大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF的表达的影响

目的 应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响，以探讨GDNF对损伤神经元的作用。方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组：A组（N＝5）正常对照组，B组（N＝20）坐骨神经压榨伤组，C组（N＝20）坐骨神经切断／结扎组；B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组，每组5例。大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死，取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段，免疫组化染色观测GDNF表达。结果 （1）正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元，少数为大神经元。（2）坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强，伤后2周达到高峰；B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调，伤后2个月恢复为对照组水平。C组背根节细胞GDNF表达保持高水平，并至观察后期2个月。（3）坐骨神经损伤同时诱导背根节卫生细胞及坐骨神经雪旺氏细胞，GNDF表达显著增强，其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端。B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周，C组伤后1个月时其表达仍显著。结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子，并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用。     

人工神经制备修复兔长段神经缺损的实验研究

目的：研究静脉（V）、基底膜（BM）、雪旺细胞（SC）和神经生长因子（NGF）制备人工神经桥接15mm兔坐骨神经缺损的作用。方法：用日本大耳白兔70只，分为7组（A、B、C、D、E、F、H），每组10条坐骨神经。各组均修复坐骨神经15mm缺损，以自体神经移植作为对照组（A）。术后观察3d,2,4,8和12周肢体运动，肌电图动作电位波幅，潜伏期和传导速度，记录电生理结果。术后12周取材，肉眼观察标本。比较近侧吻合口段（a)，移植体中段（b)，远侧吻合口段（c)神经再生情况，随机半数组织行HE染色，免疫组化髓磷脂碱性蛋白（MBP）染色，另半数组织做Cajar吡啶神经银染色，镜下观察神经再生情况，断端连接情况，并对各组再生神经束面积，有髓神经纤维密度，有髓神经纤维直径和轴突直径进行测量分析。结果：在实验组中以H组（V＋BM＋NGF＋SC组）修复情况最佳，上述各指标与自体神经移植组比较，差异无显著性意义（P＞0．05）。结论：V＋BM＋NGF＋SC组修复神经缺损，效果最好，符合神经组织学结构，能达到自体神经移植的效果，很有可能成为周围神经缺损修复的一种新的方法。     

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的　用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法　SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果　伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论　Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。     

大鼠坐骨神经损伤对背根节GDNF表达的影响

目的应用免疫组化技术观察大鼠坐骨神经条件性损伤对相应背根节及坐骨神经胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)表达的影响,以探讨GDNF对损伤神经元的作用.方法 45只成年雌性Wistar大鼠随机分为3组:A组(N=5)正常对照组,B组(N=20)坐骨神经压榨伤组,C组(N=20)坐骨神经切断/结扎组;B、C两组按存活期不同再各分为4个亚组,每组5例.大鼠分别于伤后3天、2周、1个月、2个月处死,取材L5节段损伤侧背根节及损伤坐骨神经的远近节段,免疫组化染色观测GDNF表达.结果 (1)正常背根节细胞GDNF表达主要分布于小神经元,少数为大神经元.(2)坐骨神经损伤促使同侧背根节神经元GDNF表达显著增强,伤后2周达到高峰;B组背根节细胞GDNF表达在伤后1个月时轻度下调,伤后2个月恢复为对照组水平.C组背根节细胞GDNF表达保持高水平,并至观察后期2个月.(3)坐骨神经损伤同时诱导背根节卫星细胞及坐骨神经雪旺氏细胞GDNF表达显著增强,其中远端坐骨神经GDNF表达强于近端.B组这些细胞的阳性表达持续至伤后2周,C组伤后1个月时其表达仍显著.结论 GDNF是参与损伤初级感觉神经元反应的重要因子,并可能对正常及受损背根节细胞发挥营养作用.     

坐骨神经损伤修复过程中髓鞘变化的形态学研究

目的：探讨坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，并对髓鞘显示方法的应用价值进行评估。方法：制备大鼠坐骨神经损伤实验模型，采用锇酸染色，改良苏木精染色和镀银染色等三种髓鞘显示方法对伤后30天，90天髓鞘的形态学变化进行比较研究。结果：应用三种方法均观察到伤后两组伤侧坐骨神经髓鞘形态结构同对照侧有明显差别，伤后30天神经髓鞘溃变程度很高；伤后90天，神经髓鞘形态结构接近正常。结论：三种髓鞘显示方法均能反映坐骨神经损伤修复过程中髓鞘的形态学变化，改良苏木精染色方法是显示髓鞘的形态结构及其与轴突关系的简捷有效的方法，锇酸染色方法不仅适用于显示髓鞘的形态结构，还可进行形态计量分析。     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤的修复作用

