TNF-α对HepG2细胞LXRα介导的胆固醇外流的影响及其分子机制

 目的:观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）对肝X受体α（LXRα）启动子活性及其下游ATP结合盒转运蛋白（ABCA1和ABCG1）表达的影响,从而探讨TNF-α加速HepG2细胞内胆固醇积聚的分子机制。方法:构建LXRα基因的启动子表达载体,观察炎症因子TNF-α对LXRα启动子活性的影响,进一步将HepG2细胞分为对照组（control）、TNF-α组（20 μg/L）、高脂组（LDL,100 mg/L）及联合处理组（TNF-α 20 μg/L+ LDL 100 mg/L）。采用实时定量PCR和Western blotting检测LXRfα、ABCA1和 ABCG1的mRNA及蛋白的表达。［3H ］标记胆固醇,液体闪烁计数法检测胆固醇外流量。油红O染色和定量比色法分析细胞内胆固醇的含量。结果:成功构建LXRα启动子的萤火虫萤光素酶报告质粒,证明了该启动子有明显活性,TNF-α能明显抑制LXRα启动子的活性。进一步检测发现,和对照组相比,TNF-α下调了LXRα、ABCA1和ABCG1 mRNA与蛋白表达。高脂组胆固醇外流量增加,而TNF-α组胆固醇外流量明显降低。油红O染色显示,TNF-α使细胞内脂质染色明显增加。结论: TNF-α可通过抑制LXRα启动子活性从而抑制HepG2细胞内胆固醇外流导致肝细胞内脂质异常积聚。     

内脂素通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号转导通路下调ATP结合盒转运蛋白A1的表达

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路在内脂素(visfatin)调控人单核细胞株(THP-1)源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)表达中的作用,探讨visfatin诱导泡沫细胞形成的机制和途径。方法:THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞,随机分组,给予不同浓度的visfatin和PPARγ激动剂罗格列酮进行干预,分别运用油红O染色法观察细胞内脂滴形成情况,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞ABCA1及PPARγmR-NA和蛋白表达,酶荧光学法检测细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,TC与FC之差为胆固醇酯(CE)含量。结果:与对照组比较,visfatin干预组油红O染色显示细胞内脂滴形成增加,PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(均P<0.05),细胞内FC含量升高(P<0.05);相关分析显示,visfatin呈浓度依赖性下调PPARγ及ABCA1 mRNA和蛋白的表达。与visfatin干预组比较,罗格列酮组ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.05),细胞内FC含量降低(P<0.05);相关分析显示,罗格列酮呈浓度依赖性上调ABCA1 mRNA和蛋白的表达。结论:visfatin通过PPARγ信号转导通路下调ABCA1表达,减少细胞内FC流出,从而诱导泡沫细胞形成。这可能为visfatin致动脉粥样硬化发病机制的研究提供了一个新的理论依据。     

三磷酸腺苷结合盒转运体A1对糖尿病地鼠巨噬细胞内胆固醇外流的影响

目的探讨糖尿病地鼠巨噬细胞内胆固醇外流的改变,尤其是三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的功能变化以及与载脂蛋白AI(apoA-I)的相互作用。方法用金黄地鼠高脂及糖尿病模型,分离纯化腹腔巨噬细胞,用外源性apoA-I及8-br-cAMP在体外干预巨噬细胞,测定干预前后巨噬细胞ABCA1表达和细胞内胆固醇含量的变化。结果细胞内胆固醇含量在糖尿病组高于高脂组和正常对照组。apoA-I和8-br-cAMP在体外均增加糖尿病组巨噬细胞ABCA1 mRNA的表达。apoA-I使各组细胞内胆固醇外流均增加,且与孵育时间成正比,胆固醇外流量糖尿病组高于高脂组和正常对照组。结论糖尿病鼠巨噬细胞内胆固醇大量沉积,可能与内源性apoA-I量和功能的改变所引起的ABCA1介导的细胞内胆固醇外流受阻有关。     

