CD34+细胞的心肌细胞分化潜能研究

目的:了解粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的CD34+细胞的心肌细胞分化潜能。方法:用异丙肾上腺素(ISO)复制急性心肌梗死大鼠动物模型,于3 h后用G-CSF动员骨髓造血干细胞进行心肌梗死动物模型的“自身干细胞移植”,用免疫组化和HE染色方法检测动物模型心梗区的CD34⁺细胞浸润以及心肌细胞再生情况。结果:用ISO后24 h,G-CSF处理组大鼠心梗区可见大量CD34⁺单个核细胞浸润,并有CD34⁺的新生心肌细胞生长,2周后疤痕组织不明显;而对照组心梗坏死区有大量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,无CD34+细胞浸润及新生心肌细胞生长,2周后出现较大量的疤痕组织。结论:G-CSF动员CD34⁺细胞具有向心肌细胞分化的潜能,用G-CSF 动员造血干细胞的“干细胞自身移植”,可治疗急性心肌梗死。     

粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗大鼠急性心肌梗塞

目的:探讨G-CSF动员的骨髓来源干细胞对急性心肌梗塞动物模型的治疗作用与对缺血濒死心肌的保护作用。方法:用异丙肾上腺素(ISO)复制急性心肌梗塞大鼠动物模型,于3h后用G-CSF动员骨髓干细胞释放和迁移至心肌梗塞部位,并分别于24h、48h和2周后杀死大鼠,取出心脏,检测心肌的病理变化情况。结果:用ISO后24h对照组可见散在心肌梗塞灶,坏死区周围有多量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,而治疗组大鼠心肌坏死程度较对照组轻,浸润的细胞以单个核细胞为主;48h后对照组心肌梗塞灶进一步扩大,呈散在片状分布,而治疗组心肌梗塞灶扩大不明显,呈散在灶性分布,并可见成堆或散在分布的淋巴细胞样细胞;2周后,治疗组未见明显心肌梗塞后疤痕组织,可见新生的心肌细胞生长。结论:G-CSF对缺血濒死心肌有保护作用,用G-CSF动员骨髓来源的干细胞进行"自我移植",可用于急性心肌梗塞的治疗。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰CD34~+细胞静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死

背景:近年来,已有实验证实经颅直接给予胶质细胞源性神经营养因子(glialcell-derived neurotrophic factor,GDNF)或携带GDNF基因病毒载体有显著减少脑梗死体积、促进神经功能恢复的疗效,但其治疗方法有创,临床应用有限。目的:观察GDNF基因转染的人脐血CD34+细胞经静脉移植对自发性高血压大鼠脑梗死的疗效,并探讨其机制。方法:分离人脐血CD34+细胞,脂质体方法转染pEGFP-GDNF质粒和pEGFP空载体至CD34+细胞制备pEGFP-GDNF-CD34+和pEGFP-CD34+细胞;制备60只雄性自发性高血压大鼠大脑中动脉栓死模型并随机分为3组:pEGFP-GDNF-CD34+细胞移植组(基因细胞组)、pEGFP-CD34+细胞移植组(单纯细胞组)、生理盐水组。改良神经功能损害评分评价神经功能恢复状况;图像分析法观察TTC染色脑梗死体积;酶联免疫法检测细胞培养液与脑组织匀浆GDNF水平,荧光显微镜及免疫组织化学检测绿色荧光蛋白标记CD34+细胞及其人神经胶质纤维酸性蛋白和人神经元核抗原表达。结果与结论:经静脉移植pEGFP-GDNF-CD34+细胞向自发性高血压大鼠脑缺血区域迁移、存活、并向神经细胞定向分化,促进神经功能恢复。GDNF基因转染CD34+细胞在脑组织存活、向神经细胞分化及对大脑神经功能保护作用优于CD34+细胞。脑组织GDNF水平可能是GDNF基因转染CD34+细胞和单纯CD34+细胞移植治疗自发性高血压大鼠局灶性脑缺血疗效差异机制之一。     

