扶正祛邪中药复方含药血清抗白血病细胞HL60及HL60/VCR细胞的体外实验研究

目的通过体外实验观察扶正祛邪中药复方含药血清对急性早幼粒白血病细胞HL60及长春新碱诱导的耐药细胞株HL60/VCR细胞的生长抑制率。方法采用四氮唑蓝(MTT)比色法,选择白血病敏感细胞株HL60细胞以及长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株HL60/VCR细胞为靶细胞,观察不同浓度(5%、10%、15%、20%、25%)扶正祛邪含药兔血清对其的生长抑制率。结果扶正祛邪含药兔血清对HL60/VCR及HL60均有明显的抑制作用,且其对HL60/VCR的细胞毒作用呈剂量依赖性。结论扶正祛邪复方中药具有一定的抑制白血病细胞及耐药细胞的作用。     

中药拮新康抗白血病细胞与免疫机能的研究

采用中药制剂拮新康对３４例白血病患者的白血病细胞进行体外细胞毒性试验,结果显示：长春新碱＋拮新康组较长春新碱组细胞毒性明显增加（Ｐ＜０．０１）,其中２０例为难治与复发白血病患者对长春新碱已耐药,但加拮新康后细胞毒性作用增强（Ｐ＜０．０１）;同时拮新康本身对白血病细胞也有一定的抗肿瘤作用。采用环磷酰胺抑制小鼠免疫机能作实验模型,探讨“拮新康”对小鼠细胞免疫机能的影响,发现其对免疫损伤动物模型及正常动物的ＩＦＮｒ与ＮＫ活性水平较对照组明显增高（Ｐ＜０．０１）。提示“拮新康”有抗白血病细胞和提高细胞免疫机能的作用。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对卵巢癌SKOV3细胞的化疗增敏作用

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDACIs）辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）联合长春新碱（VCR）对卵巢癌SKOV3细胞的生物学作用,并阐明其作用机制。方法：选择人卵巢癌SKOV3细胞,分为对照组、SAHA组、VCR组和SAHA+VCR组。CCK-8法检测各组SKOV3细胞生存率,流式细胞术（FCM）检测各组细胞凋亡率、自噬率和细胞周期分布情况。结果：CCK-8检测,与对照组比较,SAHA组和VCR组SKOV3细胞生存率明显降低;与SAHA或VCR组比较,SAHA+VCR组SKOV3细胞生存率明显降低（P<0.05）。FCM检测,与对照组比较,SAHA和VCR组SKOV3细胞凋亡率、自噬率及G₂/M期细胞百分率升高（P<0.05）;与SAHA或VCR组比较,SAHA+VCR组SKOV3细胞凋亡率、自噬率及G₂/M期百分率升高（P<0.05）。结论：SAHA可增强卵巢癌SKOV3细胞对VCR的敏感性,能够诱导SKOV3细胞凋亡与自噬,并促进G₂/M期阻滞;SAHA和化疗药物联合应用可能是治疗卵巢癌的新策略。     

长春新碱联合小剂量环磷酰胺治疗系统性红斑狼疮的安全性及对BAFF的影响

目的研究长春新碱（VCR）联合小剂量环磷酰胺（CTX）治疗系统性红斑狼疮（SLE）的安全性和对B细胞活化因子（BAFF）mRNA表达水平的影响。方法进行12周随机、对照研究,将纳入的SLE患者分为大剂量CTX组、VCR联合小剂量CTX、VCR联合大剂量三组,观察用药期间发生的不良事件,实时荧光定量RT-PCR检测BAFF mRNA表达水平。结果⑴VCR联合小剂量CTX组不良事件发生率与大剂量CTX组、VCR联合大剂量CTX组差异无统计学意义;⑵在基线时、12周时,VCR联合小剂量CTX组BAFF mRNA表达水平与大剂量CTX组、VCR联合大剂量CTX比较差异无统计学意义;⑶三组治疗前后BAFF mRNA表达水平明显下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 VCR联合小剂量CTX治疗SLE疗效确切,副作用无明显增加。     

