CTX-M型超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的了解湖北地区产CTX—M型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的流行基因型，为有效预防和控制该类感染提供理论依据。方法临床分离的无重复产ESBLs的肺炎克雷伯菌70株，采用NCCLS表型筛选和确证试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX—M基因型，并采用PCR—RFLP检测blaCTX—M基因分型，质粒接合试验探讨产CTX—M型ESBLs菌株的传播机制。结果70株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，产CTX—M基N型的肺炎克雷伯菌有26株（37％），PCR-RFLP及DNA测序证实其均为CTX—M-1亚组，其中CTX—M-3型最常见，质粒接合试验证实CTX—M型ESBLs介导的耐药可以水平转移。结论湖北地区存在着CTX—M基因的流行，且产CTX—M型ESBLs菌株的传播机制以质粒介导的为主，可以水平传播，应加强湖北地区产CTX—M型ESBLs菌株的分子流行病学检测。     

运用变性高效液相色谱快速检测CTX-M超广谱β内酰胺酶基因型

目的应用变性高效液相色谱（DHPLC）技术对确认产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株CTX-M型质粒酶进行基因分型，探讨其灵敏度和特异度，以建立快速检测CTX-M型ESBLs的新方法。方法采用PCR技术从大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出CTX—M型质粒的编码序列，用DHPLC技术对扩增产物进行分析和DNA测序，确定其基因突变的类型，通过比对两者结果后确定其基因型。结果从34株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌临床分离株中扩增出35份CTX-M型ESBLs编码序列（其中1株同时扩增到2份CTX—M型编码序列）。11份与标准菌株CTX—M-3一致；4份与标准菌株CTX—M-9一致；测序确定分别为CTX—M-3型和CTX—M-9型；20份表现为3种形态各异的异常洗脱峰，测序结果表明20份样本与其标准株对比均存在着基因突变，DHPLC中异常峰一致的样本均为同-基因亚型。结论DH—PLC可用于ESBLs基因分型的检测，能快速检测CTX—M的基因型，具有准确性高、简便快捷、经济等特点，有很大的临床应用价值。     

武汉市儿童医院临床分离大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌中产质粒介导AmpC酶和ESBLs的研究

目的研究武汉市儿童医院临床分离高产质粒AmpC酶和超超广谱β内酰胺酶（SSBL）肺炎克雷伯菌与大肠埃希菌的分子流行病学特征。方法收集我院2005年8月-2006年8月住院患儿临床分离的头孢西丁中介或耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌161株。采用三维试验检测AmpC酶，表型确认试验检测ESBLs，质粒转化试验定位耐药基因；采用PCR技术扩增质粒AmpC与CTX—M基因；使用限制性片段长度多态性（RFLP）技术确定CTX—M基因簇的特征；利用基因测序确定AmpC酶及CTX—M的基因亚型。结果DHA-1型和ACT-1型为主要的质粒AmpC酶基因型，发现1种新的ACT型质粒AmpC酶，其与ACT-1的同源性仅为84％。CTX—M-14型和CTX-M-3型为主要的ESBLs基因型。最常见的大肠埃希菌SSBL基因组合为CTX-M-14＋DHA-1＋ACT-1型，肺炎克雷伯菌的为CTX—M-3＋DHA-1＋ACT-1。结论我院临床分离的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌中，产SSBL菌株所占比例显著高于单产质粒AmpC酶菌株；CTXM-14／CTX—M-3＋DHA-1＋ACT-1是大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中最常见的SSBL基因型。     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌的基因型和耐药性分析

目的研究我院住院患儿分离产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的基因型及其相关耐药性分析。方法收集2004年10月-2005年10月我院住院患儿呼吸道分离产ESBLs大肠埃希菌75株，肺炎克雷伯菌45株，PCR限制性片段长度多态性（RFLP）分析及PCR产物克隆测序等方法明确ESBLs基因型，并结合体外抗生素敏感试验研究基因分型与细菌对不同头孢菌素及氨曲南的敏感性的关系。结果上述120株细菌中112株（93．3％）产CTX—M型p内酰胺酶；未能扩增出SHV型、TEM型ESBL基因。CTX—M型基因亚型主要为CTX—M9簇中的CTX—M-14型（78、6％），其次为CTX—M-1簇中的CTX—M-3型（19．6％），仅有1．8％为CTX—M-8型；携带CTX-M-1簇的菌株对头孢他啶、头孢哌酮-舒巴坦、阿莫西林-克拉维酸、头孢吡肟及氨曲南的耐药率均明显高于CTX—M-9型。结论CTX—M基因型为武汉地区儿童分离大肠埃希菌以及肺炎克雷伯菌中最常见的ESBLs，CTX—M-14为最常见基因型，其次为CTX—M-3型；CTX—M-9簇及CTX-M-1簇对头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮-舒巴坦和氨曲南的水解能力差异明显。     

