三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗白血病的疗效机理。该当以ＨＬ－６０细胞株为体外模型，终浓度为０．２０μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３作用２４、４８ｈ后，用ＰＩ／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ双标记，流式细胞术观察Ａｓ２Ｏ３对ＨＬ－６０细胞凋亡及其对细胞株端粒酶活性的影响。结果：Ａｓ２Ｏ３作用于ＨＬ－６０细胞后ＰＩ阴性／ＡｎｎｅｘｉｎＶ－ＦＩＴＣ细胞性细胞增多，提示细胞发生凋亡，ＤＮＡ周期分析显示主要作用在     

中药复方双草退黄冲剂1号抗鸭乙型肝炎病毒作用的实验研究

目的：研究中药复方双草退黄冲剂１号（ＳＣＧ－１）对鸭乙型肝炎病毒的体内抗病毒作用。方法：以感染鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）的广州麻鸭为实验动物模型。１日龄广州麻鸭感染ＤＨＢＶ，１３天后血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ全部阳性，给予ＳＣＧ－１治疗１４天，于感染后第１３天（为用药前），用药７、１４天及停药后３天分别采血，采用斑点杂交方法检测血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ。结果：ＳＣＧ－１１０ｇ／（ｋｇ· ｄ）组，用药７、１４天鸭血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ　ＯＤ值均明显低于给药前，有显著性差异（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１）；ＳＣＧ－１５ｇ／（ｋｇ．ｄ）组用药１４天血清ＤＨＢＶ－ＤＮＡ ＯＤ值亦明显低于用药前（Ｐ＜０．０５），但两组停药后３天均有反跳现象。结论：ＳＣＧ－１用药期间有一定的抑制ＤＨＢＶ－ＤＮＡ复制作用。     

血管通对实验性动脉粥样硬化家兔血管壁血小板衍化生长因子A、B及c－myc基因表达的影响

本实验采用斑点印迹杂交和原位杂交技术，进一步探讨血管通对与血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生相关基因表达的影响。结果表明，高脂组家兔血管壁血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ的ｍＲＮＡ呈高表达，杂交阳性颗粒主要分布在动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块边缘区及新生斑块区的ＳＭＣ胞浆内，而血管通组家兔血管壁ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ表达水平明显低于高脂组；高脂组血管斑块组织ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平亦比正常组高，血管通组血管壁ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平下降。上述结果初步说明血管通可能是通过影响血管壁ＰＤＧＦ－Ａ、ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平，以抑制ＶＳＭＣ增生，阻止ＡＳ形成。     

芦笋有效成分熊果酸诱导HL-60细胞凋亡的实验研究

目的：探讨芦笋有效成分熊果酸对ＨＬ－６０细胞增殖、凋亡的影响。方法：Ｅ和ＭＴＴ法、ＤＮＡ凝胶电泳、形态学方法等测定熊果酸对ＨＨＬ－６０细胞增殖、凋亡的影响。结果：熊果酸抑制ＨＬ－６０细胞增殖，对ＨＬ－６０细胞的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为８．２６μｍｏｌ／Ｌ，并能导其发生凋亡结论：熊果酸通过抑制ＨＬ－６０细胞增殖和诱导其凋亡发挥抗肿瘤作用。     

血管通对实验性动脉粥样硬化家兔血管壁血小板衍化生长因子…

本实验采用斑点印迹杂交和原位杂交技术，进一步探讨血管通过与血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增生相关基因表达的影响。结果表明，高脂组家兔血管壁血小板衍化生长因子（ＰＤＧＦ）－Ａ的ｍＲＮＡ呈高表达，杂交阳性颗粒主要分布在动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块边缘区及新生斑块区的ＳＭＣ胞浆内，而血管通组家兔血管壁ＰＤＧＦ－ＡｍＲＮＡ表达水平明显低于高脂组；高脂血管斑块组织ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ表达水平亦比正常组高，血管通组血     

肝豆片Ⅰ号治疗肝豆状核变性临床疗效观察

目的：观察肝豆片Ⅰ号治疗肝豆状核变性（ＨＬＤ）临床疗效及对其２４ｈ尿微量元素的影响。方法：口服肝豆片Ⅰ号治疗 ３４例 ＨＬＤ ４周，密切观察患者症状、体征及日常生活的变化，并测定患者治疗前及治疗后每周 ２４ｈ尿微量元素含量。结果：总有效率为 ７０．５９％，显效率为８．８２％。对儿童及（或）病情较轻的患者疗效较好。治疗后每周的２４ｈ尿排铜量均较治疗前显著增加（ Ｐ＜ ０．０１）；虽然其 ２４ｈ尿排铜量和疗程是负相关（ ｒ＝－ ０．９６； Ｐ＜ ０．０５），但是治疗后各周之间的 ２４ｈ尿排铜量两两比较无明显差异（Ｐ＞０．０５），故其尿排铜作用无减弱。结论：肝豆片Ⅰ号治疗 ＨＬＤ有效，能促进 ＨＬＤ尿铜的排泄，且未见明显毒副作用。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导HL60细胞程序性死亡