奥曲肽联合长春新碱对胃癌细胞的抑制作用

目的：探讨生长抑素类似物-奥曲肽（OCT）联合细胞毒化疗药物长春新碱（VCR）对胃癌细胞系SGC一7901的抑制作用和机制。方法：用M1Tr比色法和免疫组化法分析OCT、VCR和OCT联合VCR对胃癌细胞生长、细胞凋亡调节基因p53表达的影响。结果：当OCT为1×10^-5g／L时,对胃癌细胞的抑制作用最明显;OCT联合VCR对胃癌细胞的抑制高于VCR组（P〈0．05）;OCT上调p53的表达,也可以协同VCR上调p53的表达vs对照组,P〈0．05）。结论：OCT可以通过上调p53的表达诱导胃癌细胞凋亡,联合应用可以增强VCR对胃癌细胞的抑制作用。     

塞来昔布增强口腔癌化疗敏感性与阻滞周期进程的相关性

目的探讨塞来昔布增强口腔癌细胞化疗敏感性与其阻滞细胞周期进程及调节P-gp之间的相关性。方法塞来昔布10、
20、40、80 μmol/L和/或长春新碱0.375、0.75、1.5、3 μmol/L处理KB/VCR细胞后,分别采用MTT法检测KB/VCR细胞生长抑制
率;流式细胞术检测细胞周期分布情况;Western blot检测周期相关蛋白Cyclin D1、p21WAF1/CIP1及P-gp的蛋白表达。结果塞来昔
布浓度较低时（<20 μmol/L）对KB/VCR生长增殖无明显影响,但小剂量的塞来昔布10 μmol/L可显著增强VCR对KB/VCR细
胞的毒性作用,并呈时间依赖性。塞来昔布与长春新碱联合作用于KB/VCR细胞24、48、72 h后,其生长抑制率分别为（37.53±
2.05）%、（46.67±3.17）%及（54.02±1.53）%,显著高于塞来昔布和长春新碱单独用药组（P均<0.01）。塞来昔布与VCR联合应用
能改变细胞周期分布,与VCR组相比,联合用药组G0/G1期细胞数量增加（56.08±0.46）%,S期和G2/M期细胞数目降低［S期：
（22.83±0.20）%;G2/M期：（21.09±0.66）%］。此外,与VCR组细胞相比,联合用药能显著降低Cyclin D1的表达,增强p21WAF1/CIP1
的表达,并且Cyclin D1蛋白水平的降低及p21WAF1/CIP1蛋白水平的上升伴随着P-gp蛋白的下调。结论塞来昔布下调节P-gp而增
强KB/VCR细胞对化疗药物的敏感性可能与Cyclin D1和p21WAF1/CIP1蛋白变化引起的细胞周期阻滞有关。
     

神经生长因子对小鼠颈上神经节和大鼠腓神经损伤后修复的影响

目的 应用形态学方法观察研究神经生长因子（NGF）对长春新碱（VCR）损伤的小鼠颈上神经节和钳夹损伤的大鼠腓神经修复再生作用。方法 颈上神经节：出生2d的昆明种小鼠随机分为实验组、对照组和空白对照组。实验组皮下注射VCR（0.2mmol/L～10ul/g体重）和NGF（2、5、10ug/g体重）,对照组仅注射VCR,每天1次,连续4d。光镜下测量颈上神经节横径并且观察神经节细胞形态变化。周围神经：将钳夹损伤腓神经的SD大鼠随机分为实验组和对照组,并从损伤后第1天在近损伤处分别肌注NGF（2、4、8ug/kg体重）和生理盐水,每天1次,连续12d。取腓神经和趾长伸肌,光镜观察,并计数损伤处远端和近端神经纤维数量。结果 VCR可损伤颈上神经节,神经节横径缩小,节细胞凋亡解体;NGF则可改善VCR的损害作用,神经节横径增大61%～95%,节细胞数明显增多59%～70%,细胞凋亡现象显著减轻,改善程度与NGF剂量相关。NGF对排神经再生和趾长伸肌形态变化也有明显改善作用,尤以大剂量NGF的作用更显著。结论 NGF对长春新碱损伤的小鼠颈上神经节和经钳夹损伤的大鼠腓神经有明显的促修复作用。     

