siRNA沉默高迁移率族蛋白B1表达对肝星状细胞生物学特性的影响

目的研究siRNA干扰高迁移率族蛋白B1(high mobility group box chromosomal protein 1,HMGB1)表达对肝星状细胞(HSCs)生物学特性的影响。方法将化学合成siRNA HMGB1以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用逆转录-聚合酶链反应和免疫印迹法检测细胞HMGB1表达。应用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡变化,应用酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果转染siRNA的HSC-T6细胞HMGB1基因及蛋白表达水平明显下调,HSC-T6细胞增殖抑制明显,凋亡增加,48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(22.58±8.76)%和(39.36±6.90)%(F=47.78,P0.01),Ⅲ型胶原含量在72 h时降低(38.74±4.80)%(F=98.65,P0.01)。结论 siRNA HMGB1能高效抑制HSC-T6细胞HMGB1表达,抑制HSC-T6细胞增殖,促进凋亡,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞工、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反应和Western blot法检测细胞β-Catenin表达;Western blot法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况;细胞免疫荧光法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与定位;酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量.结果 转染siRNA的HSC-T6细胞β-Catenin基因及蛋白表达水平明显下调,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达显著下调,免疫细胞化学提示转染siRNA β-Catenin后的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均较对照组明显减弱;48 h和72 h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少,分别比阴性对照下降(23.68±7.96)％和(38.42±6.58)％(F= 18.26,P＜0.01;F= 26.38,P＜0.01),Ⅲ型胶原含量于72 h时降低(39.68±4.92)％ (F= 37.68,P＜0.0t).结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力.     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞工、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 研究siRNA干扰β-Catenin表达、阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞(HSC)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 将化学合成siRNA β-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照,抽提细胞总RNA及蛋白质,收集培养上清液,应用反转录-聚合酶链反...     

纤溶酶原激活物抑制剂-1 小干扰RNA对肝星状细胞生物学特性的影响

目的研究化学合成纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）小干扰RNA（siRNA）对肝星状细胞（HSC）PAI-1基因表达及生物学特性的影响。方法将化学合成抗PAI-1 siRNA以Lipofectamine包裹，转染HSC—T6细胞，设阴性对照和空白对照，抽提细胞总RNA及蛋白质，收集培养上清液，应用逆转录-聚合酶链反应和免疫细胞荧光法检测细胞PAI—1表达。应用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期变化，应用酶联免疫吸附法检测培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量。结果转染siRNA的HSC—T6细胞PAI-1基因表达水平明显下调，HSC—T6细胞增殖抑制明显，48h和72h时培养上清液中Ⅰ型胶原表达水平显著减少，分别比阴性对照下降（20．71±8．40）％和（37．97±6．40）％（F=42．69。P=0．0001），Ⅲ型胶原含量于72h时降低（35．98±4．60）％（F=105．52，P=0．0001）。结论化学合成抗PAI-1 siRNA能高效抑制HSC—T6PAI-1表达，抑制HSC—T6细胞增殖，显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌，具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

siRNA抑制IGFBPrP1表达对肝星状细胞株分泌细胞外基质的影响

目的利用化学合成的siRNA抑制肝星状细胞（HSC）中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1（IGFBPrP1）基因的表达,观察其对HSC产生细胞外基质（ECM）的影响,以明确IGFBPrP1在肝纤维化中的作用地位。方法 （1）化学合成2对针对IGFBPrP1基因的siRNAs,转染肝星状细胞株HSC-T6,筛选抑制率较高的siRNA用于干扰实验;（2）将HSC-T6分为3组：正常对照组、阴性对照组和IGFBPrP1 siRNA干扰组。将筛选的抑制效率较高的siRNA转染HSC-T6,Western Blot检测其IGFBPrP1、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维连接蛋白（FN）的表达。采用单因素方差分析,多重比较采用SNK-q检验。结果 （1）将2对IGFBPrP1 siRNA转染HSC,筛选出能高效抑制IGFBPrP1表达的siRNA;（2）与正常对照组和阴性对照组相比,IGFBPrP1 siRNA干扰组能明显抑制IGFBPrP1、ColⅠ和FN的表达（F=48.018、81.246、43.850,P〈0.01）。结论 IGFBPrP1 siRNA能特异性抑制HSC中IGFBPrP1的表达,进而使HSC中ECM的重要成分ColⅠ和FN合成和分泌减少,故IGFBPrP1可在肝纤维化中起有重要作用。     

