高温对大鼠血管活性物质含量及脂质过氧化的影响

目的　探讨高温对大鼠内皮素 (ET)、心钠素 (ANP)、内源性洋地黄物质 (EDLS)释放及脂质过氧化的影响。方法　将 4 8只Wistar大鼠随机分为对照组、热习服组、热应激组。用放射免疫法测定ET、ANP、EDLS及超氧化物歧化酶 (SOD)含量 ,分光光度法测定丙二醛 (MDA)含量。结果　 3组间ET含量差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;热习服组和热应激组大鼠血浆ANP含量明显低于对照组 ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ;热习服组与热应激组的EDLS含量明显高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。热习服组和热应激组大鼠血清SOD含量明显低于对照组 (P <0 0 1)。MDA含量比较 ,热应激组高于对照组 ,差异有显著性 (P <0 0 1) ,热习服组与对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　高温环境对大鼠ANP、EDLS水平有影响 ,热习服与热应激后导致ANP明显下降 ,而EDLS含量明显升高。大鼠质脂过氧化作用增强 ,抗氧化酶作用减弱。     

高温下精氨酸对一氧化氮和细胞增殖的影响

目的　探讨精氨酸对高温下血清一氧化氮 (NO)含量和淋巴细胞增殖活性的影响。方法　BALB/C小鼠 ,随机分为对照组、精氨酸补充组 [0 5 ,1 5 ,2 5 ,3 5 g/ (kg .bw) ],每组 35只 ,其中 5只为常温对照。 14d后 ,除常温对照外均放入 (41± 0 5 )℃动物高温仓热应激 12 0min ,结束后 0 ,2 ,4 ,8,12 ,2 4h共 6个时相分别眼眶采血 ,常温组在灌胃第 3,7,11,14d时采尾血。观察指标测定血清NO浓度、淋巴细胞增殖活性。结果　 (1)在常温下补充精氨酸后第 3d各实验组血清NO含量最高 ,第 7d后基本稳定 ,补充组各个时间点都高于未补充组 ,其中补充精氨酸 0 5 g/(kg .bw)组各个时间点明显高于其他补充组。 (2 )热应激后补充 0 5和 1 5 g/ (kg .bw)及未补充组血清NO浓度有先下降 (0～ 2h最低 )而后上升 ,4～ 8h基本稳定。而补充高浓度精氨酸的两组〔2 5和 3 5 g/ (kg .bw)〕热应激后持续上升 ,而且在 12h内 ,血清NO含量明显高于低浓度的两组和对照组。 (3)在热应激下补充精氨酸的各组刀豆蛋白(ConA)刺激指数高于对照组 ,补充精氨酸的各组 ,以 1 5 g/ (kg .bw)时ConA刺激指数达到最大。热应激后 ,小鼠淋巴细胞增殖活性受到抑制 ,其中 4～ 8h最低。结论　高温环境应激下小鼠对精氨酸的需要量增加 ,而血清NO含量的变     

不同气候地区武警士兵热休克蛋白71表达的差异性分析

目的　分析来自北京、郑州和广州三个地区武警士兵外周血淋巴细胞热休克蛋白 71(HSP71)基础和热应激后表达水平的差异性。方法　用流式细胞术检测淋巴细胞HSP71水平 ,用彗星试验检测淋巴细胞在基础和应激状态下DNA的损伤情况。结果　彗星试验显示 ,淋巴细胞在基础和热应激条件下 (41℃ ,1h)未发现有明显的DNA损伤 ,三个地区之间士兵淋巴细胞在基础和应激条件下DNA损伤的差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;热应激后 ,三个地区士兵淋巴细胞HSP71均明显增高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,不同地区比较发现 ,北京士兵HSP71基础和热应激水平 (平均荧光强度分别为 84 5 .87± 135 .6 0、12 5 4 .4 7± 2 39.0 5 )均比广州士兵 (平均荧光强度分别为 70 2 .73± 184 .70、86 1.72±2 2 5 .12 )明显升高 ,且差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　不同气候地区武警士兵淋巴细胞HSP71基础和热应激水平存在差异性 ,提示可以将HSP71基础和热应激水平作为评价不同气候地区武警战士在热环境下耐受能力的指标     