千佛菌对荷S180肉瘤小鼠MФ吞噬功能和IL1影响的实验研究

目的探讨中药千佛菌对荷S180肉瘤小鼠MФ吞噬功能和IL1的影响。方法将BALB／c小鼠随机分为正常对照、模型对照、千佛菌小剂量、千佛菌大剂量四组。除正常对照组外，其余三组皮下接种S180瘤细胞悬液，制戍小鼠荷瘤模型。然后千佛菌小剂量、大剂量组分别用一定浓度的千佛菌溶液灌胃1ml，正常对照、模型对照组给予相同剂量的生理盐水，1次／d，共14d。观察各组MФ、IL-1。含量或活性，分别采用吞噬中性红比色法、MTT比色法进行测定。结果荷瘤小鼠模型组与正常组比较，MФ吞噬功能、IL-1含量均显著降低（P〈0．01），用药组与荷瘤小鼠相比，腹腔MФ吞噬功能、IL—1含量均增高，其中大剂量用药组显著升高（P〈0．01）。结论千佛菌对荷瘤小鼠MФ吞噬功能，IL-1产生有增强作用。     

槲皮素抗小鼠P388白血病的作用

目的：研究槲皮素抗小鼠P388白血病的作用。方法：采用DBA／2小鼠腹腔注射P388细胞的方法建立白血病小鼠模型，80只小鼠随机分为空白对照组、溶剂对照组、高剂量槲皮素组、低剂量槲皮素组，每组20只。于第7天末次给药后每组小鼠随机抽取10只处死，收集腹水分别计数，观察腹水细胞荧光形态变化，分析细胞周期及细胞凋亡率，观察骨髓涂片及心、肝、脾、肾的组织病理学改变。观察记录其它小鼠一般情况及生存期。结果：给予槲皮素的两组小鼠平均生存期较两对照组显著延长（P〈0．05），且高剂量组小鼠平均生存期较低剂量组显著延长（P〈0．05）。在第7天处死小鼠后，高剂量组小鼠无肉眼可见腹水。低剂量组小鼠腹水细胞的密度显著减小，G0-G1期细胞比例减少，S期细胞比例增加，细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。各组小鼠骨髓涂片及心、肝、脾、肾组织病理切片未见明显异常。结论：槲皮素对P388白血病小鼠有延长生存期及抑制腹水细胞增殖和诱导腹水细胞凋亡的作用。     

肠胃清对人大肠癌细胞HCT8／V皮下移植瘤长春新碱耐药的逆转作用

目的：观察中药复方肠胃清口服液逆转大肠癌长春新碱耐药的作用,初步探讨其逆转耐药的作用机制。方法：建立人大肠癌耐长春新碱（VCR）细胞株HCT8／V裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为正常对照组、VCR组、肠胃清组、肠胃清高剂量＋VCR组、肠胃清低剂量＋VCR组。治疗结束后计算瘤体抑制率;高效液相色谱法检测瘤内VCR药物浓度;流式细胞技术检测瘤内细胞周期和凋亡改变。结果：肠胃清高低剂量联合VCR的瘤体抑制率为47．47％、69．62％,明显高于单用肠胃清或VCR组;对照组VCR的含量为0．1745μg／g瘤重,而肠胃清高剂量联合VCR组的浓度为12．2236μg／g瘤重,是对照组的70．05倍;与对照组比较,药物干预后,G1期细胞明显增加,S期细胞明显低于对照组,细胞凋亡率明显增加,以肠胃清联合VCR组作用最强。结论：肠胃清逆转大肠癌移植瘤对VCR的耐药与通过增加瘤体内药物浓度、诱导细晌凋亡有关。     

裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系的建立及其生物学特性研究

目的:建立裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系并研究其生物学特性.方法:采用逐步递增长春新碱(VCR)剂量的方法培养高成瘤性人白血病细胞系K562-n,采用细胞培养技术、透射电镜观察、流式细胞术、RT-PCR、免疫组化、染色体核型分析及体内接种等方法研究其生物学特性.结果:建立1株裸鼠高成瘤性人白血病多药耐药细胞系K562-n/VCR.与K562-n细胞比较,K562-n/VCR细胞对VCR耐药为其297.38倍,对蒽环类、鬼臼类等多种化疗药物具有交叉耐药性,bcr-abl融合基因仍为阳性,裸鼠体内成瘤性不变,但成瘤潜伏期缩短,成瘤体积明显增大.结论:裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系K562-n/VCR具有其独特的生物学特性.     

