miR-8在脑膜瘤中的表达及抑制脑膜瘤细胞增殖的机制

目的探讨miR-8在脑膜瘤组织中的表达及对脑膜瘤细胞增殖能力的影响。方法采用原位杂交检测miR-8在脑膜瘤及瘤旁组织中的表达;脂质体转染使IOMM-Lee脑膜瘤细胞过表达miR-8,采用噻唑蓝(MTT)法、克隆形成实验检测IOMM-Lee增殖活性。检索TargetScan数据库预测miR-8的靶基因;双荧光素酶报告基因系统验证Ras相关的C3肉毒素底物(RAC)1是miR-8的靶基因。结果 miR-8在脑膜瘤组织中的表达显著低于瘤旁组织(P0.001);Ⅲ级脑膜瘤中miR-8的表达显著低于Ⅱ级、Ⅰ级(P0.01);IOMM-Lee细胞过表达miR-8后,增殖抑制率、细胞克隆数目显著减少(P0.05);TargetScan预测及双荧光素酶报告基因系统证实RAC1是miR-8的靶基因。结论 miR-8通过与靶基因RAC1的3′UTR区结合,下调靶基因RAC1的表达,抑制脑膜瘤细胞增殖。     

MCPIP4诱导甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1周期停滞的机制

目的探讨RNA结合蛋白——单核细胞趋化蛋白诱导蛋白4(MCPIP4)在甲状腺乳头状癌细胞中的作用及机制。方法用脂质体转染法分别在甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞中过表达外源性MCPIP4或靶向人MCPIP4基因的shRNA, 并筛选稳定表达单细胞克隆;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞计量技术检测细胞周期;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测靶基因半衰期;RNA免疫沉淀法(RNA-IP)检测MCPIP4结合的靶基因mRNAs;荧光素酶报告基因实验检测靶向基因3′非编码区的能力。结果甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1中MCPIP4 mRNA表达水平显著低于正常甲状腺组织;过表达MCPIP4显著抑制TPC-1细胞增殖(P<0.05), 而敲低MCPIP4显著促进该细胞增殖(P<0.05);并分别显著增加或降低G1期细胞百分比(P<0.05);MCPIP4显著降低细胞周期素依赖性激酶(CDK)4、CDK6、周期蛋白D1和周期蛋白E1mRNAs的半衰期(P均<0.01);MCPIP4结合上述细胞周期相关基因(P<0.05);MCPIP4显著降低含不...     

siRNA沉默p28GANK对结肠癌细胞增殖的影响

背景：研究发现p28GANK表达与结肠癌恶性程度相关,其高表达提示预后不良。然而,p28GANK在结肠癌中的作用尚未完全明确。目的：探讨沉默p28GANK对结肠癌细胞增殖能力的影响。方法：以针对p28GANK基因的慢病毒携带siRNA转染人结肠癌HT29细胞,以蛋白质印迹法检测干扰效果,以MTr法检测细胞增殖,以平板克隆实验检测细胞克隆能力,以流式细胞术检测细胞周期变化。结果：与HT29、Con—HT29细胞相比,Si—HT29细胞中p28GANK蛋白表达水平显著降低;细胞增殖速度显著减缓;细胞克隆数量显著减少;G0／G1期细胞比例显著增多,S期细胞比例显著减少,PI值显著降低（P〈0．05）。结论：沉默p28GANK在结肠癌细胞中的表达可抑制细胞增殖能力,使细胞周期阻滞。p28GANK可作为治疗结肠癌的新靶点。     

p53对肝癌P-糖蛋白的表达和耐药表型的影响

目的 证明野生型p53调节肝癌细胞P－糖蛋白（p-glycoprotein,P-gp)表达的设想。方法 通过采用脂质体介导转染技术,将野生型p53 cDNA导入一种p53和Rb基因缺失的肝癌细胞株Hep3B。结果 经G418筛选获得稳定整合了野生型p53的克隆（wt-p53)和空载体克隆（pNeo);经northern和western印迹鉴定,wt-p53细胞表达p53;p21waf1/cip1蛋白的升高证实wt-p53细胞的p53有转录活性,并致使P－gp表达降低。细胞毒性试验表明：与pNeo细胞相比,wt-p53细胞对阿霉素和丝裂霉素化疗敏感。流式细胞仪显示：wt-p53细胞的阿霉素荧光量为pNeo细胞的13倍。结论 在肝癌细胞Hep3B中重建野生型p53的活性由于降低P－gp的表达而对化疗药敏感。     

