六味地黄丸通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路减轻糖尿病肾病炎症及纤维化

【目的】基于核因子kappa B(NF-κB)及转化生长因子β(TGF-β)/Smad双信号通路,观察六味地黄丸对糖尿病肾病炎症及纤维化的影响,探讨其对肾保护作用机制。【方法】将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、中药组,每组10只。采用一次性腹腔注射链脲佐菌素法复制糖尿病大鼠模型。中药组给予大鼠六味地黄丸(剂量为6.75 g·kg-1·d-1)灌胃,正常组、模型组给予大鼠等体积生理盐水灌胃。给药12周后取材,检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、24h尿蛋白量(24h-Pro),采用苏木素—伊红(HE)与Masson染色观察肾组织病理变化,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测肾组织NF-κB、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TGF-β、alpha平滑肌抗体(α-SMA)、Smad2、Smad3、Smad7的表达。【结果】生化指标结果显示:与正常组比较,模型组大鼠FBG、BUN、SCr、24h-Pro升高(P0.01);六味地黄丸治疗后上述指标均有所改善(P0.05)。HE与Masson染色结果显示,模型组肾小球官腔变窄、系膜基质增生及炎症细胞浸润,而中药组有所改善。Western blot结果显示:与正常组比较,模型组的NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达均呈明显上调,而Smad7表达降低(P0.01);中药组NF-κB、MCP-1、TGF-β、α-SMA、Smad2、Smad3表达下调,Smad7表达上调(P0.05)。【结论】六味地黄丸具有肾脏保护作用,其机制可能与通过调控NF-κB及TGF-β/Smad双信号通路,从而减轻糖尿病肾病炎症损伤和纤维化有关。     

活血祛痰法对糖尿病肾病大鼠核因子活化B细胞κ轻链增强子NF-κB信号通路的影响

目的观察活血祛痰法对糖尿病肾病大鼠核转录因子-κB(NF-κB)信号传导通路的影响,探讨其对DN防治作用及机制。方法建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,随机分为正常组、模型组、中药组,观察各组大鼠24 h饮水量、24 h尿蛋白量、血肌酐、空腹血糖水平等指标;病理切片过碘酸雪夫(PAS)染色观察肾脏的病理改变;采用一步法定量PCR检测肾组织NF-κB基因的表达;免疫印迹法(Western blot)检测P65蛋白质含量。结果治疗后,模型组尿蛋白量较正常组呈上身趋势,中药组治疗后,24 h尿蛋白量、血肌酐明显低于模型组(P0.01);模型组NF-κB基因在肾脏中表达量明显高于正常组,治疗后,中药组NF-κB基因在肾脏中表达水平较模型组明显下调(P0.01);相对于模型组P65蛋白表达上调,中药组治疗后P65蛋白表达量下降,接近正常组。结论活血祛痰法可用于治疗早期糖尿病肾病,机制可能与其能抑制DN大鼠肾脏中NF-κB信号传导通路的激活有关。     

糖尿病大鼠AGEs与nephrin表达的研究

目的：探讨终末期糖基化产物（AGEs）、肾病蛋白（nephrin）在糖尿病大鼠肾脏组织中的表达及其在糖尿病肾病发生、发展中的作用。方法：用免疫组化方法检测链脲佐菌素诱发糖尿病及正常对照SD大鼠肾脏中AGEs、nephrin的表达,并计算其阳性指数,同时测定各组大鼠24 h尿蛋白定量及肾功能等一般生化指标,并对大鼠肾脏AGEs、nephrin与蛋白尿进行相关分析。结果：与对照组相比,糖尿病组大鼠肾小球上AGEs表达明显增加（P〈0.01）,nephrin表达明显减少（P〈0.01）,24 h尿蛋白排泄量明显增加（P〈0.01）,大鼠肾小球AGEs的表达和nephrin的表达呈负相关（r=-0.921,P〈0.01）;nephrin蛋白表达与24 h尿蛋白排泄量呈负相关（r=-0.904,P〈0.01）;AGEs表达与24 h尿蛋白排泄量呈正相关（r=0.974,P〈0.01）。结论：AGEs可能介导了nephrin的表达缺失,进而导致足细胞损伤并加速了糖尿病肾病的进展。     