沙漠热环境徒手行军者血浆NO和NOS与生理应激的关系

目的　探讨沙漠干热环境徒手行军者血浆一氧化氮 (NO)和一氧化氮合酶 (NOS)与生理应激的关系。方法　对在沙漠干热环境中分别以 3 5km/h和 5 0km/h徒手行军 1,2 ,3h试验组 6 0名战士和对照组14名战士血浆NO和NOS、心律增值、肛温增值和积热指数等进行分析。结果　不论是 3 5km/h还是5 0km/h行军 ,各行军时间试验组血浆NO均明显低于对照组 (P <0 0 5 )。3 5km/h行军时 ,行军 3h试验组血浆NO明显低于 1h试验组 (P <0 0 5 )。行军 1h试验组血浆NOS水平明显高于行军 2 ,3h试验组(P <0 0 5 )。各行军时间试验组心率增值、肛温增值和积热指数与对照组比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。行军 3h试验组心率增值明显高于行军 2h试验组 (P <0 0 5 )。5 0km/h行军时 ,各行军时间试验组肛温增值和积热指数与对照组比较 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 )。行军 2 ,3h试验组积热指数明显高于行军 1h试验组 (P <0 0 5 ) ,行军 3h试验组明显低于行军 2h试验组 (P <0 0 5 )。行军 2 ,3h试验组心率增值明显高于对照组 (P <0 0 5 )。结论　沙漠干热环境徒手行军者血浆NO和NOS与生理应激相关。     

复合营养素干预对高温与烫伤应激大鼠脂质过氧化的影响

目的　探讨高温烫伤复合创伤 (湿热复创 )应激条件下超氧化物歧化酶和丙二醛的变化规律 ,为研究提高部队应对应激反应的能力提供实验依据。方法　 ( 1)湿热复创对照组动物以去离子水灌胃 1周 ,造成背部浅Ⅱ度烫伤 ,置于仿真模拟气候舱 [干球湿度 ( 3 7± 0 5 )℃ ,相对湿度 ( 65± 5 ) % ] 1h、 2h ,分为热应激 (高温暴露 ) 1h、2h、热应激后 4h、 10h (高温暴露 2h后常温放置 4h和 10h) 4个时相点 ;( 2 )湿热复创给药组给予维生素C、L 精氨酸、维生素E组成的复合营养素灌胃 1周 ,湿创和热应激的处理和时相点同对照组。结果　湿热复创对照组和给药组血浆SOD、MDA含量变化的差异均有显著意义 (P <0 0 1)。对照组 2h血浆SOD含量与给药组 1h、 2h、热应激后 4h比较差异均有显著性 (P <0 0 1) ;对照组热应激后 10h与给药组 2h血浆SOD含量比较差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;给药组热应激后 4h与对照组 1h、 2h、热应激后 4h血浆MDA含量比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　SOD和MDA的含量变化与机体的生理病理改变具有密切关系 ,而早期采取的干预措施可以减轻和抑制机体的脂质过氧化反应 ,从而减轻其对机体的损害     

大鼠肝缺血预处理过程中一氧化氮对IL-1β及TNF-α的影响

目的　探讨大鼠肝脏缺血预处理 (IP)过程中一氧化氮 (NO)合成对血清白细胞介素 -1β(IL -1β)及肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)水平的影响。方法　 169只大鼠随机分为缺血再灌注 (I/R组 )、IP组、左旋精氨酸加IP(L -Arg +IP)组及假手术 (S)组。检测术后 1h、2 4h及 1周时血浆NO浓度及血清IL -1β .TNF -α的浓度。 结果　 1 血浆NO水平 :IP组及L -Arg +IP组均明显高于S组 (P <0 0 1) ,在 2h及 2 4h显著高于I/R组 (P <0 0 1) ,且L -Arg +IP组在 2h时显著高于IP组 (P <0 0 5 ) ;2 血清IL -1β的水平 :IP组在 2h及 2 4h均显著低于I/R组 (P <0 0 1,P <0 0 5 )及S组 (P <0 0 1) ,在 1周时显著低于I/R组 (P <0 0 1) ;L -Arg +IP组在术后 2h显著低于IP组 ( P <0 0 5 )。 3 血清TNF -α的水平 :IP组在三个时间点均显著低于I/R组 ( P <0 0 1) ,在 2 4h时显著高于S组 (P <0 0 1) ;在 2h及 2 4h时显著高于L -ArgIP组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。L -Arg +IP组与S组均无统计学差异 (P >0 0 5 )。结论　肝脏缺血预处理能下调血液TNF -α及IL -1β水平 ,且这种下调作用可能与NO合成增加有关 ;增加NO的合成可增强这种下调效应 ,进一步增强缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤的保护作用。     

