缺血延迟预适应对心肌缺血再灌注所致细胞凋亡的保护

目的：分析心肌缺血延迟预适应能否抑制心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的发生及其发生的可能原因。 方法：①实验于2003-08／2004-12在中山大学中西医研究所完成。选用出生两三个月的SD大鼠32只，雌雄不拘。②随机将大鼠分为4组：正常对照组（不做任何处理），假手术组（只穿线，不结扎），缺血再灌注组（采用经典大鼠冠状动脉结扎，缺血1h，再灌注1h），延迟缺血预处理组（采用经典大鼠冠状动脉结扎，缺血5min再灌注5min，重复3个缺血预处理，24h后，缺血1h，再灌注1h。③采用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，反转录聚合酶链法检测Bcl-xl mRNA/Bcl-xs mRNA的表达情况，进行Bcl-xl的蛋白免疫印迹分析并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌核因子KB亚单位P65蛋白的表达。 结果：大鼠32只均进入结果分析。①大鼠心肌细胞凋亡率：心肌缺血再灌注组明显升高（P〈0.01），延迟缺血预处理组明显低于缺血再灌注组（P〈0．01）。②大鼠心肌Bcl-xl mRNA与Bcl-xs mRNA表达的比值：缺血再灌注组明显低于正常对照组（P〈0．01），延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组（P〈0．01）。③大鼠心肌Bcl-xl蛋白表达：缺血再灌注组明显减少（P〈0．01），延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组（P〈0．01）。④大鼠心肌核因子κB P65蛋白表达：延迟缺血预处理组核因子κB P65发生核转位且明显高于与缺血再灌注组（P〈0．01）。 结论：心肌缺血延迟预适应可以减少心肌缺血再灌注造成的细胞凋亡，此种作用发生可能与核因子KB括化后促进Bcl-xl的表达，保护线粒体功能有关。     

缺血延迟预适应对心肌缺血再灌注所致细胞凋亡的保护

目的:分析心肌缺血延迟预适应能否抑制心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的发生及其发生的可能原因。方法:①实验于2003-08/2004-12在中山大学中西医研究所完成。选用出生两三个月的SD大鼠32只熏雌雄不拘。②随机将大鼠分为4组:正常对照组(不做任何处理),假手术组(只穿线,不结扎),缺血再灌注组(采用经典大鼠冠状动脉结扎,缺血1h,再灌注1h),延迟缺血预处理组(采用经典大鼠冠状动脉结扎,缺血5min再灌注5min,重复3个缺血预处理,24h后,缺血1h,再灌注1h。③采用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,反转录聚合酶链法检测Bcl-xlmRNA/Bcl-xsmRNA的表达情况,进行Bcl-xl的蛋白免疫印迹分析并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌核因子κB亚单位P65蛋白的表达。结果:大鼠32只均进入结果分析。①大鼠心肌细胞凋亡率:心肌缺血再灌注组明显升高(P<0.01),延迟缺血预处理组明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。②大鼠心肌Bcl-xlmRNA与Bcl-xsmRNA表达的比值:缺血再灌注组明显低于正常对照组(P<0.01),延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组(P<0.01)。③大鼠心肌Bcl-xl蛋白表达:缺血再灌注组明显减少(P<0.01),延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组(P<0.01)。④大鼠心肌核因子κBP65蛋白表达:延迟缺血预处理组核因子κBP65发生核转位且明显高于与缺血再灌注组(P<0.01)。结论:心肌缺血延迟预适应可以减少心肌缺血再灌注造成的细胞凋亡,此种作用发生可能与核因子κB活化后促进Bcl-xl的表达,保护线粒体功能有关。     

微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的　探讨微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响并与缺血预处理比较.方法　采用大鼠在体缺血再灌注(I/R)模型,分别以缺血前去甲肾上腺素预处理(NE-P),缺血预处理(IP),采用末端脱氧核苷酸转换酶介导的生物素平移缺口末端标记技术(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡情况;同时检测心肌梗死范围.结果　I/R组细胞凋亡率[(43.33±4.92)%]较高,NE-P组及IP组虽然也有一定的心肌细胞凋亡率[(25.24±1.56)%、(24.44±2.96)%],但较I/R组明显降低(P＜0.001).IP组及NE-P组心肌梗死范围较I/R组明显减少,IP组及NE-P组两项指标无显著差异.结论　心肌缺血再灌注损伤可诱发心肌细胞凋亡,NE-P能明显减少缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡的发生率,能明显减少心肌梗死范围,减轻缺血再灌注损伤;NE-P减少心肌梗死范围、减轻缺血再灌注损伤的机理可能与其能明显减少心肌细胞凋亡有关.     

