鞘内注射NR2B反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响

目的 评价鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重230～270 g,腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下,于L3,4间隙穿刺置管.取鞘内置管成功的大鼠32只,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、反义寡核苷酸组(AO组)和正义寡核苷酸组(SO组).MD组、AO组和SO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型;C组皮下注射等量生理盐水.AO组和SO组于注射吗啡的同时分别鞘内注射15 nmol NR2B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,用生理盐水稀释至5μl;C组和MD组鞘内注射等量生理盐水.各组在末次注射吗啡或生理盐水后4 h时,腹腔注射纳洛酮4 mg/kg诱发吗啡戒断.给予纳洛酮后30 min内观察戒断反应,并进行评分.计算大鼠体重变化幅度.给予纳洛酮后1 h时处死大鼠,测定海马NR1、NR2A和NR2B的mRNA表达水平.结果 与C组比较,MD组、AO组和SO组戒断反应评分和体重变化幅度升高,MD组和SO组海马组织NR2B mRNA表达上调(P<0.05或0.01);与MD组比较,AO组戒断反应评分和体重变化幅度降低,海马组织NR2A mBNA表达上调,NR2B mRNA表达下调(P<0.05或0.01),SO组各指标差异无统计学意义(P>0.05).各组海马组织NR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射NR2B反义寡核苷酸可抑制纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应,其机制与海马NMDA受体亚基水平和构成的变化调节有关.     

鞘内注射NR2B反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响

目的 评价鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重230～270 g,腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下,于L3,4间隙穿刺置管.取鞘内置管成功的大鼠32只,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、反义寡核苷酸组(AO组)和正义寡核苷酸组(SO组).MD组、AO组和SO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型;C组皮下注射等量生理盐水.AO组和SO组于注射吗啡的同时分别鞘内注射15 nmol NR2B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,用生理盐水稀释至5μl;C组和MD组鞘内注射等量生理盐水.各组在末次注射吗啡或生理盐水后4 h时,腹腔注射纳洛酮4 mg/kg诱发吗啡戒断.给予纳洛酮后30 min内观察戒断反应,并进行评分.计算大鼠体重变化幅度.给予纳洛酮后1 h时处死大鼠,测定海马NR1、NR2A和NR2B的mRNA表达水平.结果 与C组比较,MD组、AO组和SO组戒断反应评分和体重变化幅度升高,MD组和SO组海马组织NR2B mRNA表达上调(P<0.05或0.01);与MD组比较,AO组戒断反应评分和体重变化幅度降低,海马组织NR2A mBNA表达上调,NR2B mRNA表达下调(P<0.05或0.01),SO组各指标差异无统计学意义(P>0.05).各组海马组织NR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射NR2B反义寡核苷酸可抑制纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应,其机制与海马NMDA受体亚基水平和构成的变化调节有关.     

鞘内注射NR2B反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响

目的 评价鞘内注射N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚基(NR2B)反义寡核苷酸对纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应的影响.方法 健康雌性SD大鼠,体重230～270 g,腹腔注射戊巴比妥钠60mg/kg麻醉下,于L3,4间隙穿刺置管.取鞘内置管成功的大鼠32只,随机分为4组(n=8):对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、反义寡核苷酸组(AO组)和正义寡核苷酸组(SO组).MD组、AO组和SO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型;C组皮下注射等量生理盐水.AO组和SO组于注射吗啡的同时分别鞘内注射15 nmol NR2B的反义寡核苷酸和正义寡核苷酸,用生理盐水稀释至5μl;C组和MD组鞘内注射等量生理盐水.各组在末次注射吗啡或生理盐水后4 h时,腹腔注射纳洛酮4 mg/kg诱发吗啡戒断.给予纳洛酮后30 min内观察戒断反应,并进行评分.计算大鼠体重变化幅度.给予纳洛酮后1 h时处死大鼠,测定海马NR1、NR2A和NR2B的mRNA表达水平.结果 与C组比较,MD组、AO组和SO组戒断反应评分和体重变化幅度升高,MD组和SO组海马组织NR2B mRNA表达上调(P<0.05或0.01);与MD组比较,AO组戒断反应评分和体重变化幅度降低,海马组织NR2A mBNA表达上调,NR2B mRNA表达下调(P<0.05或0.01),SO组各指标差异无统计学意义(P>0.05).各组海马组织NR1 mRNA表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 鞘内注射NR2B反义寡核苷酸可抑制纳洛酮诱发吗啡依赖大鼠戒断反应,其机制与海马NMDA受体亚基水平和构成的变化调节有关.     

