4-1 BBL在不同分化胃癌细胞株上的表达

目的 观察共刺激分子4-1 BBL在人胃高分化腺癌细胞株MKN-28、人胃中分化腺癌细胞株SGC-7901、人胃低分化腺癌细胞株BGC-823、人胃黏液腺癌细胞株MGC-803上的表达.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学法检测以上4种胃癌细胞株4-1 BBL mRNA和蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测人淋巴细胞对不同胃癌细胞的体外杀伤活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人淋巴细胞与不同胃癌细胞共培养上清液中自细胞介素(IL)-2、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.结果 RT-PCR结果示4-1 BBL mRNA表达从高到低依次为MKN-28(46.63%)、SGC-7901(37.13%)、BGC.823(20.43%)、MGC-803(14.14%).免疫细胞化学结果示4-1 BBL着色程度由深到浅依次为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803.MTT结果示不同时段不同效靶比下人淋巴细胞对胃癌细胞的体外杀伤活性由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-23、MGC-803.ELISA结果示不同效靶比下人淋巴细胞与胃癌细胞共培养48 h上清液中IL-2、TNF-α的含量由高到低为MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803.而IL-10的含量由高到低为MGC-803、BGC-823、SGC-7901、MKN-28.结论 人胃癌细胞株MKN-28、SGC-7901、BGC-823、MGC-803中4-1 BBL基因在蛋白和mRNA水平均有表达,且胃癌细胞株的分化程度越高4-1BBL表达水平越高.淋巴细胞对高表达4-1 BBL胃癌细胞株的杀伤力较高,而且4-1 BBL可能通过促进细胞因子TNF-α、IL-2和细胞抑制因子IL-10的产生调节肿瘤免疫.     

靶向沉默SPHK1基因诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨用小干扰核酸（SmallinterferingRNA,siRNA）靶向沉默神经鞘氨酸激酶1（sDhingosinekinasel,SPHKl）基因敲除后对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。方法人工化学合成SPHKlsiRNA和对照siRNA,分别转染胃癌SGC-7901细胞。Westernblot法检测SPHKl、Bcl-2和Bax蛋白的表达;流式细胞术（FlowCytometry,FCM）检测细胞凋亡的变化。结果SPHKlsiRNA转染胃癌SGC-7901细胞后,SPHKl蛋白表达明显下调;与对照组相比,SPHKlsiRNA转染组Bcl一2蛋白表达下调了55％（P〈0．01）,Bax蛋白表达差异无统计学意义,Bcl-2／Bax比值下调54％（P〈0．05）;SPHKlsiRNA转染组早期凋亡细胞明显增多（P〈0．01）,晚期凋亡细胞无明显变化。结论SPHKl特异性siRNA可阻断SGC-7901细胞SPHKl蛋白的表达,并通过影响Bcl-2通路诱导细胞凋亡。     

miRNA-34a靶向HDAC1对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化的影响

目的:探讨miR-34a通过靶向组蛋白去乙酰化酶1 (HDAC1)对胃癌细胞增殖、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法:以胃癌组织及癌旁组织、体外培养的胃癌细胞系BGC-823、MKN28、AGS、SGC-7901以及人正常胃黏膜上皮细胞NGEC为研究对象。利用Lipofectamine 2000转染试剂对SGC-7901细胞进行转染,并分组为空白对照组、miR-NC组、miR-34a mimics组、miR-34a mimics+pcDNA组、miR-34a mimics+pc-HDAC1组。结果:与癌旁组织和人正常胃黏膜上皮细胞NGEC相比,胃癌组织和细胞系中miR-34a表达降低(P<0.05),HDAC1 mRNA表达升高(P<0.05)。miR-34a mimics可提高miR-34a表达、E-cadherin表达上调,细胞增殖活性、PCAN、Ki-67、MMP-2、MMP-9、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低,细胞侵袭数明显减少(P<0.05)。miR-34a靶向负调控HDAC1蛋白表达(P<0.05)。pc-HDAC1可使m...     

