蓝氏贾第鞭毛虫病治疗的研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫病呈全球性分布,在发达国家和发展中国家均有感染,威胁着人类的健康和生命。目前治疗蓝氏贾第鞭毛虫病的药物主要是硝基咪唑类,如甲硝唑,随着长时间的临床应用,耐药虫株不断出现,但是新药的研究周期很长。近年来,如何更好地开发现有药物的新药理作用和研发新药,成为研究蓝氏贾第鞭毛虫病治疗的热点之一。本文就这些药物及其新近研究进展作一综述。     

实验感染C57 BL/6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测

建立蓝氏贾第鞭毛虫感染动物模型 ,用PCR技术对感染动物粪内该虫tim基因进行检测 ,探讨蓝氏贾第鞭毛虫基因检测方法。用人源蓝氏贾第鞭毛虫河北株 (CD)和江苏株 (XZ)的包囊分别接种两组C5 7BL 6N小鼠 ,于接种后第 6天、1 0天和 1 4天收集粪便标本 ,采用酚 氯仿法提取总DNA。将提取液分别按 1 0 0 、 1 0 - 1 、 1 0 - 2 和 1 0 - 3稀释并纯化。根据该虫磷酸丙糖异构酶 (Triosephosphateisomerase,tim)基因合成 1对特异性引物 ,采用PCR技术分别扩增各个稀释度的样本。结果贾第虫阳性样本均被扩增出相应基因的 1条 683bp长的片段 ,纯化后的各个稀释度样本的PCR检测阳性率随稀释倍数的增加而增高。本研究结果为贾第虫感染基因检测方法的进一步研究提供了实验资料。     

国内蓝氏贾第鞭毛虫研究

蓝氏贾第虫鞭毛虫(GiardialambliaStile,1915,亦称G.intestinalis或G.duodenalis,简称贾第虫)是一种机会性致病肠道原虫,一种全球性的引起人和动物腹泻的常见病原体。以往国内对本虫的危害性及其在生物进化上的地位缺乏足够的重视,实验研究起步较晚,在七十年代以前几处于?..     

贾第鞭毛虫和隐孢子虫的流行病学研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫在我国的流行状况还不是很清楚,本文简单介绍了贾第鞭毛虫和隐孢子虫的特性及分类,综述了国外贾第鞭毛虫和隐孢子虫的流行状况及其分子流行病学方面的内容。     

人源性蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因的克隆及序列分析

目的克隆蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法根据蓝氏贾第鞭毛虫Elp3已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增获得Elp3的核苷酸序列,连接到pET28a载体并测定序列。应用生物信息学方法分析Elp3基因的序列同源性与结构特征。结果扩增片段长度为1767bp,测序结果与蓝氏贾第鞭毛虫WB株（GL50830）同源性100%。可构建生物进化树,进行同源结构建模发现,71-362aa具有一个保守的S-腺甙基蛋氨酸区域,458-584aa具有组蛋白乙酰基转移酶区域。结论成功克隆了蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,生物信息学分析发现,其在进化上与其它物种不属同一起源,具有SAM和HAT的结构和功能,这些发现为进一步研究其生物学功能提供了依据和线索。     

以30日龄长爪沙鼠为介体建立贾第虫青岛株纯培养

以３０日龄长爪沙鼠为介体建立贾第虫青岛株纯培养祝虹，郭增柱，宫玉香，吴娟，王正仪（北京热带医学研究所，北京１０００５０）卢思奇等（１９９０）以１０日龄长爪沙鼠（Ｍｅｒｉｏｎｅｓｕｎｇｕｉｃｕｌａｔｕｓ）乳鼠为分离蓝氏贾第鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａｌａｍｂ...     

蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶（tim）基因序列 …

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第     

蓝氏贾第鞭毛虫PPDK特异性锤头状核酶-GCV重组载体的构建及鉴定

丙酮酸磷酸双激酶（Pyruvatephos phate dikinase,PPDK）可能是蓝氏贾第鞭毛虫能量代谢中具有催化作用的关键酶桩一。为了进一步探讨该酶在贾第虫能量代谢中的作用,本文采用RNA draw软件分析贾第虫编码PPDK的基因序列并设计特异性反义锤头状核酶（Hammerheade ribozyme）,克隆该核酶序列并与犬贾第虫病毒（GCV）连接,构建了载有特异性锤头状核酶的贾第虫病毒重组载体pGCV634/H5/2174。该载体经线性化处理后进行体外转录,转录产物以电击方式转染对数生长期的贾第虫滋养体。提取转染后24h虫体总RNA,并以其为模板进行RT-PCR验证转染效果和对靶mRNA的切割效果。结果初步证实了该载体对虫体细胞内编码PPDK的mRNA具有切割作用。     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应 (PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫 (Giardialamblia)的磷酸丙糖异构酶 (triosephosphateisomerase ,缩写为tim)基因进行特异性扩增 ,结果扩增出 1条 6 83bp的DNA片段。此方法的特异性可高达10 0 % ,而其它DNA样本 ,如日本血吸虫 (Schistosomajaponicum)、刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)、微小隐孢子虫 (Cryptosporidiumparvum)、溶组织内阿米巴 (Entamoebahistolytica)、旋毛虫 (Trichinellaspiralis)和阴道毛滴虫 (Trichomonasvaginalis) ,以及人体血细胞等均未出现扩增反应。本法的敏感性也很高 ,可检测到0 4pg贾第虫包囊的DNA。 13株来自不同地理位置和 或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生 1条长为 6 83bp的目的片段。上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效     

蓝氏贾第鞭毛虫基因分型—磷酸丙糖异构酶(tim)基因序列分析

蓝氏贾第鞭毛虫（简称贾第虫）细胞内的磷酸丙糖异构酶（ｔｉｍ）基因编码磷酸丙糖异构酶。对扩增后的ｔｉｍ基因做序列分析，可对来源于不同地理位置和／或不同宿主的贾第虫株进行基因分型，并以此确定它们之间的遗传学关系。为了确定中国虫株的基因型，我们对分离自北京（Ｃ１），四川（Ｃ２）和福建（Ｃ３）３株人源贾第虫ｔｉｍ基因序列进行了分析。结果表明，Ｃ１和Ｃ２具有相同的遗传学特性，可划归为目前公认的分型系统中的第３型（ＧＳ）。Ｃ３含有两种不同的遗传学类型，即第１型（ＷＢ）和第３型（ＧＳ），表明Ｃ３可能为两种不同遗传学类型的混合株。本研究结果进一步表明，用ｔｉｍ基因扩增和序列分析方法，可探寻世界范围内贾第虫株之间的遗传学关系。     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应(PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,缩写为tim)基因进行特异性扩增,结果扩增出1条683bp的DNA片段.此方法的特异性可高达100%,而其它DNA样本,如日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、旋毛虫(Trichinella spiralis)和阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis),以及人体血细胞等均未出现扩增反应.本法的敏感性也很高,可检测到0.4pg贾第虫包囊的DNA.13株来自不同地理位置和/或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生1条长为683bp的目的片段.上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效.     

《寄生虫与医学昆虫学报》第11卷总目次

第 1期著　述实验感染C5 7BL 6N小鼠粪内蓝氏贾第鞭毛虫tim基因检测………………………………………罗晓冰　陈小宁　卢思奇　王凤云 ( 1 )………………………………………………………………人源蓝氏贾第虫病毒GLV1 5 1 8 2 32 2基因的表达及表达产物抗血清的制备…………………………田宗成　张西臣　李建华　尹继刚　杨　举 ( 5 )……………………………………………………复方萘酚喹治疗间日疟的疗效观察单成启　王京燕　丁德本　邬伯安　时云林 ( 8)…………………雏鸡感染Eimeriatenella体内NOS活性水平的动态变化……………………     