分化拮抗非编码RNA-201对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的 探讨分化拮抗非编码RNA(DANCR)-201对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖的影响。方法 分离培养HUVECs后,构建过表达或敲低DANCR-201的细胞模型,采用长时间动态活细胞成像方法和细胞划痕实验检测HUVECs增殖和迁移能力。采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白Phospho-c-Raf和细胞周期蛋白p16、p53的表达。结果 过表达DANCR-201可促进HUVECs增殖[（67.1±5.4）%比（90.4±3.5）%,P <0.01]和迁移[（64.2±1.5）%比（88.6±3.1）%,P <0.05],同时细胞增殖相关蛋白Phospho-c-Raf表达水平升高（P <0.01）,细胞周期蛋白p16、p53表达水平均降低（P <0.01或0.05）。敲低DANCR-201对HUVECs增殖和迁移无影响,但细胞周期蛋白p16、p53表达水平均升高（P <0.01或0.05）。结论 DANCR-201促进HUVECs增殖,但其在动脉粥样硬化斑块形成中的作用机制仍需深入研究。     

miR-5188在肝癌细胞中的作用及网络调控机制研究

目的 探究miR-5188在肝癌细胞中的作用及网络调控机制。方法过表达或敲低miR-5188表达后,检测肝癌细胞HepG2的增殖能力。利用miRNA靶基因预测数据库miRDB获取miR-5188潜在的靶基因,使用小干扰RNA(siRNA)敲低HepG2细胞中的上述靶基因后检测细胞增殖能力。采用实时荧光定量PCR法检测正常肝细胞LO2和HepG2细胞中mi R-5188、pre-miR-5188和pri-miR-5188的表达水平,并分析长链非编码RNA NEAT1（下文简称NEAT1）、NONO/PSF复合体对pri-miR-5188的影响。结果过表达mi R-5188后,HepG2细胞的增殖能力增强;敲低miR-5188表达后,HepG2细胞的增殖能力减弱,差异均有统计学意义（P均<0.05）。敲低DIDO1表达后,HepG2细胞的增殖能力增强;过表达DIDO1后,HepG2细胞的增殖能力减弱,差异均有统计学意义（P均<0.05）。过表达miR-5188后,HepG2细胞中DIDO1的表达水平降低;敲低miR-5188表达后,HepG2细胞中DIDO1的表达水平升高,差异...     

PHB1对人肝癌细胞增殖的影响及其作用机制

目的探讨抗增殖蛋白1(prohibitin1,PHB1)对人肝癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法构建PHB1真核表达重组质粒(pEGFP-PHB1)和PHB1靶向siRNA质粒(shRNA-PHB1)转染人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721,诱导PHB1在人肝癌细胞中表达上调和下调,采用MTT、流式细胞学、荧光定量PCR和免疫印迹等技术检测人肝癌细胞增殖、细胞周期,以及细胞周期关键调控分子的表达情况。结果高表达PHB1可阻滞HepG2和SMMC-7721细胞于G0/G1期[(67.28±2.94)%比(56.71±2.56)%,t=6.64,P=0.00;(69.48±3.82)%比(60.43±2.59)%,t=4.80,P=0.00],使S期比例下降[(14.74±1.45)%比(24.13±1.92)%,t=9.54,P=0.00;(13.73±1.26)%比(25.50±2.30)%,t=10.99,P=0.00],抑制细胞增殖;周期调控分子p53和p21CIP1mRNA和蛋白质水平显著升高,而Cyclin A2、Cyclin E1和CDK2 mRNA和蛋白质水平显著降低(P0.01)。低表达PHB1可促使HepG2和SMMC-7721细胞趋于S期[(31.65±2.71)%比(24.68±1.28)%,t=5.69,P=0.00;(31.02±2.49)%比(25.88±2.40)%,t=3.64,P=0.005],促进细胞增殖;p53、p21CIP1、Cyclin A2、Cyclin E1、CDK2 mRNA和蛋白质水平与PHB1高表达时相反(P0.01)。结论高表达PHB1可以阻滞人肝癌细胞周期于G0/G1期,进而抑制细胞增殖,其作用机制可能与p53介导的G0/G1期相关细胞周期蛋白有关。     