CCK-B受体拮抗剂对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断时海马神经元[Ca~(2+)]i、CaM活性和CaMKⅡα表达的影响

目的 探讨胆囊收缩素-B(CCK-B)受体拮抗剂--CR-2945对吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断时海马神经元内游离Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]i)、钙凋蛋白(CaM)活性和钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠45只,体重180～240 g,随机分为9组(n=5):吗啡依赖组(MD组)采用剂量递增法建立吗啡依赖大鼠模型;生理盐水组(Ns组)以等容量生理盐水替代吗啡;纳洛酮催促戒断组(NPW组)于末次皮下注射吗啡后1 h,腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;伏核给药组(NA组)、杏仁核给药组(A组)和侧脑室给药组(LCV组)于末次皮下注射吗啡后1 h,相应靶核团注射10μg CR-2945,30 min后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;急性腹腔给药组(ACA组)于末次皮下注射吗啡后1 h,腹腔注射1 mg/kg CR-2945,30 min后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;慢性腹腔给药组(ACC组)给予吗啡的同时,腹腔注射1 mg/kg CR-2945,连续6 d,末次给药后30 min腹腔注射纳洛酮5 mg/kg;安慰剂组(P组)以生理盐水替代CR-2945,其余处理同LCV组.处理完毕后冰浴下分离海马,采用流式细胞技术检测海马神经元内[Ca~(2+)]i和CaM活性,采用Western blot法测定CaMKⅡα表达.结果 与NS组比较,MD组[Ca~(2+)]i和CaM活性升高,CaMKⅡα表达上调(P<0.01);与MD组比较,NPW组[Ca~(2+)]i和CaM活性降低,CaMKⅡα表达下调(P<0.01);与NPW组比较,ACA组、ACC组和LCV组[Ca~(2+)]i和CaM活性升高,CaMKⅡα表达上调(P<0.01),NA组、A组和P组上述指标差异无统计学意义(P>0.05).结论 CCK-B受体拮抗剂通过升高海马神经元内[Ca~(2+)]i、CaM活性,上调CaMKⅡα表达,从而抑制吗啡依赖大鼠纳洛酮催促戒断反应.     

急性或慢性吗啡依赖和戒断对大鼠脑组织CREB-1表达的影响

目的研究急性或慢性吗啡依赖和戒断大鼠脑组织环腺苷酸反应元件结合蛋白-1（CREB-1）表达的变化。方法雄性SD大鼠30只，随机分为5组（n=6）：空白对照组、急性吗啡依赖组、急性吗啡戒断组、慢性吗啡依赖组、慢性吗啡戒断组。急性吗啡依赖组每次背部皮下注射吗啡5mg／kg，间隔2h，连续8次；急性吗啡戒断组在急性吗啡依赖后3h腹腔注射纳洛酮5mg／kg，催促戒断30min后处死大鼠。慢性吗啡依赖组每日吗啡用量分3次腹腔注射，从第一天用量5mg／kg起，直到第12天递增至260mg／kg，慢性吗啡戒断组在慢性吗啡依赖后的次日腹腔注射纳洛酮5mg／kg，催促戒断24h后处死大鼠。用Western-blot法测定大脑皮层、伏隔核及海马CREB-1表达。结果与空白对照组比较，急性吗啡依赖、戒断组皮层、伏隔核和海马CREB-1表达差异无统计学意义（P〉0．05），慢性吗啡依赖、戒断组皮层、海马CREB-1表达上调，伏隔核CREB-1表达下调（P〈0．05）；与慢性吗啡依赖组比较，慢性吗啡戒断组伏隔核CREB-1表达下调（P〈0．05）。结论急性吗啡依赖、戒断对脑组织CREB-1表达无影响；而慢性吗啡依赖、戒断后不同脑区CREB-1表达不同。     

