高压液相色谱柱法测定人血白蛋白多聚体含量

目前，国际上普遍采用高压液相色谱柱法来测定人血白蛋白多聚体含量，所采用的色谱柱多为ＴＳＫＧ３０００ＳＷ柱，而使用ＰｒｏｔｅｉｎＰａｋＴＭ３００ＳＷ柱测定未见报道，笔者就以上两种色谱柱对样品的分离度、重复性及测定结果进行了比较，现报告如下。１材料和方法...     

应用反相高压液相色谱内标法测定血清和尿中肌酐

目的评价以5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-Fu）作内标的反相高压液相色谱（highpressure liquid chromatography，HPLC）测定血清和尿中肌酐（ereatinine）的方法，拟初步推荐其作为肌酐测定的候选参考方法，同时对3种常规肌酐测定试剂进行评定。方法首先对以5-Fu作内标的反相HPLC测定血清和尿中肌酐的方法进行了方法学评价。进一步以该方法为对比方法，分别采用Jaffe动力学法、酶法、干化学法测定试剂对85份新鲜血清和94份新鲜尿液标本进行测定，对测定结果进行相关和偏差分析。结果以5-Fu作内标的反相HPLC，其线性范围达2210μmol／L，批内变异系数（n=5）〈2．5％，日间变异系数（n=10）〈4．5％，回收率96．3％～102．4％。血清肌酐含量〈150μmol／L时（n=53），HPLC与各种方法间的相关系数分别为0．9314、0．9421、0．9284。血清肌酐含量〉150μmol／L时（n=32），HPLC与各种方法间的相关系数分别为0．9877、0．9841、0．9934。结论拟推荐以5-Fu作内标的反相HPLC作为肌酐测定的候选参考方法；肌酐酶偶联肌氨酸氧化酶法可作为常规测定方法。     

2型糖尿病患者微量白蛋白尿临界值的研究

目的研究2型糖尿病(T2DM)患者晨尿、随机尿的尿白蛋白/肌酐比值(ACR)及尿白蛋白(U-Alb)浓度,判定微量白蛋白尿的临界值,以检测早期糖尿病肾脏疾病(DKD)。方法收集169例T2DM患者及40名健康体检者(正常对照组)的24 h尿、晨尿、随机尿,以24 h尿白蛋白排泄率(UAE)为早期DKD的判定标准,分析目前临床应用的晨尿、随机尿的ACR及U-Alb浓度判定微量白蛋白尿的临界值对早期DKD的筛查效能;根据受试者工作特征(ROC)曲线分析,Youden指数最大时对应的晨尿、随机尿的ACR及U-Alb浓度为检测早期DKD微量白蛋白尿的临界值。结果在微量白蛋白尿判定结果中,晨尿ACR与24 h UAE的符合率为43%,UAlb为37%;随机尿ACR为48%,U-Alb为41%,以上4个指标与24 h UAE的判定结果有明显差异(P均0.001)。正常对照组晨尿、随机尿检测结果判定与24 h UAE一致,均为正常。ROC曲线分析显示ACR晨尿临界值为男16 mg/g、女23 mg/g(Youden指数分别为0.70、0.67,阴性预测值分别为97%、100%,阳性预测值分别为72%、65%);ACR随机尿临界值为男17 mg/g、女28 mg/g(Youden指数分别为0.68、0.67,阴性预测值分别为90%、90%,阳性预测值分别为61%、82%);U-Alb晨尿临界值为男16 mg/L、女15 mg/L(Youden指数分别为0.57、0.59,阴性预测值分别为84%、87%,阳性预测值分别为90%、73%);U-Alb随机尿临界值为男17 mg/L、女14 mg/L(Youden指数分别为0.56、0.53,阴性预测值分别为73%、81%,阳性预测值分别为85%、71%)。ACR的最大Youden指数均0.6,且高于相应的U-Alb浓度的Youden指数。结论目前临床应用的晨尿、随机尿微量白蛋白尿的临界值判定T2DM患者早期肾病的漏诊率较高,应重新建立T2DM患者晨尿、随机尿ACR及U-Alb的临界值,以利于DKD的早期防治。     

尿中微量白蛋白测定技术的研究进展

尿中微量白蛋白测定对糖尿病肾病，高血压肾病，子痫及各种因素所至于致的肾小球损伤都具有重要的诊断价值，是早期肾损伤监测和追踪重要生化检测指标。本文对放射免疫测定法，免疫比浊法，荧光免疫测定法，酶免疫测定法，时间分辨荧光免疫法，间接胶乳凝集试验，Ｍｉｃｒａｌ－Ｔｅｓｔ，激光－荧光法和溴酚蓝染料结合法测定ｍＡｌｂ的基本原理，进展及优缺点进行了综述。     

