钾、氯离子通道阻断剂对staurosporine诱导心肌细胞凋亡的调节作用

目的 :探讨钾、氯离子通道在心肌细胞凋亡过程中的调节作用与Caspase 3激活的关系 .方法 :在staurosporine诱导原代培养鼠心肌细胞凋亡模型中 ,观察钾、氯离子通道阻断剂 (Quinine ,BaCl2 ,DIDS和NPPB)对心肌细胞的存活率、DNA片断、Caspase 3活性及细胞膜完整性的影响 .实验分为阴性对照组 (无药物处理 )、阳性对照组 (staurosporine处理 )与药物干预组 (staurosporine加离子通道阻断剂 ) .结果 :①钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制staurosporine诱导的心肌细胞凋亡 .与阳性对照组 (2 9.8% )相比细胞的成活率在奎宁、氯化钡、DIDS和NPPB组分别是 5 9.7% ,4 7.2 % ,5 8.6 %和 6 0 .7% ,均有显著的增加 (P <0 .0 1 ) .相对应的DNA片断电泳显示 :Qui nine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组均有显著的抑制DNA的降解 .②钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3活性的激活 ,与阳性对照组 (6 0 0 .4 % )相比细胞的Caspase 3活性在Quinine,BaCl2 ,DIDS和NPPB组分别是 1 84 .2 % ,2 1 6 .3% ,1 75 .6 %和2 2 1 .4 % ,均有显著的抑制 (P <0 .0 1 ) .③细胞膜完整性实验乳酸脱氢酶水平显示各组中细胞的坏死性死亡小于 1 0 % .结论 :在staurosporine诱导的心肌细胞凋亡模型中 ,钾、氯离子通道阻断剂能有效的抑制Caspase 3     

心肌细胞MitoKATP通道分子组成的研究进展

心肌细胞上主要存在2种ATP敏感性钾通道（ATP—sensitive potassium channels,KATP通道）,即在细胞膜上的胞膜KATP通道（sarcolemmal KATP channels,SarcKATP通道）和在线粒体上的线粒体KATP通道（mitochondrial KATP thannel,MitoKATP通道）。二者在缺血预处理心肌保护中都起着重要的作用。其中MitoKATP通道的作用更关键,它既是缺血预处理心肌保护效应得以发挥的终末效应分子,也是启动心肌保护效应的重要信号分子。因此,对MitoKATP,通道分子组成和结构的研究具有重要意义。     

镁对心肌细胞钾通道和钙通道的调节

镁离子对阳离子通道有重要的调节作用,与机体的多种生理功能密切相关。高镁血症或低镁血症可致机体出现多种功能障碍。镁离子可通过与通道蛋白的直接结合、通过酶和G蛋白的间接作用、通过膜表面电荷效应或是通过与膜磷脂的相互作用等方式发挥其对细胞功能的调节作用。本文主要综述离子镁对心肌细胞膜上主要的钾离子通道和钙离子通道的功能调节及其可能机制。     

黄芪皂甙对培养心肌细胞跨膜电活动与自发性搏动的影响

培养Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠的心肌细胞。向培养基中加入黄芪皂甙５００μｇ·ｍＬ－１使搏动的心肌细胞群落数目增多；心肌细胞动作电位的发放频率增高，波幅、波宽、超射、最大舒张电位、阈电位、最大除极速度等各项参数减小；心肌细胞膜的静息电位减小１０ｍＶ。洗脱后恢复。以上结果表明黄芪皂甙能抑制Ｎａ－Ｋ－ＡＴＰ酶。     

蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钾通道的影响

目的研究蛇床子素对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞钾通道电流的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,首先在乳鼠心肌细胞上诱导出内向整流钾电流和瞬时外向钾电流,然后观察蛇床子素对这2种钾电流的影响。结果蛇床子素以浓度依赖的方式快速可逆地抑制心肌细胞瞬时外向钾电流,抑制的半有效浓度为(101.1±5.2)μmol.L-1,蛇床子素不改变瞬时外向钾通道的激活动力学。蛇床子素对内向整流钾电流有一定的抑制作用,在200μmol.L-1的浓度下抑制(68.2±7.5)%的内向钾电流。结论蛇床子素能够抑制乳鼠心肌细胞钾通道电流,并呈浓度依赖性。     

