冬凌草甲素诱导HL-60细胞凋亡

目的　研究冬凌草甲素诱导人白血病HL 6 0细胞凋亡的作用。方法　形态学观察 ,DNA凝胶电泳及流式细胞术。结果　冬凌草甲素能显著地诱导HL 6 0细胞发生凋亡 ,其作用呈明显的浓度效应关系和时间依赖性。形态学观察可见凋亡小体的形成 ,琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯带 ;流式细胞仪检测到G1亚峰。结论　冬凌草甲素能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,并与其细胞杀伤活性相互平行 ,提示冬凌草甲素的抗癌活性与诱导肿瘤细胞凋亡相关     

高三尖杉酯碱对HL-60细胞端粒酶量的抑制效应

目的　研究高三尖杉酯碱 (HHT)对HL 6 0细胞端粒酶活性的影响及诱导凋亡作用。方法　采用端粒重复序列扩增法 (TRAP) 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测了HL 6 0细胞的端粒酶量变化 ,用细胞形态学观察 ,DNA琼脂糖凝胶电泳 ,流式细胞术检测和DNA片段原位末端标记 (TUNEL)法检测了细胞凋亡现象。结果　 5～ 5 0 0 μg·L- 1HHT处理HL 6 0细胞 0～ 4 8h ,HL 6 0细胞端粒酶量呈剂量依赖性和时间依赖性下降。同时 ,HL 6 0细胞发生了凋亡。结论　HHT有降低HL 6 0细胞的端粒酶量 ,诱导细胞凋亡作用。     

聚酯型儿茶素对HL-60细胞的诱导分化作用及其机制研究

目的　研究聚酯型儿茶素对人急性早幼粒白血病HL 6 0细胞的分化作用并探讨其作用机制。方法　应用电镜、NBT还原试验、同位素掺入试验、细胞内cAMP/cGMP浓度测定、原位杂交和免疫细胞化学等方法研究细胞分化及机制。结果　聚酯型儿茶素作用于HL 6 0细胞后 ,扫描电镜和透射电镜观察显示分化细胞的特征 ;NBT还原能力明显增强 ;[3H] TdR ,[3H] Leu掺入试验证明聚酯型儿茶素可明显抑制细胞DNA和蛋白质合成 ;聚酯型儿茶素作用后 ,细胞内cAMP浓度及cAMP/cGMP比值明显增加 ,HL 6 0细胞的c myc基因mRNA和蛋白产物的表达均明显降低 ,而c fos基因mRNA和蛋白产物的表达均明显升高。结论　聚酯型儿茶素可诱导HL 6 0细胞向成熟细胞分化 ,其分化作用可能与其升高细胞内cAMP/cGMP比值和抑制c myc基因表达、增强c fos基因表达有关。本研究为聚酯型儿茶素在肿瘤防治领域的开发应用提供了充分的理论依据     

聚酯型儿茶素对小鼠淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的 :研究聚酯型儿茶素 (theasinesin ,TS)对小鼠淋巴细胞增殖和凋亡的影响。方法 :采用MTT法研究TS对小鼠脾细胞增殖的影响 ,采用形态学检测、DNA琼脂糖凝胶电泳及FACS分析方法研究TS对小鼠胸腺细胞自发凋亡及地塞米松诱导脾细胞凋亡的影响。结果 :5 0、15 0、5 0 0mg·L- 1TS对小鼠脾淋巴细胞增殖有明显促进作用。小鼠胸腺细胞体外培养 2 0后 ,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNAlad der,FACS图上出现典型的亚二倍体凋亡峰。 5 0、15 0、5 0 0mg·L- 1TS作用后 ,随药物剂量增加DNAladder减弱 ,凋亡峰减小 ,细胞凋亡率从 19.87%分别减为 12 .14%、9.4 9%、6 .71%。但不同浓度TS对地塞米松诱导的小鼠脾细胞凋亡无明显影响。结论 :聚酯型儿茶素可明显促进小鼠脾淋巴细胞增殖 ,同时可抑制小鼠胸腺细胞自发凋亡 ,两者总的效应是一致的。     