缺血再灌注损伤诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨大鼠心肌缺血再灌注后不同时相心肌细胞凋亡情况及其与缺血再灌注的关系，并进一步探讨心肌细胞凋亡在心肌缺血再灌注损伤中的可能作用。方法：64只SD大鼠随机分为5组：对照组（假手术45min、105min、165min、225min，各时间点n=8），心肌缺血45min组（I15min,n=8），心肌缺血45min后再灌注1h、2h、3h组（I／R1h、I／R2h、I／R3h，各时间点n=8），分别在各时点处死大鼠取材。应用DNA琼脂糖凝胶电泳分析与透射电镜的检测心肌细胞凋亡的改变。结果：DNA琼脂糖电泳分析显示，I／R2h组、I／R3h组出现凋亡特征性“梯状电泳带”而对照组、L45min组及I／R1h组均未见凋亡带谱。透射电镜检测显示，对照组、L45min组、I／R1h组均未见到凋亡的心肌细胞，I／R2h组、I／R3h组心肌细胞染色质凝聚、边集、核膜完整，显示出典型的凋亡特征。结论：心肌缺血再灌注可导致心肌细胞凋亡，心肌细胞凋亡因缺血再灌注不同时相而变化；心肌细胞凋亡在大鼠心肌缺血再灌注损伤的病理生理过程中起重要作用；大鼠心肌缺血后再灌注可促发或加速心肌细胞凋亡。     

大鼠心肌缺血再灌注中细胞凋亡及Bcl-2、C-myc的表达研究

目的观察心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡现象,研究Bcl-2、C-myc蛋白的表达情况。方法采用末端标记技术(TUNEL)标记凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bcl-2、C-myc蛋白的表达。结果在持续缺血和缺血再灌注大鼠心肌中,TUNEL法检测到大量的阳性细胞。随着再灌注时间的延长,大鼠心肌细胞凋亡数逐渐增多。持续缺血4.5 h组的心肌细胞凋亡数明显高于缺血30min再灌注4 h组的凋亡心肌细胞数。免疫组织化学法检测发现,与假手术组比较,持续缺血4.5 h组和缺血30min再灌注4 h组Bcl-2、C-myc蛋白的表达都增加,缺血再灌注组中Bcl-2蛋白表达明显上调,C-myc蛋白表达明显下调。结论心肌缺血再灌注中存在细胞凋亡现象,且心肌细胞凋亡与Bcl-2、C-myc蛋白的表达密切相关。     

腺苷预处理对缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的 研究腺苷预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响.方法 制备缺血/再灌注损伤(I/R)和腺苷预处理的大鼠模型,采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2和Bax.结果 ①缺血/再灌注组和腺苷组心肌细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组凋亡率显著低于缺血/再灌注组(P<0.01).②缺血/再灌注组抗凋亡蛋白Bcl-2表达与对照组比较无明显差别,而腺苷组Bcl-2显著高于缺血/再灌注组和对照组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组促凋亡蛋白Bax表达显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组Bax低于缺血/再灌注组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P<0.01),而腺苷组Bcl-2/Bax比值显著高于缺血/再灌注组(P<0.01).结论 腺苷预处理明显抑制大鼠缺血/再灌注后心肌细胞的凋亡,并使Bcl-2/Bax比值增加.     

血塞通预处理对心肌缺血再灌注损伤的早期保护作用

目的观察血塞通预处理对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的早期保护作用,并研究其可能机制.方法采用开胸冠状动脉结扎建立缺血再灌注模型,25只雄性SD大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注组(I/R组),缺血预处理组(IPC组),血塞通预处理组(PNS预处理组).再灌注后2 h测定各组血清肌酸磷酸激酶-MB(CK-MB)含量以及心肌细胞凋亡情况和心肌细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达,并观察心肌超微结构变化.结果IPC组及PNS预处理组血清CK-MB均明显低于I/R组(P＜0.05).IPC组及PNS预处理组TUNEL阳性细胞数,Bax阳性细胞数均明显低于I/R组(P＜0.05).和I/R组相比,IPC组及PNS预处理组心肌超微结构损伤减轻.结论PNS预处理后心肌细胞凋亡减少,心肌细胞损伤减轻,对I/R损伤产生有和缺血预处理类似的早期保护作用.     