左旋精氨酸对大鼠心肌细胞ATP敏感性钾通道的影响

目的研究左旋精氨酸(L-Arg)对大鼠离体心肌细胞ATP敏感性钾通道(KATP)的影响。方法急性分离大鼠心肌细胞,设保持电位-40mV,指令电位-100～ 40mV,步阶脉冲20mV,波宽200ms,刺激间隔为6s。记录IKATP。结果观察正常生理条件下和给予不同浓度L-Arg后心肌细胞IKATP的变化,并分析L-Arg对KATP通道功能的影响。指令电位为-100mV,给予10,30,50mmol·L-1的L-Arg后,KATP的开放率分别为:(173±19)%,(190±18)%,(268±21)%,具有浓度依赖性增加趋势。后两者与对照组比较(P<0.05),r=0.958,与对照组比较(P<0.05);当L-Arg的浓度增加到100mmol·L-1时,KATP的开放率为(175±54)%。结论L-Arg在低浓度范围内(10～50mmol·L-1),可浓度依赖性的开放KATP通道;L-Arg浓度增加至100mmol·L-1时,则该作用不明显。     

粉防己碱对豚鼠心肌细胞钾通道的影响

目的 :研究粉防己碱对豚鼠心肌细胞钾通道的影响。方法 :用内面向外膜片钳单通道记录法。结果 :Tet10 μmol·L-1时对钾通道影响不大 (P >0 .0 5 ) ,2 0 ,30 μmol·L-1使开放概率分别由药前的 0 .775± 0 .35 6降至 0 .2 31± 0 .2 73和 0 .2 2 1± 0 .2 30 ;变化幅度 (% )为 - 6 9.13± 2 9.6和 - 74 .93± 2 3.6 3(P <0 .0 5 )。结论 :一定浓度下Tet对心肌细胞钾通道具有阻滞作用。     

氯苄律定对豚鼠心肌细胞钾通道的抑制作用

氯苄律定是四氢小檗碱的衍生物,具有抗心律失常作用,常规电生理发现其延长ＡＰＤ５０及减少心肌钾的丢失,本文研究它对心肌钾通道的影响。采用膜片钳全细胞记录的方法,研究氯苄律定对豚鼠心肌钾离子通道的作用。氯苄律定在３μｍｏｌ／Ｌ,１０μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏｌ／Ｌ抑制延迟整流钾电流分别为１５．７％±２．４％,３６％±３％,５９％±６％,同样浓度下对内向整流钾通道无明显抑制作用。氯苄律定抗心律失常作用与抑制延迟整流钾通道有关。     

TRPC通道阻滞剂SKF96365对缺氧复氧诱导新生大鼠肥大心肌细胞凋亡的影响

目的探讨TRPC通道阻滞剂SKF96365对缺氧复氧诱导肥大心肌细胞凋亡的影响。方法①HP组,血管紧张素Ⅱ刺激体外培养的新生鼠心室肌细胞构建肥大心肌细胞模型,用5％CO2＋95％N2培养条件下进行缺氧6h,然后恢复5％C02＋21％02的条件复氧3h。②HP—SKF组,在缺氧前加入SKF96365,其他同肥大组。③CON组,在整个实验过程加入生理盐水代替AngⅡ。用AnnexinVFITC和PI双染色检测细胞凋亡;Westernblot法检测TPRCl和胞衬蛋白的表达。结果HP组心肌细胞的凋亡率明显高于CON组和HP—SKF组。CON组TRPCI的表达低于HP组和HP—SKF组。HP组剪切的胞衬蛋白率与完整的胞衬蛋白比值高于CON组和HP—SKF组。结论SKF96365能减低缺氧复氧诱导的肥大心肌细胞的凋亡。     