骨髓干细胞动员后归巢梗死心肌的实验研究

目的初步探讨骨髓干细胞动员后归巢梗死心肌的可能机制。方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉制作急性心肌梗死(acutemyocardialinfarction,AMI)模型,用干细胞因子(SCF)动员骨髓干细胞,部分大鼠予激素干预治疗,另设AMI组为对照组(A组)。制模后24h杀死大鼠,取出心脏,免疫组化法了解归巢于梗死心肌的CD34细胞数量,心肌组织中炎症趋化因子基质细胞衍生因子(SDF-1)表达量,以及HE染色观察心肌组织学变化。结果应用SCF动员治疗后,AMI 动员组(A1组)大鼠梗死灶内SDF-1表达量明显大于AMI组和AMI 激素 动员组(A2组),同时AMI 动员组(A1组)大鼠梗死灶内CD34阳性细胞数量也明显大于另2组。而AMI 激素 动员组(A2组)的SDF-1表达量最少,其梗死灶内CD34阳性细胞数量也最少。AMI 动员组(A1组)大鼠心肌梗死程度轻,可见CD34阳性的幼稚心肌细胞样细胞。结论应用SCF动员AMI大鼠的骨髓干细胞后,其向梗死灶归巢的能力增强,较多CD34细胞迁移到缺血灶内,并向心肌细胞等分化。骨髓干细胞动员后,心肌梗死灶内SDF-1表达量上调是吸引骨髓干细胞归巢的可能机制之一。     

G-CSF动员自体造血干细胞在大鼠MCAO/R模型分化为神经元样细胞

探讨G-GSF动员自体HSCs在大鼠MCAO／R模型中分化为神经元样细胞的研究。采用大鼠大脑中动脉栓塞／再灌注(MCAO／R)模型,应用粒细胞集落刺激因子(G-GSF),促进骨髓造血干细胞(HSCs)分裂增殖并向靶区“归巢”,达到动员目的。观察大鼠神经病学评分,HE染色和免疫组化法观察病理改变及CD34、巢蛋白(Nestin)阳性细胞的表达。模型大鼠脑缺血／再灌注后24h时,大量淋巴、单核细胞浸润,脑缺血区少量Nestin细胞表达,无CD34细胞表达。模型动员组48h后,脑缺血区尤其是皮层缺血区大量CD34及Nestin阳性细胞表达,72h后CD34^ 细胞消失,但仍存在大量Nestin阳性细胞,且胞突增长;模型未动员组各时段未发现CD34^ 细胞,且Nestin阳性细胞明显少于动员组。结论：应用G-GSF可动员大鼠自体HSCs并向脑缺血区迁移,并可以分化为神经元前体细胞。     

甘露醇促进人脐血CD34+细胞通过血脑屏障静脉迁移至高血压脑梗死大鼠脑组织

背景：单纯脐血细胞经静脉移植治疗脑梗死疗效有限,移植细胞经血脑屏障迁入脑内数量不足为重要原因之一。 目的：观察血脑屏障开放剂甘露醇对人脐血CD34⁺细胞经静脉移植治疗高血压大鼠脑梗死疗效的影响。 方法：分离人脐血CD34⁺细胞,脂质体方法转染pEGFPF质粒,制备pEGFP-CD34⁺细胞;45只雄性SD大鼠经线栓法建立大脑中动脉栓塞模型,造模后24 h随机分为3组：实验组注射1×10⁶ GFP-CD34⁺细胞,继之注射20%甘露醇2 g/kg;阳性对照组注射1×10⁶ GFP-CD34⁺细胞;空白对照组注射等量生理盐水。 结果与结论：①荧光显微镜下实验组每张切片脑组织GFP标记阳性的绿色荧光细胞计数平均值显著多于阳性对照组。②移植后第7天治疗组与其他各组神经功能损害评分差异无显著性意义;移植后28 d,各组神经功能均有不同程度恢复,实验组神经功能恢复明显优于阳性对照组和空白对照组(P < 0.05)。③实验组与其他两组相比,大鼠脑梗死体积均显著减少。④实验组脑组织匀浆胶质细胞源性神经营养因子水平较阳性对照组、空白对照组明显增高。提示血脑屏障开放剂甘露醇促进静脉移植CD34⁺细胞通过血脑屏障迁入至脑组织,并增强静脉移植CD34⁺细胞治疗脑梗死的疗效。     