高效液相色谱快速测定尿假尿苷

介绍一种不用苯硼酸亲和柱的高效液相色谱法快速测定尿假尿甙。本法只需简单的标本预处理，使用ＰＨ３．３磷酸盐缓冲液动相和２６８ｎｍ检测，每个标本测定只需１２分钟，批内和批间变异分别为３．２７％和４．８６％，线性范围超过１７００μｍｏｌ／Ｌ，常见的１０种抗肿瘤药物不干扰测定。     

高压液相色谱法检测肠道通透性及临床应用

目的用高压液相色谱的方法检测肠道通透性和60例健康志愿者和烧伤患者尿中乳果糖和甘露醇的排出率（L／M）。方法选取60例健康志愿者,平均年龄36．5岁（21～60岁）;病人12例烧伤面积大于30％,Ⅲ度面积大于20％的患者,测定伤后1,3,6,12d尿中乳果糖和甘露醇溶液的排出率。健康志愿者和烧伤患者在前1天晚10时起禁食;早8时口服10ml乳果糖和甘露醇溶液（含2．0g乳果糖和1．0g甘露醇）,收集口服溶液后6h内的全部尿液。尿样经离心和预处理后,用带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定,样本分析时间为10min。结果甘露醇和乳果糖标准曲线线性良好,线形的相关系数r^2分别为0．998823和0．999943;方法学的重复性误差（CV％,n=10）：乳果糖（L）3．52,甘露醇（M）1．61;回收率：乳果糖（L）98．4±3％,甘露醇（M）101．1±3（n=10）。60例健康人6h尿中的孔果糖（L）和甘露醇（M）排出率（％）的比值（L／M）是0．036±0．0008。12例烧伤患者第1d的L／M值显著增加（0．221±0．169,P〈0．05）,到12d时基本恢复正常（0．036±0．051）。结论带脉冲电化学检测器的高压液相离子色谱仪测定尿中乳果糖和甘露醇的排出率,方法准确、重复性和回收率满意。烧伤患者L／M比值的测定可反映肠黏膜的通透性和肠道屏障功能。     

高效液相色谱检测胆红素及其临床应用

由于常规的血清胆红素检测方法不能灵敏、准确的测定结合胆红素。笔者参考国外文献采用国产填料和试剂建立了敏感和特异的高效液相色谱胆红素测定法，结果表明本法可对血清胆红素作出较为灵敏和准确的测定，未结合胆红素批内和批间变异系数（ＣＶ）值分别为９．８％～１０．９％和７．３％～１２．７％，结合胆红素批内和批间ＣＶ值分别为２．５％～９．２％和９．７％～１１．０％；未结合和结合胆红素的最低检出浓度分别为０．０５μｍｏｌ／Ｌ和０．０２μｍｏｌ／Ｌ。同时采用本法分析了部分肝病患者和健康人血清胆红素，并对其临床意义进行了初步探讨。     

糖尿病尿微量白蛋白检测临床意义

目的：对2型糖尿病患者的尿微量白蛋白指标临床意义分析。方法：常规体检组与2型糖尿病组分别50例做尿微量白蛋白测定分析。结果：尿微量白蛋白与糖尿病病史相关与性别无关；结论：尿微量白蛋白检测可以发现早期糖尿病肾病。     

全血硫胺素及其衍生物的高效液相色谱检测方法的建立

目的建立一种稳定、快捷的全血硫胺素及其磷酸酯衍生物高效液相色谱(HPLC)荧光检测方法。方法全血样本经三氯乙酸(TCA)去蛋白处理、铁氰化钾衍生,产生能被HPLC反向柱子经梯度洗脱分离的稳定荧光产物,通过荧光检测并与硫胺素及其磷酸酯衍生物标准样本比对,来确定人体全血硫胺素含量。方法通过线性方程、提取率、重复性等指标验证。结果经过检测,焦磷酸硫胺素(TDP)、单磷酸硫胺素(TMP)和硫胺素的检测限分别为8.0、1.5和2.5 nmol/L,信噪比(S/N)>10,能够满足临床需要。线性趋势良好,r>0.99。硫胺素、TMP及TDP的回收率分别为103.7%、96.8%、101.7%,重复性好,变异系数(CV)<10%。结论经TCA去蛋白、铁氰化钾衍生、梯度洗脱建立的荧光HPLC检测硫胺素及其磷酸酯衍生物衍生物的方法可靠,可用于临床检测。     

Simultaneous determination of phenylalanine and tyrosine in peripheral capillary blood by HPLC with ultraviolet detection

Objectives

Phenylalanine (Phe) and tyrosine (Tyr) are the most reliable indicators for the diagnosis of phenylketonuria (PKU). The purpose of this study is to establish a simple and rapid method for the determination of Phe and Tyr in peripheral capillary blood from newborns and children by high performance liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV).