山莨菪碱对大鼠热应激的影响

目的　探讨预先静脉注射山莨菪碱有无预防大鼠中暑性内毒素血症的作用。方法　实验动物随机分为两组 ,置于 38℃～ 40℃、5 0 %～ 6 0 %相对湿度的热环境中 ,用四道生理记录仪、半导体温度计测平均动脉压和直肠温度 ,并测热应激的生存时间和生存率 ,在严格无菌和去热源的条件下 ,采集门静脉血和颈动脉血 ,用显示基质偶氮法测血浆内毒素含量。结果　热应激过程中 ,实验组和对照组动物肛温持续增加 ,2h后分别达 (4 2 .7± 0 .6 )℃和 (4 3.1± 0 .5 )℃ ,两组比较 ,差异无显著性(P >0 .0 5 ) ,死亡前肛温高达 (4 4.6± 0 .2 )℃和 (4 4.2± 0 .3)℃ ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。实验前门静脉血内毒素含量分别为 (4 5 .7± 5 .2 ) pg/ml和 (4 2 .6± 5 .4) pg/ml,外周血内毒素含量分别为 (14.8± 4.5 ) pg/ml和 (13.9± 7.2 )pg/ml,差异均无显著性 (P >0 .0 5 ) ;2h后门静脉血分别增至 (12 2 .2±16 .7)pg/ml和 (15 0 .4± 2 2 .1) pg/ml,而外周血增至 (32 .3± 7.8) pg/ml和 (4 9.7± 10 .2 )pg/ml,明显高于实验前 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而且两组之间比较 ,差异也有显著性 (P <0 .0 1)。两组动物心率变化趋势基本相同 ,都是先升后降 ,但实验前后心率变化的差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;实验前两组动     

沙漠负重行军者热休克蛋白与一氧化氮的关系

目的　探讨沙漠干热环境负重应激行军者热休克蛋白 (HSPs)与机体一氧化氮 (NO)及其一氧化氮合成酶 (NOS)的关系。方法　对在沙漠干热环境中 15kg负重、分别以 3 5km/h和 5 0km/h速度行军 1,2 ,3h的 57名战士和 14名对照血浆HSP70和HSP2 7、NOS和NOS等进行研究。结果　在 15kg负重条件下 ,不管是 3 5km /h还是5 0km /h ,各行军组HSP70与对照组及各行军时间组间HSP70均无显著性差异 (P >0 0 5) ;各行军时间组HSP2 7明显高于对照组 (P <0 0 5) ,各行军时间组间HSP2 7无显著性差异 (P >0 0 5) ;各行军时间组NO明显低于对照组(P <0 0 5)。 3 5km /h行军 3h组NO明显低于行军 1,2h组 (P <0 0 5) ;3 5km/h行军 1h组NOS明显高于对照和行军 3h组 (P <0 0 5) ;5 0km/h行军 2h组NOS明显低于对照和其它行军时间组 (P <0 0 5)。结论　沙漠干热环境应激负重行军者血浆HSP2 7与NO及其NOS密切相关 ,HSP70与NO及其NOS关系不大     

血清白介素-6、白介素-8、肿瘤坏死因子在甲状腺功能减低状态下的变化

目的　研究甲状腺功能减低状态 (简称甲减 )对人体血清白介素 - 6 (IL - 6 )、白介素 - 8(IL - 8)、肿瘤坏死因子 (TNF)水平的影响。方法　选初诊原发性甲减患者 5 3例及正常对照者 4 5例 ,抽取静脉血测定血清IL - 6、IL - 8、TNF水平。结果 (1 )甲减患者的IL - 6水平与正常对照组相比无显著差异 (P >0 .0 5 )。 (2 )甲减组中IL - 8浓度比对照组高 (P <0 .0 5 )。 (3)甲减的TNF含量比正常对照组高 (P <0 .0 5 )。 (4)甲减组患者IL - 6、IL - 8、TNF浓度与年龄、性别、甲功高低无关。结论　IL - 8、TNF系统参与原发性甲减的发病过程 ,参与自身免疫反应的免疫病理过程。     