大鼠慢性局灶脑缺血区CD8抗原表达的免疫组织化学研究

本文目的在于探查免疫分子 CD8抗原在脑缺血区表达的状况 ,进而探讨免疫因素与慢性局灶脑缺血的病理联系。采用大脑中动脉阻塞的局灶脑缺血模型和免疫组织化学 ABC方法观察 3 6只成年雄性 SD大鼠脑缺血区 CD8抗原表达的细胞种类、分布形式和表达时程。结果证明 :慢性局灶脑缺血诱导脑缺血区 CD8抗原表达 ,其阳性细胞呈无突起的圆形和分支状二类。圆形细胞在脑缺血 3 d时 ,其数量显著增加 (P<0 .0 5 ) ,位于大脑皮质梗塞灶的边缘 ,阳性细胞于脑缺血 1周达到高峰 (P<0 .0 1) ,此时 ,大部分阳性细胞已迁移到梗塞灶中央区并显示为大小和形状不同的无突起的细胞。分支状的 CD8阳性细胞出现在大脑皮质梗塞灶周围和缺血侧尾壳核 ,其数量在脑缺血 3 d显著增加 (P<0 .0 5 ) ,于脑缺血 1周 (尾壳核 )和 2周 (大脑皮质 )时达到高峰 (P<0 .0 1) ,随后缓慢下降 ,分支状的 CD8阳性细胞主要分布于大脑皮质梗塞灶的“半影区”和尾壳核的背外侧区。结果表明 :慢性局灶脑缺血诱导 CD8阳性 T淋巴细胞在脑缺血区浸润以及小胶质细胞的反应和激活 ,提示免疫因素与慢性局灶脑缺血有关联     

脑出血后的病理改变与T淋巴细胞反应

目的:探讨脑出血血肿周围局部病理改变及细胞免疫机制。方法:用免疫组化方法及组织HE染色法观察20只大鼠尾壳核脑出血24 h,3天、7天血肿周围区域的组织病变及CD3 、CD8 T淋巴细胞的分布形式和表达时程。结果:①在脑出血后24 h血肿周围即可见明显血管源性水肿,大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞为主,少量散在淋巴细胞、小胶质细胞、星形细胞、少突胶质细胞弥漫浸润;出血3天、7天以淋巴细胞、巨噬细胞浸润为主,小胶质细胞、星形细胞、少突胶质细胞增生明显,双侧半球皮层下和血管周围出现小胶质细胞结节;②出血灶周围CD3 和CD8 T淋巴细胞浸润在出血后24 h已可见,出血后3天组和出血后7天组,CD3 和CD8 阳性细胞数明显高于出血后24 h组。结论:①脑出血期以中性粒细胞反应为主,以后以淋巴细胞反应为主,胶质细胞反应在出血后24 h已发生,持续一周以上;②CD3 、CD8 阳性细胞的出现提示它们参与了出血后脑损伤的病理过程,在出血7天内, CD3 和CD8-阳性细胞反应呈增强趋势。     