转化生长因子βⅠ型受体基因的靶向小干扰RNA抑制肝星状细胞合成胶原的体外研究

目的 观察大鼠转化生长因子βⅠ型受体(TβR Ⅰ)基因的靶向小干扰RNA(siRNA)表达质粒对肝星状细胞(HSC)合成胶原的影响.方法 根据大鼠Tβ R Ⅰ的基因序列,设计并构建3个大鼠TβR Ⅰ基因的靶向siRNA表达质粒,以脂质体作转染试剂,将siRNA表达质粒分别转染至HSC-T6细胞中,RT-PCR和Western印迹技术分析TβRⅠ mRNA及蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,放射免疫法测HA、PCⅢ含量.采用LSD法进行统计学处理.结果 酶切证实siRNA的目的 基因片段已成功克隆入载体中.与空白对照组比较,转染siRNA表达质粒后,3组HSC-T6细胞TβR Ⅰ mRNA表达水平均抑制,其中以psiRNA2组抑制作用最强(psiRNA1组:t=7.354,P＜0.01;psiRNA2组:t=9.214,P＜0.01;psiRNA3组:t=5.967,P＜0.01).3组TβRⅠ蛋白表达水平均降低,以psiRNA2组降低最明显(psiRNA1组:t=6.324,P＜0.01;psiRNA2组:t=8.741,P＜0.01;psiRNA3组:t=4.128,P＜0.01).3组HSC-T6细胞增殖活性均下降,合成胶原均减少,以psiRNA2组最明显;而转染无关siRNA组无明显变化.结论 构建的TβR Ⅰ siRNA表达质粒可抑制HSC-T6细胞合成胶原,为肝纤维化基因治疗提供新的靶点.     

siRNA沉默β-Catenin对肝星状细胞增殖和凋亡的影响

目的研究siRNA干扰β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路对肝星状细胞（HSC）增殖和凋亡的影响。方法将化学合成的siRNAβ-Catenin以Lipofectamine包裹,转染HSC-T6细胞,设阴性对照和空白对照;采用逆转录-聚合酶链反应和Western blotting检测细胞β-Catenin表达;采用Western blotting法检测细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞凋亡。结果以不同浓度的β-Catenin SiRNA转染HSC-T6细胞后,β-Catenin mRNA水平比阴性对照组分别下调了51.3±3.6%、85.7±6.8%和94.5±7.5%（P均〈0.01）,比空白对照组分别下调了50.5±3.4%、86.1±6.2%和93.7±7.2%（P均〈0.01）;β-Catenin蛋白表达被抑制了56.43±2.88%（P〈0.01）;Ⅰ和Ⅲ型胶原表达分别被抑制了46.58±3.46%（P〈0.01）和50.48±3.72%（P〈0.01）;细胞增殖明显被抑制,最大抑制率达到44.8±2.8%（P〈0.01）;细胞凋亡增加达28.6%（P〈0.05）。结论 siRNAβ-Catenin能高效抑制HSC-T6细胞β-Catenin表达,阻断Wnt/β-Catenin信号通路,从而抑制HSC-T6细胞增殖,促进凋亡,显著减少Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成和分泌,具有预防及治疗肝纤维化的潜力。     

