反相高效液相色谱法测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的研究

目的:建立测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的反相高效液相色潜法。方法:采用硅胶层析柱(BUCHI,Φ12mm×75 mm,40～63μm),以甲醇-水(1:1)为洗脱剂对曼地亚红豆杉提取液进行初步分离制备供试品溶液;HPLC 检测条件:SHIM—PACK VP—ODS 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(45:55)为流动相,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为40℃,检测波长为232 nm。结果:10-DABⅢ浓度在0.04～4.00μg·mL~(-1)范围(r=0.9974),与峰面积呈良好线性关系(n=6);回收率(n=9)为99.5%～104.9%,RSD 为1.0%～1.8%。结论:曼地亚红豆杉提取液用硅胶柱层析后,多数高含量非目标物被分离,消除了高含量非目标物对10—DABⅢ测定的影响,HPLC 检测条件简单,获得满意的效果。     

南方红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的分离与纯化

目的：以南方红豆杉的枝叶为原料,研究其中活性成分10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ（10-DABⅢ）的分离和纯化条件,并进行优化筛选.方法：综合运用浸提、萃取（包括液液萃取和反萃取）、色谱分离和重结晶技术得到10-DABⅢ晶体,并采用UV,HPLC法进行分析鉴定.结果：得到了用以合成高效抗癌药紫杉醇的前体--10-DABⅢ晶体,纯度可达91%,整个工艺收率达7.9%.结论：本实验为首次采用该工艺路线得到10-DABⅢ和紫杉醇,总收率达60%以上,可用于进一步的工业化研究.     

曼地亚红豆杉与南方红豆杉不同部位中紫杉醇含量比较研究

摘 要 目的： 比较曼地亚红豆杉和南方红豆杉不同部位抗癌活性成分紫杉醇的含量,为红豆杉资源开发利用提供依据。方法: 利用丙酮和乙酸乙酯混合溶剂提取有效成分,用中性Al₂O₃吸附柱色谱法粗提紫杉醇,用高效液相色谱法测定紫杉醇含量。结果: 曼地亚红豆杉各部位紫杉醇含量均高于南方红豆杉,根皮中紫杉醇含量最高,达0.043 9%,约是南方红豆杉茎皮中紫杉醇含量的88倍。结论:曼地亚红豆杉根皮、茎皮、叶、幼枝、果实中均含有紫杉醇,其含量高于南方红豆杉茎皮中紫杉醇含量,可以对曼地亚红豆杉进行综合开发利用。     

RP-HPLC法测定欧洲红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的:建立以反相高效液相色谱法测定欧洲红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的方法。方法:色谱柱为Shim-Pack VP-ODS(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为232nm。结果:10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的进样量在264～1320ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9995);平均回收率为98.8%,RSD=1.3%(n=9)。结论:本方法简单、准确、重现性好,可用于欧洲红豆杉的质量控制。     

喜马拉雅红豆杉与曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱含量比较

目的测定并比较维吾尔药材喜马拉雅红豆杉与人工栽培品种曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量。方法采用RP-HPLC色谱法梯度洗脱,色谱柱为Century SIL C18-EPS柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水;流速为1.0mL·min-1;检测波长为227nm;柱温为30℃。结果紫杉醇回归方程:Y=2.050 975×107 X+5 531.887,线性范围为0.042~1.69μg(r=0.999 9),平均回收率为98.0%,RSD=0.98%(n=6);三尖杉宁碱回归方程Y=1.806 535×107 X+3 046.378,线性范围为0.040~1.6μg(r=0.999 9),平均回收率为96.6%,RSD=2.97%(n=6),喜马拉雅红豆杉叶中三尖杉宁碱平均含量高于茎中含量,曼地亚红豆杉相反;两者叶中紫杉醇含量高于茎中含量,而曼地亚红豆杉茎叶中紫杉醇含量并不低于喜马拉雅红豆杉。结论该方法简便、准确、适用于红豆杉药材的质量评价。     

基于指纹图谱和网络药理学对曼地亚红豆杉质量标志物的分析研究

目的:基于指纹图谱和网络药理学方法,对曼地亚红豆杉质量标志物(Q-Marker)进行预测,建立基于Q-Marker的曼地亚红豆杉药材评价方法。方法:采用Waters SymmmetryShield^TM RP 18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%三氟乙酸水为流动相,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长254 nm,进样体积10μL,建立8个年限24批曼地亚红豆杉药材指纹图谱并标定共有峰,采用层次聚类分析(hierarchical clustering analysis, HCA)进行分类评价,借助正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least square-discriminant analysis, OPLS-DA)筛选不同年限曼地亚红豆杉的主要差异性标志物;结合网络药理学,通过相应数据库筛选差异性标志物的核心靶点和关键通路,构建“成分-靶点-通路”网络图,以此预测曼地亚红豆杉的Q-Marker;采用HCA及主成分分析(principal component a...     