黄芪抑制家兔心肌缺血再灌注时细胞凋亡的实验研究

目的：观察黄芪抑制家兔心肌缺血－再灌注时细胞凋亡的作用。方法：采用结扎冠状动脉左前降支后再通的方法,复制家兔心肌缺血－再灌注的动物模型,对心肌缺血－再灌注、黄芪治疗、心肌缺血、假手术等不同情况下心肌梗死面积（TTC法）、心肌细胞DNA电就凋亡细胞的形态（TUNEL法,电镜）进行了观察。结果：再灌注组和黄芪治疗组的梗死面积小于单纯缺血组;DNA电泳发现再灌注组呈凋亡的典型表现,单纯缺血组表现为细胞坏死,黄芪治疗组梯形条带中DNA含量较心肌缺血－再灌注组明显减少;TUNEL染色发现缺血组有散在阳性细胞,再灌注组有大量的阳性标记,且积聚成团,黄芪治疗组再灌注组明显减少;电镜观察发现再灌注组线粒体等细胞亚结构损伤严重,而黄芪治疗组则明显减轻。结论：缺血－再灌注可引起心肌细胞的凋亡,黄芪确实可抑制凋亡的发生。     

异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤后细胞凋亡及HSP70表达的影响

目的观察异丙酚对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的影响并探讨其作用机制。方法应用langendorff离体心脏灌注系统建立心肌缺血/再灌注损伤模型。40只SD大鼠随机分为正常对照组、缺血/再灌注模型(I/R)组、异丙酚15、30、60μmol/L组。除正常对照外,各组分别平衡灌注20min后,常温全心停灌25min,再灌注30min。Powerlab/8s仪记录各组平衡末、缺血前及再灌30min时心率(HR)、左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVDEP)、左室压力变化速率(±dp/dtmax)、冠脉流量(CF)等心功能指标;测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)活性;差速离心法提取心肌线粒体,测定线粒体活力、膜肿胀度、锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡,免疫组化法测定天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3和热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果异丙酚30、60μmol/L能明显改善缺血/再灌注后的心脏机械功能,降低冠脉流出液中LDH、CK的活性(P<0.05);异丙酚在30、60μmol/L浓度情况下心肌线粒体活力有所恢复,膜肿胀度减轻,Mn-SOD活性升高,MDA生成明显减少(P<0.05),心肌HSP70表达增多,心肌细胞凋亡率和caspase-3阳性细胞数明显减少(P<0.05)。结论异丙酚明显减轻缺血/再灌注所致的心肌线粒体的过氧化损伤,上调HSP70的表达,抑制caspase-3表达和心肌细胞凋亡的发生,可能是其心肌保护作用机制之一。     

氯沙坦、卡维地洛和人参对大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡的影响比较

目的通过比较氯沙坦、卡维地洛和人参对大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡数目的影响,了解氯沙坦、卡维地洛和人参对大鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的相对强度。方法制作成年Wistar大鼠心肌缺血再灌注模型,分为手术对照组、氯沙坦治疗组、卡维地洛治疗组、人参治疗组和假手术组共5组,分别予药物或生理盐水,于术后48 h处死取相同缺血再灌注区部位心肌检测计数凋亡细胞数。结果手术对照组、氯沙坦治疗组、卡维地洛治疗组、人参治疗组和假手术组心肌细胞凋亡数分别为37.53±8.75个/高倍视野、8.75±4.21个/高倍视野、7.63±3.97个/高倍视野、6.50±3.56个/高倍视野和0.18±0.91个/高倍视野,手术对照组、氯沙坦治疗组、卡维地洛治疗组、人参治疗组等缺血再灌注后心肌细胞凋亡数均显著高于假手术组(P<0.01),手术对照组显著高于氯沙坦治疗组、卡维地洛治疗组和人参治疗组(P<0.01),氯沙坦治疗组与卡维地洛治疗组心肌细胞凋亡数目无显著差异(P>0.05),卡维地洛治疗组与人参治疗组也无显著差异(P>0.05),但氯沙坦治疗组显著高于人参治疗组(P<0.05)。结论氯沙坦、卡维地洛和人参均可抑制缺血再灌注后的心肌细胞凋亡增加,人参和卡维地洛抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡作用可能优于氯沙坦,而人参和卡维地洛抑制缺血再灌注后心肌细胞凋亡作用可能基本相同。     