用PCR扩增tim基因检测蓝氏贾第鞭毛虫

采用聚合酶链反应(PCR)对蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)的磷酸丙糖异构酶(triose phosphate isomerase,缩写为tim)基因进行特异性扩增,结果扩增出1条683bp的DNA片段.此方法的特异性可高达100%,而其它DNA样本,如日本血吸虫(Schistosoma japonicum)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、旋毛虫(Trichinella spiralis)和阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis),以及人体血细胞等均未出现扩增反应.本法的敏感性也很高,可检测到0.4pg贾第虫包囊的DNA.13株来自不同地理位置和/或宿主的贾第虫DNA样本在PCR中均各产生1条长为683bp的目的片段.上述结果表明本实验建立的检测贾第虫的PCR方法有效.     

梨形鞭毛虫滋养体的单克隆抗体产生及其特性(文摘)

梨形鞭毛虫是一种寄生于鼠小肠中的原生动物寄生虫,梨形鞭毛虫感染鼠可构成人贾第氏虫病的动物模型以及探讨鞭毛虫滋养体抗原的肠免疫应答的实验途径。鼠单克隆抗体(McAb)是由梨形鞭毛虫滋养体表面抗原来生产的,经非肠道免疫后的BALB/c鼠脾淋巴细胞与P3/NS1/1-Ag4-1骨髓瘤细胞融合而得到B-细胞杂交瘤。梨形鞭毛虫     

实验大鼠,实验小鼠肠道鞭毛虫种类和检索

我们对普通级SD大鼠和KM小鼠肠道内鞭毛虫分别作了观察,从大鼠检出10种肠道鞭毛虫:鼠唇鞭毛虫(Chilomastixbettencourti)、人肠滴虫(Enteromonashominis)、西蒙氏贾第虫(Giardiasimoni)、鼠六鞭虫(Hexamitamuris)、似单尾滴虫(Monocercomonoidiessp)、人五毛滴虫(Pentatrichomonashominis)、曲滴虫(Retortamonassp)、田鼠四毛滴虫(Tetratrichomonasmicroti)、微小三毛滴虫(Tritrichomonasminuta)和鼠三毛滴虫(Tritrichomonasmuris)。从小鼠检出8种肠道鞭毛虫:鼠唇鞭毛虫(Chilomastixbettencourti)、鼠贾第虫(Giardiamuris)、鼠六鞭毛虫(Hexamitamuris)、鼠八鞭毛虫(Octomituspulcher)、人五毛滴虫(Pentatrichomonashominis)、田鼠四毛滴虫(Tetratrichomonasmicroti)、微小三毛滴虫(Tritrichomonasminuta)、鼠三毛滴虫(Tritrichomonasmuris)。根据大鼠和小鼠肠道鞭毛虫的形态特征分别列出了检索表。     

郑州市某医院儿童肠道寄生虫感染情况调查

目的了解郑州地区儿童肠道寄生虫感染情况,为制定肠道寄生虫病防治措施提供参考依据。方法采用卢戈氏碘液染色法、饱和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法对儿童新鲜粪便样品进行检查。结果共调查1996份粪便样品,肠道寄生虫总感染率为1.5%,发现蓝氏贾第鞭毛虫、环孢子虫、隐孢子虫、阿米巴原虫和粪类圆线虫5种肠道寄生虫,其感染率分别为0.6%、0.5%、0.1%、0.3%和0.1%。不同性别、不同季节儿童肠道寄生虫感染情况差异无统计学意义（P〉0.05）。蓝氏贾第鞭毛虫和阿米巴原虫主要发现于春季和冬季,隐孢子虫和环孢子虫仅发现于夏季和秋季。结论郑州地区儿童土源性肠道寄生虫感染率显著下降,以机会性原虫感染为主,应进一步加强健康卫生教育。     