与ISEcp1—like插入序列相关的CTX—M型ESBLs基因传播机制研究

目的研究CTX—M—ESBLs在天津地区肺炎克雷伯菌中的传播与ISEcp1—like插入序列及1类整合子的关系。方法采用PCR-mapping、Southern印迹杂交及DNA序列分析等方法检测CTX-M-ESBLs基因，及其与ISEcp1—like插入序列和1类整合子的关系。结果46株产ESBLs肺炎克雷伯菌中44株（95．7％）携带CTX—M-1组和（或）CTX—M-9组基因，未发现CTX—M-2组基因。60％的CTX—M-1组β内酰胺酶基因和73．7％的CTX-M-9组β内酰胺酶基因上游存在ISEcp1—like插入序列。ISEcp1—like插入序列与CTX—M-3及CTX-M-14基因间隔区序列不同。46株中25株（54．3％）携带1类整合子基因，PCR—mapping及Southern印迹杂交未发现CTX—MB内酰胺酶基因在整合子上的证据。结论天津地区肺炎克雷伯菌临床株中存在CTX—M-ESBLs的流行，许多CTX—M—ESBLs基因上游存在ISEcp1—like插入序列。ISEcp1—like插入序列可能与CTX—M型超广谱酶基因在天津市肺炎克雷伯菌临床株中的播散有关。     

产超广谱β内酰胺酶49株细菌耐药基因调查

目的 了解49株产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）细菌的耐药基因。方法 采用纸片扩散法检测产ESBLs细菌，通过基因扩增、序列分析、脉冲场凝胶电泳技术研究ESBLs基因型以及产ESBLs细菌同源性。结果 产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌流行率自2000年的20％，增长至2003年的40％。49株产ESBLs细菌中，以CTX-M-14（n=33）亚型最常见，其他亚型包括CTX-M-3、CTX-M-9、CTX-M-12、CTX-M-15、CTX-M-24、SHV-5a，1株细菌同时产CTX—M-3、CTX—M-14两种CTX-M型ESBLs；4株表型确证试验阳性细菌未能分型。除2株大肠埃希菌、2株肺炎克雷伯菌有亲缘性外，其他菌株间无同源性。结论 产ESBLs细菌分离率逐年增高，以CTX—M型酶为主。PFGE试验证明非流行所致。     

对头孢吡肟敏感的疑似产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌属的分子生物学特征

目的 了解初筛试验疑似产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)但确证试验未能确认,而对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属中的ESBLs和质粒介导的AmpC酶.方法 纸片扩散法检测18株细菌对常用抗菌药物的敏感性;PCR及多重PCR法检测细菌中的ESBLs和质粒AmpC酶基因;质粒转移接合试验检测耐药质粒的可传递性;细菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR法检测供体大肠埃希菌和受体E.coli J53及其接合子的同源性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌进行同源性分析.结果 18株细菌均为2005年1月至12月期间上海华山医院临床分离的菌株,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌6株,产酸克雷伯菌1株,按常规方法对细菌进行重新鉴定和药敏试验.18株细菌经美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的ESBLs初筛试验结果均为ESBLs产生可疑菌株,但确证试验未能确认;所有菌株的头孢吡肟抑菌圈直径均在18 mm以上,显示敏感.PCR检测结果显示,11株大肠埃希菌中有9株产CIT型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为CMY-2型AmpC酶,未发现TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、SFO等广谱或ESBLs;6株肺炎克雷伯菌中有5株产DHA型质粒AmpC酶,DNA测序及序列比对结果证实为DHA-1型AmpC酶;5株产DHA-1型AmpC酶的肺炎克雷伯菌株中,4株同时伴有广谱或ESBLs:其中2株产SHV-11型广谱酶,另2株分别产CTX-M-14型ESBLs和SHV-62型ESBLs;1株产酸克雷伯菌亦单产DHA-1型AmpC酶;质粒转移接合试验结果表明,携带耐药基因的质粒可从供体菌转移至敏感细胞中;PFGE结果显示,6株肺炎克雷伯菌的谱型各不相同,而11株大肠埃希菌可分为5种谱型,其中B型包含7株细菌,这7株细菌均产生质粒介导的CMY-2型AmpC酶,并分离自外科病房,提示可能存在克隆菌株的流行传播.结论在确证试验未能确认的疑似产ESBLs中,对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌主要产生质粒介导的AmpC酶,但尚有少数菌株同时伴有产ESBLs.对同时产生ESBLs和AmpC酶的菌株,临床微生物实验室必须报告这些菌株对头孢吡肟耐药.     