抗结缔组织生长因子小干扰RNA对肝星状细胞合成分泌细胞外基质的影响

目的 研究化学合成抗结缔组织生长因子(CTGF)小干扰RNA(siRNA)对肝星状细胞(HSC)CTGF基因表达及合成分泌细胞外基质(ECM)的影响。 方法 将化学合成抗CTGF siRNA以Oligofectamine包裹,转染HSC T6细胞,设空白对照,抽提孵育24、48、72 h细胞总RNA及蛋白质,并收集培养上清液,应用western blot和(或)逆转录聚合酶链反直检测HSC T6细胞CTGF及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达,应用放射免疫法检测培养上清液中透明质酸及Ⅲ型前胶原含量。 结果 与空白对照相比,转染siRNA的HSC T6细胞CTGF及Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达水平显著下调,培养上清液中透明质酸及Ⅲ型前胶原含量24、48、72h分别降低46％±7％,52％±7％,53％±7％(F=157.45,P=0.0001)和29％±18％,29％±7％,27％±5％(F=10.77,P=0.0079)。 结论 化学合成抗CTGF siRNA能高效抑制HSC CTGF基因表达,显著减少HSC Ⅰ、Ⅲ型胶原及透明质酸等ECM的合成与分泌,抑制效应可持续72 h,提示化学合成CTGF siRNA具有预防及治疗肝纤维化的潜力并具有极好的开发前景。     

抑制细胞因子RhoA的表达对肝星状细胞株HSC-T6胶原分泌的影响

目的:观察并比较两种方法抑制RhoA的表达对细胞外基质成分,如Ⅰ型胶原、透明质酸以及层粘连蛋白合成的影响,为肝纤维化的基因治疗寻求新的途径.方法:设计并合成针对RhoA相同靶点的反义寡核苷酸和小干扰RNA.分别转染肝星状细胞株HSC-T6,逆转录PCR技术检测细胞中RhoA和Ⅰ型胶原mRNA的表达:Western blot检测细胞中RhoA蛋白质的表达;ELISA检测培养上清中透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)及PIIIP的含量.结果:转染RhoA反义寡核苷酸和小干扰RNA Ratl质粒后.HSC-T6中RhoA mRNA的表达分别由0.892±0.051、0.937±0.044降为0.113±0.024、0.212±0.042;蛋白质表达水平均明显下调;细胞内Ⅰ型胶原mRNA的表达分别由0.709±0.067、0.695±0.087降为0.436±0.037、0.201±0.044;细胞外基质成分如HA、LN及PIIIP的表达水平明显下降.两者相比,小干扰RNA具有更强的生物学效应.结论:靶向抑制细胞因子RhoA的表达可明显减少肝星状细胞株HSC-T6细胞外基质的合成,且小干扰RNA的效果明显优于针对同一靶点的反义寡核苷酸,显示RNAi技术应用于肝纤维化基因治疗的良好前景.     

调控Notch信号对肝星状细胞活化的影响

目的 探讨肝星状细胞(HSC-T6)内是否存在功能激活的Notch信号分子以及调控Notch信号转导对HSC-T6活化的影响. 方法 用PCR方法检测Notch信号分子mRNA在HSC-T6细胞内的表达,TaqMan探针检测转化生长因子(TGF)β 1刺激HSC-T6后Notch信号分子的表达变化.细胞免疫荧光法检测Notch3和Jagged1在HSC-T6内的表达定位.用携带Notch3胞内域(ICD)的真核表达质粒pcDNA3.1-N3ICD和特异性干扰Notch3的siRNA(Notch3-siRNA)分别转染HSC-T6细胞,Western blot检测Notch3、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和Ⅰ型胶原的表达变化.对数据采用t检验和方差分析. 结果 HSC-T6细胞内存在功能激活的Notch信号转导.TGF β 1(2.0 ng/ml)刺激HSC-T6导致Jagged1、Notch3和HES-1的mRNA水平明显上调,分别提高了2.9、3.2、2.2倍,F值分别为2543.482,287.982和1719.851,P值均＜0.01.pcDNA3.1-N3ICD转染后促使HSC-T6合成α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白增加,较对照组分别提高了5.8倍和4.5倍,t值分别为13.157和9.810,P值均＜0.01;相反,Notch3- siRNA明显抑制HSC-T6表达α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白,较对照组分别下降了约90％和84％,t值分别为19.863和10.376,P值均＜0.01.而且,Notch3-siRNA能拮抗TGFβ1诱导HSC-T6表达α-SMA和Ⅰ型胶原的作用.结论 Notch信号通路可能通过调控肝星状细胞的活化参与肝纤维化的形成,选择性地干预Notch3信号转导可能成为抗肝纤维化的新途径.     