吗啡依赖大鼠脑组织细胞色素P450侧链裂解酶表达水平的变化

目的 评价吗啡依赖大鼠脑组织细胞色素P450侧链裂解酶(P450scc)表达水平的变化.方法 雄性SD大鼠24只,月龄4～8月,体重180～200 g,随机分为3组(n=8):生理盐水对照组(NS组)、吗啡依赖组(MD组)和吗啡戒断组(MW组).MD组和MW组采用剂量递增法腹腔注射吗啡制备大鼠吗啡依赖模型,连续注射7 d,2次/d,剂量分别为5、10、15、20、30、40、50 mg/kg,NS组腹腔注射等容量生理盐水.NS组和MD组于末次给药1 h后断头处死大鼠,MW组于末次给药1 h时注射纳洛酮2 mg/kg,30 min后断头处死取脑,采用Western blot法检测大鼠额叶皮质、海马、纹状体、丘脑P450scc的表达水平.结果 P450scc在额叶皮质、海马、纹状体、丘脑均有表达;与NS组比较,MD组和MW组额叶皮质、纹状体和海马的P450scc表达水平降低(P<0.05).结论 脑组织P450scc表达下调可能与大鼠吗啡依赖的形成有关,而与吗啡戒断无关.     

多次鞘内注射CREB反义寡核苷酸对神经病理性痛小鼠脊髓NR2A表达的影响

目的 评价多次鞘内注射cAMP反应元件结合蛋白(CREB)反义寡核苷酸对神经病理性痛小鼠脊髓含2A亚基的NMDA受体(NR2A)表达的影响.方法 鞘内置管成功的C57BL/6雄性小鼠40只,体重20 ～ 25 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):生理盐水组(NS组)、CREB同义寡核苷酸组(S组)、CREB错义寡核苷酸组(M组)和CREB反义寡核苷酸组(A组).采用结扎坐骨神经的方法制备小鼠神经病理性痛模型,结扎坐骨神经后第1～6天,4组分别鞘内注射生理盐水5μl、同义寡核苷酸5 μg/5μl、错义寡核苷酸5μg/5μl、反义寡核苷酸5μg/5μl,1次/d.于术前1d、造模后1、3、5、7d时测定小鼠结扎侧足底的机械缩足阈值(PWMT)和热辐射刺激潜伏期(PWTL).于结扎坐骨神经后7、14 d时各取5只小鼠断头处死,取L3～5脊髓,采用Western blot和RT-PCR法测定NR2A的表达水平.结果 与基础值相比,A组小鼠结扎坐骨神经1～7d时PWMT和PWTL差异无统计学意义(P＞0.05),NS组、S组和M组PWMT和PWTL降低(P＜0.05).与NS组、S组和M组相比,A组小鼠结扎坐骨神经后7、14 d时脊髓NR2A mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).与结扎坐骨神经后7d时相比,4组结扎坐骨神经后14 d时小鼠脊髓NR2A mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05).结论 在神经病理性疼痛形成阶段多次鞘内注射CREB反义寡核苷酸可减轻神经病理性痛,其机制可能与抑制脊髓NR2A表达有关.     

NR2B反义寡核苷酸对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体与κ受体mRNA表达的影响

目的 观察NR2B反义寡核苷酸(NR2B antisense oligonucleotide,ANR2B)对吗啡依赖大鼠脊髓和脑干μ受体与κ受体表达的影响,探讨N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartic acid,NMDA)受体的NR2B亚基与阿片μ受体与κ受体在介导吗啡依赖和耐受过程中的相互作用....     

异丙酚对抑郁大鼠电休克治疗后海马神经元环氧化酶-2表达的影响

目的 探讨异丙酚对抑郁大鼠电休克治疗后海马神经元环氧化酶-2(COX-2)表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠50只,2～3月龄,体重200 ～ 250 g,采用连续不可预见性慢性应激制备抑郁模型,造模成功的40只大鼠,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=10):抑郁组(D组)、异丙酚组(P组)、电休克组(E组)和异丙酚联合电休克组(PE组),另取10只大鼠作为正常对照组(C组).P组和PE组腹腔注射异丙酚80 mg/kg,其他3组给予等容量生理盐水,E组和PE组分别于给予生理盐水8 ml/kg或异丙酚后5 min时进行电休克治疗,1次/d,连续7d.分别于造模前、造模后和治疗结束后进行进行水迷宫实验,记录逃避潜伏期和目标象限游泳时间百分比.然后处死大鼠,取海马组织,检测COX-2表达.结果 与C组比较,D组、P组、E组和PE组造模后逃避潜伏期延长,目标象限游泳时间百分比降低,海马组织COX-2表达上调,D组、P组和E组治疗结束后逃避潜伏期延长,目标象限游泳时间百分比降低(P＜0.05);与D组比较,E组治疗结束后逃避潜伏期延长,海马组织COX-2表达上调,PE组逃避潜伏期缩短,目标象限游泳时间百分比升高(P＜0.05);与E组比较,PE组治疗结束后逃避潜伏期缩短,目标象限游泳时间百分比升高,海马组织COX-2表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可改善抑郁大鼠电休克治疗后认知功能,其机制与下调海马神经元COX-2表达有关.     