为观察pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞（SC）移植对脊髓损伤的修复作用，采用切割法制备脊髓半模断损伤模型（T8平面）。实验动物随机植入pSVPoMcat微基因修饰的SC（A组）、SC组（B组）和损伤对照组（C组），每组40只。术后应用联合行为记分（CBS）和皮层体感诱发电位（CSEP）动态观察大鼠功能恢复情况，应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。术后3月行MRI观察，并用免疫组化对神经轴突进行神经中丝（NF）染色。结果显示，A组能抑制大学损伤后的GFAP表达；MRI发现，A组大鼠脊髓损伤（SCI）区脊髓信号已基本恢复正常，B组未恢复正常，而C组SCI有软化灶形成。与NF染色发现一致。A、B两组潜伏时波幅呈恢复的趋势，与A组接近正常，与CBS结果一致。提示，pSVPoMcat微基因修饰SC移植能抑制SCI后GFAP的表达，促进神经轴突的生长并对神经功能恢复有明显的促进作用。     

大鼠脊髓组织CNTFRα mRNA的表达及其坐骨神经损伤后表达的变化

目的：通过对大鼠脊髓组织中睫状神经营养因子受体α（ＣＮＴＦＲα）的分布与细胞定位及其在坐骨神经损伤后表达变化的研究，来探讨ＣＮＴＦ在脊髓组织中的可能作用。方法：利用原位杂交和点杂交的方法，对ＣＮＴＦＲα在大鼠脊髓组织中的分布与坐骨神经损伤后的表达变化进行研究。结果：ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ几乎存在于所有脊髓神经元与胶质细胞中；坐骨神经损伤后１ｄ表达增加，以后降到较低水平，到１４ｄ再次升高，但第２峰较第１峰为低。结论：ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ在大鼠脊髓组织中的广泛分布，表明ＣＮＴＦ对脊髓组织各类神经元与胶质细胞均有神经营养作用。坐骨神经损伤后１ｄ，ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ表达的增加，可能与损伤应激相关；１４ｄ的再次升高是否由于再生过程中，雪旺细胞大量增殖，ＣＮＴＦ大量表达所诱导，还有待进一步的研究；ＣＮＴＦＲα表达的改变，可能是损伤神经元在损伤与再生修复过程中，神经元本身代谢适应性改变的一部分     

大鼠脊髓缺血损伤后神经微丝及胶质纤维酸性蛋白的改变

目的神经微丝（ＮＦ）和胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）分别为神经细胞和胶质细胞特异的中间丝蛋白。着重探讨大鼠脊髓缺血损伤后ＮＦ和ＧＦＡＰ的改变及其可能的病理意义。方法利用ＮＦ和ＧＦＡＰ的单抗，借助于免疫组化、图像分析等手段，对大鼠腹主动脉再灌流缺血模型损伤脊髓神经细胞ＮＦ６８染色强度及胶质细胞数进行定性定量研究。结果伤后１天，ＮＦ的变化不明显；伤后３天，ＮＦ染色明显降低；７天达最低水平，并持续至２１天；２８天基本恢复至伤前。而胶质细胞数与正常相比，伤后１，３，７天无明显变化；至伤后１４天明显增加，并随时间而增加；至２８天达高峰。结论脊髓损伤后ＮＦ的降低与创伤性脑损伤中ＮＦ的变化相似，提示亦具有扩散性轴突损伤的存在。而胶质细胞的增生可能参与脊髓损伤的修复过程。     

髓鞘碱性蛋白徽基因修饰雪旺细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白—43表达的影响

目的：研究pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞（Schwann cell,SC)对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI)后神经生长相关蛋白－43（growth associated protein-43,GAP-43)表达的影响。方法：采用120只大鼠脊髓半横切损伤模型，随机分为三组：pSVPoMcat微基因修饰SC移植组（A组），单纯SC移植组（B）组，损伤对照组（C组）。应用免疫细胞化学方法动态观察SCI后GAP－43的表达，同时采用联合行为记分（CBS）观察大鼠神经功能恢复情况。结果：SCI损伤后1周，A，B，C三组间GAP－43表达差异无显著性意义；SCI后2，4，8周，三组间表达顺序为A＞B＞C，差异有显著性意义（P＜0．05）。其间A组在2周时达到最高峰，此后逐渐下降，12周时A，B，C三组间差异无显著性意义。A组大鼠神经功能恢复最好。结论；pWVPoMcat微基因修饰SC移植有促进SCI后GAP－43表达和大鼠神经功能恢复的作用。     