lncRNA C5orf66-AS1通过调节CYC1表达对胃癌细胞增殖和转移的影响

目的:探讨长链非编码RNA C5orf66反义链1(lncRNA C5orf66-AS1)对胃癌细胞增殖和转移的影响。方法:以2019年6月—2021年6月收集的63例胃癌患者的癌组织与癌旁组织、人胃黏膜细胞GES-1及胃癌细胞BGC823、SGC7901、AGS、MKN28为研究对象,分别检测组织和细胞中C5orf66-AS1和细胞色素c1(CYC1z)蛋白表达情况。将AGS细胞分为7组,分别检测各组细胞增殖、迁移、侵袭以及细胞中C5orf66-AS1表达水平和CYC1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达情况。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中C5orf66-AS1表达降低,CYC1蛋白表达升高(P<0.05)。与人胃黏膜细胞GES-1比较,胃癌细胞BGC823、SGC7901、AGS、MKN28中C5orf66-AS1表达降低,CYC1蛋白表达升高(P<0.05),且AGS细胞中C5orf66-AS1表达最低,CYC1蛋白表达水平最高。沉默C5orf66-AS1促进AGS细胞增殖、迁移、侵袭及CYC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达C5orf66-AS1抑制AGS细胞增殖、迁移、侵袭及CYC1、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达;过表达CYC1可逆转C5orf66-AS1对AGS细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论:过表达C5orf66-AS1可能通过下调CYC1抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭。     

白细胞介素-1受体Ⅱ对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨人白细胞介素-1受体Ⅱ(IL-1R2)对胃癌细胞生物学行为的影响及其对血管的影响。方法用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法检测胃癌细胞株(AGS、MGC-803、BGC-823、SGC-7901、HGC-27、HSC-39)及人胃黏膜细胞(GES-1)中IL-1R2的mRNA、蛋白水平, 选择MGC-803、BGC-823构建下调及过表达IL-1R2细胞模型。细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞增殖、划痕实验、Transwell侵袭实验明确IL-1R2对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。细胞周期及凋亡实验探究IL-1R2对细胞周期及凋亡的作用。RT-PCR检测下调及过表达IL-1R2的MGC-803、BGC-823细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF) mRNA水平。下调、过表达IL-1R2细胞组及其对照组与血管内皮细胞(HMEC-1)共培养, 明确IL-1R2对HMEC-1增殖、迁移及VEGF、IL-6 mRNA水平的影响。两组间差异表达采用t检验方法比较;多组间采用方差分析(ANOVA)和T...     

硫酸化修饰酶PAPSS2的表达对胃癌侵袭和迁移的影响

目的探究3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸盐合酶2（PAPSS2）在胃癌组织和细胞中的表达情况及其对胃癌细胞侵袭和迁移的影响。 方法利用GEPIA数据库分析PAPSS2在胃癌组织中的表达情况。收集陕西省人民医院2016年10月至2018年6月40例胃癌手术患者的癌组织及癌旁正常组织标本,进一步通过免疫组织化学染色进行验证。分析PAPSS2表达与胃癌患者临床病理资料和预后的关系。利用qPCR和免疫印迹法分别检测PAPSS2在胃癌细胞（HGC-27、SNU-1、AGS、SGC-7901）和正常胃黏膜细胞系（GES-1）的mRNA和蛋白水平表达差异。利用shRNA敲低胃癌细胞PAPSS2的表达,MTT检测其对细胞活性的影响,Transwell检测其对侵袭和迁移能力的影响。 结果（1）利用GEPIA数据库分析发现,PAPSS2在胃癌组织中高表达（P<0.05）,且高表达PAPSS2的胃癌患者总体生存率（HR=1.5,P=0.017）和无病生存率（HR=1.6,P=0.014）显著降低。（2）PAPSS2在40例胃癌组织的免疫组织化学染色评分显著高于对应的癌旁组织（7.100±3.169 vs 3.425±2.263,P<0.001）。高表达PAPSS2的胃癌患者肿瘤浸润深度（P=0.015）和淋巴转移率更高（P=0.005）。（3）qPCR显示PAPSS2在胃癌细胞（AGS、HGC-27、SNU-1、SGC-7901）的mRNA表达水平明显高于GES-1细胞（F=15.45,P<0.001）,免疫印迹法也得出了类似的结果。（4）MTT实验发现敲低PAPSS2对AGS和SGC-7901细胞的活性没有明显影响。（5）敲低PAPSS2后AGS细胞（386.9±73.75 vs 602.7±79.23,t=4.457,P=0.002）和SGC-7901细胞（237.8±77.60 vs 461.8±86.55,t=4.309,P=0.003）的迁移能力显著降低,AGS细胞（106.0±38.07 vs 201.3±48.79,t=3.446,P=0.009）和SGC-7901细胞（55.0±18.27 vs 93.6±21.07,t=3.093,P=0.015）的侵袭能力也明显降低。 结论PAPSS2在胃癌组织和细胞中呈高表达,其高表达促进了胃癌细胞的侵袭和转移,这可能是胃癌预后较差的重要原因之一。     

