粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗大鼠急性心肌梗塞

目的:探讨G-CSF动员的骨髓来源干细胞对急性心肌梗塞动物模型的治疗作用与对缺血濒死心肌的保护作用。方法:用异丙肾上腺素(ISO)复制急性心肌梗塞大鼠动物模型,于3h后用G-CSF动员骨髓干细胞释放和迁移至心肌梗塞部位,并分别于24h、48h和2周后杀死大鼠,取出心脏,检测心肌的病理变化情况。结果:用ISO后24h对照组可见散在心肌梗塞灶,坏死区周围有多量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,而治疗组大鼠心肌坏死程度较对照组轻,浸润的细胞以单个核细胞为主;48h后对照组心肌梗塞灶进一步扩大,呈散在片状分布,而治疗组心肌梗塞灶扩大不明显,呈散在灶性分布,并可见成堆或散在分布的淋巴细胞样细胞;2周后,治疗组未见明显心肌梗塞后疤痕组织,可见新生的心肌细胞生长。结论:G-CSF对缺血濒死心肌有保护作用,用G-CSF动员骨髓来源的干细胞进行"自我移植",可用于急性心肌梗塞的治疗。     

粒细胞集落刺激因子在干细胞移植中的应用进展

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种促粒细胞增殖的细胞因子,主要应用于各种原因引起的粒细胞减少症。近年来大量国内外的基础及临床研究表明,G-CSF能够动员骨髓间充质及外周血中的造血干细胞,在干细胞移植领域中为干细胞的释放、富集、动员、促进迁移、诱导分化等一系列问题的解决提供了一种新思路。本文旨在对G-CSF在干细胞移植领域中的新进展进行综述。     

干细胞因子与粒细胞集落刺激因子预处理对大鼠骨髓间质干细胞增殖分化的影响

目的：探讨干细胞因子（SCF）和粒细胞集落刺激因子（G-CSF）促进骨髓间质干细胞（MSCs）增殖及促进其向心肌细胞分化的作用。方法：将SD大鼠随机分成对照组、SCF组、G-CSF组和SCF＋G-CSF联合处理组。流式细胞仪检测第4代MSCs细胞周期。用DAPI（25 mg/L）标记的P4MSCs与心肌细胞共培养。在共培养的第1 d至第5 d用免疫荧光技术分别检测心肌特异性肌节肌球蛋白重链（MHC）、肌钙蛋白T（TnT）的表达，统计向心肌样细胞分化的MSCs百分率。结果：（1）SCF和G-CSF联合应用能明显诱导MSCs进入S期，单因子SCF组和G-CSF组与对照组相比，也明显促进MSCs由G₀/G₁期进入S期（P<0.01）。（2）MSCs与心肌细胞共培养后，SCF和G-CSF联合组MSCs表达心肌特异性蛋白MHC及TnT的阳性百分率均显著高于对照组（P<0.01），单细胞因子组MSCs的心肌特异性蛋白MHC及TnT的阳性表达亦高于对照组（P<0.01）。结论： SCF和G-CSF对MSCs具有促增殖、促分化的作用。     

粒细胞集落刺激因子动员外周血干细胞富集致肺损伤1例

背景：使用粒细胞集落刺激因子动员外周血干细胞后导致急性肺损伤仅有零星报道,机制尚不清楚。 目的：探讨应用重组人粒细胞集落刺激因子动员外周血干细胞富集导致肺损伤的临床表现、机制。 方法：报告1例粒细胞集落刺激因子动员外周血干细胞时导致咯血和影像学肺部结节状、片状阴影,并复习相关文献。 结果与结论：粒细胞集落刺激因子可能会导致肺损伤,机制可能和中性粒细胞在肺部聚集、黏附、释放炎症递质有关。     

粒细胞集落刺激因子干预性治疗大鼠心肌梗塞的实验研究

目的：探讨用粒细胞集落刺激因子（G-CSF）干预性治疗心肌梗塞动物模型的作用。方法：健康大鼠随机分为心肌梗塞干预性治疗组和心肌梗塞对照组。干预性治疗组予G-CSF 10 μg·kg^-1·d^-1皮下注射5 d,并于第3 d用盐酸异丙肾上腺素（ISO）5 mg/kg腹腔注射复制大鼠心肌梗塞模型。对照组皮下注射等量生理盐水5 d,也于第3 d用ISO复制心肌梗塞模型。两组均于注射ISO后2周、4周将动物处死,取出心脏,病理检查大鼠心肌梗塞的病理变化情况。结果：注射ISO后2周、4周,干预性治疗组心室肌疤痕组织面积显著小于对照组（P<0.05）,并可见到心肌细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞的再生。结论：G-CSF能促进梗死后心肌组织再生,明显减少心肌梗塞后疤痕组织范围,可用于急性心肌梗塞的干预性治疗。     