阿托伐他汀对巨噬细胞肝X受体表达及胆固醇外流的影响

目的:他汀类药物是目前治疗脂代谢的有效药物,通过研究阿托伐他汀对巨噬细胞的肝X受体(LXR)及其下游的一些目的基因的表达和胆固醇外流的影响,探讨他汀类药物对LXR信号系统的作用。方法:分离人外周血的单核细胞,并转化为巨噬细胞。在阿托伐他汀的作用下,观察巨噬细胞的aopA-I介导的胆固醇外流的变化和LXR以及其下游目的基因ABCA1、SREBP2、CETP、PLTP、apoE、MMP-9和MIP-1α的mRNA及蛋白LXRα、ABCA1、MMP-9和MIP-1α的表达。结果:阿托伐他汀上调LXRα、ABCA1、SREBP2、CETP、PLTP基因的表达,而下调MMP-9和MIP-1α基因的表达,同时增强aopA-I介导的胆固醇外流。结论:巨噬细胞在阿托伐他汀的作用下,胆固醇外流增强,这种效应与阿托伐他汀上调LXR及其下游的影响胆固醇代谢的目的基因有关,同时,也抑制一些炎症反应的基因的表达。提示他汀类药物的治疗作用,与其影响巨噬细胞LXR信号途径有关,从而影响泡沫细胞的形成。     

苦参碱对人单核细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1及胆固醇酯的影响

目的观察苦参碱对人单核细胞胆固醇和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的影响。方法用TBARS法检测细胞内MDA,油红O染色法检测泡沫细胞的形成,荧光分光光度法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,RT-PCR和Western blot检测ABCA1mRNA与蛋白的表达。结果单核细胞经佛波脂(PMA)及ox-LDL共同孵育后,细胞内积聚的总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯及脂质过氧化产物均明显增多(P<0.05),有大量泡沫细胞形成,而ABCA1蛋白、mRNA水平明显减少(P<0.05);苦参碱干预组显著缓解上述变化,细胞内胆固醇酯减少,ABCA1 mRNA、蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论苦参碱可能通过增强ABCA1的表达和降低细胞内胆固醇聚积而发挥抗动脉粥样硬化的作用。     

染料木黄酮的抗巨噬细胞泡沫化效应及其分子机制研究

目的 研究染料木黄酮对动脉粥样硬化过程中巨噬细胞泡沫化的抑制作用,并探讨其抗泡沫化的分子作用机制.方法 采用体外ox-LDL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7产生泡沫化,通过油红O染色观察细胞内脂质聚集程度判定细胞的泡沫化程度以及药物效应;利用报告基因细胞检测方法评价染料木黄酮对代谢性核受体过氧化物酶体增殖物激活受体PPAR和肝X受体LXR的转录调控功能的激动作用;利用实时定量PCR检测染料木黄酮对巨噬细胞中ox-LDL摄取以及胆固醇逆转运相关基因的mRNA水平.结果 ox-LDL处理的空白组小鼠RAW264.7单核巨噬细胞内聚积大量的脂质,而经过10 ug/ml染料木黄酮处理后的RAW264.7细胞内脂滴量明显减少,细胞泡沫化程度被大幅度降低.瞬时转染的细胞报告基因的转录激活效应研究结果说明,染料木黄酮对核受体PPAR和LXR均有较高的转录激活效应,其EC50值分别为3.5～9.2 μg/ml和1.6 ～ 3.3 μg/ml.定量PCR研究结果显示,染料木黄酮可以有效地使巨噬细胞中的胆固醇逆转运基因LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCGl、和SR-B1的表达上调,而作为主要摄取ox-LDL受体的CD36基因的表达无明显变化.结论 染料木黄酮可以有效抑制动脉粥样硬化过程中巨噬细胞的泡沫化,而该作用机制可能是通过激活PPAR和LXR通路,上调胆固醇逆转运蛋白的ABCA1、ABCG1、LXRα、LXRβ、SR-B1基因的表达,增强了巨噬细胞的胆固醇外排,从而防止动脉粥样硬化的发生和发展.     