六味地黄丸对糖尿病肾病大鼠肾脏组织RhoA/ROCK1表达的影响

目的:观察六味地黄丸对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)大鼠肾脏组织RhoA/ROCK1表达的影响。方法:将36只SD雄性大鼠按照随机数字表法分为空白组、模型组、六味地黄丸组(六味组)各12只,采用一次性腹腔注射链脲佐菌素(45 mg·kg~(-1))的方法建立DKD大鼠模型。造模成功后,空白组、模型组灌服生理盐水,六味组给予六味地黄丸。8周后检测24小时尿蛋白定量、血清白蛋白(serum albumin,ALB)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,ALT)、血肌酐(serum creatinine,Scr)等水平;测量大鼠体质量、肾脏质量,计算肥大指数;苏木精-伊红染色、过碘酸-雪夫氏染色观察肾脏模型组织;酶联免疫吸附法测定检测肾脏组织RhoA、ROCK1的水平。结果:与空白组比较,模型组24小时尿蛋白定量升高,ALB下降,体质量下降,肥大指数升高,差异均有统计学意义(P0.05);与模型组比较,六味组24小时尿蛋白定量显著下降,ALB显著升高,体质量升高,肥大指数降低,且RhoA、ROCK1的表达水平显著下降,差异均有统计学意义(P0.05)。空白组肾小球、肾小管、肾间质结构大小等均正常完整;六味组与模型组均有不同程度的肾脏病理改变,其中六味组较模型组病理改变减轻。结论:六味地黄丸可能通过影响DKD大鼠肾脏组织RhoA、ROCK1的表达,降低蛋白尿,减轻肾脏病理损害,且对肝肾功能无明显影响。     

霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞的保护作用

目的:探讨霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞相关蛋白Nephrin及炎性因子单核细胞趋化因子-1表达的影响及机制。方法:建立糖尿病肾病大鼠模型,将模型大鼠随机分为糖尿病肾病组及霉酚酸酯干预组,干预组给予霉酚酸酯15 mg/(kg·d)灌胃,8周末处死动物,常规检测尿蛋白、肾功能、肾质量/体质量,光镜及电镜观察肾小球及肾小管变化,RT-PCR及免疫组化法检测Nephrin及MCP-1 mRNA及蛋白表达。结果:与正常对照组相比,糖尿病组大鼠肾脏组织肾小球肥大、部分纤维化,肾小球滤过膜损伤严重,尿蛋白增加,Nephrin蛋白及mRNA表达减少,MCP-1蛋白及mRNA表达增加;与糖尿病组相比,霉酚酸酯干预组尿蛋白较正常对照组增加,但较糖尿病组有改善(P<0.01),肾小球滤过膜病变较糖尿病组改善,Nephrin蛋白及mRNA表达较糖尿病组增加(P<0.01),MCP-1蛋白及mRNA表达减少(P<0.01)。结论:霉酚酸酯可减少糖尿病肾病大鼠尿蛋白水平,下调MCP-1等炎症介质,上调Nephrin蛋白。霉酚酸酯对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞的保护可能通过干预Nephrin蛋白及炎症因子MCP-1的表达实现。     

当归补血汤对糖尿病大鼠肾组织NF-κB、MCP-1表达的影响

[目的]观察当归补血汤干预下糖尿病大鼠肾脏核因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)炎症因子表达变化,探讨当归补血汤抗炎机制及其与肾脏保护作用的相关性。[方法]链脲佐菌素(STZ)+高脂饲料建立糖尿病肾病(DN)动物模型,酶偶联比色法检测血糖、血脂及肾功能相关指标,光镜、电镜下观察肾脏结构变化,酶联免疫吸附试验检测大鼠肾脏NF-κB、MCP-1蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肾脏NF-κBp65、MCP-1 m RNA表达变化。[结果]DN大鼠肾功能下降,肾脏损伤严重,肾组织NF-κB、MCP-1蛋白含量增加,NF-κBp65、MCP-1m RNA转录活性增强,当归补血汤治疗后肾功能明显改善,肾脏NF-κB、MCP-1蛋白含量降低,NF-κBp65、MCP-1 m RNA转录活性下降。[结论]当归补血汤可有效减少DN大鼠肾脏NF-κB、MCP-1的表达及活性,抑制肾脏炎症反应,减轻肾脏损伤。     