运用多重PCR技术检测CTX-M型耐药基因的研究

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布。方法采用K-B琼脂扩散法,检测临床分离的85株大肠埃希菌和41株肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用双纸片增效试验检测产ES-BLs菌株,用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果检测菌株中,ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%。所有检测菌株对亚胺培南敏感。产ESBLs的菌株对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等的耐药率为100.0%;质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株。结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多。碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs最有效药物。     

全国10所教学医院产ESBLs和质粒AmpC酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的研究

目的研究全国10所教学医院临床分离的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中同时产ESBLs及质粒型AmpC酶菌株的比率及其基因型特点,比较不同地区间的差别。方法收集来自中国不同地区的10所教学医院2003年度产ESBLs的大肠埃希菌90株和肺炎克雷伯菌61株,用等电聚焦电泳测定β内酰胺酶的等电点;接合试验证实酶基因有无可转移性;采用多重聚合酶链反应(MPCR)及序列分析确定质粒AmpC酶的基因型。结果武汉、南京、济南等地产ESBLs大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌所占比率相近,均在50%左右;北京产ESBLs大肠埃希菌所占比率低于肺炎克雷伯菌;其他各城市产ESBLs大肠埃希菌所占比率均略高于肺炎克雷伯菌。在产ESBLs菌株中24.4%大肠埃希菌和19.4%肺炎克雷伯菌对头孢西丁耐药。除沈阳无对头孢西丁耐药菌株外,其他医院均存在对头孢西丁耐药株。产ESBLs菌株基因型主要为CTX—M型,其中以CTX-M-9组最为常见,其次为CTX-M-1组。在同时产ESBLs和AmpC的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,且均为CTX-M/ DHA-1型(多为CTX-M-9/DHA-1型)。3株同时产ESBLs和AmpC肺炎克雷伯菌的接合子PCR结果与其供体菌完全相同。结论参与本研究的各所教学医院产ESBLs菌株基因型主要为CTX-M-9组,在同时产ESBLs和AmpC酶的菌株中,肺炎克雷伯菌多于大肠埃希菌,多为CTX-M-9/DHA-1型,该酶可通过质粒传播。     

一种新CTX-M型超广谱β-内酰胺酶及其临床意义

目的 查明肺炎克雷伯菌的耐药情况及其超广谱β－内酰胺酶(ESBLs)的分型。方法 采用琼脂稀释法对1999年7－12月分离的80株肺炎克雷伯菌进行药敏试验，用美国临床实验室标准化委员会2000年制定的方法测ESBLs，并对所有ESBLs阳性菌株进行质粒接合试验、等电点（pI）测定，并对其中CK23株的ESBLs耐药基因做了序列分析。结果 28／80株（35％）的肺炎克雷伯菌产ESBLs。该28株中20株临床菌的耐药质粒接合成功。 等电聚焦电泳显示：结合子的粗提酶中13／20（65％）有pI为8．8的酶，10／20（50％）有pI为7．6的酶，9／20（45％）有pI为5．6的酶。13株有pI值为8．8的ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌对头孢噻肟的耐药明显高于头孢他啶，从中抽取CK23结合子进行耐药基因的PCR扩增和测序，证实为CTX－M型酶，与CTX－M－3比较，仅有3个氨基酸序列不同。结论 28／80株（35％）的肺炎克雷伯菌产ESBLs。13／20（65％）株肺炎克雷伯菌接合子产pI8．8的β－内酰胺酶。系CTX－M型的ESBLs，它极类似CTX－M－3。     