联合应用粒细胞集落刺激因子和骨髓基质干细胞治疗急性心肌缺血的实验研究

目的： 探讨粒细胞集落刺激因子和自体骨髓基质干细胞移植共同应用对心肌缺血的治疗作用。方法: 采用自体骨髓基质干细胞（MSCs）在体外培养扩增。在结扎冠状动脉造成急性心肌缺血后，把被5溴-2脱氧尿苷（BrdU）标记后的MSCs移植到自体的缺血心肌中，同时腹腔注射粒细胞集落刺激因子5 d。4周后通过激光共聚焦显微镜验证移植后的MSCs是否向心肌细胞分化，通过心脏彩超和多导生理记录仪测定缺血心肌在移植自体MSCs后是否能提高心功能。另外，用Masson 氏3色染色法从左室中断面切片量化心肌梗死范围。结果: 移植4周后，MSCs向肌细胞分化，表达出α-横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）和存在于心肌闰盘中的connexin 43，粒细胞集落刺激因子和自体骨髓基质干细胞移植结合应用的治疗组，左心室收缩功能明显强于单独应用自体骨髓基质干细胞移植的治疗组，移植后心肌左室收缩功能明显强于对照组，并且心肌梗死范围最小。结论: MSCs移植后可以向心肌细胞分化，粒细胞集落刺激因子可以动员机体内自体MSCs到心肌缺血区域，两者共同应用对于缺血心肌有协同治疗作用。     

干细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子与心肌梗死大鼠体内骨髓间充质干细胞的迁移

背景：外周静脉移植间充质干细胞只有1%~5%的移植细胞能归巢到心肌梗死区域。 目的：观察干细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子对骨髓间充质干细胞归巢的影响。 方法：采用贴壁培养法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,取传至3~5代细胞。建立SD大鼠急性心肌梗死模型,干细胞生长因子组、粒细胞集落刺激因子组、干细胞生长因子+粒细胞集落刺激因子组在骨髓间充质干细胞移植前3 d和移植后3 d单独或混合皮下注射干细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子,骨髓间充质干细胞组不注射细胞因子。 结果与结论：荧光显微镜下观察,骨髓间充质干细胞迁移至心肌梗死组织,骨髓间充质干细胞组、干细胞生长因子组、粒细胞集落刺激因子组迁移至心肌梗死区的骨髓间充质干细胞数量没有明显的区别(P > 0.05),干细胞生长因子+粒细胞集落刺激因子组的骨髓间充质干细胞数量明显高于其他3组(P < 0.05)。免疫荧光组织化学显示,植入的部分骨髓间充质干细胞表达心肌特异蛋白cTnI。结果说明干细胞生长因子和粒细胞集落刺激因子两种细胞因子联合应用可以促进骨髓间充质干细胞归巢至心肌梗死区域,在体内微环境的诱导下,骨髓间充质干细胞能够转化为心肌样细胞。     

大鼠急性心肌梗死后骨髓干细胞归巢于缺血心肌的时间窗研究

目的：初探心肌梗死后骨髓干细胞归巢于心肌组织的时间窗。 方法： 110只大鼠随机分为4组，GM-CSF干预组(n=40)皮下注射GM-CSF (50 μg/kg/d) 5 d，对照组(n=40)皮下注射同等剂量生理盐水，GM-CSF干预假手术组(n=15)，对照假手术组(n=15)，结扎左冠状动脉前降支复制急性心肌梗塞动物模型，同时复制假手术模型。各组在心梗后1 、3 、5 、10 d免疫组化法观察心肌组织中归巢的ckit+细胞数量，28 d测定血压、室内压及±dp/dt值变化，观察两组大鼠瘢痕组织修复差异。 结果： ①心梗后28 d GM-CSF干预组心功能显著高于对照组(P<0.05)；②GM-CSF干预组瘢痕组织横径显著高于对照组(P<0.05)，梗死区平均心肌面积显著高于对照组(P<0.05)；③GM-CSF干预组与对照组1，3，5 d均有ckit+细胞归巢现象，以第5 d最为密集，第10 d未再有新归巢的ckit+细胞，GM-CSF干预组各时点ckit+细胞归巢数量显著高于对照组(P<0.05)。 结论： 骨髓干细胞归巢的时间窗为心梗后10 d以内。     