EGCG对裸鼠移植瘤中人口腔表皮样癌耐药细胞凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)增敏长春新碱(VCR)对人口腔表皮样癌多药耐药细胞株KBV200裸鼠移植瘤的抑瘤作用及与瘤细胞凋亡的关系.方法:采用KBV200接种于裸鼠皮下,建立耐药肿瘤模型;2周后,EGCG和VCR腹腔注射,联合处理2周;免疫组化法检测瘤组织Bcl-2,Bax的表达;TUNEL法检测细胞凋亡; 流式细胞仪进行细胞周期分析;透射电镜观察瘤组织细胞超微结构的改变.结果:EGCG联合VCR处理治疗后瘤重、肿瘤相对体积明显低于对照组和VCR组(P<0.05),且与EGCG的剂量呈正相关;低、中、高EGCG联合 VCR组Bcl-2的表达明显低于VCR组(P<0.01);低、中、高EGCG联合 VCR组Bax蛋白的表达明显高于VCR组(P<0.01);TUNEL法低、中、高EGCG联合 VCR组凋亡指数明显高于VCR组,与EGCG呈剂量依赖关系; 流式细胞技术显示低、中、高EGCG联合 VCR组G2/M期细胞高于VCR组(P<0.01); 电镜下三个联合用药组瘤组织中可见较多典型的细胞凋亡的形态学表现.结论:EGCG在体内具有增敏VCR对KBV200移植瘤的杀伤作用.机制可能是通过下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达,从而促进肿瘤细胞的凋亡.     

低氧条件下小分子化合物VCR组合诱导大鼠成纤维细胞重编程神经前体细胞的实验研究

  目的  探讨大鼠胚胎成纤维细胞（rat embryoic fibroblasts, REFs）在低氧条件下（5%O₂）重编程为化学诱导大鼠神经前体细胞（chemically induced rat neural progenitor cells, ciRNPCs）的方法体系。  方法   分两阶段将REFs重编程为ciRNPCs,第一阶段是化学诱导产生中间态细胞,REFs在低氧条件下采用含有小分子化合物的组合VCR（valproic acid、CHIR99021和 RepSox）和10000 U/mL白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）的KSR培养基培养15 d,观察到致密细胞集落即中间态细胞形成;第二阶段是特异性诱导ciRNPCs,用胰酶消化中间态细胞,接种至低黏附板,在常氧条件下可形成ciRNPCs神经球。CM-DiI标记后,定向移植至大鼠黑质-纹状体,通过免疫荧光检测ciRNPCs在宿主脑内存活、迁移及分化状况。  结果   低氧诱导5～10 d时已观察到明显细胞聚集趋势,15 d时已形成聚集紧密的克隆,1×105个细胞中大约产生30个克隆,同时大部分细胞克隆碱性磷酸酶染色呈阳性,消化重铺后2 d即可观察到有神经胚球形成,并可表达神经前体细胞（neural progenitor cells, NPCs）表面特征性抗原（Nestin、Sox2和Pax6）,而且具有向神经胶质细胞和神经元分化的能力,分别表达GFAP和Tuj1特异性标志物。移植8周后,大鼠脑内可分化为GFAP+和Tuj1+细胞。  结论  小分子化合物VCR组合在低氧条件下可直接诱导REFs重编程为ciRNPCs,并具备体内与体外诱导分化为神经胶质细胞和神经元的潜能,为ciRNPCs移植治疗神经损伤疾病奠定基础。     

STI571 combined with vincristine greatly suppressed the tumor formation of multidrug-resistant K562 cells in a human-nude mice xenograft model

Multidrug resistance (MDR), often associated with decreased intracellular drug accumulation in patient's tumor cells resulting from enhanced drug efflux,1 is a major obstacle to successful chemo- therapy in leukemia. It is related to the overexpression of a membrane protein, P- glycoprotein (P-170), thereby reducing drug cytotoxicity. For example, Philadelphia-chromo- some-positive (Ph+) chronic myelogenous leukemia (CML) is often resistant to chemotherapy in advanced phases because of the…     