鬼臼酰肼哌啶氮氧自由基腙（GP1）抑制胃癌细胞生长及血管生成因子表达的实验研究

目的：研究稳定氮氧自由基自旋标记的鬼臼毒素衍生物-鬼臼酰肼哌啶氮氧自由基腙（GP1）在体外对胃癌细胞BGC-823、MKN-45的生长抑制作用及抗血管生成作用的机理。 方法：采用CCK-8法测定GP1对胃癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测GP1诱导胃癌细胞凋亡的作用;Transwell小室法检测GP1对胃癌细胞迁移能力的影响;RT-PCR法测定血管生成因子VEGF-A、VEGFR、Ang-1、Tie2及MMP-2和MMP-9 mRNA的表达。 结果：CCK-8法结果示不同浓度的GP1对胃癌细胞增殖均有一定的抑制作用且在浓度为100 μg/mL抑制作用最明显,BGC-823在24、48、72 h时的抑制率依次为31.31%、36.69%、39.23%,MKN-45在24、48、72 h时的抑制率依次为64.38%、73.16%、80.32%;流式细胞检测浓度为100 μg/mL的GP1作用于胃癌细胞24、48 h均出现诱导凋亡的作用。GP1作用于BGC-823细胞24、48 h后的凋亡率分别为8.00%、16.67%,作用于MKN-45细胞24、48 h后的凋亡率分别为7.33%、27.67%;Transwell小室法检测浓度为100 μg/mL的GP1作用于胃癌细胞24、48 h均抑制细胞迁移。BGC-823细胞24、48 h的抑制迁移率分别为18.85%、25.15%;MKN-45细胞24、48 h的抑制迁移率分别为17.29%,24.28%;RT-PCR测定浓度为200、100、50 μg/mL的GP1作用胃癌细胞VEGF-A、VEGFR、Ang-1、Tie2、MMP-2、MMP-9 mRNA的表达均较对照组降低。 结论：GP1对在体外生长的胃癌细胞有明显的抑制作用,且可能是通过诱导胃癌细胞凋亡而抑制其增殖的;GP1可能是通过抑制胃癌细胞MMP-2、MMP-9 mRNA的表达来抑制其迁移;GP1具有抑制VEGF-A、VEGFR、Ang-1、Tie2 MRNA表达的作用,推测GP1可能具有抑制胃癌血管生成的作用。     

抑制HO-1基因表达对人胃癌细胞系SGC-7901的影响

目的：通过构建shRNA沉默HO-1基因,研究抑制HO-1基因表达对胃癌细胞系SGC-7901的影响。方法：构建靶向HO-1基因的shRNA干扰质粒转染人胃癌细胞系SGC-7901,荧光共聚焦显微镜下观察转染效率;应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫化学法分别在基因、蛋白质水平检测HO-1基因的抑制效果;应用MTT法检测HO-1基因沉默后胃癌细胞的生长情况。结果：与对照组比较,shRNA在基因、蛋白质水平特异地抑制了胃癌细胞SGC-7901中HO-1的表达,抑制率分别为62.4%、67.6%;HO-1的表达被抑制后,胃癌细胞SGC-7901生长受抑制（P〈0.05）。结论：shRNA-HO-1可有效抑制胃癌细胞中HO-1的表达;HO-1的沉默表达可抑制肿瘤细胞生长。     

