喜马拉雅红豆杉与曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱含量比较

目的测定并比较维吾尔药材喜马拉雅红豆杉与人工栽培品种曼地亚红豆杉中紫杉醇和三尖杉宁碱的含量。方法采用RP-HPLC色谱法梯度洗脱,色谱柱为Century SIL C18-EPS柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水;流速为1.0mL·min-1;检测波长为227nm;柱温为30℃。结果紫杉醇回归方程:Y=2.050 975×107 X+5 531.887,线性范围为0.042~1.69μg(r=0.999 9),平均回收率为98.0%,RSD=0.98%(n=6);三尖杉宁碱回归方程Y=1.806 535×107 X+3 046.378,线性范围为0.040~1.6μg(r=0.999 9),平均回收率为96.6%,RSD=2.97%(n=6),喜马拉雅红豆杉叶中三尖杉宁碱平均含量高于茎中含量,曼地亚红豆杉相反;两者叶中紫杉醇含量高于茎中含量,而曼地亚红豆杉茎叶中紫杉醇含量并不低于喜马拉雅红豆杉。结论该方法简便、准确、适用于红豆杉药材的质量评价。     

曼地亚红豆杉与南方红豆杉不同部位中紫杉醇含量比较研究

摘 要 目的： 比较曼地亚红豆杉和南方红豆杉不同部位抗癌活性成分紫杉醇的含量,为红豆杉资源开发利用提供依据。方法: 利用丙酮和乙酸乙酯混合溶剂提取有效成分,用中性Al₂O₃吸附柱色谱法粗提紫杉醇,用高效液相色谱法测定紫杉醇含量。结果: 曼地亚红豆杉各部位紫杉醇含量均高于南方红豆杉,根皮中紫杉醇含量最高,达0.043 9%,约是南方红豆杉茎皮中紫杉醇含量的88倍。结论:曼地亚红豆杉根皮、茎皮、叶、幼枝、果实中均含有紫杉醇,其含量高于南方红豆杉茎皮中紫杉醇含量,可以对曼地亚红豆杉进行综合开发利用。     

UPLC法同时测定曼地亚红豆杉中3个有效成分的含量

目的:建立UPLC法同时测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)、三尖杉宁碱和紫杉醇的含量。方法:采用Acquity BEH Shield RP 18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为水(A)-乙腈(B),梯度洗脱(0～8 min,78%A;8～11 min,78%A→65%A;11～44 min,65%A),流速为0.2 mL.min-1,检测波长为227 nm,柱温25℃。结果:本方法可在44 min内完成10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇3个成分的色谱分析,且各成分色谱峰之间具有良好的分离度;10-DABⅢ、三尖杉宁碱、紫杉醇的线性范围分别为0.010～0.100μg(r=0.9996)和0.003～0.030μg(r=0.9995),0.080～0.800μg(r=0.9992)和0.001～0.010μg(r=0.9997),0.020～0.200μg(r=0.9997)和0.004～0.040μg(r=0.9998);平均加样回收率(n=9)分别为99.8%,97.8%,100.4%。结论:以10-DABⅢ、三尖杉宁碱和紫杉醇为目标成分时,5月份为5年生曼...     

反相高效液相色谱法测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的研究

目的:建立测定曼地亚红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DABⅢ)的反相高效液相色潜法。方法:采用硅胶层析柱(BUCHI,Φ12mm×75 mm,40～63μm),以甲醇-水(1:1)为洗脱剂对曼地亚红豆杉提取液进行初步分离制备供试品溶液;HPLC 检测条件:SHIM—PACK VP—ODS 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-水(45:55)为流动相,流速为1.0 mL·min~(-1),柱温为40℃,检测波长为232 nm。结果:10-DABⅢ浓度在0.04～4.00μg·mL~(-1)范围(r=0.9974),与峰面积呈良好线性关系(n=6);回收率(n=9)为99.5%～104.9%,RSD 为1.0%～1.8%。结论:曼地亚红豆杉提取液用硅胶柱层析后,多数高含量非目标物被分离,消除了高含量非目标物对10—DABⅢ测定的影响,HPLC 检测条件简单,获得满意的效果。     