miRNA-126质粒转染对甲状腺未分化癌细胞系8505C的影响

目的研究miR-126质粒转染对甲状腺未分化癌细胞系8505C的影响及具体机制。方法通过Hi Per Fect转染试剂分别转染miR-126质粒和空质粒至8505C细胞,细胞分组为miR-126组(miR-126)和对照组(control),MTS细胞增殖实验测定细胞24h,48h,72h的增殖情况,细胞克隆实验测定比较两组细胞2周生成的细胞克隆团块数量,蛋白免疫印迹法测定两组细胞p85β蛋白表达,PI3K-AKT通路的表达情况。结果 MTS试验示:质粒转染后72h,miR-126组细胞增殖下降达到峰值(65.14±1.31%VS100.00±2.09%,P0.0001);细胞克隆实验示:与对照组相比,miR-126组细胞克隆团数量明显下降(67.31±9.34%VS100.00±8.13%,P0.05);蛋白免疫印迹实验发现miR-126组p85β表达量下降了41.31±2.18%(P0.0001),p-AKT表达量下降了35.84±1.75%(P0.0001)。结论 miR-126质粒转染有效抑制了甲状腺未分化癌细胞系8505C的增殖和克隆,其机制为miR-126作用其靶基因PIK3R2,抑制了PI3K-AKT通路活化。     

miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞生长的调控作用

背景miR-145-3p在头颈癌、肺癌和胃癌等肿瘤可发挥抑癌的作用,而其在肝癌中的表达和作用并不清楚.目的探讨miR-145-3p在肝癌中的表达及其对肝癌细胞的增殖与凋亡的调控作用.方法用RT-q PCR法检测肝癌组织、癌旁组织、肝细胞株(Hep3B、Huh-7、Hep G2和SMMC-7721)与正常肝细胞株L-02中miR-145-3p的表达水平;将miR-145-3pmimic或miR-145-3pinhibitor转入Hep3B细胞,用CCK-8法、流式细胞术、TUNEL法和Westernblot法分别检测细胞活力、细胞周期、细胞凋亡和4型黏蛋白(mucin4, MUC4)表达.用荧光素酶报告基因实验鉴定miR-145-3p的靶基因.将pc DNA-MUC4转入已转染miR-145-3p mimic的细胞,用CCK-8法和TUNEL法分别检测细胞活力与细胞凋亡.结果miR-145-3p在肝癌组织和细胞中呈低表达.过表达miR-145-3p能抑制细胞增值和G0/G1期到S期转换,促进凋亡和降低MUC4表达;而敲减miR-145-3p则作用相反. MUC4是miR-145-3p的靶基因.过表达MUC4能逆转miR-145-3p mimic对细胞存活的抑制作用.结论miR-145-3p在肝癌低表达,且其表达与T分期呈负相关.过表达miR-145-3p可抑制肝癌细胞存活与生长,而敲减miR-145-3p能促进肝癌细胞存活与生长.     