早期营养减轻湿热复合创伤后应激的研究

目的　高温高湿创伤复合应激条件下超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)和醛固酮(ALD)的变化规律 ,为提高部队应对应激反应的能力提供实验依据。方法　 (1)湿热创伤对照组动物以去离子水灌胃1周 ,造成背部浅Ⅱ°烫伤 ,置于仿真模拟气候舱 [干球温度 (37± 0 5 )℃ ,相对湿度 (6 5± 5 ) % ]1～ 2h ,每组各分为热应激 1,2 ,4 ,10h 4个时相点 ;(2 )湿热创伤给药组 ,给予维生素C、L -精氨酸、维生素E组成的复合营养素灌胃 1周 ,创伤和湿热、时相点处理同 (1)。结果　对照组和给药组血浆SOD、MDA含量变化的有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;对照组1h与对照组其余各时相点及给药组各时相点血浆NO、血清ALD含量比较均有显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论　早期肠道营养对于减轻应激、保护器官及预防并发症的发生有重要意义     

高温复合创伤对兔血一氧化氮及平均动脉压的影响

目的探讨急性热暴露复合创伤后血浆一氧化氮(NO)早期变化及其对血压的可能影响,为急性应激条件下NO的作用机制研究提供理论依据.方法建立兔急性热暴露复合创伤模型,实验动物分为常温无创组、常温创伤组、高温无创组、高温创伤组.于0、1、2 h不同时间点取血测定NO含量,全程监测血压变化.结果急性热暴露创伤后1 h左右,兔血浆NO浓度下降,然后升高,高温创伤组NO浓度在1、2 h时分别为(42.75±8.24)、(59.54±9.05)μmol/L,差异有显著性(P＜0.05),而正常对照组则为(56.63±3.79)、(55.22±7.15)μmol/L,两组于1 h时的差异有显著性(P＜0.05).在高温和创伤条件下,兔平均动脉压(MAP)于60～70 min降至最低点,继之有一个短暂的回升,然后则迅速下降.结论急性热暴露复合创伤兔早期血浆NO浓度先降低后升高,且与MAP的变化有一定关系.     

热休克反应对高温诱导的循环衰竭的保护作用

目的　探讨热休克反应 (HSR)对高温诱导的循环衰竭的保护作用及其机制。方法　本研究分为 2个实验 :(1)HSR的保护作用。大鼠分为 2组 :热休克组、对照组。热休克组予热休克预处理 ,对照组则否。两组常温恢复 2 0h后予以热暴露至死亡 ,监测记录血压、心电。运用Chart软件获取平均动脉压 (MAP)、生存时间等数据。 (2 )作用的机制。大鼠分为 3组 :热休克组、对照组和常温对照组。常温对照组不予任何处理。前两组处理同实验一 ,但在热暴露至 73min时终止实验 ,记录收缩压 (Ps)、舒张压 (Pd)等数据 ,并检测心肌一氧化氮 (NO)、热休克蛋白 (HSP70 )含量。结果　热休克组生存时间 [(10 2 .3± 11.4 )min]明显长于对照组 [(87.9± 7.7)min],且休克出现晚 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。热暴露早期热休克组与对照组MAP差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,6 0min后 ,前者高于后者。热暴露至 73min时 ,热休克组MAP、Ps、Pd、HR均较对照组明显升高 ,差异有显著性 (P <0 .0 5、P <0 .0 1) ,心肌HSP70、NO含量则较对照组明显降低 ,差异亦有显著性 (P <0 .0 1)。结论　HSR可能通过诱导心肌HSP70的高表达 ,抑制热暴露大鼠心肌NO过量生成 ,从而减轻高温诱导的循环衰竭。     