脂自噬通过减少巨噬细胞脂质含量抑制泡沫细胞形成

目的:观察泡沫细胞形成不同时间脂自噬的水平,探讨脂自噬是否参与调节泡沫细胞脂质含量从而抑制泡沫细胞的形成。方法:体外培养THP-1单核细胞,采用佛波酯诱导THP-1单核细胞48 h分化成为巨噬细胞,再用50 mg/L氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导形成泡沫细胞。油红O染色脂质观察泡沫细胞形成,计算脂质含量;采用胆固醇含量测定试剂盒测量泡沫细胞内的总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,计算胆固醇酯(CE)含量及CE/TC比值;胆固醇外流试剂盒检测泡沫细胞的胆固醇外流率;Western blot检测自噬相关蛋白5(Atg5)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达。荧光染料分别标记脂滴(LD)和LC3抗体,激光共聚焦显微镜检测细胞中LD与LC3的共定位以确定脂自噬水平,再分别采用自噬诱导剂雷帕霉素(Rap)和阻断剂3-甲基腺嘌呤(3MA)干预泡沫细胞,观察细胞内脂自噬水平、胆固醇含量及胆固醇外流的变化。结果:50 mg/L oxLDL作用24 h后细胞内LD大量聚集,CE/TC比值大于50%,泡沫细胞形成。泡沫细胞形成24 h内胆固醇外流率升高,在48 h胆固醇外流率下降(P&...     

炎症对脂肪酸负荷的肾细胞FAT/CD36表达的影响

目的: 观察炎症是否干扰脂肪酸负荷的肾细胞[人系膜细胞(HMCs)和肾小管上皮细胞HK-2]脂肪酸转运蛋白(FAT/CD36)的表达。方法: 分别给予不同浓度软脂酸(0 mmol/L、0.02 mmol/L、0.04 mmol/L、0.08 mmol/L、0.16 mmol/L、0.32 mmol/L)处理HMCs和HK-2细胞24 h。采用实时定量PCR和Western blotting方法检测细胞FAT/CD36的mRNA及蛋白的表达。进一步选取0.04 mmol/L软脂酸联合炎症因子(25 μg/L TNF-α或20 μg/L IL-6)处理肾细胞24 h后,观察炎症因子对肾细胞FAT/CD36 mRNA及蛋白表达的影响;油红O染色及酶比色法检测细胞甘油三酯(TG)水平;ELISA检测细胞游离脂肪酸(FFA)含量。结果: 软脂酸呈浓度依赖性上调HMCs和HK-2细胞FAT/CD36 mRNA和蛋白表达。炎症因子明显刺激脂肪酸负荷的肾细胞FAT/CD36 mRNA和蛋白表达进一步增加。油红O染色及胞内TG和FFA含量测定显示炎症因子促进肾细胞脂质积聚。结论: 炎症上调脂肪酸负荷的肾细胞FAT/CD36表达,加重胞内脂质积聚。     

甾体衍生物02F04 通过非核受体上调PAM212 细胞胸腺基质淋巴细胞生成素的研究

目的:探索02F04诱导TSLP表达是否通过核受体介导。方法:一系列浓度的6种核受体,包括视黄酸受体(RAR)、维甲酸X受体(RXR)、过氧化物酶体增生物激活受体(PPAR)、维生素D受体(VDR)、糖皮质激素受体(GR)和肝X受体(LXR)的激动剂和抑制剂,单用或者与10μmol/L 02F04联合刺激PAM212细胞24 h后,ELISA法测定培养上清中TSLP的蛋白水平,MTT法检测PAM212细胞的存活率。10μmol/L 02F04刺激PAM212细胞4、8、12或24 h,实时荧光定量PCR反应测定细胞中相应核受体靶向基因的表达。结果:VDR激动剂不能增加PAM212细胞中TSLP的表达。02F04不能诱导RAR、RXR和PPAR靶向基因的表达,且RARα、PPARγ和PPARδ的激动剂及抑制剂单用或与02F04合用后均不影响TSLP的产生; RARγ、RXR和GR激动剂可抑制细胞基本水平及02F04诱导水平的TSLP产生,而抑制剂未呈现出相反的结果。02F04可激活LXR并增加靶向基因ABCA1的表达,但LXR激动剂不能诱导TSLP产生,LXR抑制剂也不能抑制02F04诱导的TSLP表达。结论:02F04具有甾体结构,但诱导TSLP的产生不能通过核受体作用而介导。     

