临沂产红银花和大毛花不同部位药效成分含量的比较研究

目的：临沂产红银花和大毛花在不同采收期的花和叶中绿原酸、木犀草苷含量。方法利用高效液相色谱法对绿原酸和木犀草苷含量进行测定。结果临沂产红银花和大毛花不同花期和不同部位的绿原酸、木犀草苷含量差异显著;两种金银花不同花期的绿原酸含量均高于《中国药典》2015年版要求;红银花在幼蕾期、三青期及二白期木犀草苷含量符合药典要求,大毛花在大白期木犀草苷含量最高。红银花的幼叶中的绿原酸含量较高,且明显高于花中绿原酸含量,叶中的木犀草苷含量也明显高于花的含量;大毛花的花中绿原酸含量高于叶中绿原酸含量,但叶中木犀草苷含量明显高于花中木犀草苷含量。结论金银花的叶可以用来提取绿原酸和木犀草苷,以提高金银花资源的利用率。     

基于近红外技术的金银花药材多指标成分快速检测

目的 采用近红外光谱(NIR)漫反射法和化学计量学方法对金银花药材质控指标绿原酸和木犀草苷的含量同时进行快速检测,实现金银花药材质量的高效评价。方法 HPLC分别测定不同批次金银花药材中绿原酸和木犀草苷成分的含量,同时采集药材的NIR光谱,最终采用偏最小二乘回归(PLSR)法分别建立NIR与绿原酸和木犀草苷含量间的定量校正模型,并对预测集样品中指标成分的含量进行预测。结果 所建PLSR定量模型的相关系数均>0.90,RMSECV分别为0.469和0.012 4;采用独立验证集对模型进行外部验证,RMSEP分别为0.478和0.010 5,与RMSEC值相近且与RMSECV的比值接近于1,RSEP分别为10.19%和14.76%。所建NIR快速检测方法的准确度和精密度结果良好。结论 该分析方法简便高效,可应用于不同批次金银花药材中绿原酸和木犀草苷2个关键质控指标含量的快速检测及质量控制,结果准确可靠。     

基于化学成分含量变化的金银花药材保质期预测

目的:建立测定金银花药材中绿原酸和木犀草苷含量的方法,以探讨金银花在常温密封环境下的保质期。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C_(18)(绿原酸)、Agilent Zorbax SB-Phenyl(木犀草苷),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87,V/V,绿原酸)、乙腈-0.5%冰醋酸溶液(梯度洗脱,木犀草苷),流速为1.0 m L/min,检测波长为327 nm(绿原酸)、350 nm(木犀草苷),柱温为30℃,进样量为10μL。结果:绿原酸、木犀草苷检测质量浓度线性范围分别为10~100μg/m L(r=0.998 6)、5~50μg/m L(r=0.999 3);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<4.0%;加样回收率分别为95.78%~99.70%(RSD=1.46%,n=6)、96.30%~104.31%(RSD=2.93%,n=6)。滚简杀青、烤房烘干、自然晾晒的药材样品中绿原酸和木犀草苷的含量在贮藏12个月后普遍降低了30%~40%。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于金银花药材中绿原酸和木犀草苷含量的测定;金银花在贮藏1年后有效成分的含量显著下降,有必要建立金银花保质期规范,以保证临床用药的有效性。     

不同产地金银花与山银花主要成分的含量比较

目的:比较不同产地金银花与山银花中主要成分含量的差异。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-紫外扫描(UV)法测定不同产地金银花和山银花中绿原酸和木犀草苷的含量;采用HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD)法测定2种药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm,5μm),测定木犀草苷的流动相为乙腈-0.2%磷酸(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,检测波长为350nm;测定绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的流动相为0.4%冰醋酸-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,绿原酸检测波长为324nm,其余两成分采用ELSD。结果:不同产地金银花中绿原酸、木犀草苷含量分别为2.227%～2.931%、0.0389%～0.0739%,不含灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙;不同产地山银花中绿原酸含量为3.039%～5.657%,灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总含量为5.59%～9.29%,不含木犀草苷,均符合现行版药典规定。结论:本试验结果可为金银花人工培育和GAP基地建设提供依据,同时为有效鉴别制剂中的金银花和山银花提供依据。     