化学合成经修饰抗TIMP-2小干扰RNA对活化HSCs合成分泌ECM影响

目的观察化学合成经修饰抗金属蛋白酶组织抑制剂-2（TIMP-2）小干扰RNA（sinNA）对活化肝星状细胞（HScs）合成分泌细胞外基质（ECM）的影响。方法针对TIMP-2靶基因化学合成siRNA_366和siRNA_687，分别以不同浓度和不同时间转染活化HSCs，筛选基因沉默效率较高的一对。再将此siRNA以不同浓度作用于活化HSCs，检测培养细胞上清液中透明质酸（HA）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）和羟脯氨酸（Hyp）含量，采用荧光实时定量PCR检测TIMP-2、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原纤维（COLI）和Ⅲ型胶原纤维（COLⅢ）mRNA的表达，western印迹检测TIMP-2蛋白表达。结果siRNA687对TIMP-2的沉默效率高于siRNA366。在活化HSCs中应用化学合成经修饰抗TIMP-2siRNA后，各siRNA组α-SMA、COLⅠ和COLⅢ的表达显著降低，且培养细胞上清液中HA、PCⅢ和Hyp的含量也随之减少。结论化学合成经修饰抗TIMP-2 siRNA能够高效抑制TIMP-2的表达，减少HSCs分泌合成ECM，抑制HSCs活化，是治疗肝纤维化的潜在有效方法。     

特异性小干扰RNA对晚期糖基化终产物受体介导肝星状细胞激活和胶原生成的抑制作用

目的 探讨特异性小分子干扰RNA对晚期糖基化终产物受体（RAGE）介导肝星状细胞（HSC）激活和胶原生成的影响。方法 构建RAGE特异性siRNA表达载体，经脂质体转染入HSC—T6细胞，以空白和转染非特异性siRNA表达载体pGCsi-C为对照，分别用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测各组HSC—T6细胞RAGE、α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和Ⅰ型胶原基因及蛋白的表达。结果 与空白对照组和pGCsi—C组相比，转染特异性siRNA表达载体pGCsi—R1的HSC—T6细胞RAGE mRNA和相对分子质量50×10^3、46×10^3的RAGE蛋白表达分别下调79．65％、78．04％（F=26．005，P〈0．01），56．09％、54．93％（F=365．185，P〈0．01）和63．67％、59．67％（F=386．07，P〈0．01），同时α—SMAmRNA和蛋白、Ⅰ型胶原mRNA和蛋白的表达也受到明显抑制，分别为空白对照组和pGCsi—C组的57．53％、65．50％（F=20．913，P〈0．05）、58．48％、62．80％（F=56．592，P〈0．05）、71．16％、74．23％（F=18．091，P〈0．05）和71．91％、76．09％（F=17．299，P〈0．05）。结论 RAGE特异性siRNA可在细胞内稳定表达，并能有效抑制HSC的激活和Ⅰ型胶原生成。     

银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞细胞因子和胶原合成及细胞增殖的影响

目的研究银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机理。方法用不同浓度(0,1,10,100,500μg·ml-1)的银杏叶提取物处理HSC-T6细胞24h和48h,采用RT-PCR法检测各组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化。结果银杏叶提取物在10,100,500μg·ml-1浓度能明显抑制TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),在一定范围内呈剂量和时间依赖性,影响HSC-T6的细胞周期,降低其增殖活性。结论银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6细胞的增殖,抑制细胞因子及细胞外基质成分基因的表达,由此发挥抗肝纤维化的作用。     