脂联素抑制甲基环糊精包被的胆固醇诱导的人血管平滑肌细胞泡沫化

目的:体外研究脂联素(APN)对甲基环糊精包被的胆固醇(Chol:MβCD)诱导的人血管平滑肌细胞(VSMCs)泡沫化过程的影响,并探讨其可能的机制。方法:体外培养人主动脉平滑肌细胞,将细胞分为5组,即对照组(正常培养VSMCs)、泡沫细胞组(VSMCs与100 mg/L Chol:MβCD共孵育24 h)及低、中、高剂量APN组(在泡沫细胞组基础上分别加入2.5、5和10 mg/L APN干预24 h)。油红O染色及脂质含量计算分析各组细胞泡沫化情况,酶荧光法检测胞内胆固醇含量及细胞胆固醇流出率。RT-qPCR和Western blot法分别检测各组细胞内沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)mRNA和蛋白的表达。结果:与对照组相比,泡沫细胞组胞质内可见大量红色脂滴聚集,胞核突出,胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)的含量及CE/TC值均显著升高(P0.05),细胞胆固醇流出率增加(P0.05),符合泡沫细胞改变;SIRT1和PGC-1α的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P0.05)。APN干预可呈浓度依赖性降低泡沫细胞内脂质沉积(P0.05),减少胞内TC和CE含量及CE/TC值(P0.05),促进细胞胆固醇流出(P0.05);SIRT1和PGC-1α的mRNA和蛋白表达水平随着APN浓度的升高而逐步升高(P0.05)。结论:APN在体外可呈浓度依赖性抑制Chol:MβCD诱导的VSMCs泡沫化,其机制可能与调控SIRT1/PGC-1α信号通路有关。     

miRNA-33对Hcy干预RAW264.7巨噬细胞衍生的泡沫细胞表达ABCA1/ABCG1的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)是否通过微小RNA-33 (miRNA-33)抑制三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)和三磷酸腺苷结合盒转运体G1(ABCG1)的表达,从而降低胆固醇逆转运(RCT)效率。方法:复制RAW264.7巨噬细胞经氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导为泡沫细胞的模型,油红O染色确定模型是否复制成功,用LipofectamineTM2000将miRNA-33 mimics和miRNA-33 inhibitor分别转染入细胞内,再给予5 mmol/L的Hcy干预24 h后进行实验;用油红O染色观察细胞内脂滴情况;real-time PCR和Western blot检测ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达水平;液体闪烁计数法检测细胞内胆固醇流出率;高效液相色谱分析细胞内胆固醇含量。结果:(1)与空白对照组相比,miRNA-33 mimics组细胞内脂滴含量增加,ABCA1和ABCG1的mRNA和蛋白表达量降低(P 0.05),细胞内胆固醇含量逐渐增加(P 0.05),细胞内胆固醇流出率逐渐减少(P 0.05);(2)与空白对照组相比,miRNA-33 inhibitor组检测结果与miRNA-33 mimics组的结果相反,差异具有统计学意义(P 0.05);(3)空白对照组、miRNA-33 mimics-NC组和miRNA-33 inhibitor-NC组3组间相比,所有检测结果的差异均无统计学显著性。结论:Hcy可间接通过诱导miRNA-33表达而抑制ABCA1和ABCG1的蛋白表达,降低RCT效率。     