UPLC法同时测定曼地亚红豆杉中3个有效成分的含量

目的:建立UPLC法同时测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)、三尖杉宁碱和紫杉醇的含量。方法:采用Acquity BEH Shield RP 18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～8 min,78%A;8～11 min,78%A→65%A;11～44 min,65%A),流速为0.2 mL.min-1,检测波长为227 nm,柱温25℃。结果:本方法可在44 min内完成10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇3个成分的色谱分析,且各成分色谱峰之间具有良好的分离度;10-DABⅢ、三尖杉宁碱、紫杉醇的线性范围分别为0.010～0.100μg(r=0.9996)和0.003～0.030μg(r=0.9995),0.080～0.800μg(r=0.9992)和0.001～0.010μg(r=0.9997),0.020～0.200μg(r=0.9997)和0.004～0.040μg(r=0.9998);平均加样回收率(n=9)分别为99.8%,97.8%,100.4%。结论:以10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇为目标成分时,5月份为5年生曼...     

HPLC测定曼地亚红豆杉中的紫杉醇

目的 采用RP-HPLC法测定曼地亚红豆杉中紫杉醇的含量.方法 采用Diamond C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(52:48),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长227 mn,柱温30 ℃.结果 曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的平均含量达0.0237%,该检测方法可将紫杉醇与其类似物分离.结论 曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的含量较高,该检测方法稳定,可用于紫杉醇的快速定量测定.     

苯丙氨酸、蔗糖和甘露醇对杂种红豆杉细胞的生长及形成紫杉醇、巴卡亭III和10-去乙酰基巴卡亭III的影响

研究了苯丙氨酸、蔗糖和甘露醇对杂种红豆杉悬浮细胞的生长及形成紫杉醇、巴卡亭II和10-去乙酰基巴卡亭II的影响。结果表明,培养基中添加1.0mmol·L^-1或2.0mmol·L^-1苯丙氨酸和在培养28d时同时补加73.0mmol·L^-1蔗糖和137.3mmol·L^-1甘露醇能显著地促进细胞的生长和这3种紫杉烷的形成。同对照相比,有苯丙氨酸又补加蔗糖和甘露醇的细胞生物量增加了0.6～0.8倍,紫杉醇的产量增加了9～10倍,巴卡亭II的产量增加了2.5～3.0倍,10-去乙酰基巴卡亭II的产量增加了7倍。在培养28d时补加73.0mmol·L^-1蔗糖能显著地促进细胞的生长,但对细胞中这3种紫杉烷的含量没有显著的影响。     

苯丙氨酸、蔗糖和甘露醇对杂种红豆杉细胞的生长及形成紫杉醇、巴卡亭III和10-去乙酰基巴卡亭III的影响

研究了苯丙氨酸、蔗糖和甘露醇对杂种红豆杉悬浮细胞的生长及形成紫杉醇、巴卡亭ＩＩ和１０去乙酰基巴卡亭ＩＩ的影响。结果表明，培养基中添加１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１或２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１苯丙氨酸和在培养２８ｄ时同时补加７３０ｍｍｏｌ·Ｌ－１蔗糖和１３７３ｍｍｏｌ·Ｌ－１甘露醇能显著地促进细胞的生长和这３种紫杉烷的形成。同对照相比，有苯丙氨酸又补加蔗糖和甘露醇的细胞生物量增加了０６～０８倍，紫杉醇的产量增加了９～１０倍，巴卡亭ＩＩ的产量增加了２５～３０倍，１０去乙酰基巴卡亭ＩＩ的产量增加了７倍。在培养２８ｄ时补加７３０ｍｍｏｌ·Ｌ－１蔗糖能显著地促进细胞的生长，但对细胞中这３种紫杉烷的含量没有显著的影响。     

云南红豆杉中BaccatinⅢ和10—去乙酰Baccatin Ⅲ的含量测定

报道了一种在C18高效液相色谱柱上分离紫杉醇（Taxol）的前体化合物BaccatinⅢ和10－去乙酰BaccatinⅢ的分析方法。所用流动相为甲醇－水（52：48），必要时可使用水－乙腈－四氢呋喃（67：25：8），流速1.0ml/min，检测波长227nm，运用此方法对云南红豆杉不同部位（干皮、枝、叶、心木）的若干样品进行了测定，发现BaccatinⅢ和10－去乙酰BaccatinⅢ在各部位间含量差异较大，即使同一部位也有很大差异。     

云南红豆杉中BaccatinⅢ和10－去乙酰BaccatinⅢ的含量测定

报道了一种在Ｃ＿（１８）高效液相色谱柱上分离紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）的前体化合物ＢａｃｃａｔｉｎⅢ和１０－去乙酰ＢａｃｃａｔｉｎⅢ的分析方法。所用流动相为甲醇－水（５２：４８），必要时可使用水－乙腈－四氢呋喃（６７：２５：８），流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长２２７ｎｍ。运用此方法对云南红豆杉不同部位（干皮、枝、叶、心木）的若干样品进行了测定，发现ＢａｃｃａｔｉｎⅢ和１０－去乙酰ＢａｃｃａｔｉｎⅢ在各部位间含量差异较大，即使同一部位也有很大差异。     