高效液相色谱法同时测定湖南不同产地金银花中不同部位绿原酸与木犀草苷含量

目的通过高效液相色谱法测定6个产地金银花中不同部位的绿原酸与木犀草苷的含量,考察湖南省金银花的质量情况,为该药材资源的综合开发利用提供科学依据。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Sepax Bio-C18(4.6 mm×250 mm,5μL);流动相:乙腈-0.4%乙酸水溶液;二元梯度洗脱,0～12min(0∶100～5∶95),12～17 min(5∶95～16∶84),17～70 min(16∶84～5∶95);流速1.0mL·min-1,检测波长350 nm,柱温:30℃。结果绿原酸、木犀草苷分别在0.0104～0.4150 mg·mL-1、0.0013～0.0410 mg·mL-1与峰面积线性关系良好,绿原酸的加样回收率在99.5%～109.4%,木犀草苷的加样回收率在93.4%～106.7%,RSD均<3.0%;不同产地金银花中活性成分含量有差异,同一产地金银花不同部位的活性成分也存在明显差异。结论该方法对于金银花中绿原酸和木犀草苷的定量分析简便、快捷、稳定,且重现性良好,对湖南省金银花的各个部位的综合利用具有一定的参考意义。     

杭菊叶生长过程中绿原酸类和木犀草苷动态变化分析

目的：建立高效液相色谱（HPLC）法同时测定杭菊叶中5种绿原酸类成分及木犀草苷的方法,并分析不同生长过程杭菊叶中绿原酸类和黄酮类成分的动态变化,比较同期采收的杭菊叶与杭菊花中成分的差异,为杭菊叶的质量控制、合理利用提供参考。方法：采摘不同生长时期的杭菊叶样品及盛花期的杭菊花样品,采用HPLC法对杭菊叶及杭菊花中绿原酸类及黄酮类成分进行检测。结果：不同生长时期杭菊叶中绿原酸类及木犀草苷成分呈不同的规律。新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B随着生长时间而逐渐累积,到9月含量达到峰值后逐步下降;绿原酸、异绿原酸A则随着成分累积,在9月达到峰值,下降后又在11月出现次峰值。木犀草苷则随着生长过程逐步增加,到11月达到含量峰值。同期采收的杭菊叶中绿原酸类及黄酮类成分高于杭菊花。结论：该研究结果为确定杭菊叶的采收时间及质量测定标准提供了参考和依据,为揭示杭菊叶生长过程中资源性化学成分的变化以及药材品质的控制奠定了一定基础。     

HPLC-MS法测定双黄连口服液中木犀草苷和绿原酸的含量并评价二者对成品质量的影响

目的:建立测定双黄连口服液中主要成分木犀草苷含量的方法,并探讨木犀草苷和绿原酸对成品质量控制的影响。方法:木犀草苷含量测定采用高效液相色谱-质谱联用法。色谱柱为Agilent HC-C18柱,流动相为0.2%磷酸(A)-乙腈(B)(梯度洗脱),流速为1mL·min-1,检测波长为350nm,进样量为10μL,柱温为25℃;绿原酸的含量测定采用2010年版《中国药典》(一部)双黄连口服液项下方法。通过测定9批双黄连口服液样品和4个模拟样品中木犀草苷和绿原酸的含量分析二者对成品质量的影响。结果:木犀草苷检测浓度在3.9～39.0μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为99.5%,RSD=3.6%。9批双黄连口服液中木犀草苷的含量为5.56～30.20μg·mL-1,有较大差异;绿原酸的含量为0.71～0.94μg·mL-1,差异不大。4个模拟样品中木犀草苷的含量为0～33.28μg·mL-1,有较大差异;绿原酸的含量为1.07～1.23μg·mL-1,差异不大。结论:仅测定绿原酸来表征双黄莲口服液中金银花的含量有失准确、专属和有效,建议在双黄连口服液质量标准中增加木犀草苷的含量测定。     

HPLC测定金银花颗粒中的木犀草苷、绿原酸及其伪品检测

目的 完善金银花颗粒的质量标准.方法 采用HPLC法测定金银花中木犀草苷的含量,并对山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙进行限量检查,制定绿原酸含量测定限度.金银花中木犀草苷含量测定采用Agilent Zorbax SB-phenyl色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5％冰乙酸,梯度洗脱,进样量10 ...     