Sortilin调控ABCA1蛋白水平影响荷脂巨噬细胞内脂质流出

目的　探讨Sortilin对荷脂THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白表达及胞内脂质流出的影响。 方法　采用Western blot和qRT-PCR检测细胞内ABCA1蛋白和mRNA表达水平；Co-IP实验检测Sortilin和ABCA1的结合情况；高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量变化；油红O染色观察细胞内脂滴情况。 结果　Sortilin下调细胞内ABCA1蛋白水平，但对其mRNA水平无显著影响；Co-IP结果表明Sortilin能与ABCA1结合；与对照组相比，Sortilin过表达后荷脂巨噬细胞内胆固醇流出减少，胞内脂质含量增加且脂滴肥大，数量明显增多，Sortilin沉默后荷脂巨噬细胞胆固醇流出增加，胞内脂质含量减少，脂滴瘦小，数量减少；溶酶体抑制剂氯喹共处理可部分逆转Sortilin过表达对巨噬细胞ABCA1蛋白和胆固醇流出的抑制作用。 结论　Sortilin下调巨噬细胞ABCA1蛋白水平，抑制胆固醇流出，促进胞内脂质蓄积。     

Sortilin调控ABCA1蛋白水平影响荷脂巨噬细胞内脂质流出

目的　探讨Sortilin对荷脂THP-1巨噬细胞ABCA1蛋白表达及胞内脂质流出的影响。 方法　采用Western blot和qRT-PCR检测细胞内ABCA1蛋白和mRNA表达水平;Co-IP实验检测Sortilin和ABCA1的结合情况;高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇、胆固醇酯含量变化;油红O染色观察细胞内脂滴情况。 结果　Sortilin下调细胞内ABCA1蛋白水平,但对其mRNA水平无显著影响;Co-IP结果表明Sortilin能与ABCA1结合;与对照组相比,Sortilin过表达后荷脂巨噬细胞内胆固醇流出减少,胞内脂质含量增加且脂滴肥大,数量明显增多,Sortilin沉默后荷脂巨噬细胞胆固醇流出增加,胞内脂质含量减少,脂滴瘦小,数量减少;溶酶体抑制剂氯喹共处理可部分逆转Sortilin过表达对巨噬细胞ABCA1蛋白和胆固醇流出的抑制作用。 结论　Sortilin下调巨噬细胞ABCA1蛋白水平,抑制胆固醇流出,促进胞内脂质蓄积。     

Rab18通过PPARγ下调PLIN2以减少巨噬细胞脂质蓄积

目的:探讨Rab18是否通过过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)下调脂滴包被蛋白2(PLIN2以减少巨噬细胞脂质蓄积。方法:用氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理THP-1巨噬细胞,通过Western blot法检测ox-LDL作用不同时间(0 h、6 h、12 h和24 h)后细胞内Rab18、PPARγ及PLIN2的表达情况,并使用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积的变化。制备表达野生型、高活型和低活型Rab18的巨噬细胞,分别加入ox-LDL处理,用Western blot及细胞免疫荧光染色法检测细胞内PPARγ和PLIN2的表达量,并采用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况。分别用PPARγ激动剂GW1929和抑制剂T0070907预处理表达高活型Rab18的巨噬细胞,再用ox-LDL孵育该细胞,Western blot及免疫荧光染色法分别检测巨噬细胞内PPARγ和PLIN2的表达量及PPARγ的核转位情况,同时采用油红O染色法观察细胞内脂质蓄积情况。结果:ox-LDL处理24 h后,THP-1巨噬细胞Rab18、PPARγ和PLIN2的表达水平显著增加,脂质蓄积增加(P0.05)。ox-LDL处理后,表达野生型和高活型Rab18的巨噬细胞中PPARγ及PLIN2表达下调,脂质蓄积减少(P0.05),而表达低活型Rab18的巨噬细胞上述指标则无明显变化。Rab18能抑制PPARγ的激活,并抑制其核转位。表达高活型Rab18的巨噬细胞中PLIN2表达下调能被PPARγ激动剂GW1929逆转,并使脂质蓄积增多。PPARγ抑制剂处理后,表达高活型Rab18的巨噬细胞中PLIN2表达及脂质蓄积进一步减少。结论:Rab18通过抑制PPARγ的激活下调PLIN2表达进而抑制巨噬细胞脂质蓄积。     