10-乙酰乙酰紫杉醇标准品的制备工艺研究

目的 研究半合成紫杉醇中工艺杂质10-乙酰乙酰紫杉醇的制备方法。方法 选择性地保护紫杉醇的2''位和7位羟基,然后在碱性条件下脱去10位乙酰基,未保护的10位羟基与2,2,6-三甲基-4H-1,3-二噁英-4-酮进行缩合,最后脱去7位和2''位的保护基,制备得到10-乙酰乙酰紫杉醇。结果 以紫杉醇为原料通过5步反应制备得到10-乙酰乙酰紫杉醇,总收率为27%,纯度高达95%。结论 为10-乙酰乙酰紫杉醇标准品的制备提供了简便易行的方法,有利于紫杉醇原料药的质量控制与评价。     

维药红豆杉质量控制研究及建议

目的：研究维药红豆杉药材的质量控制方法并对质量标准提出建议。方法：采用硅胶G薄层色谱板,以紫杉醇、10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ和红豆杉对照药材为对照,建立薄层色谱鉴定方法;依照《中华人民共和国药典》2020年版四部通则相关规定对红豆杉药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分进行检查,测定其醇溶性浸出物的含量;采用高效液相色谱法建立红豆杉特征性成分紫杉醇的含量测定方法。结果：建立的红豆杉薄层色谱专属特征显著。药材水分含量为4.3%～7.0%,总灰分为2.4%～5.4%,酸不溶性灰分为0.2%～1.8%,醇溶性浸出物含量为14.0%～35.4%。紫杉醇含量在6.70～80.44μg·ml^-1(r=0.9998)线性关系良好,加样回收率平均为99.3%。15批红豆杉药材中紫杉醇含量为0.003%～0.024%。结论：建立的红豆杉质量控制方法简便、重复性和专属性良好,研究结果可为红豆杉质量控制及标准的制修订提供一定参考。     

高效液相色谱法测定不同生长年限南方红豆杉中紫杉醇的含量

目的 采用高效液相色谱法测定不同生长年限南方红豆杉中紫杉醇的含量。方法 采用Hypersil BDS C18色谱柱（200nlm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（58：42），流速1．0mL·min^-1，检测波长为227nm，柱温为25＇C。结果紫杉醇的线性范围为192～960ng，r=0．9999，平均回收率为97．56％，RSD为1．17％。结论 建立的方法可靠，可用于南方红豆杉中紫杉醇的含量测定。     

10—脱乙酰浆果杉亭—Ⅲ的新药源研究

从马尾松针叶和中国粗榧叶中提取分离得到１０－脱乙酰浆果杉亭－Ⅲ，可扩大紫杉醇药源，减少红豆杉资源的消耗。     

东北红豆杉茎、叶及愈伤组织中紫杉醇含量的比较

目的:比较东北红豆杉茎、叶及愈伤组织中紫杉醇的含量。方法:用甲醇-氯仿(1∶1)提取样品,二氯甲烷与水萃取提取物,高效液相色谱法测定样品中紫杉醇的含量。结果:东北红豆杉愈伤组织、茎、叶中紫杉醇的含量分别为0.01830%、0.00128%、0.00066%,愈伤组织中紫杉醇的含量高于茎、叶。结论:本试验对合理开发和利用东北红豆杉、保护红豆杉属植物资源具有积极意义。     

超临界CO2萃取南方红豆杉中挥发油和10-DABⅢ的工艺优化

目的 优化超临界CO₂萃取法萃取南方红豆杉中挥发油和10-DABⅢ的工艺条件。方法 以萃取时间、萃取温度、萃取压力、分离温度、物料与夹带剂的比例和夹带剂浸泡时间等为考察因素,以红豆杉中挥发油的得率和10-DABⅢ的含量为评价指标,采用正交试验优选最佳工艺条件。结果 最佳工艺条件为以无水乙醇为夹带剂,物料与夹带剂比例为1:3,萃取压力270 bar、萃取温度35℃、分离温度40℃,萃取时间2.5 h。红豆杉挥发油的得率为23.422%,10-DABⅢ的含量0.546‰。结论 所用工艺稳定、可行,可用于红豆杉中挥发油和10-DABⅢ的提取。     

HPLC波长转换法同时测定天麻头痛片中天麻素、欧前胡素、阿魏酸、胡薄荷酮和11-羰基-β-乙酰乳香酸的含量

目的 建立同时测定天麻头痛片中天麻素、欧前胡素、阿魏酸、胡薄荷酮和11-羰基-β-乙酰乳香酸含量的HPLC方法。方法 采用Agilent Zorbax TC-C₁₈色谱柱,流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液,流速为1.2 mL·min^-1,梯度洗脱,进样量为10 μL,柱温为35 ℃。结果 天麻素、欧前胡素、阿魏酸、胡薄荷酮和11-羰基-β-乙酰乳香酸检测浓度分别在1.25~25.00,0.50~10.00,10.00~200.00,0.50~10.00,0.50~10.00 μg·mL^-1内与峰面积积分值呈良好的线性关系;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均≤1.0%;平均加样回收率分别为100.0%,99.4%,99.1%,98.9%,98.6%,RSD分别为1.33%,1.38%,0.79%,3.12%,1.26%(n=9)。结论 该方法简便、准确、重复性好,可为天麻头痛片的质量控制提供实验依据。