超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑梗死的在体磁敏感加权成像研究

目的 超顺磁性氧化铁(SPIO)体外标记骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗大鼠脑梗死,使用磁敏感加权成像(SWI)监测BMSC在脑内的分布与迁移.方法 原代培养大鼠BMSC,SPIO体外标记第3代BMSC,倒置显微镜及普鲁士蓝染色观察.改良Longa法制作大鼠左侧脑梗死模型,缺血对侧顶叶脑皮层移植SPIO标记的BMSC.分别在移植后1d、1周、2周和4周进行SWI序列MRI动态观察,移植后4周脑组织普鲁士蓝染色观察.结果 移植后1d、1周、2周和4周SWI序列MRI检测均可显示缺血对侧半球移植的SPIO标记BMSC所致的低信号;移植后2周可见沿胼胝体腹侧走行的线状低信号影;移植后4周移植细胞所致的“彗星状”改变更为明显,彗星尾向缺血侧延伸.移植后4周脑组织切片普鲁士蓝染色显示胼胝体内迁移的蓝染细胞呈条带状排列.结论 SWI序列可显示移植部位SPIO标记BMSC所致的低信号,且可以明确显示其在大鼠脑组织内的迁移.     

G-CSF动员自体造血干细胞在大鼠MCAO/R模型分化为神经元样细胞

探讨G-GSF动员自体HSCs在大鼠MCAO／R模型中分化为神经元样细胞的研究。采用大鼠大脑中动脉栓塞／再灌注(MCAO／R)模型,应用粒细胞集落刺激因子(G-GSF),促进骨髓造血干细胞(HSCs)分裂增殖并向靶区“归巢”,达到动员目的。观察大鼠神经病学评分,HE染色和免疫组化法观察病理改变及CD34、巢蛋白(Nestin)阳性细胞的表达。模型大鼠脑缺血／再灌注后24h时,大量淋巴、单核细胞浸润,脑缺血区少量Nestin细胞表达,无CD34细胞表达。模型动员组48h后,脑缺血区尤其是皮层缺血区大量CD34及Nestin阳性细胞表达,72h后CD34^ 细胞消失,但仍存在大量Nestin阳性细胞,且胞突增长;模型未动员组各时段未发现CD34^ 细胞,且Nestin阳性细胞明显少于动员组。结论：应用G-GSF可动员大鼠自体HSCs并向脑缺血区迁移,并可以分化为神经元前体细胞。     

川芎嗪联合骨髓间充质干细胞移植抑制脑缺血大鼠神经细胞凋亡

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)联合骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对脑缺血大鼠神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养BMSCs,传代至第3代用于尾静脉移植。采用线栓法诱导大鼠右侧大脑中动脉阻塞模型,除假手术组外,大鼠随机分为模型组、BMSCs(1×10~9/L)组、川芎嗪(40 mg/kg)组和联合(川芎嗪+BMSCs)组,每组12只。缺血后第1、7和14天采用改良的神经损伤严重程度评分(modified neurological severity scoring,m NSS)进行神经功能评价。缺血后第14天,甲苯胺蓝染色检测脑梗死体积,HE染色观察脑组织病理学变化,采用原位末端标记(TUNEL)法观察神经细胞凋亡数,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测Bax和Bcl-2的mRNA及蛋白表达。结果:与BMSCs组和川芎嗪组比较,联合组m NSS评分显著减少(P0.01),梗死体积显著减少(P0.01),缺血引起的脑缺血周边区病理性损伤明显减轻,TUNEL阳性细胞数显著减少(P0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达显著增加,Bax的mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论:川芎嗪联合BMSCs移植能显著促进脑缺血后大鼠的功能恢复,减少梗死体积,减轻脑组织缺血性损伤,抑制神经细胞凋亡,机制可能与调控Bcl-2和Bax的表达有关。     

骨髓间充质干细胞联合依达拉奉移植脑梗死大鼠血清炎性因子的表达

BACKGROUND:To inhibit the expressions of prothrombin activator inhibitor 1 and tissue plasminogen activator is one potential target for the treatment of cerebral infarction. OBJECTIVE:To investigate the expressions of serum inflammatory cytokines in rats with cerebral infarction undergoing bone marrow mesenchymal stem cell transplantation combined with edaravone. METHODS:Sixty Sprague-Dawley rats were enrolled to prepare models of focal cerebral infarction by middle cerebral artery occlusion, and were randomly divided into four groups. Rats were given intravenous injection of PBS via tail veins for 5 consecutive days as model group, rats were subjected to intravenous injection of 2.0×10⁹ /L bone marrow mesenchymal stem cell suspension (1 mL) via tail veins, twice daily for 5 days as stem cell transplantation group, and those were given intravenous injection of 30 mg edaravone combined with intravenous injection of 2.0×10⁹/L bone marrow mesenchymal stem cell suspension (1 mL) via tail veins for 5 days, twice daily, as combined group. RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the model group, modified neurologic severity scores were lower, expressions of serum prothrombin activator inhibitor 1 and tumor necrosis factor-α mRNA in the brain decreased, and the infarct area reduced in the stem cell transplantation and combined groups. And the changed levels of above indicators in the combined group were significantly larger than those of the stem cell transplantation group. In conclusion, combination of bone marrow mesenchymal stem cell transplantation with edaravone can promote neural function recovery after cerebral infarction.     