PPARγ-ABCA1途径在肺炎衣原体诱导泡沫细胞形成中的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPARγ)、ATP结合盒转运体A1(ABCA1)在肺炎衣原体(C.pn)诱导巨噬细胞源性泡沫细胞形成的作用.方法 THP-1单核细胞给予160 nmol/L佛波酯(PMA)孵育72 h后,诱导分化为巨噬细胞,在与50 mg/L低密度脂蛋白(ME)共同孵育的情况下将细胞随机分为4组:对照组(未感染组)、C pn感染组、罗格列酮+C.pn感染组、罗格列酮组.运用油红O染色观察细胞质内脂滴的变化,酶荧光学法检测细胞内胆同醇酯含量的变化.分别运用RT-PCB和Western blot检测ABCA1、PPARγ mRNA和蛋白表达.结果 在负荷LDL的THP-1源性巨噬细胞内,C.pn感染呈浓度依赖性地下调ABCA1、PPARγ mRNA和蛋白表达.罗格列酮不仅浓度依赖性地抑制C. Pn诱导的ABCA1表达的下调,而且高浓度罗格列酮(10和20μmol/L)明显抑制C.pn诱导的巨噬细胞内脂滴的增多和胆固醇酯含量的增加(P<0.05).结论 C.pn经PPARγ途径下调ABCA1表达,进而诱导泡沫细胞形成,这可能为进一步阐明C.pn感染可促进动脉粥样硬化发生发展提供一个新的理论依据.     

温胆汤抑制氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞泡沫化

目的:从巨噬细胞泡沫化角度探讨温胆汤抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用MTT法确定温胆汤的无毒性干预浓度;药物干预后,采用油红O染色法检测泡沫细胞的形成;采用酶法检测细胞内胆固醇水平及细胞胆固醇流出;采用Western blot检测巨噬细胞膜蛋白CD36、A类清道夫受体(SR-A)及ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和B类I型清道夫受体(SR-BI)的蛋白表达水平。结果:温胆汤冻干粉溶液对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)刺激的THP-1细胞源性巨噬细胞的无毒性干预浓度为0～6 g/L,于是设置温胆汤干预浓度梯度为1.5、3和6 g/L进行后续实验。各浓度温胆汤干预可抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成,半定量分析显示温胆汤浓度依赖性降低细胞内脂质沉积(P<0.05或P<0.01)。温胆汤浓度依赖性降低细胞内总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯化率(P<0.05或P<0.01),促进细胞胆固醇流出(P<0.01),减少CD36表达(P<0.01)。6 g/L温胆汤显著减少SR-A的表达(P<0.05);3和6 g/L温胆汤显著促进ABCA1和SR-BI...     

LXR激活对大鼠原代培养海马神经元胆固醇代谢关键酶基因表达的影响

为了探讨肝X受体(LXR)激活对海马神经元胆固醇代谢关键酶基因表达和胆固醇外流的影响,本研究取当天新生大鼠海马神经元行体外培养7d,随机分为TO组(培养液含2.0μmol/L的TO901317)和正常对照组(CON),继续培养48h。用胆固醇氧化酶-比色法检测TO组胆固醇的排出量;应用RT-PCR方法检测两组海马神经元ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、HMG-CoA还原酶(HMGR)、胆固醇24-羟化酶(CYP46)、P450侧链裂解酶(P450scc)、固醇生成急性调节蛋白(StAR)和酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)等胆固醇代谢关键酶基因的mRNA的表达。结果显示:TO组mRNA表达上调的酶有HMGR、P450scc和StAR(P<0.01);表达下调的酶是ACAT1(P<0.01);表达不受影响的酶是CYP46。上述结果表明LXR激活、促进细胞内胆固醇外流时,海马神经元可能通过协调胆固醇代谢关键酶基因的表达,增加胆固醇的合成和向神经甾体的转化,抑制胆固醇的储备,而不影响胆固醇排出血脑屏障,从而维持细胞内胆固醇的动态平衡,保证神经元的正常生理功能。     