急性胰腺炎后心肌细胞快钠通道的变化

目的探讨急性胰腺炎后心肌细胞快钠通道的变化.方法以开腹胰管内注射牛磺胆酸钠的方法制备大白鼠急性胰腺炎实验模型,24～48 h后处死动物分离单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳记录技术观察心肌细胞快钠通道电流(INa)的变化,同时设假手术对照组.结果急性胰腺炎大鼠心室肌细胞的快钠电流受到抑制,电流密度-电压关系曲线上移,其峰值电流密度:对照组为(-13.55±5.33)pA/pF,急性胰腺炎组为(-6.80±2.03)pA/pF,较对照组下降了49.82%,P＜0.001;其失活曲线左移,半数最大失活电位对照组为(-105±21)mV;急性胰腺炎组为(-121±26)mV,与对照组比较显著减小,P＜0.01,失活速度加快;急性胰腺炎组INa恢复速度明显减慢,恢复时程延长,和对照组比较P＜0.01.结论急性胰腺炎后心室肌细胞的快钠通道受抑制,细胞兴奋性及传导速度下降,可能为急性胰腺炎后发生心律失常的机制之一.     

氧自由基抑制心肌细胞膜钾通道活动及丹酚酸A的作用

本实验应用膜片钳技术发现黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶产生的氧自由基能明显抑制心肌细胞膜钾通道活动,中药丹参提取的有放成分之一丹酚酸A能逆转被抑制的通道活动。     

Koch三角心肌细胞瞬间外向钾电流电生理学特征研究

目的 探讨Koch三角区心肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)电生理学特征.方法 采用单细胞膜片钳技术研究家兔Koch三角区心肌细胞Ito电流-电压及电流密度-电压关系曲线、稳态激活以及稳态失活特征.结果 ①起搏细胞(PC)、过渡细胞α(TCα)、过渡细胞β(TCβ)、心房肌细胞(AC)和浦肯野样细胞(PL) +20 mV时的最大峰值电流(pA)幅值及峰值电流密度(pA/pF)任意两类细胞间差异均有统计学意义(P<0.05);除TCα、TCβ与PL相比外(P>0.05),各类细胞两两比较电流密度(pA/pF)差异均有统计学意义(P<0.05).②五种细胞稳态激活曲线之半数激活电压(VmIto1/2,mV)在各组细胞间差异均有统计学意义(P<0.05).但TCα与PC以及TCβ与AC和PL相比差异无统计学意义(P>0.05).③五种细胞稳态失活曲线之半数失活电压(VhIto1/2,mV)TCα、TCβ与PC和PL分别相比以及PC、AC、PL间相比差异均有统计学意义(P<0.05);TCα与TCβ、TCβ与PC、AC和PL以及PC与PL之间相比差异均有统计学意义(P<0.05),但TCα与PC、AC相比差异无统计学意义(P>0.05).结论 家兔Koch三角区各种心肌细胞之Ito存在异质性;不同心肌细胞间又具有相对特殊性及Ito梯度.     

心肌钾通道的研究进展

心肌细胞钾通道决定心肌静息电位、心率、动作电位的形状和时程并且是各种神经递质、激素、药物和毒素作用的重要靶点,调节心肌的功能。心肌细胞钾离子通道有很多种,各种钾离子通道的分子结构、电导值、门控动力学特性、离子动力学特性、通道的特异性激动剂及阻滞剂各不相同,在动作电位的形成中起到各自的作用。本文对近年来心肌钾离子通道的研究现状进行回顾总结。     