骨髓间充质干细胞移植脑梗死大鼠：神经功能恢复与突触素的表达

BACKGROUND:Synaptophysin plays an important role in the recovery of neural function after cerebral ischemia. OBJECTIVE:To investigate the effects of bone marrow mesenchymal stem cell transplantation on nervous function and expression of synaptophysin after cerebral infarction. METHODS:Totally 60 rats were equivalently randomized into four groups, including sham operation, control, model and stem cell treatment groups. Rats in the control, model and stem cell treatment groups were used for preparing cerebral infarction models, and the remaining underwent the sham operation. After 1 day of modeling, bone marrow mesenchymal stem cells were transplanted into the rat lateral ventricle in the stem cell treatment group, and rats in the control group was given the injection of the same amount of PBS. After 1, 7 and 14 days of treatment, rat’s neurological function was scored on beam-walking test, rotarod test and screen test, and expression of synaptophysin was detected by RT-PCR and immunohistochemical assay. RESULTS AND CONCLUSION:At 7 and 14 days after treatment, the beam-walking test, rotarod test and screen test scores in the stem cell treatment group were significantly lower than those in the control and model groups (P < 0.05), and the above scores showed no significant differences between the control group and model group (P > 0.05). At 1 day after treatment, the mRNA expression of synaptophysin and the number of synaptophysin-positive cells in the sham operation group were significantly higher than those in the other three groups (P < 0.05); at 7 and 14 days after treatment, the mRNA expression of synaptophysin and the number of synaptophysin-positive cells in the stem cell treatment group were significantly increased compared with the other three groups (P < 0.05), and additionally, the mRNA expression of synaptophysin and the number of synaptophysin-positive cells in the sham operation group were significantly lower than those in the model and control groups (P < 0.05). These findings suggest that bone marrow mesenchymal stem cell transplantation can effectively promote the recovery of neurological function in cerebral infarction rats, and partially promote the formation of synaptophysin.     

汉防已甲素对大鼠实验性脑梗塞的影响

目的和方法：选用热凝造成大脑中动脉阻断（ＭＣＡＯ）而致实验性大鼠脑局灶性缺血模型，观察汉防己甲素（ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ，ＴＥＴ）对大鼠脑局灶性缺血的防治作用。结果：ＴＥＴ组用药七天，脑梗塞范围明显小于缺血组，缺血区脑组织Ｃａ２＋、Ｎａ＋、过氧化脂质（ＬＰＯ）、血浆血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）明显低于缺血组，而超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）明显高于缺血组，６－酮－前列腺素Ｆ１α（６－ｋｅｔｏＰＧＦ１α）无显著改变，ＴＸＢ２／６－酮（Ｔ／Ｋ）比值明显低于缺血组。结论：ＴＥＴ具有对大鼠ＭＣＡＯ局灶性脑缺血有效的防治作用，其机制可能与减少脑组织缺血区Ｃａ２＋、Ｎａ＋、ＬＰＯ含量，降低ＴＸＢ２，使Ｔ／Ｋ比值趋于正常有关。     

丹红注射液联合骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑梗死

背景：单纯骨髓间充质干细胞移植修复受损脑组织的作用并不十分理想。 目的：观察丹红注射液联合骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑梗死的效果。 方法：用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞模型,随机分为3组,模型组尾静脉注射PBS、丹红注射液组尾静脉注射2 mL/kg丹红注射液、联合治疗组联合注射2 mL/kg丹红注射液+2.0×10⁹ L^-1的骨髓间充质干细胞悬液,连续5 d,1次/d。 结果与结论：在骨髓间充质干细胞移植后2周,联合治疗组神经功能评分明显优于模型组及丹红注射液组(P < 0.05);移植后3周联合治疗组大鼠脑梗死体积明显小于模型组和丹红注射液组(P < 0.05);病理组织学观察也可见联合治疗组的组织损伤减轻程度大于丹红注射液组和模型组。结果可见丹红注射液联合骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脑梗死疗效显著,可以对脑细胞起到保护作用。