不同加工方法山银花药材中绿原酸、木犀草苷的含量测定

目的建立高效液相色谱法对不同加工方法山银花药材中绿原酸、木犀草苷2个指标性成分进行含量测定,确定山银花最佳加工方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Agi Lent C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-0.4%冰醋酸,梯度洗脱;流速:1 m L·min-1;检测波长:350 nm;柱温:25℃。结果不同加工方法山银花中绿原酸、木犀草苷含量有明显变化,其中低温烘干与杀青烘干山银花中绿原酸、木犀草苷含量较高。结论低温烘干法加工山银花外观质量最优,绿原酸、木犀草苷含量最高,应广泛推广应用。     

金银花质量与产地影响因素相关性研究

产地加工是金银花品质形成的重要环节,对其有效成分绿原酸、木犀草苷含量有明显的影响。本文对地域、种质资源、田间管理、采收、加工等因素对金银花质量的影响进行了综述,旨在为控制金银花质量、提高临床疗效提供一些参考。     

河南产忍冬不同药用部位挥发油成分分析

目的:分析河南产忍冬不同药用部位的挥发油成分。方法:采用固相微萃取法提取忍冬花蕾、叶和枝干中的挥发油,应用气相色谱-质谱联用技术结合保留指数法对其化学成分进行分析和鉴定,并用气相色谱面积归一化法测定各成分的相对百分含量。结果:从河南产忍冬不同部位中共鉴定出85种成分,其中7种是3个部位共有成分。结论:本研究可为进一步开发利用忍冬资源提供科学依据。     

基于EST-SSR的金银花分子鉴别方法研究

利用简单有效的方法鉴定药用植物种及其变种一直是中药材鉴定首先要解决的问题。金银花是临床常用大宗中药材之一,源自忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的花蕾。为了有效利用金银花EST序列开发功能性分子标记,本文通过生物信息学手段对本实验室保存的忍冬及其变种红白忍冬(L.japonica var.chinensis Thunb.)EST序列进行分析,共获得3 705条忍冬EST-SSRs,且平均每4.05 kb检出一个SSR(simple sequence repeat);2 818条红白忍冬EST-SSRs,平均每7.49 kb检出一个SSR。分析结果表明金银花及其变种红白忍冬主要SSR重复为二核苷酸,其次为三核苷酸,主要重复基序类型为AG/TC和GAG/TCT。通过同源比对,在忍冬及其变种中共筛选出87对重复次数具有差异的EST-SSR。选出15对碱基数差异大于6的EST-SSR进行验证,结果表明其中的13对引物在52份金银花类药用植物中具有有效扩增产物,且引物jp.ssr4、jp.ssr64及jp.ssr65可用于忍冬及其变种、山银花原植物的鉴别。     

高效液相色谱法同时对金银花中5种有效成分的含量测定

目的建立HPLC法同时测定金银花中5种有效成分的含量。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.4%的磷酸水溶液进行线性梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,检测波长:350 nm,进样量:10μL。结果绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、槲皮素5个化合物在测定的范围内均表现出良好的线性关系(r≥0.999 3),回收率为97.5%～100.2%。结论该方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重复性好,为较全面控制金银花药材的质量提供了一种可靠的方法。     

高效液相色谱法同时对金银花中5种有效成分的含量测定

目的建立HPLC法同时测定金银花中5种有效成分的含量。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.4%的磷酸水溶液进行线性梯度洗脱,流速：1.0 mL/min,检测波长：350 nm,进样量：10μL。结果绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、槲皮素5个化合物在测定的范围内均表现出良好的线性关系（r≥0.999 3）,回收率为97.5%～100.2%。结论该方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重复性好,为较全面控制金银花药材的质量提供了一种可靠的方法。     

毛连菜总酚含量测定和纯化工艺研究

目的 建立毛连菜总酚的含量测定方法,并优选其大孔吸附树脂纯化工艺。方法 采用紫外-可见分光光度法测定毛连菜总酚的含量,以吸附量、解吸率、解吸量等指标优选毛连菜总酚的大孔吸附树脂富集纯化工艺。结果 所建立的质量控制方法的精密度、重复性和稳定性良好,其RSD均<3.0%。优选出了HP-20树脂对毛连菜总酚有较好的吸附、解吸性能,最佳工艺：上样的毛连菜水溶液总酚浓度为8.54 mg·mL^-1,上样体积为1 BV,控制流速为2 BV·h^-1。先用水和10%乙醇洗去杂质,用量各4 BV,收集4 BV的30%乙醇和3 BV的50%乙醇洗脱液,浓缩,即得。结论 本实验建立的质量控制方法简单、准确,经HP-20树脂分离纯化,毛连菜总酚的纯度可达87%以上,且工艺稳定。     