安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响

目的：通过研究安律胶囊对豚鼠心室肌细胞钾离子通道的影响，以探讨其抗心律失常的作用机制。方法：采用膜片钳全细胞记录技术记录了安律胶囊对单个豚鼠心室肌细胞钾电流的影响。结果：①安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使IK1幅值从给药前的（-2．06±0．29，nA）降低到（-1．95±0．34、-1．67±0．43和-1．62±0．25，nA），大剂量具有显著的统计学意义（P〈0．05）；在对IK1时效关系的实验中，在200斗g／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值钾电流为（-1．60±O．27,nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（-1．56±0．35，-1．34±0．26和-1．26±0．29，nA），无统计学意义（P〉0．05）。②安律胶囊清膏2、20、200μg／L可使Ito1幅值从未给药时的（1．14±0．17，nA），降低到（1．13±0．17、1．10±0．16和1．06±0．13，nA），但无统计学意义（P〉0．05）。③安律胶囊清膏2、20、200μg／L可剂量依赖性的降低Ik，分别使Ik幅值从给药前的（1．45±0．15，nA），降低到（1．42±0．15、1．29±0．10和1．20±0．11，nA），中剂量组具有显著的统计学意义（P〈0．05），大剂量具有极为显著的统计学意义（P〈0．01）；在对Ik时效关系的实验中，在200μg／L的安律胶囊清膏作用下，未计时时最大内向峰值电流为（1．45±0．15，nA），1min、4min、8min后，最大内向峰值钾电流分别为（1．21±0．10，1．20±0．12和1．11±0．13，nA），无统计学意义（P〉0．05）。结论：安律胶囊对IK1有-定的阻滞作用且可剂量依赖性的阻滞Ik，但不具有时间依赖性，对Ito1无阻滞作用，这是其抗心律失常作用的机理之一。     

人心肌细胞中NLRP3融合蛋白表达的鉴定

目的：构建人NLRP3真核表达载体并证实NLRP3融合蛋白在人心肌细胞中表达。方法以人胎脑cDNA文库为模版,PCR扩增NLRP3全长编码基因,亚克隆至pCDNA3．1-myc-his A表达载体中。将构建的重组质粒测序并转染到人心肌细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用流式细胞仪观察Myc-NLRP3在人心肌细胞内的作用。结果 NLRP3全长基因序列克隆到了真核表达载体 pCDNA3．1-myc-his A中,酶切鉴定片段大小为3111 bp。 Western blot检测到了融合蛋白Myc-NLRP3表达,分子量约为114 KD。 Myc-NLRP3在人心肌细胞中过表达,能够促进细胞凋亡。结论成功构建了Myc-NLRP3全长基因真核表达载体,过表达Myc-NLRP3能够促进心肌细胞凋亡。     

心脏氯离子通道研究进展

同钠、钾等阳离子通道一样,氯离子通道在维持细胞正常功能中扮演重要角色。在心肌细胞目前已发现四种氯离子通道的表达,分别是囊性纤维化跨膜转导体、容量调节性氯通道、钙激活的氯通道以及电压依赖性氯通道。越来越多的研究表明,这些通道在心肌细胞的正常生理功能中起重要作用,并在诸如心律失常和心肌缺血中可发现通道的异常改变。目前,对于心脏氯通道的基因,分子结构,通道特性和生理功能的研究已经取得了一些重要进展,但仍有诸多不明和争议,尚需进一步探究。     

醛固酮对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 观察醛固酮对新生大鼠心肌细胞凋亡影响并探讨其机制.方法 取新生大鼠心肌细胞培养36 h后,加入不同浓度醛固酮(0.01～10.0 μrmol/L).分别用吖啶橙(AO)荧光染色法和流式细胞术检测心肌细胞凋亡.用免疫组化法测定心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 醛固酮加入细胞24 h后,随着其浓度的增高,凋亡细胞所占比例逐渐增加,Bax表达逐渐增强,Bcl-2表达减弱,Bcl-2/Bax比值下降,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 醛固酮明显促进心肌细胞的凋亡,且具有浓度依赖性,这可能与醛固酮能下调Bcl-2蛋白表达及上调Bax蛋白表达有关.     

心细胞离子电导对心电波稳定性影响的模拟研究

目的 分析构成心电产生和传导基础的主要离子电导对心肌细胞动作电位时程的影响.方法 利用计算机仿真技术,模拟一维心肌组织心电传导,分别改变钾、钙、钠3种离子的电导,以动作电位时程恢复性质曲线为观察对象,观察这3种主要离子电导对动作电位时程的影响.结果 在一定范围内,时间依赖性钾电导减小或钙电导增大,均会引起动作电位时程恢复曲线的斜率增大;相比之下,钠电导的变化对动作电位时程的影响较小.结论 动作电位时程主要受钙离子和时间依赖性钾离子的影响,且二者的作用相反.临床上可通过控制这两种离子的通透性来降低动作电位时程恢复曲线的斜率,从而减少致死性心室颤动的发生.