有氧运动训练可通过调节脑血管生成及神经炎症反应改善大鼠缺血性脑损伤

目的：探讨有氧运动改善大鼠缺血性脑损伤的可能作用机制。方法：将大鼠分为假手术（sham）组、脑中动脉栓塞局灶缺血性脑损伤（MCAO）组及有氧运动治疗（MCAO+E）组，每组12只；通过TTC染色及神经功能评分分别检测三组大鼠脑梗死体积及神经功能障碍情况，转棒实验评估三组大鼠平衡及运动协调能力；HE染色及TUNEL染色检测三组大鼠脑梗死灶细胞凋亡情况；运用FITC标记葡聚糖检测三组大鼠脑梗死灶血管密度，免疫荧光染色及ELISA法检测三组大鼠梗死灶炎症发生情况。结果：三组大鼠TTC染色表明，MCAO+E组梗死灶体积及神经功能评分较MCAO组均显著降低（P<0.01），转棒实验MCAO+E组大鼠滚筒持续时间较MCAO组显著延长（P<0.01）;MCAO+E组梗死灶细胞凋亡较MCAO组显著减少（P<0.001），脑血管生成显著增多（P<0.001）;MCAO组炎症细胞活化增多，功能增强，MCAO+E组可显著减少MCAO组引起的炎症细胞活化及功能增强（P<0.01）。结论：有氧运动训练可能通过促进血管生成抑制炎症反应，从而降低梗死灶细胞凋亡水平，最终改善大鼠缺血性脑...     

骨髓干细胞动员对大鼠缺血心肌的治疗作用

目的：了解干细胞动员剂动员的骨髓干细胞的心肌细胞分化潜能及对缺血心肌的影响。方法：用异丙肾上腺，素(ISO)制作大鼠心肌梗死模型，联用粒细胞集落刺激因子(C-CSV)和辛伐他汀动员大鼠自体骨髓干细胞释放和迁移至心肌梗死区，用ISO后24小时、4周杀死大鼠，取出心脏，通过免疫组化、HE染色和VG染色方法观察大鼠心梗灶的CD34^ 细胞的浸润及心肌血管再生、心肌纤维化的情况。结果：用ISO后24小时，动员组大鼠心梗区可见CD34^ 细胞浸润，并有CD34^ 的新生心肌细胞生长，4周时瘢痕组织少，心肌纤维化程度轻，缺血心肌基本结构得到保护。结论：急性心梗发生后，联用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和辛伐他汀能迅速动员自体骨髓干细胞向心梗区内迁移、存活和向心肌细胞、血管内皮细胞等分化；并能抑制缺血心肌纤维化和保护缺血心肌基本结构。     

动员造血干细胞对局灶性缺血再灌注大鼠脑组织C-FOS mRNA表达的影响

目的探讨应用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员自体造血干细胞(HSC)对大脑中动脉栓塞/再灌注大鼠(MCAO/R)脑组织C-FOSmRNA表达的影响。方法制作MCAO/R模型;免疫组化双标记法鉴定HSC向神经元样细胞分化;RT-PCR法检测C-FOSmRNA表达水平。结果模型 G-CSF组再灌注后24 h出现CD34/Brdu双标记,48 h时双标记最为显著;再灌注后48 h出现CD34/NSE双标记。模型组各时间点C-FOSmRNA表达显著高于假手术组;G-CSF致再灌注48 h后C-FOSmRNA表达显著下调。结论应用G-GSF动员大鼠自体HSC可促进脑缺血再灌注损伤修复,调节C-FOSmRNA表达水平可能为其作用机制之一,而部分HSC来源的细胞分化为神经元样细胞可能参与缺血损伤修复过程。     