二乙酰二脱水卫矛醇诱导人白血病HL-60细胞凋亡与Bcl-2家族的关系

目的　探讨抗肿瘤药物二乙酰二脱水卫矛醇 (di acetyldianhydrogalactitol,DADAG )诱导肿瘤细胞凋亡机制。方法　透射电镜、DNA梯形条带、流式细胞术及Westernblot法分别检测凋亡和凋亡相关基因Bcl 2家族成员表达的动态变化。结果　透射电镜可见细胞异染色质固缩、边集及凋亡小体形成 ;DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的“DNAlad der” ;流式细胞仪DNA直方图上出现亚二倍体峰。DADAG4 μmol·L-1处理HL 6 0细胞 6h后 ,Bcl 2蛋白水平开始下降 ,Bad蛋白水平明显上调 ,相反 ,Bcl XL 蛋白水平呈时间依赖性地下降。结论　DADAG诱导白血病HL 6 0细胞凋亡 ,与Bcl 2、Bcl XL 蛋白水平下降 ,Bad蛋白水平明显上调有关     

中华眼镜蛇毒血清抑制HL60细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

目的　探讨中华眼镜蛇毒血清体外对白血病细胞系(HL6 0 )的抑制作用及其机制。方法　以人粒细胞白血病细胞系 (HL6 0 )为靶细胞 ,观察口服中华眼镜蛇毒血清对肿瘤细胞增殖的影响 ,并采用DNA片断凝胶电泳、流式细胞仪分析药物体外诱导细胞凋亡情况。结果　中华眼镜蛇毒血清在体外显著抑制HL6 0细胞的生长 ,其抑制作用随着剂量的加大而增强 ,高剂量 (7 5g·L-1)的抑制效果相近于阿霉素(5mg·L-1) ,和空白对照组比较差异有显著性。经DNA电泳、流式细胞仪分析显示中华眼镜蛇毒血清与HL6 0细胞共同培养可诱导其发生细胞凋亡。结论　中华眼镜蛇毒血清体外能显著抑制HL6 0细胞的生长 ,此作用可能与诱导白血病细胞发生凋亡有密切关系。     

苦参碱对白血病细胞K562和JM诱导凋亡作用的研究

目的　研究苦参碱对白血病细胞 K5 62和 JM的作用。方法　不同浓度的苦参碱作用于培养的 K5 62和JM细胞 ,观察细胞的生长情况 ,通过光镜的形态学观察、DNA凝胶电泳分析和流式细胞仪分析 ,检测细胞的凋亡。结果　 0 .4g· L-1以上浓度苦参碱作用于 K5 62细胞 ,细胞增生明显受到抑制 ,同时 ,可以见到细胞凋亡 ;实验结果还表明 ,随着苦参碱浓度的提高和作用时间的延长 ,凋亡细胞比例明显增加。0 .2 g· L-1以上浓度苦参碱作用于 JM细胞后 ,也可发现细胞生长受到抑制和细胞凋亡的现象。基因组 DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪 DNA分析均证实了肿瘤细胞的凋亡。结论　苦参碱可以诱导白血病细胞 K5 62和 JM的凋亡 ,这可能是苦参碱抗白血病的机制之一     

放线菌酮快速诱导小鼠肝细胞凋亡的实验研究

目的　研究放线菌酮 (CHX)诱导小鼠肝细胞凋亡的作用机制。方法　利用琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、电镜、活细胞荧光染色、HE染色等方法观察CHX诱导肝细胞凋亡的情况。结果　 ( 1)2 0mg kg以上剂量的CHX作用 1h即可出现典型的肝细胞凋亡 ,溴化乙啶和吖啶橙荧光染色为桔黄色 ,HE染色可见核固缩、浓染以及凋亡小体形成 ,凋亡细胞周围无炎性细胞浸润。电镜观察可见肝细胞体积变小 ,染色质固缩。 ( 2 )电泳结果显示 :不同剂量的CHX处理的小鼠其肝细胞NDA呈典型的“Ladder”电泳条带。 ( 3 )流式细胞术分析 :在CHX 2 0mg kg ,作用 1h以后即可见到肝细胞凋亡峰 (AP峰 )。随CHX剂量增加和作用时间的延长 ,凋亡率也逐渐增高 ,凋亡细胞的NDA含量减少。 ( 4)C myc基因表达量随CHX剂量增加和作用时间的延长而增加 ,但bcl 2基因表达呈下降趋势。结论　CHX可以快速诱导小鼠肝细胞凋亡 ,在凋亡过程中C myc基因表达量增加 ,bcl 2基因表达量降低 ,细胞凋亡率与CHX剂量和作用时间有一定的线性关系     