大鼠Smad7真核表达质粒的构建及在肝星状细胞中的表达

目的:构建并鉴定大鼠Smad7真核表达质粒,观察外源Smad7对肝星状细胞HSC-T6的转染.并进一步研究其对TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA达水平的影响.方法:采用基因重组技术将Smad7 cDNA插入真核表达载体pcDNA3.1( ),构建大鼠Smad7真核表达质粒.脂质体介导转染HSC-T6细胞,分为正常对照组、空质粒组及转染组,G418筛选,挑取阳性细胞,运用Western blot检测Smad7蛋白表达情况,RT-PCR检测Smad7、TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平.结果:酶切和测序结果证实Smad7真核表达质粒构建成功.Smad7转染组与正常对照、空质粒组比较,Smad7 mRNA表达显著增加(1.053±0.009 VS 0.984±0.054,0.986±0.044,P<0.01或0.05),蛋白水平显著上调(0.083±0.02 VS0.058±0.050,0.056±0.064,均p<0.05:Smad7转染组TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA表达降低(0.961±0.013 VS 1.039±0.013,1.032±0.037;0.592±0.096 VS 0.767±0.085.0.770±0.090,均P<0.01);Ⅲ型胶原mRNA表达差异无统计学意义.正常对照、空质粒组Smad7 mRNA和蛋白水平、TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNAA达差异无统计学意义.结论:smad7可能参与TGF-β/smad信号转导,在一定程度上具有抗纤维化的生物学活性.     

Smad7质粒转染对肝星形细胞α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)前胶原基因表达的影响

目的:研究上调Smad7表达对肝星形细胞(HSC)α1(Ⅰ)和α1(Ⅲ)前胶原基因转录的作用.方法:应用Fugene6介导Smad7质粒转染体外培养的HSC-T6细胞.继续培养48 h.同时使用实时定量聚合酶链式反应(Real time-PCR),逆转录酶链式反应(RT-PCR)方法检测Smad7质粒组和正常对照组、空载质粒对照组α(Ⅰ)和α1(Ⅲ)前胶原mRNA水平.结果:与正常对照组和空载质粒对照组相比,Smad7质粒转染HSC-T6细胞48h后,Smad7 mRNA水平显著增高(1.29±0.18 vs 0.11±0.02,0.13±0.02,均P<0.01),α1(Ⅰ)前胶原mRNA表达明显下降(0.10±0.01 vs 1.18±0.15.1.07±0.12,均P<0.01),但α1(Ⅲ)前胶原基因表达无明显改变(0.72±0.00 vs 0.70±0.01,0.75±0.0l,均P>0.05).结论:Smad7能明显抑制HSC细胞α1(Ⅰ)前胶原mRNA转录.     

慢病毒载体介导的结缔组织生长因子基因沉默对下游基因的影响

目的利用RNA干扰技术,以慢病毒为载体,介导结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默,并观察其对下游基因表达的影响。方法用构建的CTGF小干扰RNA(siRNA)慢病毒转移质粒与包装质粒、包膜蛋白质粒共转染293T细胞,包装成介导CTGF基因沉默的慢病毒载体;感染肝星状细胞系HSC-T6,应用Real-time PCR和Western免疫印迹法筛选基因沉默效率最高的慢病毒载体;再根据绿色荧光蛋白(GFP)表达水平检测感染效率;应用Real-time PCR法检测CTGF基因沉默后HSC-T6中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、TIMP-2和I型胶原mRNA表达水平。结果包装的慢病毒载体感染HSC-T6细胞的效率高于50%;感染HSC-T6细胞后,CTGF的表达在mRNA和蛋白水平均受到明显抑制,其中TS1具有最佳的抑制效率;HSC-T6细胞CTGF基因沉默后,其TIMP-1、TIMP-2和I型胶原mRNA水平也显著降低。结论包装的慢病毒载体在HSC-T6中具有较好的感染效率和CTGF基因沉默效果,基因沉默后可进一步抑制HSC-T6细胞TIMP-1、TIMP-2和I型胶原的基因表达,这在抗纤维化的研究中具有积极的意义。     

上调miR-203表达对肝星状细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察上调mi R-203表达对肝星状细胞增殖活性及胶原合成的影响.方法:利用Lipofectamine?2000将miR-203模拟物(mimics)转染大鼠肝星状细胞(HSC-T6),培养48 h后,收集细胞提取总蛋白和总RNA,分别行Western blot和RT-qP CR,检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达;MTT(噻唑蓝)法检测细胞增殖活性.结果:与阴性对照组相比,mi R-203 mimics组α-SMA蛋白和mRNA表达分别下降75%和80%(均P0.01);Ⅰ型胶原蛋白表达下降56%(P0.01),mRNA表达下降48%(P0.05);Ⅲ型胶原蛋白与mRNA表达分别下降45%和60%(P0.05);HSC-T6细胞增殖活性下降20%±5%(P0.01).结论:上调mi R-203表达能显著抑制肝星状细胞增殖及胶原合成.     