临床分离志贺菌中产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶基因型及耐药性分析

目的 了解北京地区临床分离志贺菌携带CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因型及耐药特征。 方法 收集2008-2011年本地区分离出的志贺菌83株,聚合酶链反应(PCR)检测CTX-M型ESBLs耐药基因,明确基因型,阳性产物序列在GenBank上进行比对确定基因亚型,并通过DNAman软件对核酸序列进行分析;对携带CTX-M型ESBLs耐药基因菌株按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定志贺菌对8种头孢类抗生素耐药情况。 结果 83株志贺菌中,13株携带CTX-M型ESBLs基因,阳性率为15.66%。对DNA序列进行比对、分析均为CTX-M-9型中的CTX-M-14亚型,未发现单核苷酸多态性(SNPs)位点。药敏结果显示,13株携带CTX-M型ESBLs基因菌株对头孢噻吩、头孢唑林、头孢噻肟等头孢类抗生素耐药,对头孢西丁、头孢他啶、头孢吡肟和头孢哌酮等头孢类抗生素均敏感,部分菌株对氨曲南耐药。 结论 本地区志贺菌中CTX-M型ESBLs以CTX-M-14亚型为主,基因结构稳定,携带CTX-M-14型ESBLs菌株呈多重耐药。     

广州地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的研究

目的 研究广州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子表型、流行病学和耐药基因环境特征.方法 收集2007-2008年广州地区9家医院临床分离产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌,通过PCR检测ESBLs分子表型;通过接合试验、质粒图谱、PCR分析CTX-M-15型ESBLs的基因环境,肠杆菌科基因间重复序列引物PCR(ERIC-PCR)分析产CTX-M-15型ESBLs菌株的分子同源性.结果 67.3%(243/361)的ESBLs产生株为CTX-M表型,其中CTX-M-1群和CTX-M-9群各占46.9%(114/243)和53.1%(129/243),未发现其他CTX-M亚群.CTX-M-14和CTXM-15是最常见的ESBLs基因型,其中CTX-M-14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别35.4%(64/181)和28.3%(51/180),CTX-M-15在这两种菌的检出率分别为21.5%(39/181)和26.1%(47/180),此外还检出对头孢他啶有水解活性的CTX-M-55、CTX-M-19和CTX-M-27.采用ERIC-PER分析CTX-M-15产生株的同源性,39株大肠埃希菌被分为28个基因型,47株肺炎克雷伯菌被分为30个基因型.67.6%(25/37)和32.4%(12/37)bla_(CTX-M-15)分别位于65 000 bp和90 000 bp的可接合质粒上,65 000 bp质粒除bla_(CTX-M-15)阳性外,未检到bla_(TEM-1)、qnrB、bla_(DHA-1)、bla_(OXA-1),aac(6′)-I6-cr等耐药基因.1株接合菌90 000 bp质粒还存在bla_(OXA-1)和bla_(TEM-1)耐药基因,其余7个90 000 bp质粒所携耐药基因同65 000 bp质粒.所有bla_(CTX-M-15)都位于ISEcp1-like插入序列下游,ISEep1-like末端与blaCTX-M-15间距均为48 bp.结论 广州地区ESBLs主要分子表型为CTX-M型主要流行为CTX-M-14型.以CTX-M-15为代表能水解头孢他啶的CTX-M型ESBLs在本地区检出增多值得关注.     

广州地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的研究

目的 研究广州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子表型、流行病学和耐药基因环境特征.方法 收集2007-2008年广州地区9家医院临床分离产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌,通过PCR检测ESBLs分子表型;通过接合试验、质粒图谱、PCR分析CTX-M-15型ESBLs的基因环境,肠杆菌科基因间重复序列引物PCR(ERIC-PCR)分析产CTX-M-15型ESBLs菌株的分子同源性.结果 67.3%(243/361)的ESBLs产生株为CTX-M表型,其中CTX-M-1群和CTX-M-9群各占46.9%(114/243)和53.1%(129/243),未发现其他CTX-M亚群.CTX-M-14和CTXM-15是最常见的ESBLs基因型,其中CTX-M-14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别35.4%(64/181)和28.3%(51/180),CTX-M-15在这两种菌的检出率分别为21.5%(39/181)和26.1%(47/180),此外还检出对头孢他啶有水解活性的CTX-M-55、CTX-M-19和CTX-M-27.采用ERIC-PER分析CTX-M-15产生株的同源性,39株大肠埃希菌被分为28个基因型,47株肺炎克雷伯菌被分为30个基因型.67.6%(25/37)和32.4%(12/37)bla相似文献   

Molecular characterization of extended-spectrum-β-lactamase-producing and plasmid-mediated AmpC β-lactamase-producing Escherichia coli isolated from stray dogs in South Korea