通过基因扩增产物的限制性内切酶分析划分肠道蓝氏贾？…

人们已经使用聚合酶链反应来扩增编码不同的变异性表面蛋白的基因片断。９个瑞士蓝氏贾第虫无菌虫株被用于基因分析。根据产量、大小和限制性片断长度的多态性分析鉴定３个基因型。其中有５个蓝氏贾第虫株（０１，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３－１Ａ１和Ｃ１）被分类属于基因组Ⅰ。一个从人类获得的虫株（Ｈ２－１７Ａ）被分类属于基因组Ⅱ，它产生了一个特殊的ＶＳＰ１２６７的ＰＣＲ产物。这个虫株也产生了１．８ｋｇ ｔｓｐ１１和０．５２ｋ     

DIFFERENTIATION OF MAJOR GENOTYPES OF GIARDIA LAMBLIA(G.INTESTINALIS) BY RESTRICTION ANALYSIS OF GENE AMPLIFICATION PRODUCTS

人们已经使用聚合酶链反应来扩增编码不同变异性表面蛋白的基因片断。９个瑞士蓝氏贾第虫无菌虫株被用于基因分析。根据产量、大小和限制性片断长度的多态性分析鉴定３个基因型。其中有５个蓝氏贾第虫株（０１，Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３－１Ａ１和Ｃ１）被分类属于基因组Ⅰ。一个从人类获得的虫株（Ｈ２－１７Ａ）被分类属于基因组Ⅱ，它产生了一个特殊的ＶＳＰ１２６７的ＰＣＲ产物。这个虫株也产生了１．８ｋｂｔｓｐ１１和０．５２ｋｂ类似ｔｓａ４１７／ｔｓｐ１１的ＰＣＲ产物，这个产物具有基因组Ⅱ型虫株的限制性片断长度的多态性。３个虫株（Ｏ２－４Ａ１，Ｏ３和Ｈ３－１５Ｋ２）代表了一个新的基因型，它和基因组Ⅰ和基因组Ⅱ密切相关。这３个虫株显示了在ｔｓｐ１１ＰＣＲ产物中完全相同的限制性片断长度的多态性，同时未能产生１个ＶＳＰ１２６７ＰＣＲ产物。这个结果表明能用这种方法划分肠道蓝氏贾第虫的不同基因型。     

实时荧光PCR检测蓝氏贾第鞭毛虫和隐孢子虫方法的建立

目的建立贾第鞭毛虫和隐孢子虫的基因检测方法。方法根据GenBank中贾第鞭毛虫和隐孢子虫相对保守序列,设计引物及其相应的Taqman探针。通过对引物和探针浓度、Taq酶以及反应条件等优化筛选后,建立检测贾第鞭毛虫和隐孢子虫的荧光PCR方法。结果贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测结果为阳性,对其它DNA样本如日本血吸虫、刚地弓形虫、溶组织内阿米巴、旋毛虫和阴道毛滴虫的检测均为阴性。本法的敏感性高,可检测到10～102copies/μl的DNA浓度。结论建立的基因检测方法,对贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测具有高度的特异性和敏感性,可用于饮用水和临床样本等的快速检测。     

人源蓝氏贾第虫病毒GLV1518-2322基因的表达及表达产物抗血清的制备

根据中国人源蓝氏贾第虫病毒 (GLV)全基因组测序结果 ,将其全基因组cDNA上编码贾第虫病毒部分衣壳蛋白的GLV1 5 1 8 2 3 2 2基因克隆到原核表达载体pET 2 8c ( +)上 ,构建了原核表达重组质粒pET 2 8c( +) GLV1 5 1 8 2 3 2 2。SDS PAGE分析表明 ,经IPTG诱导 ,3 2kDa蛋白基因在大肠杆菌BL2 1 (DE3 )pLysS中得到高效表达。以纯化的表达产物为抗原 ,免疫BalB c小鼠 ,同时用病毒粒子免疫BalB c小鼠 ,制备了中国人源蓝氏贾第虫病毒GLV1 5 1 8 2 3 2 2蛋白特异性抗血清 ,ELISA方法测得的纯化蛋白最适抗原包被浓度为1 40 0和病毒粒子抗血清最佳工作浓度为 1 2 0 0。