我国不同种类红豆杉不同部位紫杉醇的含量分布研究

目的:建立红豆杉中紫杉醇的提取纯化方法和紫杉醇高效液相色谱分析方法,分析研究了我国境内中国红豆杉、云南红豆杉、西藏红豆杉、东北红豆杉、南方红豆杉以及曼地亚红豆杉不同部位紫杉醇含量的差异,寻找其分布规律。方法:以乙酸乙酯-丙酮(1∶1)为提取溶剂进行提取,采用自制碱性氧化铝柱进行柱层析纯化;色谱条件:采用 AichromBond-AQ C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)分析柱,以甲醇-乙腈-水(18∶40∶42)为流动相,流速1.0 min·mL~(-1),柱温40℃,于228 nm 波长处进行检测。结果:红豆杉各部化紫杉醇含量差异明显,其中叶、枝条、根和树皮的平均含量分别为0.015%,0.018%,0.055%,0.077%。中国红豆杉、云南红豆杉、西藏红豆杉、东北红豆杉、南方红豆杉以及曼地亚红豆杉树木各部位的平均含量分别为0.032%,0.050%,0.034%,0.043%,0.044%,0.046% 结论:鉴于红豆杉的枝和叶中也含有相当量的紫杉醇且再生能力较强,故应以红豆杉的枝叶为原料进行提取、分离,对红豆杉的保护和合理开发利用都具有现实意义,其中尤以云南红豆杉开发利用价值最高。     

不同采集时间曼地亚红豆杉中紫杉醇含量分析

目的以引种5年生曼地亚红豆杉为材料,检测紫杉醇和前体含量的年变化规律。方法采用固相萃取结合高效液相色谱(HPLC)法检测不同采集时间曼地亚红豆杉枝叶中的紫杉醇含量。结果通过对紫杉醇含量的分析,其在0.1～1.6μg/mL具有良好的线性关系,平均回收率为98.2%,相对标准偏差(RSD)为0.01%,经固相萃取后紫杉醇能达到基线分离。经过一系列综合考虑,曼地亚红豆杉的最佳收割期为9月份。结论曼地亚红豆杉中紫杉醇的含量与采集季节相关,9月份为最佳采集季节。     

HPLC测定曼地亚红豆杉中的紫杉醇

目的 采用RP-HPLC法测定曼地亚红豆杉中紫杉醇的含量.方法 采用Diamond C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(52:48),流速1.0 mL·min~(-1),检测波长227 mn,柱温30 ℃.结果 曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的平均含量达0.0237%,该检测方法可将紫杉醇与其类似物分离.结论 曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的含量较高,该检测方法稳定,可用于紫杉醇的快速定量测定.     

维药红豆杉质量控制研究及建议

目的：研究维药红豆杉药材的质量控制方法并对质量标准提出建议。方法：采用硅胶G薄层色谱板,以紫杉醇、10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ和红豆杉对照药材为对照,建立薄层色谱鉴定方法;依照《中华人民共和国药典》2020年版四部通则相关规定对红豆杉药材的水分、总灰分、酸不溶性灰分进行检查,测定其醇溶性浸出物的含量;采用高效液相色谱法建立红豆杉特征性成分紫杉醇的含量测定方法。结果：建立的红豆杉薄层色谱专属特征显著。药材水分含量为4.3%～7.0%,总灰分为2.4%～5.4%,酸不溶性灰分为0.2%～1.8%,醇溶性浸出物含量为14.0%～35.4%。紫杉醇含量在6.70～80.44μg·ml^-1(r=0.9998)线性关系良好,加样回收率平均为99.3%。15批红豆杉药材中紫杉醇含量为0.003%～0.024%。结论：建立的红豆杉质量控制方法简便、重复性和专属性良好,研究结果可为红豆杉质量控制及标准的制修订提供一定参考。     

RP-HPLC法测定欧洲红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的含量

目的:建立以反相高效液相色谱法测定欧洲红豆杉中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ含量的方法。方法:色谱柱为Shim-Pack VP-ODS(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为232nm。结果:10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的进样量在264～1320ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9995);平均回收率为98.8%,RSD=1.3%(n=9)。结论:本方法简单、准确、重现性好,可用于欧洲红豆杉的质量控制。     

曼地亚红豆杉针叶中紫杉烷二萜类化学成分

目的 研究栽培于我国辽宁本溪的曼地亚红豆杉（Taxus media ‘Hicksii’）针叶中紫杉烷二萜类化学成分。方法 采用大孔树脂、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色谱及MDS柱色谱等方法进行分离纯化,通过NMR分析鉴定化学结构。结果 从曼地亚红豆杉针叶的乙醇提取物中得到6个已知化合物,分别鉴定为10-去乙酰基-10 β-羟基丁酸酯基紫杉醇A(1)、紫杉宁B(,2)、5 α-桂皮酰基红豆杉素(3)、紫杉宁A(4)、5 α-去桂皮酰基紫杉欧吉酚(5)、10-去乙酰基巴卡亭(6)。结论 化合物1、2、3、5为首次从曼地亚红豆杉中分离得到。     