胃癌细胞中&beta|肾上腺能受体与NF-κB通路及其下游侵袭相关因子的关系

目的：探讨胃癌细胞中β肾上腺能受体（β-ARs）与NF-κB通路及下游侵袭相关因子的关系。 方法：分别用不同浓度普萘洛尔（10，30，100 μmol/L）和异丙肾上腺素（50，100，200 μmol/L）作用胃癌BGC-823和SGC-7901细胞株24 h后，用RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）,环氧化酶2（COX-2）,基质金属蛋白酶2（MMP-2）,基质金属蛋白酶9（MMP-9）mRNA表达；用Western blot检测上述因子及NF-κB p65蛋白表达。 结果：与对照细胞比较，普萘洛尔呈浓度依赖性降低两种胃癌细胞VEGF，COX-2，MMP-2，MMP-9的mRNA表达，而异丙肾上腺素则呈浓度依赖性升高上述因子的mRNA表达（均P<0.05）；与对照组细胞比较，普萘洛尔作用后，两种胃癌细胞上述因子及NF-κB p65蛋白的表达明显下调，而异丙肾上腺素作用后则呈反向变化，且作用均呈浓度依赖性（均P<0.05）。 结论：β-ARs与胃癌侵袭、转移密切相关，且其作用机制可能与增加NF-κB通路活性及其下游侵袭相关分子的表达有关。     

RNA干扰抑制yrdC蛋白表达对人胃癌细胞株BGC-823体外增殖能力的影响

目的:构建针对人yrdC基因siRNA的重组腺病毒Ad-shyrdC并观察其转染人胃癌细胞株BGC-823后对细胞体外增殖能力的影响。方法:筛选高效抑制yrdC蛋白表达的RNAi位点,并构建表达siRNA的重组腺病毒,转染人胃癌细胞株BGC-823后以Western印迹法鉴定细胞yrdC蛋白表达的变化;同时通过MTT法、流式细胞术分别测定BGC-823细胞增殖活性和增殖指数的变化。结果:成功构建了抑制人yrdC基因siRNA的重组腺病毒Ad-shyrdC;转染BGC-823细胞后可明显抑制yrdC蛋白表达,并使所测定的细胞MTT值和细胞增殖指数提示BGC-823细胞增殖活性下降(P<0.05)。结论:腺病毒介导的RNAi能有效地抑制BGC-823细胞中yrdC蛋白表达,并降低其增殖活性。     

P27^kip1基因过度表达诱导人胃癌细胞系凋亡机制的研究

目的：研究P27^kipl基因转染对人胃癌细胞系BGC-823的诱导凋亡作用及其可能机制。方法：构建含人P27^kipl基因的逆转录病毒真核表达载体，将外源性P27^kipl基因转染人胃癌细胞系BGC-823，应用Western blot、流式细胞分析术（FCM）等方法，检测P27^kipl蛋白在胃癌细胞内的表达、诱导凋亡作用及其对bcl-2基因表达的影响。结果：外源性P27^kipl蛋白在胃癌细胞中获稳定表达，胃癌细胞凋亡，bcl-2蛋白表达水平降低。结论：P27^kipl的过度表达可通过对bcl-2表达的调控显促进胃癌细胞凋亡，提示P27^kipl基因转染可成为胃癌的有效治疗方法。     

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的 :探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(FOXQ1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法:采用q RT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),q RT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因和蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。结果:FOXQ1在胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达显著低于胃癌细胞(P0.05),胃癌SGC-7901细胞中FOXQ1的表达最高,作为后续实验研究对象。转染FOXQ1 siRNA后SGC-7901细胞中FOXQ1的表达显著下降(P0.05)。si-FOXQ1组凋亡率及Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于si-Control组(P0.05),而SHH、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达显著低于si-Control组(P0.05)。Normal组和si-Control组间以上各指标差异无统计学意义(P0.05)。SHH特异性激活剂purmorphamine能够逆转转染FOXQ1 siRNA诱导的SGC-7901细胞凋亡。结论:FOXQ1基因在胃癌细胞中呈高表达,SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,通过上调Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达来实现。     

RNA干扰下调肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因表达对胃癌细胞黏附、迁移和侵袭的影响

目的 观察肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(TROP-2)基因小干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞生物学行为的影响.方法 培养人胃癌MGC-803、HGC-27及BGC-823细胞株,以荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测TROP-2基因mRNA表达;筛选出TROP-2表达最高者.采用TROP-2基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察TROP-2基因mRNA和蛋白水平,然后以计数法检测细胞黏附,以划痕法观察癌细胞迁移、以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果 荧光实时定量PCR方法显示,3株胃癌细胞中,TROP-2均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以TROP-2 siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞TROP-2基因mRNA和蛋白明显下降,且呈浓度依赖性;细胞黏附结果显示,转染组细胞黏附数量明显下降;划痕试验和Boyden试验结果显示,细胞迁移和侵袭力明显下降.结论 TROP-2基囚在胃癌细胞黏附、迁移和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附、迁移和侵袭能力.     