不同剂量异丙酚麻醉对新生大鼠远期认知功能的影响

目的 探讨不同剂量异丙酚麻醉对新生大鼠远期认知功能的影响.方法 雄性SD大鼠100只,出生后7d,体重9～18g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为5组(n =20)∶对照组(C组)、异丙酚25 mg/kg组(P1组)、异丙酚50 mg/kg组(P2组)、异丙酚100 mg/kg组(P3组)和异丙酚200 mg/kg组(P4组).P1组和P2组分别腹腔注射异丙酚25和50 mg/kg;P3组和P4组首次注射异丙酚50 mg/kg,翻正反射恢复时,再追加异丙酚50 mg/kg,直至给完总量.每组取5只大鼠,于苏醒后即刻抽取动脉血样进行血气分析.苏醒后放回笼内继续饲养直至9周龄,采用Morris水迷宫实验测定认知功能,处死后,取海马组织,分别采用Western blot法和RT-PCR法测定神经生长因子(NGF)和Caspase-9蛋白及其mRNA的表达;电镜下观察海马神经元超微结构.结果 5组大鼠血气分析指标差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,P1组逃避潜伏期和穿越原平台次数差异无统计学意义(P＞0.05),P2组～P4组逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,P1组～P4组海马NGF蛋白及其mRNA表达下调,Caspase-9蛋白及其mRNA表达上调(P＜0.05);P1组～P4组逃避潜伏期逐渐延长,NGF蛋白及其mRNA表达逐渐下调,Caspase-9蛋白及其mRNA表达逐渐上调,P2组～P4组穿越原平台次数少于P1组(P＜0.05),但P2组～P4组间差异无统计学意义(P＞0.05);P2组～P4组海马神经元出现核固缩、染色质边集、核碎裂、凋亡小体.结论 异丙酚麻醉可损害新生大鼠的远期认知功能,且该作用与剂量有关;其机制可能与抑制NGF表达,增强Caspase-9活性有关.     

ERK-CREB信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用

目的 评价细胞外信号调节激酶-cAMP反应元件结合蛋白(ERK- CREB)信号通路在糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受中的作用.方法 健康雄性SD大鼠,体重280～320 g,月龄2月,经枕骨大孔行鞘内置管.取36只鞘内置管成功的大鼠,采用随机数字表法,将大鼠随机分为6组(n=6):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+地塞米松组(MD组)、吗啡+RU38486组(MR组)、地塞米松组(D组)和RU38486组(R组).分别鞘内注射生理盐水10 μl、吗啡10腭、吗啡10 μg+地塞米松4 μg、吗啡10 μg+ RU38486 2 μg、地塞米松4.μg、RU38486 2 μg,2次、d,连续6d.于给药前1d测定热甩尾潜伏期(TFL)基础值,随后于给药1、3、5d首次给药后30 min及最后1次给药后1 d(T1～4)测定TFL,计算最大镇痛效应百分比(MPE).最后1次测定TEL后取脊髓,采用免疫荧光染色法测定脊髓背角磷酸化ERK(pERK)和磷酸化CREB(pCREB)的表达.结果 与T1时比较,M组和MD组T3.4时MPE降低(P＜0.05).与C组比较,M组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB的表达上调(P＜0.05或0.01),R组和D组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与M组比较,MR组MPE升高,脊髓背角pERK和pCREB表达上调,MD组脊髓背角pERK和pCREB表达下调,MPE降低(P＜0.05或0.01).结论 糖皮质激素受体介导大鼠慢性吗啡耐受的机制可能与抑制ERK-CREB信号通路有关.     