阻断Wnt-β-catenin信号通路对肝星状细胞活化的影响

目的探讨活化的肝星状细胞（HSC）内是否存在功能性的Wnt-β-catenin信号通路的激活，以及阻断该信号通路对HSC活化的影响。方法免疫细胞化学染色检测β-catenin在HSC-T6细胞内的表达。通过转染T细胞因子（T-cellfactor，TCF）依赖的荧光素酶报告质粒（pTOPFI。ASH）测定HSC—T6细胞内的Wnt-β-catenin信号。将TCF的显性负性突变体dnTCF表达质粒转染HSC-T6阻断Wnt-β-catenin信号的转导，用Western印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Ⅰ型胶原表达变化。结果HSC-T6细胞核内有β-catenin的表达；转染pTOPFLASH的细胞荧光素酶活性显著高于转染pFOPFLASH的对照组（P〈0．01）；与转染空质粒的对照组相比，转染dnTCF的HSC-T6细胞α-SMA及Ⅰ型胶原表达分别下降52．9％和37．5％（P〈0．05）。结论活化的HSC中存在Wnt-β-catenin信号通路的激活，阻断该信号通路可抑制活化HSC的功能。     

SMYD2对心脏成纤维细胞的增殖和胶原合成的影响

目的探讨组蛋白甲基转移酶SMYD2对心脏成纤维细胞(CFs)的增殖和胶原合成的影响。方法体外分离培养CFs,通过转染SMYD2干扰RNA(siRNA),在CFs中降低SMYD2的表达,利用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)处理各组细胞,检测以下指标:(1)噻唑蓝(MTT)法检测CFs增殖;(2)Western Blot和qPCR检测SMYD2、促进转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原等指标的表达。结果 AngⅡ诱导CFs中SMYD2的表达增加(P<0.01)。AngⅡ刺激CFs增殖和胶原合成(P<0.01),SMYD2-siRNA和对照组相比,CFs增殖下降(P<0.05),Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和转化生长因子β1表达降低(P<0.05)。结论降低CFs中SMYD2表达可抑制AngⅡ引起的CFs增殖和胶原合成,提示SMYD2参与心肌纤维化的发生过程。     

干扰素γ对肝星状细胞-T6细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原等基因表达的影响

目的观察干扰素γ(IFN γ)对肝星状细胞(HSC)-T6细胞Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(colⅢ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)基因表达的影响。方法浓度0.1、1、10、102、103、104、2.5×105、5×105U/ml IFN γ作用于HSC-T6细胞48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法观察其对HSC-T6细胞生长指数的影响;以1、102、104U/ml IFN γ作用于HSC-T6细胞48 h,采用逆转录聚合酶链反应方法测定其对HSC-T6细胞Col Ⅰ、ColⅢ、TIMP1基因表达的影响。结果空白对照组ColⅠ、ColⅢ、TIMP1基因表达水平分别为2.86±0.21、2.00±0.23、3.90±0.81;1U/m1、102U/ml、104U/ml IFNγ作用于HSC-T6细胞,ColⅠ基因表达水平依次为1.00±0.11、0.42±0.12、0.33±0.12,与空白对照组比较, 差异有统计学意义;ColⅢ基因表达水平依次为1.09±0.1 5、0.52±0.14、0.43±0.18,与空白对照组比较, 差异有统计学意义;TIMP1基因表达水平依次为3.81±0.37、3.50±0.51、3.41±0.31,与空白对照组比较,差异无统计学意义。结论IFNγ明显抑制HSC-T6细胞colⅠ、ColⅢ基因表达水平,而对TIMP1基因表达水平无明显影响,从而可抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,这可能是其抗纤维化的作用机制之一。