东北红豆杉茎、叶及愈伤组织中紫杉醇含量的比较

目的:比较东北红豆杉茎、叶及愈伤组织中紫杉醇的含量。方法:用甲醇-氯仿(1∶1)提取样品,二氯甲烷与水萃取提取物,高效液相色谱法测定样品中紫杉醇的含量。结果:东北红豆杉愈伤组织、茎、叶中紫杉醇的含量分别为0.01830%、0.00128%、0.00066%,愈伤组织中紫杉醇的含量高于茎、叶。结论:本试验对合理开发和利用东北红豆杉、保护红豆杉属植物资源具有积极意义。     

高效液相色谱法测定南方红豆杉细胞悬浮液中紫杉醇含量

目的建立南方红豆杉细胞悬浮液中紫杉醇含量测定高效液相色谱法。方法以Unitary C18色谱柱（5μm,150.0 mm×4.6 mm）为分析柱,乙腈-水为流动相,流速为1.0 mL min-1,检测波长为227 nm,柱温30℃;进样量20μL。结果南方红豆杉细胞悬浮液中紫杉醇在此色谱条件下分离效果良好,其质量浓度在3.99～79.8 mg L-1（r=0.999 5）与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.1%,RSD值为2.5%。结论该方法操作简便、准确,重现性好,为南方红豆杉细胞悬浮液中紫杉醇的测定及其质量控制奠定了基础。     

高效液相色谱法测定不同生长年限南方红豆杉中紫杉醇的含量

目的 采用高效液相色谱法测定不同生长年限南方红豆杉中紫杉醇的含量。方法 采用Hypersil BDS C18色谱柱（200nlm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（58：42），流速1．0mL·min^-1，检测波长为227nm，柱温为25＇C。结果紫杉醇的线性范围为192～960ng，r=0．9999，平均回收率为97．56％，RSD为1．17％。结论 建立的方法可靠，可用于南方红豆杉中紫杉醇的含量测定。     

南方红豆杉枝叶中10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ的分离与纯化

目的：以南方红豆杉的枝叶为原料,研究其中活性成分10-脱乙酰巴卡亭Ⅲ（10-DABⅢ）的分离和纯化条件,并进行优化筛选.方法：综合运用浸提、萃取（包括液液萃取和反萃取）、色谱分离和重结晶技术得到10-DABⅢ晶体,并采用UV,HPLC法进行分析鉴定.结果：得到了用以合成高效抗癌药紫杉醇的前体--10-DABⅢ晶体,纯度可达91%,整个工艺收率达7.9%.结论：本实验为首次采用该工艺路线得到10-DABⅢ和紫杉醇,总收率达60%以上,可用于进一步的工业化研究.     

高效液相色谱法测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的含量

目的建立白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,资生堂CAPCELL PAK MG C18(100 mm×3.0 mm,3μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%甲酸溶液(65:35),流速0.6 mL·min-1,柱温25℃,白术内酯Ⅰ及Ⅲ检测波长为220 nm,白术内酯Ⅱ检测波长为280 nm,进样量10μL。结果白术内酯Ⅰ的线性范围为1.128⁵6.42μg·mL-1(r=0.999 9);白术内酯Ⅱ的线性范围为1.79056.42μg·mL-1(r=0.999 9);白术内酯Ⅱ的线性范围为1.790⁸9.50μg·mL-1(r=0.999 9);白术内酯Ⅲ的线性范围为1.26889.50μg·mL-1(r=0.999 9);白术内酯Ⅲ的线性范围为1.268⁶3.42μg·mL-1(r=0.999 9);平均加样回收率分别为98.5%(RSD=3.8%)、102.4%(RSD=2.8%)、98.6%(RSD=3.2%)。结论本方法简便、快速,测定结果准确可靠,可用于白术药材的质量控制。     