银翘散主要药物提取物体外抑制流感病毒作用的比较研究

目的:观察并比较银翘散主要药物金银花、连翘、牛蒡子及其配伍提取物体外抗甲型流感病毒FM1株作用.方法:采用血凝试验对中药不同浓度、不同时间点进行体外抗甲型流感病毒的效价测定.结果:金银花、连翘、牛蒡子及其配伍提取物可直接抑制甲型流感病毒FM1株的活性,作用时间从1 h可持续到24 h;各时间点各中药提取物在最大不凝血浓度即金银花25 mg/mL、连翘50 mg/mL、牛蒡子100 mg/mL、配伍组50 mg/mL时均能完全抑制病毒的增殖,其对病毒的抑制作用随着药物浓度的降低而逐渐减弱.结论:金银花、连翘、牛蒡子及其配伍提取物可有效抑制甲型流感病毒FM1株体外增殖.     

金银花药材中抗呼吸道病毒感染的咖啡酰奎宁酸类成分的定量研究

目的:寻找金银花中的抗呼吸道病毒感染的成分,并进行定量研究。方法:采用各种柱层析和制备薄层层析等方法分离、细胞病变法进行抗病毒作用的研究,采用RP-HPLC方法进行定量方法的研究。结果:分离得到了13种咖啡酰奎宁酸类化合物和咖啡酸、咖啡酸甲酯,确认咖啡酰奎宁酸类成分具有较强的抗呼吸道病毒作用,并采用HPLC方法测定了金银花中的 6种咖啡酰奎宁酸类成分和咖啡酸的含量。结论:咖啡酰奎宁酸类成分为金银花中的有效成分,定量方法准确、重复性好。     

人工模拟干旱胁迫下金银花幼苗的生理适应性反应

目的研究人工模拟干旱胁迫条件下金银花幼苗的生理适应性反应,为揭示金银花植株的抗旱机制以及抗旱品种的选育提供理论依据。方法采用聚乙二醇（PEG-6000）模拟干旱胁迫处理金银花幼苗,检测幼苗体内的丙二醛（MDA）含量;超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）等保护酶活性,渗透调节物质脯氨酸（Pro）和可溶性糖含量。结果 10%、20%和30%PEG处理幼苗后120 h MDA含量分别高出对照组20.31%、28.12%和36.72%,随着PEG浓度升高,MDA含量逐渐增加。SOD、POD、CAT和APX活性总体呈现先升高后降低的趋势,各种酶对干旱胁迫的响应速率不同,CAT于干旱胁迫后立即开始启动,SOD、POD于干旱胁迫后24 h启动,而APX于干旱胁迫后48 h开始启动。Pro和可溶性糖含量均于处理后24 h开始增高,于处理后72 h达到峰值。结论随着干旱程度的增加和胁迫的延长,金银花体内膜质过氧化严重,通过增加Pro、可溶性糖的含量以及保护酶系统来抵御干旱胁迫,保护酶启动顺序为CAT、SOD、POD、APX。     

鱼腥草种质资源的RAPD分析

目的分析鱼腥草种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用RAPD技术对92份鱼腥草种质资源进行检测。结果34个随机引物中有32个引物(94.1%)扩增产物具多态性。34个引物共得到200条扩增DNA片段,其中93.5%的片段具多态性。每个多态性引物平均可扩增出5.8个多态性片段。峨眉蕺菜和蕺菜种内平均遗传相似系数(genetic similarity,GS)分别为0.521和0.572,二者种间GS值为0.517。峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为36的细胞型间相似程度最高,其平均GS值达0.530。栽培蕺菜类群比其野生类群遗传多样性相对较高。聚类分析表明,利用RAPD技术可将全部供试材料区分开,所有材料共划分为14类。其中,绝大多数(62个)聚为一类,且根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论(1) 鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。(2) RAPD标记可作为构建鱼腥草DNA指纹图谱的有效工具。(3) 鱼腥草药材道地性与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素所决定。     

银黄颗粒提取工艺研究

目的 研究银黄颗粒的提取工艺.方法 采用正交实验法,以绿原酸和黄芩苷为指标.结果 金银花最佳提取工艺12倍水,石灰乳浓度为20%,硫酸浓度10%.黄芩最佳提取工艺8倍水,硫酸浓度10%,温度为70℃.结论 该工艺稳定可行,显著优于原工艺.