HSP70在无创性肢体缺血预适应中对心肌的保护作用

目的探讨无创性肢体缺血预适应对心肌梗死后心肌细胞凋亡及HSP70表达的影响。方法将健康成年雄性Wistar大鼠48只,随机平均分成4组:对照组(C),缺血再灌注组(I/R),经典缺血预适应组(IP),远程缺血预适应组(NDLIP)。各组分别在心肌梗死,再灌注过程中记录心电,再于实验末测定血清肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CKMB),最后取心脏以免疫组化法检测热休克蛋白70(HSP70),以TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,行心脏缺血范围(AAR)和梗死范围测定(IA),并计算梗死范围与缺血范围(IA/AAR)的比值。结果 (1)CK和CKMB:远程预适应组同经典预适应组的血清CK和CKMB值与缺血再灌注组相比明显下降(P<0.05);(2)心肌梗死面积(坏死区占缺血范围心肌重量的百分比):远程预适应组同经典预适应组的心肌梗死面积与缺血再灌注组相比明显下降(P<0.05);(3)凋亡率:远程预适应组同经典预适应组的凋亡率与缺血再灌注组相比明显下降(P<0.05);(4)HSP70:远程预适应组同经典预适应组的HSP70表达与缺血再灌注组相比表达增强(P<0.05)。结论远程缺血预适应同经典缺血预适应一样对大鼠心肌具有保护作用,其保护机制可能部分通过上调热休克蛋白以降低心肌细胞凋亡实现。     

L-NAME enhances microcirculatory congestion and cardiomyocyte apoptosis during myocardial ischemia-reperfusion in rats

Besides necrosis, apoptosis is the other major mode of cardiomyocyte loss in ischemic cardiovascular disease. In the present study, we examined the hypothesis that nitric oxide (NO) protects myocardial function by improving myocardial microcirculation and attenuating cardiomyocyte apoptosis in a rat model of myocardial ischemia/reperfusion (MI/R). The left main coronary artery of anesthetized male rats was ligated for 40 min, followed by 4 h reperfusion. Four groups of animals were studied: sham operated control + saline; sham operated control + N(W)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME); MI/R + saline; MI/R + L-NAME (10 mg/kg, iv, 10 min prior to reperfusion). Results show that MI/R caused a decrease in mean arterial blood pressure (MABP), cardiac index (CI), and stroke volume index (SVI). Inhibition of NO synthesis by L-NAME attenuated plasma NO levels, but increased MABP and SVR in sham control rats and rats subjected to MI/R, and further depressed left ventricular function in rats subjected to MI/R as indicated by decreased CI and SVI. Furthermore, administration of L-NAME to rats subjected to MI/R enhanced cardiomyocyte apoptosis as indicated by a significant increase in DNA fragmentation compared to rats with MI/R alone. Histological study revealed that L-NAME caused arterial constriction and congestion of red blood cells in arteries and capillaries in the peri-ischemic areas of the hearts in rats subjected to MI/R and, interestingly, also in the sham control rats. Data suggest that the mechanism of increased reperfusion injury may be attributable to a "no-reflow" phenomenon induced by L-NAME, resulting in increased cardiomyocyte apoptosis secondary to ischemia and enhanced cytochrome-c release from mitochondria. In addition, cardiac injury may be increased due to the augmented oxygen consumption of cardiomyocytes caused by the increased SVR and afterload. These results suggest that endogenous NO may act to improve myocardial microvascular perfusion, reduce SVR, and limit cardiomyocyte apoptosis, thereby, attenuating myocardial dysfunction induced by MI/R.     