A total of 47 extended-spectrum-cephalosporin-resistant Escherichia coli strains isolated from stray dogs in 2006 and 2007 in the Republic of Korea were investigated using molecular methods. Extended-spectrum β-lactamase (ESBL) and AmpC β-lactamase phenotypes were identified in 12 and 23 E. coli isolates, respectively. All 12 ESBL-producing isolates carried bla(CTX-M) genes. The most common CTX-M types were CTX-M-14 (n = 5) and CTX-M-24 (n = 3). Isolates producing CTX-M-3, CTX-M-55, CTX-M-27, and CTX-M-65 were also identified. Twenty-one of 23 AmpC β-lactamase-producing isolates were found to carry bla(CMY-2) genes. TEM-1 was associated with CTX-M and CMY-2 β-lactamases in 4 and 15 isolates, respectively. In addition to bla(TEM-1), two isolates carried bla(DHA-1), and one of them cocarried bla(CMY-2). Both CTX-M and CMY-2 genes were located on large (40 to 170 kb) conjugative plasmids that contained the insertion sequence ISEcp1 upstream of the bla genes. Only in the case of CTX-M genes was there an IS903 sequence downstream of the gene. The spread of ESBLs and AmpC β-lactamases occurred via both horizontal gene transfer, accounting for much of the CTX-M gene dissemination, and clonal spread, accounting for CMY-2 gene dissemination. The horizontal dissemination of bla(CTX-M) and bla(CMY-2) genes was mediated by IncF and IncI1-Iγ plasmids, respectively. The clonal spread of bla(CMY-2) was driven mainly by E. coli strains of virulent phylogroup D lineage ST648. To our knowledge, this is the first report of bla(DHA-1) in E. coli strains isolated from companion animals. This study also represents the first report of CMY-2 β-lactamase-producing E. coli isolates from dogs in the Republic of Korea.     

多重PCR检测临床产ESBLs阴沟肠杆菌的耐药基因型研究

目的了解产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阴沟肠杆菌的耐药性、阳性率及基因分布特点。方法改良双纸片法检测80株临床分离阴沟肠杆菌对14种抗生素的耐药性及ESBLs表型,多重PCR检测鉴定ESBLs基因型,DNA测序确认DNA序列。结果 80株阴沟肠杆菌中,29株检出ESBLs,阳性率36.3%。80株阴沟肠杆菌对亚胺培南全部敏感,产ESBLs的阴沟肠杆菌对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等头孢菌素类抗生素的耐药率高达96.1%。29株细菌所产ESBLs中,12株为TEM型,6株为SHV型,24株为CTX-M型。其中CTX-M-1组9株,CTX-M-9组15株,未检出CTX-M-2组及CTX-M-8/CTX-M-25组。结论阴沟肠杆菌ESBLs检出率较高,耐药显著。产ESBLs阴沟肠杆菌的主要基因型为CTX-M型。     

革兰阴性菌产CTX-M-3型超广谱β内酰胺酶分子传播机制的研究

目的 :了解革兰阴性菌产CTX M 3型超广谱β内酰胺酶 (ESBLs)的分子传播机制 ,为临床防治提供依据。 方法 :收集革兰阴性菌医院感染无重复株共 378株 ,进行药敏试验和ESBLs产酶株的检测 ;肠杆菌科基因组内重复一致序列 聚合酶链反应 (ERIC PCR)进行克隆株的DNA分型 ;质粒转移实验、质粒谱及耐药质粒酶切指纹分析、等电聚焦电泳、PCR扩增TEM、CTX M基因及其克隆测序进行ESBLs基因分型和质粒定位。结果 :ESBLs的检出率为 16 .9% (6 4 / 378) ,其中CTX M 3型产酶株占 2 0 .3% (13/ 6 4 ) ;CTX M 3基因定位在 6 6kb和 75kb 2种接合性质粒上 ,6 6kb的质粒同时携带TEM 1基因 ;从不同来源的CTX M 3产酶株中可以分离到同种耐药质粒 ,染色体DNA同源性分析显示其为不同的克隆株。结论 :CTX M 3型ESBLs产酶株的传播机制以质粒介导为主 ,并可能存在局部携带CTX M 3基因耐药质粒的爆发     