YWHAE对结肠癌细胞增殖的影响及表达意义

目的:探讨YWHAE基因表达与结肠癌细胞增殖的关系及其在结肠癌组织中表达的临床意义.方法:应用免疫组织化学探讨YWHAE过表达与结肠癌转移、分化及分期的关系;慢病毒转染小RNA沉默结肠癌HT-29细胞YWHAE基因,RT-PCR、Western blot技术检测沉默效率;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(methyl-thiazolyl-tetrazolium,MTT)技术观察转染前后细胞增殖变化;流式细胞术检测转染前后细胞周期变化及凋亡情况;细胞克隆实验检测转染前后细胞克隆形成情况.结果:YWHAE在结肠癌组织中高表达,在癌旁5 cm处黏膜正常腺体中低表达或表达缺失(P0.001),发生转移的结肠癌YWHAE表达要明显高于未转移的结肠癌组织(P0.05);高效转染、沉默YWHAE基因表达后,结肠癌HT-29细胞长速度明显减慢(P0.01),细胞凋亡增加,细胞周期阻滞于G1期,细胞克隆形成率显著降低(P0.01).结论:沉默YWHAE基因表达能抑制结肠癌细胞增殖,可能与促进肿瘤细胞凋亡及细胞周期阻滞有关.     

HBx基因下调p21对HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的:构建转基因细胞模型HepG2/HBx,观察HBx基因对HepG2细胞增殖、周期和凋亡的影响, 探讨细胞周期蛋白P21在其中的作用和意义.方法:应用脂质体转染和G418筛选构建稳定表达HBx的转基因细胞HepG2/HBx,RT-PCR和Western blot鉴定HBx mRNA与蛋白的表达.分别以四唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测HepG2/HBx细胞及对照组HepG2与HepG2/pcDNA3.1细胞(转染空载体pcDNA3.1的HepG2细胞)的增殖、周期和凋亡.另半定量RT-PCR检测各组细胞中细胞周期蛋白P21与抑癌基因p53mRNA的表达.结果:HepG2/HBx细胞中有HBx mRNA和蛋白的表达.HepG2/HBx细胞生长速度加快.HepG2/HBx中G0/G1期细胞比例较对照组显著减少(43.34%±3.11%vs57.69±4.28%,P<0.01),S期细胞比例明显增加(28.69%±1.17%vs22.41%±1.99%,P<0.05),同时还发现与对照组相比其凋亡率也显著降低(1.19%±0.06%vs 5.43%±0.42%, P<0.001).细胞周期蛋白p21 mRNA在HepG2/HBx细胞中的表达较对照组细胞显著降低(0.16±0.05vs0.78±0.15,P<0.001),而p53表达则无显著变化.结论:HBx基因可下调细胞周期蛋白P21mRNA的表达,可能参与HBx基因加速HepG2细胞周期进程、促进细胞增殖以及抑制细胞凋亡的作用.     

COL8A1通过竞争性结合miR-876调控SUZ12的表达从而促进胃癌细胞增殖

目的 筛选胃癌中具有显著临床意义的潜在靶基因,探究其在胃癌发生发展中的功能和潜在分子机制.方法 通过GEPIA数据库检索对胃癌发生发展具有重要意义的目的基因;采用免疫组化染色法及qRT-PCR检测目的基因在胃癌组织及胃癌前病变组织中的表达;通过siRNA介导敲低目的基因,利用细胞增殖实验和克隆形成实验验证其在胃癌发生发...     

毛花苷C促进肝癌SMMC-7721细胞凋亡及抑制survivin的表达

目的:通过毛花苷C作用于人肝癌SMMC-7721细胞,研究其对SMMC-7721细胞增殖的影响初步探讨其作用机制.方法:使用不同浓度毛花苷C干预S M M C-7721细胞,通过细胞增殖实验及克隆形成实验,检测毛花苷C对SMMC-7721细胞增殖的作用;通过流式细胞仪检测毛花苷C对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响;采用Western blot技术分析细胞凋亡抑制基因survivin的表达.结果:毛花苷C对SMMC-7721细胞增殖有明显的抑制作用,各加药组与对照组相比差异有统计学意义(P0.01),并呈现剂量-效应相关关系;流式细胞术显示,毛花苷C将S M M C-7721细胞阻滞于S期,并诱导其凋亡;Western blot检测结果显示毛花苷C下调SMMC-7721细胞内survivin蛋白的表达.结论:毛花苷C明显抑制SMMC-7721细胞增殖,将细胞阻滞在S期并诱导其凋亡.该机制可能与下调survivin的蛋白表达有关.     