目的：探讨儿茶素类化合物的抗癌作用机制。方法：以儿茶素的主要成分表没食子儿茶素没食子酸酯（ＥＧＣＧ）为实验材料，使用噻唑蓝（ＭＴＴ）还原法，ＤＮＡ凝胶电泳，透射电镜技术，观察了ＥＧＣＧ对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ６０）程序性死亡的影响。结果：０．５５×１０－３ｍｏｌ·Ｌ－１ＥＧＣＧ作用５ｈ后，琼脂糖凝胶电泳下，ＨＬ６０细胞呈现典型的ＤＮＡ条带，透射电镜观察到凋亡小体。结论：ＥＧＣＧ对ＨＬ６０细胞程序性死亡的诱导活性平行于它的细胞杀伤作用     

流式细胞仪检测清开灵注射液及其有效成分诱导HL-60细胞凋亡及其机理研究

我们通过流式细胞仪检测证明：清开灵注射液及其有效成分黄芩甙、猪去氧胆碱体外作用以诱导ＨＬ－６０细胞凋亡为主,体外作用６ｈ可诱导产生凋亡早期蛋白ＡｎｎｅｘｉｎＶ,并同时增加Ｆａｓ蛋白表达,降低ｂｃｌ－２蛋白表达（Ｐ〈０．０１）。牛黄胆酸可同时上调Ｆａｓ和ｂｃｌ－２表达,无明显诱导细胞凋亡作用。     

电针对缺血性脑血管病血清β2—MG含量的影响

通过对４０例缺血性脑血管病（ＩＣＶＤ）患者电针治疗前后血清β２－微球蛋白（β２－ＭＧ）含量的研究，发现ＩＣＶＤ患者电针治疗前血清β２－ＭＧ含量较正常对照组显著升高（Ｐ＜０．０１）；电头针能显著降低患者血清β２－ＭＧ含量，使之接近正常值（Ｐ＜０．０１）；电体针治疗后血清β２－ＭＧ含量较治疗前亦显著降低（Ｐ＜０．０１），但仍明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。提示血清β２－ＭＧ含量可作为ＩＣＶＤ病情预后的指标之一，并对电针降低该指标的机理展开讨论。     

隔药灸治疗慢性溃疡性结肠炎的疗效与结肠粘膜免疫学研究

本研究采用隔药灸治疗慢性溃疡性结肠炎３０例，总有效率９６．７％，明显优于西药对照组（７５％）。结肠粘膜Ｔ８＾＋细胞明显低于正常组（Ｐ〈０．０１），肠上皮细胞均有不同程度的ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，提示溃疡性结肠炎患者存在肠粘膜局部免疫功能紊乱。隔药灸能有效纠正肠粘膜的异常免疫反应，其作用机制可能是通过抑制或和消除肠上皮细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，增加Ｔ８＾＋细胞数，调整Ｔ淋巴细胞亚群间的比例有关。     

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??OBJECTIVE To investigate the protection of hepatocyte growth factor (HGF) on CML cell line K562 from apoptosis induced by etoposide (VP-16) and its molecular mechanism. METHODS Quantitative and qualitative analyses on cell morphological change of apoptosis were performed through acridine orange (AO) staining and HE staining, and fluorescent flow cytometry.The test analyzes membrane on the surface of the PS evagination and integrity of cell membrane surface and mitochondrial membrane potential changes were performed through Annexin V-FITC/PI double dyeing and JC-1 cell dyeing tests, and apoptotic factors such as Bcl-2, Bax, Caspase-3 and Caspase-9 were measured by SYBR Green (Takara) qRT-PCR. RESULTS The HE and AO staining revealed that apoptotic rates in HGF+VP-16 groups were significantly lower than those in VP-16 groups (P<0.05,P<0.05), HGF can inhibit the apoptosis of cells induced by VP-16; FCM (Annexin V-FITC/ PI and JC-1) tests showed that cells apoptotic rates in HGF+VP-16 groups were significantly lower than those in VP-16 groups (P<0.05,P<0.001), indicating that HGF has the anti-apoptosis function. Apoptosis related gene mRNA expression tests found that the Bcl-2 mRNA expression in HGF+VP group was obviously higher than that in the VP-16 group (P<0.001), while Bax mRNA, Caspase-3 mRNA, and Caspase-9 mRNA expressions were significantly lower than those in the VP-16 group (P<0.05, P<0.001, P<0.001),suggesting that HGF possesses antiapoptotic effect through inhibiting apoptosis gene expression and promoting the antiapoptotic gene expression simultaneously. CONCLUSION HGF can significantly protect K562 cells from apoptosis induced by VP-16 through the HGF/c-Met way to regulate PI3K/AKT pathway.     

