｎｕｓＣｕｖｉｅｒ或其近缘动物的干燥胆［１］。熊胆主要含牛磺熊去氧胆酸及熊去氧胆酸,尚含有少量鹅去氧胆酸、去氧胆酸及胆酸。胆熊为希有贵重药材,货源紧缺,价格较高,商者为谋其利,故市场上出现较多熊胆伪品。按现行的质量标准,只能控制其它动物胆冒充熊胆,不能控制熊胆粉冒充熊胆,熊胆粉和熊胆的价格相差３０倍以上,两者成分种类、含量一致,所以只能从性状、胆皮特征将两者区别。以下从性状、薄层色谱、胆皮显微特征三方面,浅淡３种…     

基于超高效液相色谱串联电喷雾式检测器新技术的熊胆粉特征指纹图谱研究

目的:解决熊胆粉质量控制存在的胆汁酸类化合物检测困难、化学信息不足、耗时长等问题,为熊胆粉质量控制提供新的思路和方法。方法:采用超高效液相色谱串联电喷雾式检测器(UPLC-CAD)新技术,建立熊胆粉特征指纹图谱分析方法,并利用相似度计算方法结合主成分分析(PCA)及偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)对35批不同来源熊胆粉进行评价。结果:建立的UPLC-CAD分析方法具有良好的精密度和重复性,结合液质联用对8个共有峰进行化学指认,全面地反映了熊胆粉中的主要胆汁酸成分。不同方法相似度评价结果显示,投影含量法可以更好地反映化学成分含量相似度。PCA和PLS-DA分析结果显示,不同来源熊胆粉可聚集为3类,熊胆粉主要活性成分牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)和牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)在不同来源样品中具有较好的一致性,而差异显著成分为其他含量较小的胆汁酸成分如7-酮-牛磺石胆酸、胆酸等,提示熊胆粉质量控制应以主要指标成分TUDCA和TCDCA含量结合胆汁酸特征指纹图谱进行综合评价。结论:本研究所建立的基于UPLC-CAD的熊胆粉特征指纹图谱分析方法简便快捷,可为熊胆粉的质量标准及药效物质基础研究提供依据,并为其他含弱紫外吸收化学成分的中药材质量控制提供参考。     

人工蛇胆汁中胆汁酸的薄层色谱分析

采用薄层色谱法考察了人工蛇胆汁的胆汁酸组成;以双波长薄层扫描法对人工蛇胆汁中的主要胆汗２酸成分牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸（包括牛磺鹅去氧胆酸）进行了测定。薄层色谱斑点清晰;人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸（扬牛磺鹅去氧胆酸）的含量分别为４０．２２ｍｇ／ｍＬ和２．３５ｍｇ／ｍＬ。结果表明牛磺胆酸是人工蛇胆汁中的主要胆汁酸成分;薄层鉴别和含量测定方法简便、可靠,重现性好,可用于人工蛇胆汁的质量控制。     

熊去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸治疗胆固醇性胆结石的疗效对照

目的观察与探究熊去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸治疗胆固醇性胆结石的疗效。方法选取2013年11月至2016年11月期间于本院就诊及治疗的60例胆固醇性胆结石患者作为研究对象,按照随机数字表法分为两组,每组各有30例患者,对对照组患者给予熊去氧胆酸治疗,对观察组患者给予牛磺熊去氧胆酸治疗,对比并分析两组患者的效果。结果观察组患者的治疗总有效率(83.33%)与对照组患者(70.00%)相对比,组间差异比较明显(P0.05),观察组患者的治疗满意度(90.00%)与对照组患者(73.33%)相对比,组间差异比较明显(P0.05)。结论对胆固醇性胆结石患者应用牛磺熊去氧胆酸治疗的效果要优于熊去氧胆酸治疗。     

对比采用微创保胆取石术联合牛磺熊去氧胆酸与腹腔镜胆囊切除术治疗胆囊结石的价值

目的了解适合胆囊结石患者的专业救治措施。方法抽选73例因患胆囊结石、于2013年7月至2015年12月间入住本院的患者,随机分组:35例单治组展开腹腔镜胆囊切除疗法,38例联治组联合展开牛磺熊去氧胆酸以及微创保胆取石疗法,给予两种疗法实践价值比较。结果 38例联治组内有效率94.74%,35例单治组为74.29%,(P0.05)。结论当胆囊结石患者接受治疗时,联合展开牛磺熊去氧胆酸以及微创保胆取石疗法可行性强,推荐应用。     