辛伐他汀抑制HepG2细胞增殖作用的机制

目的 体外观察辛伐他汀对人肝癌细胞HepG2增殖、细胞周期及细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察辛伐他汀对HepG2细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测辛伐他汀对细胞周期的作用,用免疫细胞化学法观察辛伐他汀对细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p2l蛋白表达的影响.对数据进行析因设计与单因素方差分析.结果 体外辛伐他汀可抑制HepG2细胞的增殖(F浓度=1264,P＜0.001 ;F时间=17.466,P＜0.001;F浓度*时间=35.053,P＜0.001).辛伐他汀处理组G0/G1期细胞增多,但细胞凋亡不明显;体外辛伐他汀可增强HepG2细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白的表达(F=512.133,P＜0.001).结论 体外辛伐他汀对HepG2细胞增殖有抑制作用,该作用可能与其使细胞生长阻滞于G0/G1期及增强细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子p21蛋白表达有关.     

miR-126-3p靶向AKT2对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-126-3p(miR-126-3p)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常葡萄膜组织及葡萄膜黑色素瘤组织中miR-126-3p的表达。采用葡萄膜黑色素瘤MUM2B细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-126-3p mimics及其阴性对照miR-NC、si-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2及其阴性对照si-NC,分别记为miR-126-3p组、miR-NC组、si-AKT2组、si-NC组。甲基噻唑基四氮唑(MTT)、平板克隆形成实验检测增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;靶基因预测miR-126-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶基因,Western印迹检测AKT2蛋白表达。MUM2B细胞中共转染miR-126-3p mimics与AKT2过表达载体,用以上方法检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果 与正常葡萄膜组织相比,miR-126-3p在葡萄膜黑色素瘤组织中表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-126-3p mimics或si-AKT2后MUM2B细胞...     

白花蛇舌草多糖对Bel7402细胞基因表达的影响

目的探讨白花蛇舌草多糖（HDP）对体外培养的人肝癌Bel7402细胞诱导凋亡的作用及可能的作用机制。方法人肝癌Bel7402细胞常规体外培养，设空白对照组、5-氟尿嘧啶（5-FU）凋亡对照组、HDP组。观察细胞形态变化，采用MTT法检测抑制率。RT—PCR法检测bel-xl、p53基因mRNA表达的变化。结果HDP抑制人肝癌Bel7402细胞生长、促进细胞凋亡，与空白对照组相比有显著差异（P〈0．01）；上调p53基因mRNA表达，降低bcl-xl基因mRNA表达，与空白对照组相比有显著差异（均P〈0．01）。结论HDP抑制人肝癌Bel7402细胞增长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与激活抑癌基因p53、抑制原癌基因bcl-xl表达有关。     

miR-34c-3p调控脑胶质瘤细胞增殖、分化、凋亡的机制研究

目的探讨miR-34c-3p调控脑胶质瘤U87细胞增殖、分化、凋亡的机制。方法用脂质体分别将miR-34c-3p mimics和miR-34c-3p inhibitors转入U87细胞中,用RT-PCR检测转染效果;用MTT检测转染miR-34c-3p对U87细胞增殖的影响;用平板克隆法检测转染miR-34c-3p对U87细胞分化的影响;用流式细胞仪检测转染miR-34c-3p对U87细胞凋亡的影响;通过Pic Tar、miRanda和Target Scan靶基因预测库预测miR-34c-3p的靶基因,用双荧光素酶表达系统进行靶基因鉴定,RT-PCR检测转染miR-34c-3p对靶基因mRNA表达的影响,Western-blot检测转染miR-34c-3p对靶基因蛋白表达的影响。结果 miR-34c-3p在U87细胞中的表达显著低于正常胶质细胞,转染miR-34c-3p mimics后,U87细胞miR-34c-3p mRNA的表达上调,细胞存活率降低,细胞形成克隆的能力下降,细胞凋亡率升高,与对照组相比均具有显著性差异;转染miR-34c-3p inhibitors后,U87细胞miR-34c-3p mRNA表达量下降,细胞存活率显著升高,细胞形成克隆的能力上升,细胞凋亡率下降,与对照组相比差异均具有显著性。靶基因库预测Notch2是miR-34c-3p的靶基因,转染miR-34c-3p mimics后,Notch2的mRNA表达和蛋白表达下降,转染miR-34c-3p inhibitors后,Notch2的mRNA表达和蛋白表达上升,共转染miR-34c-3p mimics和wt Notch2后荧光素酶活性显著降低,与对照组相比均具有显著性差异。结论 miR-34c-3p通过靶基因Notch2抑制脑胶质瘤U87细胞的增殖、分化,促进细胞凋亡。     