Foxo3a在大鼠坐骨神经损伤后背根神经节中的表达

目的 探讨大鼠坐骨神经夹伤后Foxo3a在腰段背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)中的表达变化及其意义.方法 将42只成年SD大鼠完全随机分为正常对照组和实验组.对实验组行坐骨神经夹伤术.运用Western blot及免疫荧光染色,观察大鼠坐骨神经夹伤对腰段DRG中Foxo3a表达的影响及其与生长相关蛋白的表达变化.结果 Western blot结果表明,坐骨神经夹伤后1 d,腰段DRG中Foxo3a蛋白表达开始明显下降,第2天达到最低值,随之逐渐升高,于4周后接近正常水平.坐骨神经夹伤后2 d细胞核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和神经元生长相关蛋白(GAP-43)在DRG中的表达均开始上调,在7 d达到最高点,GAP-43则保持较高水平.免疫荧光染色结果表明,Foxo3a表达下降主要存在于神经元和神经胶质细胞内,并且PCNA与神经元细胞几乎无共定位,与神经胶质细胞共定位明显.结论 大鼠坐骨神经损伤后,Foxo3a在腰段DRG中的表达减少可能与神经胶质细胞增殖和轴突再生密切相关.     

不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中Caspase3表达的影响

目的　观察睫状神经营养因子 (CNTF)对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase3)在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中表达的影响。方法　幼年、成年、老年Wistar大鼠各 2 70只 ,随机分为正常组 (1 8只 )、CNTF组 (1 2 6只 )和生理盐水组 (1 2 6只 )。CNTF组和生理盐水组切出长 2mm右侧坐骨神经 ,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室 ,CNTF组再生小室内注入 2 5 μg/ml重组CNTF1 5 μl,生理盐水组再生小室内注入生理盐水 1 5 μl,CNTF组和生理盐水组分为术后 1、3天和 1、2、4、8、1 2周组。利用免疫组织化学、Westernblotting检测脊髓Caspase3的分布与表达强度变化 ,进行Caspase3活性测定。结果　损伤后各年龄组伤侧脊髓Caspase3蛋白表达增强 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,以前角运动神经元变化最为明显 ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3表达较生理盐水组减弱 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;各组对侧未伤侧与正常组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。幼年、老年及成年生理盐水组于损伤侧脊髓Caspase3活性升高 ,各时相点幼年大鼠Caspase3活性高于老年及成年 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3活性低于生理盐水组 (P <0 .0 5或 0 .0 1 )。生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧Ca     

Involvement of Cdc2 in axonal regeneration enhanced by exercise training in rats

PURPOSE: Physical activity can improve sensorimotor recovery after peripheral nerve injury. We examined the effects of treadmill training (TMT) on axonal regeneration in the injured sciatic nerve of the rat and further investigated cellular and molecular events that underlie enhanced axonal regrowth by training. METHODS: After crush injury of the sciatic nerves, rats were randomly assigned into either TMT or sedentary groups. Three to 14 d after injury, changes in protein levels in the regenerating nerve were analyzed by Western blotting and immunofluorescence staining. Axonal regeneration was assessed by anterograde and retrograde tracing techniques. The animals' functional recovery was determined by the sciatic functional index. RESULTS: We identified enhanced axonal regrowth in the distal stump of the sciatic nerve 7-14 d after injury in the rats with TMT. Cell division cycle 2 (Cdc2) mRNA and protein levels were highly increased in the injured sciatic nerves 3 and 7 d after injury, and decreased to basal levels 14 d later. Daily TMT accelerated distal shift of Cdc2 mRNA and protein induced in the regenerating nerves, and Cdc2 kinase activity was similarly increased in the distal stump by TMT. Cdc2 protein induced by TMT was mainly colocalized with Schwann cell marker S100beta protein, and correlated with axial distribution pattern of bromodeoxyuridine-labeled proliferating cell population in the regenerating nerve. We further demonstrate that axonal regeneration and motor function recovery after injury, both of which were promoted by TMT, were greatly suppressed by in vivo administration of Cdc2 inhibitor roscovitine. CONCLUSION: The present data suggest that Cdc2 kinase activated in the regenerating sciatic nerve may play an important role in TMT-mediated enhancement of axonal regeneration.     

Magnetic resonance imaging evaluation of acute crush injury of rabbit sciatic nerve: correlation with histology