人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸和牛磺去氧胆酸的反相高效液相色谱法测定

采用反相高效液相色谱法测定人工蛇胆汁中牛磺胆酸、牛磺鹅去氧胆酸及牛磺去氧胆酸 3种主成分的含量。其色谱条件为 :Nova Pak C1 8(4μm )柱 ,流动相 :乙腈 -水 (1∶ 2 ) ,流速 :0 .9m l/ min,检测波长 :2 10 nm。平均加样回收率分别为 :牛磺胆酸 10 0 .5 %、牛磺鹅去氧胆酸 10 2 .2 %及牛磺去氧胆酸 10 0 .9% ,RSD分别为 1.48%、 1.6 0 %及 1.97%。该法快速、灵敏、准确 ,适用于人工蛇胆汁中 3种主要有效成分的同时测定     

猪胆粉中鹅去氧胆酸的分离纯化与检测

正猪胆粉为猪科动物猪胆汁的干燥品,收载于《中国药典》一部2010年版[1],具有清热、润燥、解毒、止咳平喘功效,其主要成分为鹅去氧胆酸[2]。鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)又称3α,7α-二羟基-5-β-胆烷酸,是熊去氧胆酸(UDCA)的7β差向异构体,具有降低胆汁内胆固醇饱和度的作用,主要用于治疗胆结石症,对胆固醇     

丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 (IL-6)、热休克蛋白70 (HSP70)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) 和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA的表达。结果 丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论 丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

欧芹素乙对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :观察欧芹素乙 (imperatorin,IMP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用和对缺氧 /复氧诱导人脐静脉内皮细胞ECV30 4凋亡的影响。 方法 :栓线法阻断大脑中动脉建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型 ;以 L onga5分制评分标准对实验大鼠作行为评分 ,以图像分析仪测算实验鼠大脑梗死面积 ,细胞凋亡采用碘化丙啶染色方法 ,流式细胞术检测 ECV30 4细胞的凋亡。 结果 :IMP可显著减轻脑缺血再灌注损伤大鼠的神经损伤症状 (行为评分 ) ,缩小脑梗死面积 ;IMP可剂量依赖性降低缺氧 /复氧引起的 ECV30 4细胞的凋亡。 结论 :IMP对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用 ;IMP降低缺氧 /复氧引起的内皮细胞凋亡是其保护机制之一。     

E-selectin及其配体介导食管癌细胞与血管内皮细胞早期粘附

目的探讨E-选择素（E-selectin）及其配体sLe A和sLe X在食管癌细胞和内皮细胞早期粘附中的作用。方法应用粘附实验检测食管癌细胞和血管内皮细胞的粘附。结果静息状态下,人食管癌细胞株EC9706和奇静脉内皮细胞株ECV304粘附较少,内皮细胞经脂多糖激活后,与人食管癌细胞株粘附显著增加。激活内皮细胞组、E-选择素单抗（1∶200）、E-选择素单抗（1∶400）、E-选择素单抗（1∶800）组相对粘附率（5.2900±0.790）、（1.8818±0.8289）、（1.9436±0.3935）、（3.1730±0.4887）,差异具有统计学意义（F值28.789,P值〈0.001）。sLe A、sLe抗体处理组相对粘附率分别为（2.5436±0.6789）、（3.1286±0.8306）,均较未处理（6.5170±0.9293）低,差异具有统计学意义（P〈0.01）。结论E-selectin及其配体sLe A和sLe X介导食管癌细胞和内皮细胞早期粘附,可能与食管癌转移有关。     

熊胆粉与其他三种动物胆粉的FT-IR特征分析及药理作用比较

目的:建立熊胆粉与猪胆粉、鸡胆粉、牛胆粉的IR分析方法并比较镇咳、抗惊厥和解热作用,为寻找熊胆粉的代用品提供依据。方法:采用IR法测定熊胆粉、猪胆粉、牛胆粉和鸡胆粉IR光谱,分析IR特征并采用氨气致咳法、戊四氮致惊厥法和干酵母致热法比较四种胆粉对小鼠的镇咳作用、抗惊厥作用和解热作用。结果:鸡胆粉与熊胆粉的IR图谱基本一致,熊胆粉IR光谱特征为:1 656 cm-1(s)和1 557 cm-1(s),有酰胺基(-CO-NH-)双峰,且峰强大致相等,1 188 cm-1(宽峰,s)和1 051 cm-1(s)为-SO3H双强峰,T1 188 cm-1/2 954 cm-1及T 1 051 cm-1/1 188 cm-1均约为1.0;猪胆粉、牛胆粉或四种胆粉的相互混合品的IR光谱不具备或不同时具备以上三个特征。四种胆粉均具有镇咳、抗惊厥和解热作用,其中鸡胆粉镇咳作用较强,猪胆粉抗惊厥作用最强,而熊胆粉的解热效果较好。结论:IR法可用于鉴别熊胆粉与牛胆粉、猪胆粉,具有操作简单、分析时间短和鉴别特征明显等优点,但不能准确区分熊胆粉与鸡胆粉。四种胆粉均有镇咳、抗惊厥和解热作用,效果有所差异。     