Methods

Peripheral blood specimens were taken from newborns or children by heel stick or skin puncture on the fingers. Blood samples were deproteinized by equal volume of 5% perchloric acid. Amino acid separation was carried out on a Hypersil C8 column. The mobile phase containing 5% acetonitrile (v/v) was run at a flow rate of 1.5 mL/min. Phe and Tyr were determined in the ultraviolet detector at 210 nm.

Results

The determination was within 10.0 min. The linear range was from 6.0 to 1512.0 μmol/L for Phe and 5.5 to 1250.0 μmol/L for Tyr. Although Phe and Tyr levels from peripheral blood samples were relatively lower than those from serum or plasma, the data showed a good agreement between them.

Conclusion

The method we developed is simple, rapid and convenient. It is useful for screening and diagnosis of PKU in newborns and children.     

高效液相色谱——紫外、荧光双检测器同时测定人尿中犬尿氨酸和犬尿喹啉酸

目的建立高效液相色谱（HPLC）同时测定人尿中犬尿氨酸（KYN）和犬尿喹啉酸（KYNA）方法。用KYNA／KYN比值评价人体犬尿氨酸氨基转移酶（KAT）活性。方法采用HPLC测定KYN、KYNA,分析柱为安捷伦HCC18反相色谱柱;流动相为10mmol／L乙酸钠-乙酸缓冲液：7％乙腈=93：7;流速1mL／min;检测器波长：紫外365nm,荧光344nm（激发）／398nm（发射）。结果KYN和KYNA保留时间分别为6．9和11．5min。水溶液标准与标准加入工作曲线斜率差异无统计学意义（KYN：P=0．4068;KYNA：P=0．6462）。KYN和KYNA的平均回收率分别为98．74％±7．53％、95．17％±8．17％;稳定性试验的变异系数（CV）分别为3．35％和0．88％;精密度CV分别为2．73％和2．79％;最低检测限分别为0．4和0．2μmol／L。30份健康成年人尿样的KYNA／KYN比值为2．45±1．54。尿中KYNA与KYN含量呈正相关关系（r2=0．3758,P〈0．001）。结论测定方法灵敏、准确、稳定。KYNA／KYN比值评测KAT活性具有简便、实用等特点,可用于相关疾病的临床辅助诊断和基础研究。     

高血压及糖尿病早期肾损害患者尿液中微量清蛋白检测分析

目的探讨尿微量清蛋白(mAlb)在高血压及糖尿病患者肾功能早期损害中的诊断价值。方法测定87例高血压患者、24例糖尿病患者、48例糖尿病合并高血压患者及115例健康对照者的血清尿素(Urea)、肌酐(Cr)和尿mAlb水平,并将患者按所患疾病以及是否合并肾病进行分组,对Urea、Cr和尿mAlb水平进行评价。结果 159例高血压及糖尿病患者尿mAlb水平与对照组比较,差异有统计学意义(P0.001)。尿mAlb诊断阳性率远高于血清Urea和Cr。结论高血压及糖尿病患者早期肾损害时,血清Urea和Cr虽然升高,但一般在正常范围,而尿mAlb水平明显升高,超过正常范围。尿mAlb的水平升高对于高血压及糖尿病患者肾脏早期损害具有重要的诊断意义。     

非胰岛素依赖型糖尿病自主神经病变对尿白蛋白排泄率的影响

目的：探讨糖尿自主神经病变与糖尿病肾病之间的关系。方法：将４６例非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者按有无自主神经病分成两组，分别测定尿白蛋白排泄率（ＵＡＥＲ）。结果：伴自主神经病变组（ＡＮ组）夜间ＵＡＥＲ明显高于无自主神经病变组（无ＡＮ组）且与卧立位血压差和自主神经计人呈显著正相关，结论：自主神经病变使ＮＩＤＤＭ患者夜间ＵＡＥＲ增加，促进糖尿病肾病的发展。     

Differences in urinary albumin detected by four immunoassays and high-performance liquid chromatography