局灶性脑梗死出血转化模型中基质金属蛋白酶9的表达

背景：理论上来说,出血性转化可发生于任何脑梗死患者,可见于脑梗死自然演变病程的任何阶段。因此进一步从缺血时间和再灌注角度进行梗死后出血转化发病机制研究可以为临床预防和治疗梗死后出血转化提供理论依据。 目的：观察持续性脑梗死与脑缺血再灌注大鼠脑组织基质金属蛋白酶9的表达。 方法：将健康雄性成年Wistar大鼠随机分为3组：即假手术组、缺血再灌注组、持续脑梗死组。采用线栓法制成大脑中动脉闭塞模型,缺血再灌注组在相应缺血时间点(4.5,6,12,24,48 h)将线栓拔出再灌注24 h,假手术组手术过程同缺血再灌注组,但未置入栓线。持续脑梗死组制成大脑中动脉闭塞模型,但中间不取出栓线。分别于术后2 h进行模型成功评价,并于术后相应时间点进行神经功能障碍评分;TTC染色观察脑组织发生出血转化情况;用免疫组化方法测定基质金属蛋白酶9的表达。 结果与结论：脑梗死后4.5 h内血流再通神经功能评分明显提高,6 h以后尤其12 h以后血流再通将加重神经功能缺损;在缺血再灌注组内随着缺血时间的延长神经功能评分逐渐降低,缺血48 h降至最低。脑组织TTC染色可见缺血12,24,48 h再灌注大鼠均有不同程度的出血转化发生。基质金属蛋白酶9以负性因素参与再灌注损伤和出血性转化,加重缺血再灌注损伤以及促进出血性转化发病。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程      

尾静脉注射骨髓基质细胞和腹腔注射粒细胞集落刺激因子治疗大鼠脑梗死

背景：骨髓间充质干细胞具有成神经分化特性,有很多试验也证实粒细胞集落刺激因子可以用于改善脑梗死后的神经功能。 目的：比较静脉移植骨髓间充质干细胞和腹腔注射粒细胞集落刺激因子动员干细胞来治疗大脑中动脉闭塞模型大鼠疗效。 方法：实验以改良的Zea-longa线栓法阻断大脑中动脉建立SD大鼠脑梗死模型,造模24 h后分别通过尾静脉注射骨髓间充质干细胞或腹腔注射粒细胞集落刺激因子。 结果与结论：两种治疗方法均可改善脑梗死模型大鼠的运动和认知功能,且粒细胞集落刺激因子对脑梗死模型大鼠的运动和认知功能的改善比尾静脉注射骨髓间充质干细胞明显,移植后第7,14天,粒细胞集落刺激因子组梗死面积小于骨髓间充质干细胞组(P < 0.05),粒细胞集落刺激因子组BrdU阳性细胞数多于骨髓间充质干细胞组(P < 0.05)。提示粒细胞集落刺激因子动员骨髓干细胞治疗脑梗死的疗效可能优于骨髓间充质干细胞静脉注射的移植方法。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后在多脏器的分布*

背景：利用绿色荧光蛋白转基因小鼠间充质干细胞自身携带荧光性的特点,干预重症急性胰腺炎大鼠后,便于动物体内跟踪观察。 目的：观察绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞在重症胰腺炎大鼠体内各脏器的分布情况。 方法：直接贴壁法分离培养绿色荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞,90%融合后消化传代扩增。传至第3代后行CD29+、CD90+、CD34-、CD45-细胞免疫表型鉴定。显微镜下逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠制造SD大鼠重症急性胰腺炎模型。1 h后,按2×106/只尾静脉注入重症急性胰腺炎SD大鼠体内。分别于6,12,24 h取肝、肾、脑、肺、胰、肠脏器送普通病理检查,观察胰腺病理变化及骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎SD大鼠后在各脏器干细胞分布情况及灰度值测定。 结果与结论：胰腺破坏随时间延长而加强,24 h破坏最严重;GFP小鼠CD29阳性细胞91.1%,CD90阳性细胞93.5%,CD34阳性细胞0.82%,CD45阳性细胞2.22%;注射干细胞SD大鼠各脏器均有绿色荧光出现,并随时间增长而增强;在肾脏组织中灰度值最高,脑组织最少。提示骨髓间充质干细胞干预重症急性胰腺炎大鼠后能在各脏器稳定分布。 关键词：重症急性胰腺炎;器官分布;骨髓间充质干细胞;干预;鼠 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.10.001     

依达拉奉干预永久性脑缺血大鼠神经干细胞增殖及分化

目的 探讨依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内内源性神经干细胞的影响.方法 采用电凝法建立大鼠永久性脑缺血模型.将30只SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组与依达拉奉组,每组10只,模型制作成功后6 h,1.5 g/L依达拉奉组腹腔注射依达拉奉(10 ml/kg),每天1次,假手术组与脑缺血组腹腔注射等体积的生理盐水,连续注射...     