雷公藤内酯醇对K562细胞增殖周期的影响及对比研究

目的探讨雷公藤内酯醇抑制 K562细胞增殖的机理。方法选用 K562细胞株,运用细胞培养、MTT 法及流式细胞仪研究不同浓度雷公藤内酯醇、足叶乙甙(VP-16)对 K562细胞增殖及细胞周期的影响。结果雷公藤内酯醇能抑制 K562细胞的增殖,呈时间与剂量依赖性,且具有上调 K562细胞 G_1/S 检测点的能力。而 VP-16作用点是 G_2/M 期。结论雷公藤内酯醇有明确的抗白血病细胞增殖的能力,能干扰 K562细胞 G_1/S 检测点的转换,与 VP-16作用点不同。     

人参总皂甙增加白血病细胞对化疗药物的敏感性

目的：探讨人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）化疗药物敏感性的作用。方法：采用白血病祖细胞集落形成（ＣＦＵ－ＡＭＬ）药敏试验法。选用４种化疗药物：高三尖杉酯碱（ＨＨｒ）、阿糖胞苷（Ａｒａ）、阿霉素（Ａｄｒ）和足叶乙甙（Ｖｐ－１６）。结果：ＴＳＰＧ刺激ＣＦＵ－ＡＭＬ在体外增殖，集落数提高３７．９８％，使化疗药物对ＣＦＵ－ＡＭＬ的抑制率从原先的３０．４％￣４７．４％分别提高到５１．２％￣     

当归对黑色素瘤细胞粘附、侵袭、运动和转移能力的影响

目的:研究中药当归对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法测定当归对B16-BL6细胞增殖能力的影响,采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察当归对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:当归水提液能显著抑制B16-BL6细胞的增殖;对B16-BL6细胞与基底膜成分LN的粘附有双向调节的作用;对B16-BL6细胞穿越基底膜的运动能力有显著抑制作用但对B16-BL6细胞侵袭基底膜能力没有显著影响。低剂量当归能明显减少小鼠肺转移结节数目,减轻肺转移程度。结论:当归提取液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,作用可能与其能够抑制B16-BL6细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的运动能力有关。     

大鼠原位肝灌流及体外肝微粒体温孵研究对甲基苯磺酰胺代谢的影响因素

 目的研究抗肿瘤新药对甲基苯磺酰胺(PTS)肝代谢过程中对大鼠CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2的影响,P-糖蛋白抑制剂对PTS代谢的影响,PTS合并用药时的代谢变化。方法♂Wistar大鼠分组ip苯巴比妥,酮康唑和维拉帕米连续给药3 d后肝灌流PTS 25μmol·L^-1,比较空白组与各处理组PTS代谢变化。♂Wistar大鼠分组ip PTS 33和99 mg·kg^-1·d^-1连续给药4 d后分别肝灌流CYP3A2,CYP2D1底物右美沙芬和CYP1A2底物非那西丁。比较空白组与PTS处理组对CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2活性的影响。体外实验右美沙芬40μmol·L^-1和非那西丁20μmol·L^-1与不同浓度的PTS在空白微粒体中温孵。PTS与不同浓度依托泊苷(VP-16),氟尿嘧啶(5-FU)在空白微粒体中温孵。结果苯巴比妥诱导组PTS代谢加快,酮康唑组代谢减慢。右美沙芬和非那西丁代谢在温孵反应中与空白组无显著差别。依托泊苷体外实验中抑制PTS代谢达50.7%,氟尿嘧啶对PTS代谢没有影响。结论大鼠原位肝灌流是良好的整体器官药物代谢模型,是体外实验有力的补充。PTS大鼠肝代谢与CYP450相关。PTS代谢不影响CYP3A2,CYP2D1,CYP1A2活性。P-糖蛋白抑制剂不影响PTS在实验条件下的代谢。合并用药的依托泊苷对PTS肝代谢有显著抑制。     

β-环糊精与依托泊苷相互作用的紫外-可见光谱研究

目的：研究β-环糊精（β-CD）与依托泊苷（VP-16）之间的超分子包结作用机理,建立新的定量检测微量VP一16的方法。方法：采用紫外-可见光光谱法研究了β-CD与VP-16之间的超分子包结作用。考察了时间、温度和浓度对包结反应的影响。结果：VP-16在284nm处有最大吸收光,与B—CD形成1：1的超分子包结物后,其吸收光强度增大,β-CD对VP-16有吸收光增敏作用。在20℃,pH7．0时,包结常数K=5．32×10^4L·mol^-1,且包结常数随温度升高而减小,该包结反应属焓驱动的自发的放热反应。     