赤芍对早期糖尿病肾病大鼠肾脏AngⅡ、ET-1、PKC及TGF-β1的影响

目的 观察赤芍对早期糖尿病肾病大鼠的作用及赤芍对肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)、蛋白激酶C(PKC)及转化因子-β1 (TGF-β1)的影响.方法 腹腔注射STZ制备糖尿病肾病大鼠模型,随机分为正常对照组、糖尿病肾病模型组以及高、中、低赤芍组(腹腔注射5、15、30g/kg),8周后测定大鼠血糖、血脂及肾功能指标(尿素氮、血肌酐、24h尿蛋白),放射免疫法测定肾脏AngⅡ、ET-1含量,免疫组织化学染色法检测肾脏TGF-β1及PKC表达.结果 与正常对照组相比,糖尿病肾病组大鼠血糖、血脂、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白明显升高,AngⅡ、ET-1含量和TGF-β1、PKC表达增强(均P<0.01); 与糖尿病肾病组相比,赤芍能呈浓度依赖性的降低糖尿病肾病大鼠血脂、尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白,明显下调肾脏ET-1、TGF-β1 及PKC(均P<0.01),AngⅡ虽有下调趋势,但与糖尿病肾病组相比无明显差异性(P>0.01).结论 赤芍能改善糖尿病早期肾功能,其机制可能主要与抑制肾脏ET-1表达继而下调PKC及TGF-β1水平有关.     

糖尿病肾病模型中NF-κB与甘露聚糖结合凝集素途径补体激活的关系

目的 通过链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病肾病大鼠模型,了解糖尿病肾病时甘露聚糖结合凝集素(MBL)途径补体激活情况及其与核转录因子κB(NF-κB)的关系.方法 将SD大鼠分为正常对照组(N组)和糖尿病肾病组(DN组).DN组按55 mg/kg体质量一次性腹腔注射1%STZ,N组一次性腹腔注射等量柠檬酸缓冲液.于实验1,2、4、8周分别处死两组各5只大鼠,测量大鼠的血糖、24 h尿量、24 h尿白蛋白量、24 h尿肌酐、血清肌酐、体质量和肾脏质量,计算肌酐清除率和肾脏肥大指数,采用免疫组化SP法观察各组大鼠1、2、4、8周肾组织MBL,膜攻击复合物(MAC)及NF-κB的表达.结果 与正常组相比,DN组大鼠肾小球MBL沉积增多,MAC,NF-κB表达明显增多(P＜0.05),并随时间推移继续增高,各时间点差异有统计学意义(P＜0.05).STZ腹腔注射所致DN组大鼠的肾小球MBL,NF-κB的表达水平成显著正相关(r=0.973,P＜0.01).结论 甘露聚糖结合凝集素途径的补体激活参与了糖尿病肾病的发生发展,可能为下一步的诊断治疗提供新的方向.     

黄芪多糖对肾阳虚型糖尿病大鼠肾组织NF-κB、TGF-β1的影响

目的:研究黄芪多糖(APS)对肾阳虚型糖尿病大鼠肾脏核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β1(TGF-β1)过度表达的抑制作用。方法:将纯种SD雄性大鼠随机分为4组:正常对照组、模型组、苯那普利治疗组和APS治疗组。实验第8周时统一处死,以RT-PCR法检测各组大鼠肾组织NF-κB mRNA、TGF-β1mRNA表达,并观察肾脏超微结构变化及肾重/体重,测定大鼠血糖(BS)、血脂及肾功能。结果:与苯那普利治疗组相比,APS能使大鼠肾组织NF-κB mRNA、TGF-β1mRNA表达量减少,肾脏病理改变减轻,还可明显降低肾重/体重、血糖、血脂,改善肾功能。结论:糖尿病大鼠肾组织NF-κB、TGF-β1活性增加,APS能抑制NF-κB mRNA、TGF-β1mRNA的过度表达,从而延缓糖尿病肾病的进展。     

前列地尔联合雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏NF-κB表达的影响

目的 研究前列地尔联合雷米普利对阿霉素肾病大鼠肾脏NF-κB表达的影响,探索其作用机制.方法 正常六周龄雄性wistar大鼠40只随机分为四组.模型组10只,单用前列地尔组10只,单用雷米普利组10只,前列地尔联合雷米普利组10只,相应药物干预后分别于4周、8周末进行24h尿蛋白定量、ALB、Scr、Cys-c检测,免疫组化方法测定肾脏NF-κB的表达.结果 与模型组和单用药物治疗组相比,4W、8W末,前列地尔联合雷米普利组大鼠24小时尿蛋白定量,血浆Cys-c,肾脏组织NF-κB的表达均显著降低(P<0.01).结论 前列地尔联合雷米普利可降低阿霉素肾病大鼠肾脏NF-κB表达,减少蛋白尿,延缓肾小球硬化.