高三尖杉酯碱对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的　探讨高三尖杉酯碱 (homoharringtonine,HHT)对鼻咽癌细胞CNE 2Z的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法　采用MTT法检测增殖抑制率和IC50 ,流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳和Hoechst 3 3 2 5 8/PI荧光染色分析细胞凋亡。结果　不同浓度的HHT分别处理CNE 2Z细胞 2 4、48和 72h ,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增高 ,其IC50 分别为(0 62 9± 0 0 3 9)、(0 483± 0 0 2 7)、(0 3 89± 0 0 2 7)mg·L-1,各IC50 间差异有统计学意义 (P <0 0 1)。 1、0 5mg·L-1HHT处理细胞 8h ,流式细胞术观察到凋亡峰 ,荧光染色可见凋亡形态学改变 ,流式细胞术和荧光染色检出的凋亡率均高于对照组 (P <0 0 1) ;1mg·L-1HHT处理细胞 8h ,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯带。结论　HHT对CNE 2Z细胞具有增殖抑制作用 ,此抑制作用具有剂量和时间依赖性 ;HHT可诱导CNE 2Z细胞凋亡     

紫杉醇诱导食管癌细胞的细胞周期阻断与细胞凋亡

目的研究紫杉醇对食管癌细胞的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用。方法应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Eca109进行了检测和观察。结果紫杉醇可将食管癌细胞阻断于G0／G1期及G2／M期并诱导其凋亡，凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征，流式细胞仪检测有凋亡峰出现，琼脂糖凝胶电泳显示3nmol·L-1紫杉醇作用72h便可见明显的DNA梯带。100nmol·L-1和1000nmol·L-1浓度的紫杉醇作用于细胞，在形态变化与细胞周期变化上有很大差别。紫杉醇作用短时间（＜2h）去除后再培养比持续性作用更早促使细胞凋亡。结论紫杉醇不仅可以阻断食管癌细胞的分裂，而且对于间期细胞也有很大作用。细胞周期阻断并不直接诱导细胞凋亡，甚至可能抑制细胞凋亡的进程。食管癌细胞中存在多条凋亡途径。     

番荔枝内酯诱导白血病细胞凋亡的机理

目的　研究番荔枝内酯(squamocin)诱导白血病细胞凋亡的机理。方法　DNA凝胶电泳法、荧光染色等检测细胞凋亡。试剂盒检测caspase-3的活性。Westernblot法检测PARP和caspase-3的剪切片断和磷酸化的SAPK/JNK量的变化。结果　Squamocin处理HL-60细胞后,导致染色质浓缩、片断化,DNA梯形条带出现,完整PARP的116ku条带逐渐减少,而85ku的片断逐渐增加,caspase-3酶的活性也增加。Caspase-3的特异性抑制剂DEVD-CHO预处理HL-60细胞,可阻止squamocin诱导的DNA片断化、PARP的剪切和细胞死亡。Squamocin激活HL-60细胞中SAPK/JNK。结论　Squamocin诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,squamocin激活caspase-3可能与SAPK/JNK的激活相关     