Poly(ADP-ribose) polymerase contributes to the development of myocardial infarction in diabetic rats and regulates the nuclear translocation of apoptosis-inducing factor

Activation of the nuclear enzyme poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)-1 by oxidant-mediated DNA damage is an important pathway of cell dysfunction and tissue injury during myocardial infarction. Because diabetes mellitus can substantially alter cellular signal transduction pathways, we have now investigated whether the PARP pathway also contributes to myocardial ischemia/reperfusion (MI/R) injury in diabetes mellitus in rodents. Myocardial ischemia/reperfusion in control and streptozotocin-diabetic rats was induced by transient ligation of the left anterior descending coronary artery. PARP activation was inhibited by the isoindolinone derivative PARP inhibitor INO-1001. In diabetic rats, a more pronounced degree of myocardial contractile dysfunction developed, which also was associated with a larger infarct size, and significant mortality compared with nondiabetic rats. Inhibition of PARP provided a similar degree of myocardial protective effect in diabetic and nondiabetic animals and reduced infarct size and improved myocardial contractility. In diabetic rats, PARP inhibition reduced mortality during the reperfusion phase. There was marked activation of PARP in the ischemic/reperfused myocardium, which was blocked by INO-1001. In addition, there was a significant degree of mitochondrial-to-nuclear translocation of the cell death effector apoptosis-inducing factor (AIF) in myocardial infarction, which was blocked by pharmacological inhibition of PARP. The role of PARP in regulating AIF translocation in myocytes also was confirmed in an isolated perfused heart preparation. Overall, the current results demonstrate the importance of the PARP pathway in diabetic rats subjected to myocardial infarction and demonstrate the role of PARP in regulating AIF translocation in MI/R.     

超速起搏预处理对急性心肌梗死的延迟保护

目的　探讨超速心室起搏 (ventricularoverdrivepacing,VOP)预处理对急性心肌梗死的延迟保护作用 (delayedprotection ,DP)及可能机制。方法　 2 0只兔随机分为 4组 :(1)对照组 ,将电极导管送至右心室旷置 70min ,2 4h后结扎、冠状动脉左前降支造成缺血再灌注模型。 (2 )起搏组 ,缺血再灌注前 2 4h予VOP。 (3)放线菌素组 ,缺血再灌注前 2 4h静注放线菌素D阻滞热休克蛋白 (HSP)转录。 (4 )起搏 放线菌素组 ,延迟缺血再灌注前 2 4h予VOP并静脉注射放线菌素D ,缺血再灌注前后测定血流动力学变化 ,以TTC染色测量各组心肌梗死面积百分比 ,免疫组化染色间检测HSP70抗原 ,并观察心肌缺血再灌注后的组织学改变。结果　与对照组比较 ,起搏组心肌梗死面积减少 34 35 % (P <0 0 0 1) ,左心收缩和舒张功能均改善 ;心肌超微结构损伤减轻。其余组与对照组比较 ,在各项指标上差别无显著意义。HSP70免疫组化染色仅在起搏组心肌标本呈阳性。结论　多次VOP预处理对急性梗死心肌有明显的延迟保护作用 ,此作用与HSP70的表达密切相关。     