OBJECTIVES: To compare the analysis of urinary albumin from diabetic patients by four conventional immunoassays including radioimmunoassay (RIA), immunonephelometry (IN), and two different methods of immunoturbidimetry (IT), as well as by high-performance liquid chromatography (HPLC). DESIGN AND METHODS: Urines were collected over a 24-h period and stored at -20 degrees C until assay. Urinary albumin concentration was determined by an in-house RIA, by IN using a Beckman Array Analyser with reagents from Beckman Diagnostics (Sydney, Australia), by IT using a Dade-Behring Turbitimer with reagents from Dade-Behring (Marburg, Germany), by IT using a Dade-Behring Dimension R x L Chemistry Analyser with reagents from DiaSorin (Stillwater, OK, USA), and by HPLC using a Zorbax Bio series preparative GF-250 column. Regression lines were calculated using a least squares method to determine the correlation between the assays studied. Bland-Altman bias plots including limits of agreement were also calculated. RESULTS: The correlation coefficients calculated were high (>0.85) indicating a strong linear relationship between all assays studied. The slopes calculated for the comparisons demonstrate that each assay can vary from one another (up to threefold) and have a slope significantly different from an ideal slope of 1 (P < 0.001). These results were confirmed by Bland-Altman bias plots and calculation of the limits of agreement that were all large. CONCLUSIONS: At this time, there is no global standard by which urinary albumin assays may be standardized. This study suggests the need for such standards.     

谷氨酰胺高效液相测定法的研究应用

目的 建立一种准确、简便、快速的高效液相色谱法,快速测定血中谷氨酰胺含量,监测给予经谷氨酰胺强化的安全肠外营养病人血清谷氨酰胺浓度并对照组比较。方法 反相Ｃ１８柱为固定相,异硫氰酸苯酯作柱前衍生剂,５０ｍｍｏｌ／Ｌ醋酸缓液（ｐＨ６．５０）－乙腈（９７．７：２．３）为流动相,进行单泵等梯度洗脱,在λ２５４ｎｍ处检测谷氨酰胺含量。结果 线性范围４０～２５００μｍｏｌ／Ｌ相关系数０．９９８,批内和比间的     

Simultaneous determination of betaine and N,N-dimethylglycine in urine

A method is described for the determination of betaine and its metabolite N,N-dimethylglycine in human urine. The method involves a deamination step and a solid-phase extraction to isolate both substances from urine followed by high performance liquid chromatography (HPLC) separation on a 5-μm SCX column with UV absorbance detection. Limit of detection is about 0.9 μg for both substances. Recoveries were > 85%. The method appears to be suitable for monitoring betaine and its metabolite in urine of patients undergoing therapy with betaine.     

RP-HPLC-荧光法测定大鼠海马组织中5种氨基酸类神经递质

目的采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)-荧光检测技术建立一种用于测定脑海马组织中5种氨基酸[天门冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Aspa)、谷胺酰胺(Gln)、甘氨酸(Gly)]类神经递质的方法。方法采用甲醇∶水=1∶1提取大鼠脑海马组织中多种氨基酸类神经递质。用6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚胺氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生RP-HPLC-荧光法测定海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量。结果 5种氨基酸类神经递质在15 min内完全分离,分离效果良好;在0.5~100.0μg/μL范围有较好的线性关系,相关系数(r)≥0.999 90;Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly的检出限分别为0.05、0.068、0.037、0.05、0.02μg/μL。精密度[相对标准偏差(RSD)]为0.4%~2.5%,加样回收率为70.27%~128.20%,RSD均5%;8只正常大鼠海马组织中Asp、Glu、Aspa、Gln、Gly含量分别为38.98±9.66、126.42±34.06、216.00±0.75、90.44±33.75、(12.95±4.42)μg/g。结论 RP-HPLC-荧光法快速、准确、灵敏度高,适用于脑组织中氨基酸类神经递质含量的测定。     

胥文春陈宏础罗春丽(重庆医科大学检验系

用一种简单快速的反相高效液相色谱法（ＲＰ－ＨＰＬＣ）分离并测定了四种胆红素组分比。这四种胆红素组分是：未结合胆红素（Ｂα）、胆红素单葡萄糖醛酸酯（Ｂβ）、胆红素双葡萄糖醛酸酯（Ｂγ）及与白蛋白紧密结合的胆红素（Ｂδ）。所用色谱柱为Ｃ４宽孔短链的国产柱子。标本处理简单，不需除去蛋白质，血清经稀释后高速离心取上清液直接进样，采用线性梯度洗脱，在波长４３６ｎｍ处，Ｂγ、Ｂβ、Ｂδ及Ｂα依次出峰，２２分钟可测一个标本。并初步探讨了其在临床上的应用价值