siRNA干扰沉默GS基因抑制胃癌细胞生长的研究

目的：利用RNA干扰技术,研究靶向Glutamine Synthetase（GS）基因的小干扰RNA（siRNA）在体外对胃癌细胞生长的影响,探索胃癌基因治疗并了解GS在胃癌发生、发展中的作用。方法：合成GSsiRNA,并用脂质体法将GSsiRNA转至胃癌BGC-823细胞中;采用实时定量PCR和Western印迹法观察GSsiRNA转染前后胃癌细胞GS基因及相应蛋白表达的变化;用CCK8、流式细胞检测技术分别检测胃癌细胞增殖及凋亡的变化。结果：转染GSsiRNA后的胃癌细胞BGC-823与对照组相比,生长明显变缓（P〈0.05）,细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）。结论：靶向GSsiRNA可明显下调靶基因GS的表达,在体外可抑制胃癌BGC-823细胞的生长并促进其凋亡。     

Na+-H+交换体1反义基因磁性纳米微粒对SGC-7901胃癌细胞形态学的影响

目的探讨Na^＋-H^＋交换体1（Na^＋-H^＋exchanger1,NHE1）反义基因磁性纳米微粒对SGC-7901胃癌细胞形态学的影响。方法构建NHE1反义基因真核表达载体和NHE1反义基因磁性纳米微粒,将NHE1反义基因转染至SGC-7901胃癌细胞中,从光镜、电镜水平观察转染与未转染细胞形态学的变化。结果氧化铁磁性纳米颗粒成功地将NHE1反义基因转染至SGC-7901胃癌细胞中。与亲本细胞相比,光镜下NHE1反义基因转染的SGC-7901胃癌细胞胞体增大,胞质丰富,核大小相对一致,核质比和核分裂象减少,异型性减少。透射电镜下细胞线粒体数量增多、体积增大,并可见髓鞘样变,粗面内质网、高尔基体较发达,内质网扩张,核偏向一侧,极性增强。结论NHE1反义基因磁性纳米微粒能使SGC-7901胃癌细胞发生形态学及超微结构的变化,有促进SGC-7901胃癌细胞分化的作用。     

长链非编码RNA RAB1A-2在胃癌中的表达及作用

背景与目的:长链非编码RNA(lncRNA)参与细胞增殖、凋亡、周期控制、细胞发育和分化等一系列生物学过程,其差异表达与肿瘤的发生,发展密切相关。lncRNA RAB1A-2(RAB1A-2)一种mTORC1激活剂,目前发现RAB1A-2与肺癌细胞DNA异常扩增、细胞增殖及侵袭有关。为进一步研究其生物学功能,本研究探讨RAB1A-2在胃癌中的表达及作用。方法:采用qRT-PCR法检测68例胃癌组织及癌旁组织﹑3种胃癌细胞系(MKN-45、BGC-823、SGC-7901)及正常胃黏膜细胞系(GES-1)中RAB1A-2的表达,分析RAB1A-2的表达与患者临床病理因素间的关系,Kaplan-Meier生存分析比较RAB1A-2的表达与预后的关系。将SGC-7901细胞系分别转染si-RAB1A-2(RAB1A-2干扰组)、RAB1A-2模拟物(RAB1A-2模拟物组)和阴性对照序列(阴性对照组),分别用MTT法、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡和细胞侵袭能力。结果:qRT-PCR结果显示,胃癌组织中RAB1A-2相对表达量高于癌旁组织,3种胃癌细胞系中RAB1A-2表达量均高于正常胃黏膜细胞系(均P0.05)。胃癌组织中RAB1A-2的表达与肿瘤大小、T分类、N分类和TNM分期均有关(均P0.05)。生存分析结果显示,RAB1A-2高表达患者3、5年总生存率均低于RAB1A-2低表达患者(均P0.05)。与阴性对照组SGC-7901细胞比较,转染后24、48、72 h,RAB1A-2模拟物组SGC-7901细胞的A_(450) nm值均明显升高,RAB1A-2干扰组SGC-7901细胞的A_(450) nm值均明显降低(均P0.05);RAB1A-2模拟物组SGC-7901细胞的凋亡率明显降低,RAB1A-2干扰组SGC-7901细胞的明显升高(均P0.05);RAB1A-2模拟物组SGC-7901细胞的侵袭细胞数明显增加,RAB1A-2干扰组SGC-7901细胞的侵袭细胞数明显减少(均P0.05)。结论:RAB1A-2在胃癌组织和细胞中表达上调,RAB1A-2可促进胃癌细胞增殖和侵袭,并抑制细胞凋亡,RAB1A-2高表达患者预后较差。     