缺血预处理保护大鼠移植胰及与细胞凋亡的相关性

背景:胰腺移植过程中,缺血再灌注损伤会导致许多并发症,直接威胁着供胰和受体本身的存活,严重时可导致移植失败。缺血预处理可使靶器官在随后的缺血中得到保护,目前成为器官移植研究的热点之一。目的:观察缺血预处理对大鼠移植胰缺血再灌注损伤的早期保护作用及其与细胞凋亡的相关性。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第四军医大学西京医院胃肠外科、麻醉科。材料:雄性SD大鼠70只(250～320g),3～6个月。方法:实验于2001-09/2004-04在西京医院胃肠外科实验室完成。正常大鼠6只为对照组,糖尿病大鼠模型成功24只,采用随机数字法分为缺血再灌注组6只和缺血预处理1次组6只(缺血5min再灌注5min1次)、缺血预处理2次组6只(缺血5min再灌注5min2次)和缺血预处理3次组6只(缺血5min再灌注5min3次),缺血再灌注组和缺血预处理组均行单纯胰腺移植,24只SD大鼠为供体。主要观察指标:①各组大鼠再灌注前、后血糖;再灌注后2h血清中肿瘤坏死因子α和一氧化氮的含量、移植胰组织中超氧化物歧化酶,髓过氧化物酶和丙二醛含量。②用原位末端标记法观察移植胰组织细胞凋亡情况;WesternBlot法检测移植胰组织Bax和Bcl-2蛋白表达情况。结果:①各组大鼠再灌注前、后血糖变化:缺血再灌注组和缺血预处理各组较再灌注前血糖下降;缺血预处理2次组血糖显著低于缺血再灌注组、缺血预处理1次组和缺血预处理3次组(P<0.05)。②各组大鼠再灌注后2h血清中肿瘤坏死因子α含量:缺血预处理各组较缺血再灌注组血清中肿瘤坏死因子α含量低;缺血预处理2次组较缺血预处理1次组和缺血预处理3次组肿瘤坏死因子α含量低(P<0.05)。③各组大鼠再灌注后血清一氧化氮的含量:缺血预处理各组较缺血再灌注组血清中一氧化氮含量高;缺血预处理2次组较缺血预处理1次组和缺血预处理3次组一氧化氮含量高(P<0.05)。④各组大鼠再灌注后移植胰组织中超氧化物歧化酶含量:缺血预处理各组较缺血再灌注组超氧化物歧化酶活性高;缺血预处理2次组较缺血预处理1次组和缺血预处理3次组超氧化物歧化酶活性高(P<0.05)。⑤各组大鼠再灌注后移植胰组织中丙二醛和髓过氧化物酶含量:缺血预处理各组丙二醛含量和髓过氧化物酶活性较缺血再灌注组低;缺血预处理2次组较缺血预处理1次组和缺血预处理3次组低。⑥各组大鼠移植胰组织细胞凋亡情况:再灌注后缺血预处理各组较缺血再灌注组移植胰组织中凋亡指数值低;缺血预处理2次组显著低于较缺血预处理1次组和缺血预处理3次组(P<0.05)。⑦各组大鼠移植胰组织Bax和Bcl-2蛋白表达情况:再灌注后缺血再灌注组胰组织Bax蛋白高表达,Bcl-2蛋白低表达,缺血预处理各组再灌注后移植胰组织Bax蛋白低表达,Bcl-2蛋白高表达,而缺血预处理2次组Bcl-2蛋白表达最高,Bax蛋白表达最低。结论:缺血预处理对大鼠移植胰的缺血再灌注损伤具有早期保护作用,可能与提高超氧化物歧化酶的活性、增加内源性一氧化氮的合成、下调肿瘤坏死因子α和减轻多形核白细胞黏附与聚集有关;缺血预处理可以减少移植胰缺血再灌注后的细胞凋亡,可能与减轻多形核白细胞黏附与聚集、减少氧自由基、上调Bcl-2蛋白和下调Bax蛋白有关;缺血5min再灌注5min2次是最佳的大鼠移植胰缺血预处理诱导办法。     

缺血预处理大鼠自体肝移植后剩余肝细胞的凋亡和增殖

背景:肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞受到增殖和凋亡的双重调控.肝大部切除后,余肝经历缺血再灌注损伤,其肝再生受到明显抑制,缺血预处理可减轻此损伤,促进肝再生,其机制是否也与这有关,目前未见相关报道.目的:探讨缺血预处理对大鼠自体肝移植后余肝肝细胞凋亡和增殖的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-09/2007-07在中南大学湘雅医学院实验动物中心完成.材料:雄性SD大鼠144只,随机分为3组:单纯肝叶切除组、自体肝移植组、缺血预处理组,48只/组.方法:单纯肝叶切除组大鼠只行肝左、中叶切除,不阻断肝右、尾叶血流.自体肝移植组大鼠结扎切断肝后与食管腹段之间的静脉交通支,游离liberate尾状叶,游离第一肝门、肝上及肝下下腔静脉后,阻断并经门静脉持续低温灌注保存液,同时进行无血肝切除(切除肝左、中叶),肝脏在体持续低温灌洗15 min.解除肝门阻断,完全恢复肝脏血流.快速复温肝脏表面,并冲洗腹腔,缝合关腹.缺血预处理组大鼠在门静脉灌注前先阻断肝右、尾叶血流10 min,然后开放血流10 min,余步骤同自体肝移植组.各组大鼠分别于肝叶切除后0,1,3,6,12,24,48,72 h时取材.主要观察指标:生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶及天冬氨酸氨基转移酶的水平,流式细胞仪检测肝细胞凋亡指数,通过Ki-67抗原的表达检测肝细胞增殖情况.结果:与自体肝移植组比较,除肝叶切除后0 h 外,其余各时间点单纯肝叶切除组、缺血预处理组血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平均明显降低(P < 0.05).各组在肝叶切除后0 h(即正常肝组织)基本不存在凋亡细胞;单纯肝叶切除组肝大部切除后余肝肝细胞凋亡指数稍有升高;自体肝移植组复灌注后肝细胞凋亡指数急剧升高,约在12 h达到高峰,而后逐渐下降;与自体肝移植组比较,缺血预处理组肝细胞凋亡指数明显降低(P < 0.05).各组Ki-67表达率在肝叶切除后均明显升高,约在24 h达高峰,而后逐渐下降.与单纯肝叶切除组比较,自体肝移植组Ki-67表达率明显降低(P < 0.05);与自体肝移植组比较,缺血预处理组Ki-67表达率明显增高(P < 0.05).结论:缺血预处理可减轻自体肝移植后肝缺血再灌注损伤所致肝细胞凋亡,促进肝细胞增殖,这可能是其促进肝再生的机制之一.     