浙江省台州地区不同来源的大肠埃希菌耐药性分析及产超广谱-内酰胺酶、头孢菌素酶的基因分型

目的 了解浙江省台州地区的分散式供水、食品从业人员粪便及临床标本分离的大肠埃希菌耐药状态、产超广谱-内酰胺酶(ESBLs) 和头孢菌素酶(AmpC)情况及相关耐药基因的类型。 方法 从分散式供水标本、食品从业人员肛拭及临床标本中分离培养的各100株大肠埃希菌进行药敏试验,用ESBLs确证试验、AmpC酶检测试验检测实验菌株的表型,以 PCR扩增和序列分析检测相关的耐药基因。 结果 从食品从业人员肛拭分离到的菌株耐药性高于分散式供水中分离的菌株,而临床标本分离到的菌株耐药性更高;从100株集中式供水分离的菌株中检测出产ESBLs菌6株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9。100株食品从业相关人员肛拭分离的菌株中检测出产ESBLs 17株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9,CTX-M-9;检出产AmpC酶3株,基因型为MOX-1、DHA-1。100株临床标本中分离出产ESBLs 33株,基因型为TEM-1合并CTX-M-9、CTX-M-9、CTX-M-25;检出产AmpC酶9株,基因型为MOX-1、DHA-1、FOX-1。 结论 在分散式供水及正常食品从业相关人员粪便中检出产ESBLs、AmpC酶的大肠埃希菌与在临床分离的标本中的产ESBLs、AmpC酶的大肠埃希菌携带的基因型有一定的相似性。     

Rapid dissemination and diversity of CTX-M extended-spectrum beta-lactamase genes in commensal Escherichia coli isolates from healthy children from low-resource settings in Latin America

A survey carried out in 2005 among members of a healthy population of children living in Bolivia and Peru revealed that fecal carriage of Escherichia coli strains resistant to expanded-spectrum cephalosporins was remarkably increased compared to that observed in the same settings in 2002 (1.7% in 2005 versus 0.1% in 2002). In this work, we demonstrated that this phenomenon was mainly related to the dissemination of CTX-M-type extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) determinants among commensal E. coli strains. Of 50 ESBL-producing isolates collected in the 2005 survey, 44 harbored a CTX-M-type and 6 an SHV-type (SHV-2 or SHV-12) ESBL. Compared to 2002 results, an increased diversity of CTX-M-type ESBLs was also observed: members of the CTX-M-1 group (CTX-M-15) emerged in Bolivia (where only CTX-M-2 was observed in 2002), while members of the CTX-M-9 group (CTX-M-14 and CTX-M-24) emerged in Peru (where only CTX-M-15 and CTX-M-2 were observed in 2002). A new CTX-M-2 variant named CTX-M-56 was also detected. Molecular characterization of the CTX-M-producing isolates and gene transfer experiments suggested that different mechanisms could be involved in the spreading of different CTX-M group determinants and revealed that additional resistance determinants for non-beta-lactam antibiotics were preferentially carried by plasmids encoding certain CTX-M variants (CTX-M-15 and variants of the CTX-M-2 group). Three CTX-M-15-encoding conjugative plasmids from Peruvian isolates carried the new fluoroquinolone resistance gene aac(6')-Ib-cr. To our best knowledge, this is the first report of the detection of aac(6')-Ib-cr in Latin America.     

大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶基因型及毒力因子相关性研究

目的分析温州医科大学附属第一医院临床分离产超广谱β-内酰胺酶(Extended Spectrum BetaLactamase,ESBLs)大肠埃希菌耐药情况,研究大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶的不同基因型与所含的毒力因子的关系。方法普通聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测不同标本来源大肠埃希菌的毒力因子papC、sfa/foc、afa/dra、iutA、aer、fimH、hly、cnf1、kpsMTII、fyuA;纸片扩散确证法检测超广谱β-内酰胺酶,PCR方法检测ESBLs不同基因型的分布情况。结果产ESBLs大肠埃希菌株中,毒力因子iutA、fyuA的检出率较高,均50%;毒力因子fimH、aer的检出率为20%~40%,而毒力因子papC、sfa/foc、afa/dra和kpsMTII的检出率均较低20%;经χ2检验产ESBLs菌株与非产ESBLs菌株的毒力因子分布率差异均无统计学意义(P0.5)。92株产ESBLs大肠埃希菌中,毒力因子papC在CTX-M-9群中的阳性率高于TEM群和CTX-M-1群,差异有统计学意义(P0.05);毒力因子aer在CTX-M-1群中的阳性率高于TEM群和CTX-M-9群,差异有统计学意义(P0.05)。结论各种毒力因子检出率与细菌是否产ESBLs无相关性。但ESBLs阳性菌株中不同的基因型与某些毒力因子的存在与否存在一定关系,毒力因子与产CTX-M酶大肠埃希菌耐药情况可能有关。