补充L-精氨酸对热应激小鼠血清NO、NOS和T细胞亚群的影响

目的:通过补充不同剂量的L-精氨酸(L-Arg),探讨热应激后L-Arg对免疫功能的影响。方法:雄性成年NIH小鼠随机分为三组(A组:灌蒸馏水;B组:给L-Arg1.5mg/gbw;C组:给L-Arg2.5mg/gbw),每组各有6只为常温对照(不经过热应激处理),另36只为热应激后分6个时间点取样。给L-Arg14d后放入动物高温仓进行热应激,干球温度(41±0.5)℃,湿球温度(33.5±0.5)℃,相对湿度65%处理120min。结束后分别取样检测血清NO含量、NOS活性及胸腺T细胞亚群的变化。结果:常温下补充L-Arg组小鼠血清NO浓度、NOS活性及CD3+、CD4+细胞百分率、CD4+/CD8+比值均高于未补充组;而热应激后小鼠血清NO浓度、NOS活性、CD3+、CD4+细胞百分率、CD4+/CD8+比值补充组均明显高于未补充组,但CD8+细胞百分率则是补充组低于未补充组,而补充L-Arg的两组间无显著性差异。结论:热应激后4~8h小鼠免疫功能受损最严重。补充适量L-Arg可促进热应激小鼠NOS活性,提高体内NO水平,增加T细胞亚群数量及CD4+/CD8+比值。     

高频喷射通气对单肺通气患者氧化应激反应的影响

目的 研究高频喷射通气(HFJV)对单肺通气患者氧化应激反应的影响.方法 择期行食管癌根治术患者45例,按随机数字表法分为双肺通气组(A组)、单肺通气组(B组)、单肺通气时非通气侧给予HFJV(驱动压力1 kg/cm2,频率100次/min)组(C组),每组15例.分别于开胸前(T0),单肺通气后(A组于开胸后)30 min(T1)、90 min(T2)、150 min(T3),手术结束时(T4)测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)浓度.结果 T2～T4时B、C组SOD活性[B组:(47±10)、(37±9)、(41±7)kU/L;C组:(58±12)、(51±11)、(49±9)kU/L]低于A组[(78±8)、(75±7)、(79±6)kU/L](P＜0.05),T1～T4时B、C组MDA、NO浓度高于A组(P＜0.05);T3时C组SOD活性明显高于B组(P＜0.05),T1～T4时C组MDA浓度及T2～T4时NO浓度低于B组(P＜0.05).结论 HFJV能在一定程度上抑制单肺通气患者的氧化应激反应.

Abstract：

Objective To determine the effects of high-frequency jet ventilation (HFJV) on oxidative stress in patients during one-lung ventilation (OLV). Methods Forty-five patients undergoing elective radical esophageal cancer resection were divided into three groups with 15 cases each by random digits table: two lung ventilation group ( group A), OLV group (group B), HFJV- OLV group ( group C, working pressure 1 kg/cm2 and frequency 100 times/min). Venous blood samples were taken before induction (T0),at30min (T1),90min (T2),150min (T3) after OLV and the end of operation (T4) for measuring serum superoxide dismutase(SOD),malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO). Results SOD was lower at T2-T4 in group B[(47 ± 10), (37 ±9), (41 ±7) kU/L] and group C[(58 ± 12), (51 ± 11), (49 ± 9) kU/L] than those in group A [(78 ±8), (75 ±7), (79 ±6) kU/L](P＜ 0.05),and MDA and NO were lower at T1-T4 in group B and group C than that in group A(P＜ 0.05). SOD was higher at T3 in group C than that in group B (P ＜ 0.05), MDA at T1-T4 and NO at T2-T4 were lower in group C than those in group B (P ＜ 0.05). Conclusion HFJV can effectively decrease oxidative stress in patients during OLV.     

吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元NO含量和NOS活性的影响

目的　研究新型农药吡虫啉对原代培养的大鼠海马神经元细胞培养液内NO(一氧化氮 )含量和细胞内NOS(一氧化氮合酶 )活性的影响。方法　原代培养的大鼠海马神经元成熟后 ,分组加入不同浓度的吡虫啉进行染毒 ,于染毒后 12h、2 4h、4 8h分别在相差显微镜下观察其形态学改变 ,并测定细胞死亡率 ,细胞培养液内NO含量及细胞内NOS的活性。结果　与DMSO对照组相比 ,除 0 ,10 -6mol/L吡虫啉组外 ,随染毒浓度增加 (10 -5～ 10 -3 mol/L)和染毒时间延长 ,出现细胞肿胀、胞体内颗粒增多和突起断截等改变 ,细胞间网络也变稀疏 ;细胞死亡率和细胞培养液NO含量在作用 2 4h后增加 (P <0 0 5 ) ,作用 4 8h继续增加 (P <0 0 1)。细胞内NOS活性在作用 12h于 10 -3 mol/L组首先出现升高 (P <0 0 1) ;作用 2 4h ,10 -5～ 10 -4mol/L组也升高 (P <0 0 1) ,10 -3 mol/L继续升高 (P <0 0 1) ;作用 4 8h ,各浓度组吡虫啉的细胞内NOS活性与 2 4h时相比无明显变化。结论　 10 -5～ 10 -3 mol/L浓度的吡虫啉可引起原代培养的大鼠海马神经元细胞培养液内NO含量和细胞内NOS活性的升高 ,这可能与其神经毒性作用有关。     