Role of autophagosomes clearance in delayed cardioprotection in rats with ischemia-reperfusion injury by sevoflurane preconditioning in vivo北大核心CSCD

Objective: To evaluate role of autophagosomes clearance in delayed cardioprotection by sevoflurane preconditioning in rats with ischemia-reperfusion injury in vivo. Methods: Forty-five adult male Sprague-Dawley rats, weighing 270-350 g, were randomly (random number) divided into 3 groups; sham operation group (sham group), ischemia-reperfusion group (CON group), sevoflurane preconditioning group (SWOP group). Myocardial ischemia was induced by 30 min occlusion of left anterior descending branch (LAD) of coronary artery followed by reperfusion for 2 h, and myocardial infarct size was stained by triphenyltetrazolium chloride. Cardiomyocyte apoptosis was evaluated by terminal deoxyribonucleotidyl transferase-mediated biotin-16dUTP nick-end labeling. Autophagosomes were detected under transmission electron microscope. Expression of LC3-II, cathepsin B, p62 and cleaved caspase-3 were assessed by western blotting. Statistical analysis were performed using one or two way analysis of variance (SPSS 15. 0, Chicago, USA) test followed by Dunnet-J or LSD-t test. Results: Sevoflurane preconditioning reduced myocardial infarct size and the number of autophagosomes (P = 0. 027), attenuated cardiomyocyte apoptosis (P = 0. 042). Sevoflurane preconditioning decreased the level of LC3-II (P = 0. 033), p62 (P = 0. 041) and cleaved caspase-3 (P = 0.037), but increased the level of cathepsin B (P =0.046). Conclusions: Delayed cardioprotection by sevoflurane preconditioning increased myocardial clearance of autophagosomes against the delayed ischemia reperfusion injury.     

热休克蛋白27介导异氟醚预处理延迟相对缺血/再灌注损伤兔心肌的保护作用研究

目的 探讨热休克蛋白27(HSP27)在异氟醚预处理延迟相对缺血/再灌注(I/R)兔心肌保护中的作用机制.方法 将30只新西兰大白兔随机分成假手术组(C组)、I/R组和体积分数为2%的异氟醚预处理组(S组)3组,每组10只.C组吸入纯氧2 h,24 h后仅行左冠状动脉(冠脉)套线而不阻断血流160 min;I/R组吸入纯氧2 h,24 h后结扎左冠脉前降支阻断血流40 min,再灌注120 min;S组吸入2%的异氟醚和纯氧2 h,24 h后处理同I/R组.再灌注后抽血测定各组丙二醛(MDA)含量;用伊文思蓝和氯化三苯四唑(TTC)染色法测定心肌梗死面积;用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)测定各组HSP27和核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达.结果 异氟醚预处理延迟相可降低I/R损伤心肌梗死面积[(19.7±2.8)%比(37.8±1.75)%],上调HSP27表达[(84.5±4.3)灰度值比(53.1±3.8)灰度值],下调NF-κB表达[(58.6±4.2)灰度值比(119.3±5.6)灰度值],降低MDA含量[(5.24±0.45)kU/L比(9.42±0.83)kU/L],差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 HSP27介导了异氟醚预处理延迟相对I/R心肌的保护作用.