肺炎衣原体下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1、ABCG1表达的机制研究

目的:观察c-Jun氨基末端激酶(JNK)对肺炎衣原体(Cpn)诱导的THP-1源性巨噬细胞ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ATP结合盒转运蛋白G1(ABCG1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调控作用,探讨Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达的信号转导机制。方法:将THP-1单核细胞诱导分化为巨噬细胞后,观察Cpn感染对细胞内ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。并用不同浓度的JNK特异性抑制剂SP600125对细胞进行预处理,观察SP600125对Cpn诱导的ABCA1/ABCG1、PPARγ mRNA和蛋白表达的影响。分别用RT-PCR和Western blotting检测各组ABCA1/ABCG1及PPARγ mRNA和蛋白表达。结果:Cpn下调THP-1源性巨噬细胞ABCA1/ABCG1及其上游调控基因PPARγ mRNA和蛋白表达。而SP600125能呈浓度依赖性地抑制Cpn感染所带来的上述影响。结论:Cpn可能通过JNK-PPARγ信号转导通路下调AB-CA1/ABCG1表达,减少巨噬细胞内胆固醇流出,促进动脉粥样硬化发生发展。     

木豆叶总芪对高脂模型兔的降脂作用及调节机制

目的研究木豆叶总芪(TSC)对高脂模型兔脂质代谢的影响及可能的分子机制。方法将36只雄性新西兰兔分为对照,模型,TSC高、中、低剂量和血脂康6组,于0、2和6周末测血脂,6周末测肝脏脂质并行病理学检测;将THP-1细胞诱导成巨噬细胞,用[3H]胆固醇预处理48 h后分为对照、木豆叶总芪单体成分C03高、中、低剂量和雌二醇5组,作用24 h后加入apoAI作用12 h,检测各组上清液和细胞内[3H]胆固醇含量,计算细胞胆固醇流出率,Western blot检测各组细胞ABCA1表达。结果与模型组相比,TSC高剂量使兔血清和肝脏TC分别下降35.36%和35.97%(P<0.01),TG分别下降12.34%(P<0.05)和41.32%(P<0.01),血清LDL-C下降29.07%(P<0.01);HE染色:TSC高剂量组肝脂肪病变明显轻于模型组。C03高、中剂量作用后细胞胆固醇外流率分别提高55.39%和24.97%(P<0.01)。C03高剂量使ABCA1蛋白表达显著增加。结论 TSC能抑制高脂饮食所致高脂血症,其降脂作用可能与上调细胞ABCA1表达,进而促进胆固醇逆转运有关。     

烟酸经LXRα/NPC1途径促进巨噬细胞溶酶体胆固醇外流

目的:探讨烟酸(NA)对巨噬细胞溶酶体游离胆固醇外流的作用及其机制。方法:以佛波酯诱导人单核-巨噬细胞THP-1形成的巨噬细胞为细胞模型,利用激光扫描共聚焦成像技术观察NA对经氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)孵育的巨噬细胞溶酶体胆固醇外流的作用,以及烟酸腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)拮抗剂Ned-19、Ca²⁺螯合剂BAPTA、肝X受体α(LXRα)siRNA和尼曼-皮克C1蛋白(NPC1)siRNA对NA效应的影响。RT-qPCR和Western blot检测NA、Ned-19和BAPTA对LXRαmRNA和NPC1蛋白表达的影响。结果:NA呈剂量依赖性地促进oxLDL孵育的巨噬细胞溶酶体胆固醇外流;这种效应可被Ned-19和BAPTA显著抑制。NA可明显促进NPC1蛋白及LXRαmRNA表达;这种效应也可被Ned-19和BAPTA明显抑制。LXRαsiRNA可明显抑制NA对NPC1蛋白表达的促进作用。siRNA沉默LXRα和NPC1表达也可明显减弱NA促溶酶体胆固醇外流的效应。结论:NA可显著促进巨噬细胞溶酶体胆固醇外流,其机制可能与其增加NAADP的生成,...