异三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡

用透射电镜观察、DNA凝胶电泳及流式细胞术研究了异三尖杉酯碱(IHT)诱导HL-60细胞凋亡的作用。结果证明异三尖杉酯碱能快速、显著地诱导HL-60细胞发生凋亡,其作用呈明显的浓度-效应关系和时间依赖性。IHT处理的细胞出现凋亡相关的特征性变化。在电镜观测中发现细胞核内染色质浓缩边集、核碎裂及凋亡小体形成;琼脂糖凝胶电泳可见明显的DNA梯;流式细胞光度术出现显著的G1亚峰。经10^-7mol·L^-1IHT处理120min,可使43.8%HL-60细胞发生凋亡。IHT有明显诱导HL-60细胞凋亡的作用,并与其细胞杀伤活性相平行,提示IHT的抗癌活性与诱导肿瘤细胞凋亡相关。这些实验结果对进一步研究、开发IHT有重要实用价值。     

Dihydroartemisinin induces apoptosis in human leukemia cells HL60 via downregulation of transferrin receptor expression

Dihydroartemisinin (DHA), a water-soluble active metabolite of artemisinin derivatives, is the safest and most effective antimalarial analog of artemisinin. In the present investigation, we assessed the apoptotic effect of DHA on leukemia HL60 cells and its regulation of transferrin receptor (TfR). Cell growth inhibition was assessed by Trypan blue exclusive staining; the expression of caspase-3, Bcl-2, and Bax in HL60 cells was evaluated by Western blotting; DHA-induced apoptosis was determined by AO/EB double staining, DNA fragmentation assay, and flow cytometric analysis; the expression of TfR in HL60 cells was examined by real-time PCR assays, Western blotting, and flow cytometric analysis. DHA could specifically reduce the mRNA and protein expression of TfR in HL60 cells, and the flow cytometric analysis presented the unity tendency that the TfR content decreased progressively in a dose-dependent manner. Consequently, DHA exhibited high anticancer activity in HL60 cells; MTT assay and growth inhibition assay showed that DHA could specifically inhibit the growth of HL60 cells in a dose-dependent (0.25-8 micromol/l) and time-dependent (12-72 h) manner. DHA-induced DNA fragmentation also induced the activation of caspase-3 and influenced the expression of Bcl-2 and Bax. Taken together, these data from our study show that DHA can induce HL60 cell apoptosis via the effect of downregulation TfR expression resulting in an induction of apoptosis through the mitochondrial pathway, and it might be a potential antileukemia strategy for leukemia therapy.     

灵芝菌丝体多糖对HL-60细胞凋亡的影响

目的：研究灵芝菌丝体粗总多糖(MGLP1)、总多糖(MGLP2)对HL-60细胞凋亡的影响。方法：MGLP1,MGLP2与HL-60细胞共培养,MTT法检测MGLP1,MGLP2对HL-60细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞检测法定性定量检测细胞凋亡。MGLP1,MGLP2作用于小鼠脾细胞,再将共培养上清液(MGLP1-S-CM, MGLP2-S-CM)作用于HL-60细胞,同法定性定量检测它们对HL-60细胞凋亡的诱导作用。结果：MGLP1, MGLP2在体外对HL-60细胞的增殖无明显的抑制作用,且不能明显的诱导HL-60细胞凋亡。但MGLP1, MGLP2作用于脾细胞的共培养上清液却可以明显的诱导HL-60细胞凋亡。结论：MGLP1, MGLP2无直接促进HL-60细胞凋亡作用,但可通过脾细胞间接诱导HL-60细胞凋亡。     

Apoptosis induction and cell cycle perturbation in human hepatoma hep G2 cells by 10-hydroxycamptothecin

10-Hydroxycamptothecin (HCPT), a DNA topoisomerase I inhibitor, is an antitumor alkaloid isolated from a Chinese tree, Camptotheca acuminata, and exhibits a remarkable antihepatoma effect. We studied HCPT to determine whether or not its anti-hepatoma activity occurs through apoptosis induction and cell cycle disturbance using the MTT method, DAPI staining, agarose gel electrophoresis and flow cytometric analysis. The results showed that HCPT inhibited proliferation of human hepatoma Hep G2, Bel-7402 and Bel-7404 cells at an optimal concentration of 0.1 microg/ml. This growth inhibition was dose and time dependent, and was accompanied by evidence of apoptotic changes and cell cycle perturbation in Hep G2 cells. Chromatin condensation and nuclear fragmentation were observed in Hep G2 cells by fluorescence microscopy. Agarose gel electrophoresis showed internucleosomal DNA fragmentation ('ladder pattern') of Hep G2 cells following treatment with HCPT, in a concentration- and time-dependent manner. Flow cytometry showed that HCPT induced a massive hypodiploid cell population and arrested cells in G2/M phase (at low dose) or in S phase (at high dose) in Hep G2 cells. The results of this study suggest that the anti-hepatoma effect of HCPT may result from apoptosis induction and cell cycle disturbance.     