OBJECTIVE: To investigate the relation between the quantitative assessment of magnetic resonance imaging (MRI) features and the correlation with histology and functional recovery by using the rabbit sciatic nerve crush model. METHODS: In New Zealand, 32 rabbits were randomly divided into 2 groups (group A and B); all rabbits underwent crushing injury of their left sciatic nerve. In group A (n = 16), the sciatic nerves were crushed by using microvessel clamps with a strength of 3.61 kg. In group B (n = 16), the sciatic nerves were crushed with a strength of 10.50 kg. Right sciatic nerves were served as controls. Serial MRI of both hind limbs in each rabbit was performed before and at the time point of 1, 2, 4, and 8 weeks after crushed injury. The MRI protocol included T1-weighted spin-echo (T1WI), 3 dimension turbo spin-echo T2-weighted (3DT2WI), T2-weighted turbo spin-echo images with spectral presaturation with inversion recovery (T2WI/SPIR), balanced fast-field echo (B-FFE) and short-time inversion recovery (STIR) sequences. The coronal image of the sciatic nerve was obtained. The nerve and muscle signal ratio (SIR) on each sequence was measured. The function recovery was observed and pathological examination was performed at each time point. RESULTS: A signal intensity increase of the distal segment of crushed sciatic nerves was found on 3DT2WI, T2WI/SPIR, B-FFE, and STIR, but not on T1WI images. Of 32 crushed nerves, 30 nerves showed high signal intensity. The correct diagnostic rate was 93.75% with false negative-positive of 6.25%. The SIR of the crushed sciatic nerve at distal portion was higher than those of the control nerves; there was a statistically significant difference (P < 0.001). The SIR of the distal portion of crushed nerves was higher than that of the proximal nerve portion; there was a statistically significant difference (P < 0.001). Whereas, the SIR at proximal nerve portions of crushed nerve was similar to control nerves (P > 0.05). The SIR between group A and group B was not found statistically significantly different (P > 0.05). The SIR of crushed nerves at distal portion increased at one week after the crush injury, subsequently further increased, and reached a maximum at 2 weeks. The pathological examination revealed myelin swelling and axonal fragmentation of crushed nerve. Abduction function of injured hind limb was deficit. From 4 to 8 weeks following the crush, the SIR decreased, correspondingly, nerve regeneration was revealed on pathology including extensive Schwann cells proliferation and the immature myelin formation. The abduction function gradually recovered. There was no abnormal finding on MRI for control and sham-operated nerves. CONCLUSION: The SIR of injured nerve at distal portion increased on MRI. The evolution of SIR after injury was correlated with the degeneration and regeneration of nerve and the function recovery of lower extremities. Assessment of peripheral nerve injury by using SIR could reveal acute nerve injury, as well as aid in monitoring the recovery process. The pathophysiological basis for the SIR is predominantly the results of axon breakdown and myelin regeneration     

低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的效果比较

目的 比较低温冷冻和酒精处理的同种异体周围神经移植的疗效。方法 取45只成年雄性SD大白鼠，随机分为A、B、C、D4组。A、B、C组为实验组，每组10只；D组为供体组，15只，切取双侧坐骨神经15mm作为供神经。A组的供体神经在－196℃下保存3周，37℃生理盐水复温后桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；B组用70％酒精浸泡8小时后，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段；C组的供体神经不经任何预处理，桥接于受体一侧坐骨神经10mm缺损段。术后17周进行电生理测定，光镜观察及移植异体神经中段的轴突计数。结果 A、B实验组的电生理测定及移植神经中段的轴突计数结果无显著性差异，光镜下的形态学变化相似。A、B组与C组、电生理测定与移植体中段轴突计数均有显著性差异。结论 两种预处理方法降低异体神经的抗原性具有相似的近期效果。     

雪旺氏细胞植入Dacron人造管修复周围神经缺损的研究

各类型雪旺氏细胞植入Dacron管,移植修复大鼠坐骨神经缺损.移植后7、15、30天取移植体行光镜与电镜观察,植入自体雪旺氏细胞组,再生轴突数与再生轴突恢复率均优于不植入雪旺氏细胞组和异体雪旺氏细胞组,与自体神经倒转回植组结果相近.表明:自体雪旺氏细胞植入到渗透作用好,无排斥反应的人造Dacron管中,同时加入自体血浆作营养支持物,对周围神经再生有较好的促进作用,可望有临床应用前景.     

坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓病理改变

目的　研究坐骨神经高速弹丸震荡伤后腰段脊髓的病理改变。方法　火器伤组致伤靶点为兔右后肢外侧坐骨神经体表投影线中点 ,切割伤组在同一水平切断右坐骨神经 ,分别在光电镜下观察伤后 1天、3天 ,1周、2周、4周、12周时腰段脊髓的病理改变。结果　火器伤组可见腰段脊髓有小出血灶、神经元水肿、空泡样变、运动神经元数量减少等变化 ,切割伤组则未见这些病理改变。结论　火器伤组腰段脊髓损伤较切割伤组重 ,运动神经元存活数量显著减少     

多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

目的 探讨 不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤（SCI）的能力。方法 成鼠脊髓损伤后，分别移植游离正中神经（EPN组）、带血管蒂正中神经（VPN组）、孕、14天胚胎脊髓（FSC组）、游离正中神经加胚胎脊髓（P＋F组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后8周行神经解剖及电生理检查。结果 V＋F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目、胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组（P＜0．01），细胞分化较好，突触较成熟。体感诱发电位（SEP）的P1、N1波潜伏期显著缩短（P＜0．01）。结论 带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育和损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。