人胃癌细胞株增殖迁移和克隆成瘤的比较

我们选取4株常见的人胃癌细胞,通过体内外实验,比较其增殖、迁移和克隆成瘤能力. 一、材料与方法 1.材料和细胞培养:AGS、BGC-823、SGC-7901细胞株购自上海市细胞生物研究所,MKN-28细胞株由上海内分泌代谢病研究所赠送,Boyden迁移槽购自Costar公司,BALB/C裸小鼠购自扬州大学比较医学中心.细胞用含10%小牛血清的DMEM传代培养,取对数生长期细胞进行实验.     

蛋白激酶B siRNA 转染对胃癌SGC-7901细胞生长增殖的影响

目的:探讨蛋白激酶B（PKB）基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖的作用。 方法:应用基因转染技术将蛋白激酶B家族的Akt2 siRNA转染至胃癌细胞中，采用Western blot、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术MTT等方法观察和检测Akt2 siRNA转染后对转染组细胞生长和增殖的影响。结果:与对照组比较，转染Akt2 siRNA组的胃癌SGC-7901细胞生长、增殖速度明显减缓（P＜0.01）， Akt2 siRNA组较对照组细胞的Akt2蛋白表达水平显著下调（P＜0.01）;转染组出现梯状凋亡条带;细胞周期显示转染组细胞聚集在G2/M期。 结论:应用RNAi使蛋白激酶B基因沉默能使人胃癌SGC－7901细胞的生长受到抑制，胃癌细胞增殖速度减缓，其作用机理可能通过诱导细胞凋亡和抑制PI3/K信号传导通路而实现。Akt2有望成为胃癌基因治疗的新靶点。     

蛋白激酶D1及其甲基化在胃癌中的表达研究

目的 探讨蛋白激酶D1（PKD1）在胃癌组织和胃癌细胞中的表达,及其甲基化在胃癌发病中的作用.方法 采用RT-PCR方法检测胃癌组织中PKD1 mRNA的表达;体外培养胃癌细胞系BGC-823和MGC-803,采用Western blot检测PKD1甲基化特异性阻断剂5-杂氮-2＇-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）处理前后PKD1蛋白的表达.结果 与癌旁组织相比,PKD1在胃癌组织中的表达明显下降（0.318±0.036比0.908±0.041,P＜0.01）.5-Aza-CdR处理后,BGC-823和MGC-803细胞中PKD1蛋白表达均显著增高（均P＜0.05）.结论 PKD1甲基化可导致胃癌细胞PKD1表达下降,可能参与了胃癌的发生和进展.     

骨桥蛋白小干涉RNA抑制大隐静脉平滑肌细胞增殖和迁移能力的研究

目的观察骨桥蛋白（OPN）小干涉RNA（siRNA）对大隐静脉血管平滑肌细胞增殖和迁移能力的影响，并探讨可能机制。方法原代培养大隐静脉平滑肌细胞，转染siRNA，用实时定量聚合酶链反应（PCR）和免疫印迹法检测OPN以明确干涉效果，用噻唑蓝比色法（MTT）试验和Transwell法观察对增殖和迁移能力的影响，并用免疫印迹法检测基质金属蛋白酶（MMPs）表达情况。结果OPNsiRNA有效干涉了血管平滑肌细胞OPN的表达，抑制了血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力，并减低了基质金属蛋白酶-2、-9（MMP-2、MMP-9）蛋白的表达。结论OPN通过调控MMP-2、MMP-9表达，对大隐静脉平滑肌细胞的增殖和迁移具有重要意义；骨桥蛋白siRNA在细胞水平上能改变血管平滑肌细胞的生物学行为。