金喜素诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase活化

目的　探讨金喜素诱导急性白血病细胞凋亡的生化机制。方法　采用MTT法测定金喜素对HL 6 0细胞的杀伤作用 ;通过形态学、DNA凝胶电泳及AnnexinVFITC染色 ,研究金喜素对靶细胞的促凋亡活性 ;采用caspase 8、3特异性抑制剂IETD fmk、DEVD CHO ,分析金喜素介导的靶细胞凋亡与caspase活化的关系。结果　经 0 1μmol·L-1金喜素处理至 8、12及 16h时 ,HL 6 0细胞的存活率依次降至6 2 %± 12 %、、43%± 15 %及 32 %± 10 % ,低于对照 (P <0 0 5 ) ,同时 ,靶细胞逐渐出现磷脂酰丝氨酸外化 ,并产生梯状DNA及凋亡小体 ;经caspase抑制剂与金喜素联合处理12、16h时 ,HL 6 0细胞的存活率高于单用金喜素组 ,分别为77%± 14%、6 5 %± 16 % (IETD fmk组 )与 74%± 12 %、6 0 %± 11% (DEVD CHO组 ) ,同时 ,靶细胞的梯状DNA与凋亡小体的诱生也明显受抑。结论　金喜素对HL 6 0细胞具有较强的促凋亡作用 ,该过程可能依赖caspase 8、caspase 3的活化     

生存素在VP16诱导HL-60白血病细胞凋亡中的作用

目的探讨生存素在化疗药物足叶乙甙（VP16）诱导白血病细胞凋亡中的作用。方法用HL-60白血病细胞株进行传代培养,MTT试验检测VP16不同药物浓度对白血病细胞增殖的影响。通过光镜下观察细胞形态学变化和DNA凝胶电泳定性检测细胞凋亡,用流式细胞术（FCM）定量检测细胞凋亡及周期变化,用RT-PCR检测生存素基因表达,免疫组化检测其蛋白表达。结果各种浓度的VP16均可诱导HL-60细胞凋亡,下调生存素表达,阻滞细胞周期,具有明显时间和浓度依赖性。结论VP16诱导白血病细胞凋亡可能与其抑制生存素表达有关。     

灵芝菌丝体多糖通过增强小鼠巨噬细胞功能诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨灵芝菌丝体粗总多糖（ＭＧＬＰ１）、总多糖（ＭＧＬＰ２）作用的小鼠腹腔巨噬细胞培养上清对ＨＬ－６０细胞凋亡的影响。方法ＭＧＬＰ１、ＭＧＬＰ２作用于小鼠腹腔巨噬细胞,生物法检测培养上清中ＴＮＦ－α的活性;再将共培养上清（ＭＧＬＰ１－ΜΦ－ＣＭ、ＭＧＬＰ２－ΜΦ－ＣＭ）作用于ＨＬ－６０细胞,ＭＴＴ法检测ＭＧＬＰ１－ΜΦ－ＣＭ、ＭＧＬＰ２－ΜΦ－ＣＭ对ＨＬ－６０细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞检测法定性定量检测它们对ＨＬ－６０细胞凋亡的诱导作用。结果ＭＧＬＰ１、ＭＧＬＰ２作用于腹腔巨噬细胞后,可以明显增强培养上清中ＴＮＦ－α的活性;其共培养上清可以明显地抑制ＨＬ－６０细胞的增殖并诱导该细胞凋亡（Ｐ＜０．０１）。结论ＭＧＬＰ１、ＭＧＬＰ２可以通过小鼠腹腔巨噬细胞,促进ＴＮＦ－α分泌,诱导ＨＬ－６０细胞凋亡。