P73基因在长春新碱诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达

目的 :探讨长春新碱诱导U937细胞凋亡过程中P73mRNA的表达变化 ,以进一步了解P73基因在U937细胞凋亡中的作用。方法 :用长春新碱诱导U937细胞凋亡 ,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量等方法 ;采用半定量逆转录PCR(RT -PCR)检测P73mRNA的表达变化。结果 :长春新碱可诱导U937细胞凋亡。 2 0 μg/ml的长春新碱使用于U937细胞 1 8h ,光镜下见细胞明显聚集、体积缩小 ,荧光染色见染色质明显浓缩、核碎裂等现象 ,而对照组未出现上述现象 ;DNA片段电泳见清晰的梯形条带 ;流式细胞仪检测 :长春新碱作用于U937细胞 1 8h ,2 4h ,细胞的凋亡率分别为 1 0 .54 %、35 .1 5 % ,而对照组的凋亡率仅为 0 .93 % ;半定量RT -PCR结果 :在U937细胞凋亡前后 ,P73mRNA的表达差异无显著性。结论 :在U937细胞凋亡过程中P73的mRNA表达差异无统计学意义     

Fas诱导MML-1凋亡时活化caspase-3表达与细胞周期的关系

目的研究Fas诱导的B淋巴细胞瘤细胞株MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3表达与细胞周期的关系。方法抗Fas抗体孵育MML-1不同时间以诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率并验证MML-1对Fas诱导凋亡的敏感性。采用PI—Triton X和FITC—active caspase-3双染色分析经Fas诱导凋亡的MML—1内活化caspase-3的表达。以细胞周期蛋白cyclin A、B1、E标记Fas诱导凋亡的处于不同增殖周期MML-1（S、G2／M和G1期细胞）,流式细胞术检测细胞内活化caspase-3的表达。结果Fas诱导6h后,MML-1凋亡率达到56％。Fas诱导4h后,活化caspase-3在G1期细胞内表达显著升高,仅有少量S期和G,／M期细胞表达活化caspase-3。Cyclin A、B1阴性而cyclinE阳性MML-1表达活化caspase-3。结论Fas诱导MML-1凋亡过程中,细胞内活化caspase-3的表达与细胞周期有关。G1后期和S早期的MML-1最先表达活化caspase-3,且对Fas诱导凋亡的敏感性最高。     

Reversal of P-glycoprotein-mediated multidrug resistance in SGC7901/VCR cells by PPARγ activation by troglitazone

Over-expression of P-glycoprotein(P-gp),an ATP-dependent drug efflux pump,represents one of the major mechanisms that contribute to multidrug resistance(MDR) in cancer cells.This study examined the effects of troglitazone,a ligand of peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARγ),on P-gp-mediated MDR in SGC7901/VCR cells(a vincristine-resistant human gastric cancer cell line).The expression of P-gp was detected by RT-PCR and Western blotting,respectively.The SGC7901/VCR cells were treated with 0.1 ...     

Upregulation of drug sensitivity of multidrug-resistant SGC79 01/VCR human gastric cancer cells by bax gene transduction

Objective To investigate the role of bax in a vincristine （VCR）-induced multidrug-resi stant （MDR） human gastric cancer cell line, SGC7901/VCR, in which the Bax prot ein expression level was significantly lower compared with that in parent cells .Methods A bax eukaryotic expression vector was constructed and transfected into SGC7901/ VCR cells by lipofectamine, and resistant clones were selected by G418. Western blotting detected Bax expression in transfectants. Tetrazolium blue (MTT) assa y evaluated the differences in drug sensitivity and cell cycle changes of transf ectants were analyzed using flowcytometry (FCM). Results The bax eukaryotic expression vector was constructed and transfected into SGC790 1/VCR cells. Through G418 selection, resistant clones were obtained. Western b lotting demonstrated that the expression of Bax protein was markedly increased i n bax transduced cells. These cells were more sensitive to adriamycin (ADR) and VCR than mock vector transducted cells. Moreover, bax transfection enhanced AD R-induced apoptosis and VCR-induced G(2)/M phase arrest of SGC7901/VCR cells. Conclusion Bax was involved in the MDR of SGC7901/VCR cells.