脊髓NO信号通路和ERK信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用

目的 评价脊髓NO信号通路和细胞外调节激酶(ERK)信号通路在吗啡依赖大鼠戒断反应中的作用.方法 鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠90只,体重200～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为9组(n＝10):正常对照组(C组)、吗啡依赖组(MD组)、吗啡戒断组(MW组)、L-N-硝基精氨酸甲酯组(L-NAME组)、7-硝基吲唑组(7-Ni组)、氨基胍组(AG组)、U0126组、克列莫佛组(cremophor组)和二甲基亚砜组(DMSO组).MD组、MW组、L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、cremophor组和DMSO组皮下注射吗啡10 mg/kg,2次/d,隔天每次增加10 mg/kg,至第6天末次注射50 mg/kg,建立吗啡依赖模型.末次注射吗啡后4h时,MW组、L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、cremophor组和DMSO组腹腔注射纳洛酮4 mg/kg激发吗啡戒断反应.给予纳洛酮前30 min时,L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、cremophor组和DMSO组分别鞘内注射L-N-硝基精氨酸甲酯400μg(溶于10μl生理盐水中)、7-硝基吲唑400 μg(溶于10μl克列莫佛中)、氨基胍400μg(溶于10 μl生理盐水中)、U0126 150μg(溶于10μl二甲基亚砜中)、克列莫佛10 μl和二甲基亚砜10 μl.注射纳洛酮后1h内观察大鼠戒断反应和痛觉异常反应,并进行评分,然后处死大鼠,取脊髓组织,分别采用免疫组化法和Western blot 法测定脊髓背角诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、神经型一氧化氮合酶(nNOS)和磷酸化ERK(p-ERK)的表达.结果 与MD组比较,MW组、L-NAME组、7-Ni组、AG组、U0126组、DMSO组和crmophor组戒断反应评分和促诱发痛评分升高(P<0.05);与MW组比较,L-NAME组、7-Ni组、AG组和U0126组戒断反应评分和促诱发痛评分降低(P<0.05),DMSO组和cremophor组差异无统计学意义(P＞0.05);与C组和MD组比较,MW组脊髓背角nNOS和iNOS表达上调(P<0.05);与MW组比较,U0126组脊髓背角nNOS和iNOS表达下调(P<0.05).与C组比较,MD组和MW组脊髓背角p-ERK表达上调(P＜0.05);与MW组比较,L-NAME组、7-Ni组和AG组脊髓背角p-ERK表达下调(P<0.05).结论 脊髓NO信号通路和ERK信号通路的相互调节作用参与了吗啡依赖大鼠的戒断反应.     

人参皂甙Rg1对炎性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙Rg1对炎性痛大鼠吗啡耐受时脊髓背角细胞凋亡的影响.方法 雄性SD大鼠,体重280～320 g,采用右踝关节腔内注射完全弗氏佐剂的方法制备炎性痛模型.取模型制备成功的24只大鼠,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=6):生理盐水对照组(C组)、吗啡耐受组(M组)、人参皂甙Rg1组(G组)及吗啡复合人参皂甙Rg1组(MG组).致炎后3d时M组、G组及MG组分别鞘内注射吗啡10 μg、人参皂甙Rg1 100μg及吗啡10μg+人参皂甙Rg1 100 μg,C组给予等容量生理盐水,吗啡2次/d,人参皂甙Rg1 1次/d,连续7d.分别于致炎前(T1)、鞘内给药前1d(T2)、给药1、3、5、7 d(T3-6)时测定机械缩足阈值(PWT).最后一次测定痛阈后处死大鼠,取L3-5节段脊髓组织,采用TUNEL染色法测定细胞凋亡情况,计算脊髓背角细胞凋亡率.结果 与T1时比较,4组T2-6时PWT降低(P＜0.01);与T2时比较,M组T3.4时PWT升高,G组和MG组T3～6时PWT升高(P＜0.05);与C组比较,M组和MG组PWT和脊髓背角细胞凋亡率升高(P＜0.05),G组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,MG组PWT升高,脊髓背角细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 人参皂甙Rg1预防吗啡耐受形成的机制与降低炎性痛大鼠脊髓背角细胞凋亡有关.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠DRG辣椒素受体表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节(DRG)辣椒素受体(VR1)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠30只,采用左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂(CFA)50μl的方法制备炎性痛模型.随机分为6组(n=5):A组于注射CFA后第4天,鞘内注射生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组不制备炎性痛模型,鞘内注射吗啡10μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;C组于注射CFA后第4天,鞘内注射吗啡10μg/kg(10μl);D组于注射CFA后第4天,鞘内注射吗啡10μg/kg(10μ1),2次/d,连续7 d;E组鞘内给药方法同D组,同时每天首次给药后,电针大鼠阳陵泉和足三里,强度2 mA,频率2 Hz,时间30 min;F组:电针频率为15 Hz,余同E组.于炎性痛模型制备前、鞘内注药前1 d、鞘内注药第1～7天时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).吗啡第7天末次给药后采用Western blot方法测定DRG总蛋白及细胞膜蛋白VR1的表达.结果 各组炎性痛模型制备前PWL比较差异无统计学意义(P＞0.05).B组和D组发生吗啡耐受,E组和F组未发生吗啡耐受.D组DRG总蛋白及细胞膜蛋白VR1表达水平最高,E组VR1表达水平低于F组(P＜0.05).结论 DRG VR1表达上调参与了大鼠吗啡镇痛耐受的形成;电针刺激可抑制吗啡镇痛耐受的形成,该作用与下调DRG VR1的表达有关.     

炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节CGRP、SP、BDNF表达的变化及电针对吗啡耐受的影响

目的 探讨炎性痛-吗啡耐受大鼠背根神经节降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质(SP)及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化及电针对吗啡耐受的影响.方法 取鞘内置管成功的25只大鼠,于左后足踝关节腔注射完全弗氏佐剂50μl致炎,致炎后第4天开始鞘内给药.随机分为5组(n=5):A组鞘内给予生理盐水10μl,2次/d,连续7 d;B组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,仅给药1 d;C组鞘内给予吗啡10 μg/kg(10μl),2次/d,连续7 d;D组鞘内给药方法同C组,同时每日首次给药后用电针刺激仪电针大鼠阳陵泉穴和足三里穴,刺激强度2 mA,刺激频率2 Hz,波宽0.6ms,刺激时间30 min;E组电针刺激频率15Hz,波宽0.4 m,余同D组.于致炎前、鞘内给药前1 d、给药后1、2、3、4、5、6、7 d(T0-8)时测定大鼠后肢热缩足潜伏期(PWL).给药7 d后取L4～L6背根神经节,采用RT-PCR法测定CGRP、SP、BDNF的mRNA表达.结果 与T0时比较,各组T1时PWL缩短(P＜0.05);与T1时比较,B组～E组T2时PWL延长(P＜0.05);与T2时比较,B组～E组T3-8时PWL缩短(P＜0.05).与A组比较,B组～E组PWL延长,C组CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05);与B组比较,C组～E组PWL延长(P＜0.05);与C组比较,D组和E组PWL延长,CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达下调(P＜0.05);与D组比较,E组PWL缩短,CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调(P＜0.05).结论 大鼠背根神经节内CGRP mRNA、SPmRNA、BDNF mRNA表达上调参与了吗啡镇痛耐受的形成;电针治疗可抑制吗啡镇痛耐受的形成,机制可能与抑制背根神经节内CGRP mRNA、SP mRNA、BDNF mRNA表达有关.     

糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用

目的 评价糖皮质激素受体在慢性吗啡耐受大鼠脊髓背角神经元凋亡中的作用.方法 鞘内置管成功的健康雄性SD大鼠20只,体重300～350 g,随机分为4组(n=5):对照组(C组)、慢性吗啡耐受组(M组)、吗啡+糖皮质激素受体拮抗剂组(MR组)和吗啡+糖皮质激素受体激动剂组(MD组)分别于8:00和20:00鞘内注射生理盐水10μl、吗啡10μg、吗啡10μg+RU38486 2μg、吗啡10μg+地塞米松4μg,连续6 d.于每天8:00给药后30 min行甩尾实验,给药第7天处死大鼠,取L3～L5脊髓行TUNEL染色,光镜下观察脊髓背角神经元的凋亡情况,计算凋亡率.结果 地塞米松、RU38486分别对慢性吗啡耐受的形成起促进、抑制作用.与C组比较,M组和MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05);与M组比较,MR组脊髓背角神经元凋亡率降低,MD组脊髓背角神经元凋亡率升高(P＜0.05).结论 糖皮质激素受体参与了慢性吗啡耐受形成中大鼠脊髓背角神经元凋亡的过程.