低抗凝肝素来源低分子肝素的研制及药代动力学

 以低抗凝肝素为来源，按生产要求设计工艺，制备了平均分子量为6000d的低分子肝素，测定了其理化指标、抗凝效价和抗FXa活性，研究了其抗血栓形成作用和药代动力学。结果表明，该低分子肝素具有较强的抗FXa活性和抗血栓形成作用，体内生物半衰期长。     

左归丸对肾虚仔鼠胸腺内CD4-CD8-T细胞分化的影响

目的:研究左归丸对肾虚仔鼠发育过程中CD4-CD8-T细胞在胸腺内分化的影响以及补肾填精法的应用价值,探索“肾为先天之本”的理论内涵。方法:采用大鼠2∶1进行雌雄配对,3种应激法复合构建肾虚模型,将孕鼠分为正常组,模型组,胸腺肽组(0.003 g·kg^-1),左归丸低、高剂量组(2,8 g·kg^-1)。正常组不造模给予生理盐水灌胃;模型组造模给予生理盐水灌胃,胸腺肽组造模给予胸腺肽胶囊溶液灌胃,左归丸低、高剂量组造模给予左归丸悬浊液灌胃,选取胚胎16,19 d及出生第1天(E16,E19,P1)3个时期,计算仔鼠胸腺指数,电镜观察仔鼠胸腺上皮细胞超微结构形态,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测仔鼠胸腺内胸腺肽β4(TMSβ4)和胸腺肽α1(Tα1)的含量,流式细胞学检测仔鼠胸腺细胞表面CD4,CD8,CD25,CD44表达以鉴定T细胞类型。结果:电镜下模型组胸腺上皮细胞形态不规则,细胞核变形,核染色质明显聚集增加,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺上皮细胞变形不明显;ELISA法检测结果显示,与正常组比较,模型组不同时期的TMSβ4,Tα1含量明显降低(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组胸腺内TMSβ4和Tα1的含量明显升高(P<0.05);流式细胞检测显示,与正常组比较,模型组在E16,E19,P13个时期CD4^-CD8^-T细胞均明显增加(P<0.05),CD4^-CD8^-CD25^-CD44^-T(DN4)明显增加(P<0.05);与模型组比较,胸腺肽组和左归丸低、高剂量组在E16,E19,P1时期CD4-CD8^-T细胞均明显减少(P<0.05),同时DN4也明显减少(P<0.05)。结论:左归丸可以改善肾虚仔鼠胸腺上皮细胞的结构,并通过增加仔鼠胸腺内TMSβ4和Tα1的分泌诱导胚胎期胸腺内T细胞从DN4至DP阶段的分化,说明左归丸通过补肾填精,促进T细胞发育成熟,调节仔鼠肾虚免疫失调状态。     

莪术对黑色素瘤细胞转移相关能力的影响

目的:研究中药莪术对小鼠黑色素瘤高转移细胞B16-BL6转移相关能力的影响。方法:分别采用cck-8法、细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察莪术对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果:莪术水提液在较高浓度下能显著抑制B16-BL6的增殖;显著抑制B16-BL6对LN的粘附能力,侵袭性及趋化性运动能力,显著抑制黑色素瘤的在体生长及肺转移。结论:莪术水提液能够抑制黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的转移,可能与其能够抑制B16-BL6与细胞外基质的粘附以及降低B16-BL6的侵袭性和运动能力有关。     

丹参对小鼠黑色素瘤细胞株B16-BL6侵袭和转移能力的影响

目的研究活血化瘀中药丹参对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6生长、粘附、侵袭、运动、转移能力的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定丹参对B16-BL6细胞增殖能力的影响;采用细胞粘附实验、重组基底膜侵袭实验、趋化性运动能力实验以及小鼠黑色素瘤自发性转移模型,观察丹参对B16-BL6细胞生长、粘附、侵袭、运动及转移能力的影响。结果丹参水提液对B16-BL6细胞的增殖具有双向调节作用;能显著促进B16-BL6细胞与基底膜成分纤维粘连蛋白粘附,显著抑制B16-BL6细胞侵袭基底膜能力及趋化性运动能力;能显著减小肺转移结节体积,但对结节数目没有明显作用。结论丹参提取液能够显著减轻小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16-BL6的肺转移程度,可能与其能够抑制B16-BL6细胞对基底膜的侵袭能力以及降低B16-BL6的运动能力有关。