亚低温对构建脑梗死模型大鼠梗死区神经再生微环境的影响

BACKGROUND: Numerous studies have demonstrated that mild hypothermia has a better protective effect on neurons after cerebral infarction. OBJECTIVE:To investigate the effect of mild hypothermia on nerve regeneration microenvironment of infarcted area in rat models of cerebral infarction and analyze its possible effects on neural functional recovery after cerebral infarction. METHODS:Twenty out of 65 adult female Sprague-Dawley rats were randomly selected as the sham group. The remaining 45 rats were subjected to carotid artery ligation to establish rat models of cerebral infarction. Five rats were rejected because of modeling failure or death, the remaining 40 rats were randomly and evenly divided into cerebral infarction and mild hypothermia groups. The head temperature of rats in the cerebral infarction group was downregulated to (37±1) ℃ using a semiconductor refrigeration instrument. The rats were transferred to the room with the temperature of 25 ℃ after the operation. Brain hypothermia was also induced in rats from the mild hypothermia group. At 13.0-14.0 minutes after establishing rat models of cerebral ischemia, the head on the side of cerebral ischemia was tightly connected with the probe of the semiconductor refrigeration instrument. The refrigerator temperature was adjusted to 6-8 ℃, so as to make the temperature of brain tissue on the lesion side at 32.0-33.0 ℃ for 4 hours. RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the cerebral infarction group, the BBB scores of rats in the mild hypothermia group were distinctly increased, and the volume of infarcted area decreased. At 1 day after modeling, the expression level of growth associated protein 43 mRNA in brain tissue of rats in the mild hypothermia group was close to that in the cerebral infarction group. At 2 weeks after modeling, the expression level of growth associated protein 43 mRNA in brain tissue of rats in the mild hypothermia group was significantly increased compared with that in the cerebral infarction group. These results suggest that mild hypothermia therapy can protect nerve cells against injury caused by cerebral infarction and promote the recovery of neurological function. Its underlying mechanism may be related to the up-regulation of the expression of growth associated protein 43 in ischemic penumbra.     

γ-分泌酶抑制剂对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经保护作用

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂（3,5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰基-L-2-苯基甘氨酸叔丁酯（DAPT）对脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后的神经保护作用。 方法 SD大鼠33只,脑缺血模型制造成功后,随机平均分为3组：模型组、神经干细胞移植组（移植组）、DAPT+移植组。另假手术组11只仅在麻醉状态下分离暴露血管。NSCs移植后7d观察各组大鼠神经行为学改变;TTC染色观察脑梗死体积;尼氏染色观察脑组织病理形态学变化;免疫荧光双标检测BrdU/神经元核抗原（NeuN）阳性细胞表达。 结果 假手术组神经功能学评分为零,无脑梗死灶,细胞形态完好,尼氏小体丰富,BrdU/NeuN阳性细胞表达阴性;与假手术组相比,模型组神经功能学评分增加,有明显神经功能缺损症状,可见明显脑梗死灶,神经细胞排列紊乱,可见核固缩,尼氏小体稀少,存活神经元数量显著减少(P＜0.05),有少量BrdU/NeuN阳性细胞表达(P＜0.05);与模型组比较,移植组和DAPT+移植组都有不同程度神经功能评分减低,脑梗死体积缩小,神经细胞存活数量增加( P＜0.05),BrdU/NeuN阳性细胞表达增多(P＜0.05),以DAPT+移植组各项指标恢复最为明显。 结论 DAPT能够促进移植的NSCs向神经元分化,对脑缺血大鼠神经干细胞移植后有神经保护作用。