血管内皮生长因子对血管内皮细胞增殖及DNA合成的影响

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)诱导血管增生性疾病中血管生成的作用机制。方法　取体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞 ,用MTT法和3H -TdR掺入法观察VEGF对ECV 30 4细胞增殖及DNA合成的影响。结果　VEGF对ECV 30 4细胞增殖及DNA合成均有明显刺激作用 ,且均呈剂量依赖性关系。结论　VEGF可能通过刺激血管内皮细胞增殖及DNA合成 ,促进血管生成。在血管增生性疾病中可能起重要促进作用。     

牛磺熊去氧胆酸的获取方法及药理研究进展

牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)是熊胆中的主要药理活性成分,临床上主要用于治疗与胆汁酸代谢异常相关的疾病。目前,市场上提供熊胆制品的唯一渠道是通过引流取胆法,但是该法目前受到相关条例的限制,因此有必要找到新的获取熊胆制品的方法。综述TUDCA的药理研究进展及人工合成TUDCA的方法尤其是生物合成法的研究进展。     

丹参酮ⅡA对NB4所诱导的人ECV304细胞株促凝活性的影响

目的研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对急性早幼粒细胞性白血病（APL）细胞株NB4诱导的人ECV304细胞株促凝活性的影响。方法①分别用0．5μg／mL TanⅡA、0．3μg／mL ATRA、0．1g／LDMSO、RPMI1640处理培养NB4细胞制成条件培养基TanⅡA-NB4-CM,ATRA-NB4-CM、DMSO-NB4-CM以及RPMI1640-NB4-CM,再分别与ECV304细胞在37℃共同孵育0、4、8、12h,利用复钙时间测定及改良发色底物法,分别测定ECV304细胞裂解液的肿瘤促凝活性（PCA）和组织因子活力（TF：Act）。②ECV304细胞分别与0．5μg／mLTanⅡA及TanⅡA-NB4-CM在37℃共同孵育4、12、24、72、120h,用上述同样方法测定ECV304细胞裂解液的PCA和TF：Act。结果①0．5μg／mLTanⅡA处理NB4细胞24、72、120h的条件培养基能使ECV304细胞PCA增强,ATRA具有相似作用（P〉0．05）。②0．5μg／mL的TanⅡA对0．5μg／mL TanⅡA作用NB4120h的条件培养基（TanⅡA-120h-NB4-CM）促ECV304细胞PCA有抑制作用,其作用强度呈时间依赖性,120h达到高峰,再增加TanⅡA浓度,作用强度不增加;与0．3μg／mL ATRA作用相似。③TanⅡA-120h-NB4-CM能够增加ECV304细胞TF：Act,并随作用时间增加而增强,TanⅡA与ATRA作用相似（P〉0．05）。④0．5μg／mLTanⅡA能够抑制TanⅡA-120h-NB4-CM对ECV304细胞的TF：Act,并随作用时间增加而增强,ATRA具有相似作用（P〉0．05）。结论TanⅡA在诱导NB4细胞分化凋亡的同时,可能通过某种因子增强NB4细胞对ECV304细胞促凝活性和组织因子活力TanⅡA能够有效阻止NB4细胞增强ECV304细胞的促凝活性和组织因子活力,起到保护细胞的作用。     

硫胺素和核黄素对H2O2诱导的DNA氧化损伤的影响

目的 探讨硫胺素和核黄素对H2O2诱导人脐静脉内皮细胞ECV304的DNA氧化损伤的影响.方法 于细胞培养液中分别加入硫胺素(终浓度为10、100、500、1000 mg/L)或核黄素(终浓度为20、100、300、500 nmol/L)预处理24 h,给予H2O2(终浓度为25 μmol/L)反应30 min,采用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)分析DNA氧化损伤情况.以不加H2O2、硫胺素和核黄素者为阴性对照组;以加H2O2而不加硫胺素、核黄素者为阳性对照组.结果 H2O2诱导ECV304细胞DNA断裂损伤,SCGE分析显示,阳性对照组拖尾细胞率、彗星尾长、尾部DNA含量和Olive尾矩等指标均较阴性对照组升高;经10、100、500 mg/L硫胺素或20、100、300 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标均较阳性对照组显著下降(P<0.05或P<0.01);经1000 mg/L硫胺素或500 nmol/L核黄素预处理后,各DNA损伤指标与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 适宜浓度的硫胺素和核黄素能降低H2O2诱导的DNA氧化损伤,高浓度的硫胺素和核黄素不能保护H2O2诱导的DNA氧化损伤.