TNFα增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体表达受PKCα调控

目的 通过研究蛋白激酶Cα（PKCα）参与调控肿瘤坏死因子α（TNFα）增强肾小球系膜细胞Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体（IP3RI）表达的信号机制,揭示TNFα引起肝肾综合征肾小球滤过率（GFR）下降的分子机制.方法 选择大鼠系膜细胞株（GMCs）进行体外培养.按TNFα处理GMCs的不同时间点,分为对照组（D）、TNFα-2 h组、TNFα-4 h组、NFα-8 h组、TNFα-24 h组,另设2组分别为Sanfingol-8 h组（S）、TNFα＋ Sanfingol共培养8h组（TS）,共6组.应用免疫细胞化学染色、Western blot、Real time-PCR检测方法,观察TNFα孵育的GMCs中IP3RI表达的变化.结果 免疫细胞化学染色发现：IP3RI主要分布于GMCs的胞浆内,对照组阳性信号较弱,TNFα处理各组棕褐色阳性信号增强,以TNFα-8 h组最明显.Western blot分析发现：TNFα-4 h组、TNFα-8 h组、TNFα-24 h组与对照组差异有统计学意义（4 h：1.82±0.63,8 h：2.95±0.66,24 h：2.48±0.72,D：1±0.02,F=9.24,P＜0.05）.其中TNFα-8 h组、TNFα-24 h组IP3RI表达最高（P＜0.05）.S组、TS组与对照组差异无统计学意义（S：1.39 ±0.65,TS：1.35±0.37,P＞0.05）.Real time-PCR发现：TNFα处理各时间点组与对照组相比IP3 RI表达均明显增加,差异有统计学意义（2 h：3.35±1.97;4 h：3.16±1.35,8 h：3.70±1.76;24 h：4.49±1.70,D：1±0.01,F=6.167,P＜0.05）. TNFα各处理组组间差异无统计学意义（P＞0.05）.S组、TS组与对照组比较差异无统计学意义（S：1.53±0.79,TS：1.32±0.38,P＞0.05）.结论 IP3 RI主要分布于GMCs的胞浆内,TNFα可增加肾小球系膜细胞IP3 RI蛋白、mRNA的表达,并可被PKCα抑制剂Sanfingol所阻断,这可能是肝肾综合征时TNFα引起GFR下降的重要信号机制.     

二氧化硅对人肺泡Ⅱ型上皮细胞纤溶酶原激活物抑制因子-1和激活蛋白-1表达的影响

目的研究SiO2对人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)中纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)及激活蛋白1(AP1)表达的影响,探讨SiO2致肺纤维化的发病机制。方法按SiO2(200μg/ml)与A549细胞共育时间的不同,实验分SiO2刺激0、4、8、16、24h组。利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)、Westernblot及免疫细胞化学SP法检测细胞PAI1mRNA和蛋白的表达;AP1(cjun/cfos)总蛋白及核蛋白表达的检测采用Westernblotting。结果SiO2刺激后,实验组PAI1mRNA及蛋白表达强度随时间延长依次增强,呈直线正相关(rmRNA=0.911,r蛋白=0.902,P<0.05),且实验组PAI1蛋白表达均高于对照组(0.36±0.03),其中24h组(0.73±0.01)表达最强;cjun和cfos核蛋白的表达亦明显高于对照组(0.52±0.02、0.15±0.01),cjun核蛋白的表达4h组(1.54±0.02)最强;cfos核蛋白表达8h组(0.36±0.01)最强;cjun和cfos核蛋白的表达均从孵育16h开始逐渐下降。AP1(cjun/cfos)总蛋白的表达各组间差异无统计学意义(P>0.05);PAI1阳性信号定位于胞浆和胞核。结论SiO2能够诱导A549细胞PAI1的表达,呈现出明显的时间-效应关系,核转录因子AP1在SiO2刺激的早期被激活。     