栽培曼地亚红豆杉针叶化学成分的分离与鉴定

目的对栽培于辽宁本溪的曼地亚红豆杉(Taxus media‘Hicksii’)针叶的化学成分进行研究。方法曼地亚红豆杉针叶的乙醇提取物经大孔树脂、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、凝胶柱色谱进行分离纯化,依据1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS、HRESI-MS鉴定其结构。结果从曼地亚红豆杉针叶的乙醇提取物中分离纯化得到6个化合物,分别鉴定为二萜类化合物:5-cinnamoyl-9-acetyltaxicin-I(1)、5-cinnamoyl-10-acetyltaxicin-I(2)、5-去桂皮酰基紫杉宁J(3)、紫杉醇(4);黄酮类化合物:柚皮素(5);脂肪酸类:十六烷酸(6)。结论化合物1、2、5和6为首次从曼地亚红豆杉中分离得到。     

HPLC法同时测定腰腿痛丸中麻黄碱、士的宁及马钱子碱的含量

目的采用HPLC法同时测定腰腿痛丸中麻黄碱、士的宁和马钱子碱的含量。方法采用HPLC法。色谱柱为安捷伦C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-1mL·L-1磷酸(12∶88);流速为1.0mL·min-1;检测波长为210和254nm;柱温为30℃。结果麻黄碱在1.0²5μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.7%;士的宁在2.025μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.7%;士的宁在2.0⁵0μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为99.1%;马钱子碱在250μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为99.1%;马钱子碱在2⁵0μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为97.9%。3批腰腿痛丸中麻黄碱、士的宁及马钱子碱的平均含量分别为93.1,106.7和76.8μg·g-1。结论该方法灵敏,精密度好,结果准确可靠。     

基于指纹图谱和网络药理学对曼地亚红豆杉质量标志物的分析研究

目的:基于指纹图谱和网络药理学方法,对曼地亚红豆杉质量标志物(Q-Marker)进行预测,建立基于Q-Marker的曼地亚红豆杉药材评价方法。方法:采用Waters SymmmetryShield^TM RP 18(250 mm×4.6 mm, 5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%三氟乙酸水为流动相,梯度洗脱,流速1 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长254 nm,进样体积10μL,建立8个年限24批曼地亚红豆杉药材指纹图谱并标定共有峰,采用层次聚类分析(hierarchical clustering analysis, HCA)进行分类评价,借助正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least square-discriminant analysis, OPLS-DA)筛选不同年限曼地亚红豆杉的主要差异性标志物;结合网络药理学,通过相应数据库筛选差异性标志物的核心靶点和关键通路,构建“成分-靶点-通路”网络图,以此预测曼地亚红豆杉的Q-Marker;采用HCA及主成分分析(principal component a...     

高效液相色谱法同时测定葛根提取物中5种异黄酮的含量

目的:建立葛根提取物中5种异黄酮含量测定的HPLC方法。方法:采用Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02 mol·L-1醋酸铵(醋酸调pH=4.6)为流动相,进行梯度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为260 nm,柱温为35℃。结果:葛根素、大豆苷、染料木苷、大豆素、染料木素分别在0.204～510.4μg·mL-1(r=0.999 9),0.201～503.0μg·mL-1(r=0.999 9),0.233～581.8μg·mL-1(r=0.999 9),0.201～502.4μg·mL-1(r=0.999 9),0.195～487.6μg·mL-1(r=0.999 9)范围内线性关系良好。平均回收率(n=6)分别为101.52%(RSD=0.69%),102.66%(RSD=0.30%),98.90%(RSD=0.26%),98.64%(RSD=0.29%),100.16%(RSD=0.20%)。结论:本方法快速、简便、精密度和重现性好、灵敏度高,可作为葛根提取物的含量控制方法。     

我国境内几种红豆杉的RAPD分析和染色体鉴定

用随机扩增多态性方法对6个红豆杉品种进行了基因组DNA多态性分析，从64条引物中共筛选出9个引物，获得RAPD谱带96条，其中多态条带(PPB)比率接近44．8％。D=0．60时，可将供试材料分为2类：第一类是西藏红豆杉，第二类包括其它5种红豆杉；D=0．50时．可将供试材料分为3类：第一类是西藏红豆杉，第二类是曼地亚红豆杉，第三类包括其它4种红豆杉；D=0．44时．进一步细分了其它4种红豆杉间的遗传差异，将东北红豆杉与其它3种区分开来。聚类分析结果表明：6个不同的红豆杉种间．中国红豆杉与南方红豆杉的亲缘关系最近，西藏红豆杉与曼地亚红豆杉的亲缘关系最远。几种红豆杉在染色体数目上并无差异。