PRL-3基因对结直肠癌细胞增殖能力的影响

目的:探讨PRL-3的过表达或敲低对结直肠癌细胞增殖能力的影响.方法:利用MTT法、平板克隆形成实验检测PRL-3对细胞体外增殖的影响;应用流式细胞术检测PRL-3对细胞周期的影响.结果:应用MTT法,检测PRL-3对SW480/EGFP、SW480-EGFP-PRL-3、SW480/EGFP/Mock及SW480-PRL-3-KD1细胞体外增殖能力的影响,经析因方差分析,4组差异具有显著性(F=23.463,P=0.000);不同时间点对细胞体外增殖的影响差异具有显著性(F=71.515,P=0.000);各组细胞与各时间组两因素交互效应显著(F=2.128,P=0.008);除第1天外,其他各时间点细胞组间的细胞增殖差异具有显著性.经LSD法多重比较,结果表明,与SW480/EGFP/Mock和SW480/EGFP细胞相比,SW480-EGFP-PRL-3细胞的增殖速度加快,而SW480-PRL-3-KD1细胞的增殖速度减慢.平板克隆形成实验显示SW480-EGFP-PRL-3细胞克隆形成能力明显增强,而SW480-PRL-3-KD1细胞克隆形成能力显著下降,差异具有显著的统计学意义(F=44.411,P=0.000).结论:PRL-3基因可促进结直肠癌细胞的增殖.     

miR-485-5p通过靶基因FLOT2调控甲状腺癌细胞增殖、凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-485-5p(miR-485-5p)靶向脂筏标记蛋白(FLOT)2对甲状腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法采用qRT-PCR与Western印迹分别检测不同甲状腺癌细胞及正常甲状腺上皮细胞中miR-485-5p与FLOT2 mRNA及蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测甲状腺癌SW579细胞转染miR-485-5p mimic、miR-NC、si-FLOT2、si-NC后的细胞增殖活性,并采用流式细胞术检测细胞凋亡率。采用双荧光素酶活性检测鉴定miR-485-5p与FLOT2的靶向关系。Western印迹检测SW579细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、p27、B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-caspase)-3蛋白表达。结果与TEC细胞相比,甲状腺癌细胞SW579、FTC-133、KAT-18中miR-485-5p的相对表达量显著降低(P0.05),而FLOT2 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.05);miR-485-5p过表达或抑制FLOT2表达后SW579细胞OD值、CyclinD1及Bcl-2蛋白表达均显著降低(P0.05),细胞凋亡率、p21、p27及Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达均显著升高(P0.05);双荧光素酶活性检测鉴定FLOT2是miR-485-5p的靶基因,miR-485-5p可负向调控FLOT2表达;FLOT2过表达可逆转miR-485-5p过表达对甲状腺癌SW579细胞增殖及凋亡的作用。结论 miR-485-5p通过负向调控靶基因FLOT2抑制甲状腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

背景 miR-132-3p在肿瘤中呈低表达,但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer,GC)发生过程中的调控机制尚未阐明.Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因.本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.目的探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平;以BGC-823细胞为研究对象,利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA(miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pc DNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞,通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果.甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭;Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因,分别将野生型Gab2基因3’UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞,双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.结果与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P0.05), Gab2的表达水平显著升高(P 0.05);与miR-NC组相比,miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P 0.05),P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P 0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因;与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P 0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P0.05), Cyclin D1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.05).结论 miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.