7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响

目的探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度Na F(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72 h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)%,(70.27±1.20)%,(54.40±0.98)%和(52.17±1.07)%,(40.60±1.11)%,(29.50±1.40)%。10~(-4)mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24 h细胞存活率为(105.96±3.44)%;10~(-3) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)%;10~(-2) mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24 h细胞存活率为(88.64±4.75)%。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml。高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)%,高于对照组(P0.05);低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)%和(1.0±0.2)%,与对照组差异无统计学意义(P0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μmol/L,(0.452±0.012)、(0.517±0.072)、(0.607±0.013)U/ml],差异有统计学意义(P0.05)。与氟单独处理组相比,NaF联合应用7-NI后,各组NO含量及NOS活力均下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,氟可使SH-SY5Y细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01),并随着氟染毒剂量及时间的增加,细胞凋亡指数随之增加;联合应用7-NI后,各组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P0.01)。氟可使SH-SY5Y细胞数量减少,形态变为圆形、不规则形,细胞存活率降低;低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组在相同视野下细胞数增加,高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组细胞数明显减少,大部分细胞呈圆形或不规则形。结论氟中毒所致细胞凋亡可能与NOS活力和NO含量升高有关,7-NI可降低细胞凋亡指数。     

微波诱导小胶质细胞的促炎症反应

目的 探讨微波与小胶质细胞促炎症反应之间的关系,揭示小胶质细胞在微波致中枢神经损伤中的作用.方法 离体培养的N9小胶质细胞接受90 mW/cm2微波辐照,在辐照后0、1、3、6、12、24 h采用细胞流式计数的方法观察CD11b的表达情况,用酶联免疫吸附(EUSA)方法检测N9细胞培养上清液中TNF-α的浓度,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测N9小胶质细胞一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达,采用硝酸还原酶法检测培养上清液中NO含量.结果 微波辐照后3 h阳性表达CD11b的小胶质细胞明显增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),一直持续到辐照后24 h,并在辐照后6 h达到高峰.TNF-α含量在辐射后1 h明显升高[(657.8±25.9)pg/ml],并一直持续到24 h,在辐照后3 h达到峰值[(762.1±61.5)pg/ml],与对照组[(258.9±81.7)pg/ml]比较,差异有统计学意义(P<0.01.NO的含量在辐照后1 h开始升高(4.48±0.59) μmol/L].与对照组[(2.65±0.14) μmol/L]的差异有统计学意义(P<0.05),并随时间的延长逐渐增加.iNOS mRNA表达在辐照后1 h开始明显升高,6 h升高约2倍,此后表达有所下降,但24 h内均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 微波辐照可明显诱导小胶质细胞活化,活化的小胶质细胞可通过分泌大量TNF-α,释放NO等产生促炎症反应.     

高温、苯并芘-7,8-二醇-9,10-环氧化物单独作用对人肺腺癌细胞Hsp27、Hsp70表达的影响

目的研究不同温度和不同浓度B(a)P7,8二醇9,10环氧化物(BPDE)作用A549细胞后,热休克蛋白27(HSP2)、热休克蛋白70(Hsp70)的表达规律。方法体外培养的A549细胞分为高温应激组和BPDE组。37℃培养的细胞作对照,高温应激组细胞置于高温(39℃、42℃、43℃)应激2小时。BPDE组用不同浓度的BPDE(0、2、4、8μmolL)染毒2h。利用Westernblot技术分析A549细胞株中Hsp27、Hsp70的表达水平。结果高温应激组细胞Hsp27的表达较37℃对照明显升高,差异均有显著性(P<0.05)。在39℃,Hsp27的表达水平达到峰值。高温处理后,Hsp70的表达也增加,在42℃达到最高,且与对照相比差异有显著性(P<0.05)。BPDE组Hsp27、Hsp70的表达均较对照明显升高,其中Hsp27的表达水平在实验用最高浓度8μmolL达到最高,且与对照比较差异有显著性(P<0.05),但仍处于上升阶段。Hsp70在4μmolL达到最高,在4μmolL和8μmolL时,Hsp70的表达水平与对照比较差异有显著性(P<0.05)。结论高温和BPDE均能诱导A549细胞Hsp27、Hsp70的表达。高温应激时,Hsp27和Hsp70的表达水平分别在39℃和42℃达到峰值。BPDE处理时,Hsp27在8μmolL时表达最高,但仍处于上升趋势,而Hsp70在4μmolL时表达最高。