MUC2反义脱氧寡核苷酸对胃癌细胞体外黏附侵袭活性的影响

目的 探讨黏蛋白MUC2反义脱氧寡核苷酸（ASODN）对人胃癌细胞株SGC7901黏附侵袭活性的影响。方法 采用人工合成的MUC2 ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入SGC7901细胞中,采用黏附试验、Boyden小室体外侵袭试验观察比较转染前后癌细胞黏附率,穿膜细胞相对百分率及组织蛋白酶D、钙黏蛋白表达的变化。结果 转染SGC7901细胞48h后,癌细胞黏附率在30、60、90、120min各时间段逐渐升高,但低于空白对照组（P均〈0．01）;转染后癌细胞穿膜细胞相对百分率明显下降;转染后SGC7901细胞的E-钙黏蛋白表达明显增高,组织蛋白酶D水平明显降低。结论 人工合成的MUC2 ASODN能有效抑制胃癌细胞株SGC7901黏附侵袭能力。     

STAT3反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的观察转染信号转导与转录激活因子3(STAT3)的反义寡核苷酸对人宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭功能的影响。方法针对人STAT3的基因序列设计并合成反义寡核苷酸,用阳离子脂质体介导转染人宫颈癌He-La细胞。应用RT-PCR和Western blot法分别检测STAT3基因mRNA及蛋白表达水平,软琼脂集落培养检测细胞的定植功能,体外侵袭实验检测HeLa细胞的侵袭能力。结果转染STAT3反义寡核苷酸HeLa细胞(HeLaSTAT3-ASODN)STAT3基因的mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(HeLaSTAT3-SODN)和正义组(HeLa),P<0.05;各组细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数分别为:HeLa组(74.31±7.62)、(44.85±6.26)个,HeLaSTAT3-SODN组(71.57±6.92)、(45.46±6.79)个,HeLaSTAT3-ASODN组(45.18±7.69)、(22.41±5.98)个。与HeLa组、HeLaSTAT3-SODN组比较,HeLaSTAT3-ASODN组克隆形成数和透膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 STAT3基因特异反义寡核苷酸可通过下调STAT3基因表达抑制细胞的定植和侵袭。     

DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长

目的研究ＤＮＡ聚合酶α（ＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅα，ＤＮＡ＿ｐｏｌα）特异的寡聚脱氧核苷酸（ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＯＤＮ）对人胃癌细胞生长的抑制作用。方法设计并合成与ｐｏｌα催化亚基ｍＲＮＡ翻译起始区和功能Ⅰ区互补的正义、反义ＯＤＮ（ＳＯＤＮ，ＡＳＯＤＮ），作用于人胃癌细胞系ＭＧＣ＿８０３，ＳＧＣ＿７９０１及正常对照人脐静脉曲皮细胞（ＨＵＶＥＣ），体外培养９６ｈ，ＭＴＴ比色法测定细胞存活状态，流式细胞仪分析ＤＮＡ含量。结果只有互补于ｐｏｌα翻译起始区的１８ｍｅｒＡＳＯＤＮ＿１可显著抑制人胃癌细胞的生长，并使胃癌细胞的ＤＮＡ指数值明显降低，半数抑制浓度约为１００μｇ／ｍｌ，培养４８ｈ后作用显著；而ＨＵＶＥＣ的生长未受明显干扰。结论ＤＮＡ＿ｐｏｌα催化亚基ｍＲＮＡ可作为构建抗肿瘤反义寡核苷酸的靶核酶，为恶性肿瘤的特异性治疗带来突破性进展。     

反义局部粘着斑激酶脱氧寡核苷酸对肝癌细胞侵袭性生长的抑制作用

目的 观察反义局部粘着斑激酶脱氧寡核苷酸(FAK ODN)转染对肝癌细胞侵袭性生长的影响,并探讨其作用机制。 方法 以LipofecTAMINE介导的反义FAK ODN转染Bel 7402肝癌细胞株,测定Bel 7402肝癌细胞株体外生长曲线、细胞活力,测定不同时间点该细胞体外黏附能力变化,以Transwell小室测定细胞的体外侵袭能力,同时行FAK表达与细胞DNA含量的双参数流式细胞仪检测及细胞凋亡的流式细胞仪检测。 结果 p125FAK表达在反义转染组(6.49％±0.10％)显著低于正义转染组(14.33％±1.88％)与对照组(16.68％±1.62％),F=7.66,P<0.01;反义FAK ODN转染显著抑制Bel 7402肝癌细胞株的生长,其细胞活力显著下降,肿瘤细胞抑制率在30％-60％之间;细胞体外黏附能力受到显著抑制,黏附抑制率在25％-55％间;细胞的体外侵袭能力显著下降,侵袭抑制率在15％-25％之间;细胞凋亡显著增加;细胞周期分析显示S期细胞比率显著降低,细胞生长主要阻滞在G2/M期。 结论 FAK在Bel 7402肝癌细胞的黏附与迁移运动中发挥重要作用,其表达阻断显著抑制肝癌细胞的体外黏附与侵袭活性。FAK表达阻断显著抑制肝癌细胞的体外增殖,促进细胞凋亡。     

Cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞化疗敏感性的影响

目的 研究Cyclin D1反义寡核苷酸（ASODN）对胃癌细胞SGC-7901和HS-746T化疗敏感性的影响,并探讨其内在机制。方法 在给予Cyclin D1 ASODN和Cyclin D1反义寡核苷酸转染细胞24h后,分别给予梯度浓度的5-氟尿嘧啶（5-FU）、氨甲喋呤（MTX）、顺铂（CDDP）,观察各组的量效反应,计算IC50。Cyclin D1 ASODN转染细胞后24h、48h时应用RT—PCR分别检测各组细胞中胸苷酸合酶（TS）、胸腺嘧啶磷酸化酶（TP）、二氢叶酸还原酶（DHFR）的表达情况。结果 Cyclin D1 ASODN转染增加了两种胃癌细胞对5-FU、MTX、CDDP的敏感性,ASODN＋化疗组对各化疗药物的lc50与对照组相比均有显著下降。RT—PCR显示Cyclin D1 ASODN转染后24h时Cyclin D1、TS、DHFR mRNA表达较对照组下降,而TP mRNA表达较对照组升高,在48h时各种酶mRNA表达的改变更加明显。结论 Cyclin D1 ASODN能提高胃癌细胞对多种化疗药物的敏感性,可能是由于影响了化疗药物代谢相关酶表达的改变所致。     

存活素反义寡核苷酸对甲状腺癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨利用凋亡抑制基因存活素反义寡核苷酸（ASODN）诱导甲状腺癌细胞凋亡的效应。方法 设计合成特异性靶向存活素的ASODN，以不同浓度和时间对人甲状腺髓样癌细胞进行转染，并设空白、正义（SODN）对照组进行比较。采用RT-PCR、Western印迹、免疫细胞化学技术检测各组细胞中存活素mRNA、蛋白表达水平，DNA裂解分析、吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡水平和形态变化，MTT法检测细胞生长抑制情况。结果 转染ASODN各组细胞存活素mRNA和蛋白表达均较空白对照组、SODN组明显减弱；细胞凋亡率显著增加，细胞生长相应受抑，上述效应在ASODN转染24h最为明显，并呈浓度依赖性；而各时段SODN组与空白对照组间各项指标差异均无统计学意义。结论 ASODN能够特异性地下调甲状腺癌细胞中存活素基因表达，进而诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制其增殖。     

C-myc反义寡核苷酸对人肝癌移植瘤生长的影响

在肝癌组织中 ,Ｃ ｍｙｃｍＲＮＡ及蛋白均有较高表达[1 ] 。我们发现 ,脂质体 (ＬＲ)介导Ｃ ｍｙｃ反义寡核苷酸 (Ａ ＳＯＤＮ)对人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1在体外细胞培养实验中有抑制肿瘤细胞生长作用[2 ] 。为此 ,我们选择 9只裸鼠 ,制成肝癌移植瘤模型 ,初步观察Ｃ ｍｙｃ反义寡核苷酸对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响。材料和方法一、反义寡核苷酸的制备采用计算机辅助设计针对Ｃ ｍｙｃｍＲＮＡ第二外显子起始码ＡＵＧ及其后四个密码子合成Ｃ ｍｙｃ反义寡核苷酸 5′ ＡＡＣＧＴＴＧＡＧＧＧＧＣＡＴ 3′ ,错配链寡核苷酸 (ＭＯＤＮ) ,5′ …     

三氧化二砷对肝癌细胞侵袭转移的影响及机制

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)抗肝癌侵袭转移的机制.方法 体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,将0、1.0、2.0 μmol/L浓度的As2O3作用于SMMC-7721细胞,采用过河实验检测肿瘤细胞体外运动;MTT法观察细胞黏附能力;Transwell体外侵袭转移模型检测细胞迁徙、侵袭能力;并用PCR法检测乙酰肝素酶(HPA)mRNA表达.结果 0、1.0、2.0 μmol/L As2O3作用SMMC-7721细胞后,表现为过河时间延长,细胞黏附抑制率明显上升,过膜细胞数减少(P＜0.01),HPA基因表达量降低(P均＜0.01);且呈剂量依赖性.结论 As2O3可明显抑制人肝癌细胞SMMC-7721细胞黏附、迁徙和侵袭能力,下调HPA mRNA表达,此可能为其抗肿瘤侵袭转移作用的机制之一.     

CD98对肝癌细胞侵袭和转移的影响

目的本研究拟通过RNA干扰技术下调人类肝癌细胞(hepatocellular carcinoma,HCC)CD98基因的表达,探讨CD98对肿瘤侵袭与转移的影响.方法利用CD98 siRNAs瞬时转染人类HCC系(FHCC-98),免疫印迹法证实癌细胞中CD98蛋白表达下调后,通过细胞黏附实验、Transwell侵袭实验及划痕愈合实验,检测CD98对HCC的黏附、侵袭和迁移能力的影响.结果 CD98 siRNAs瞬时转染FHCC-98细胞48 h后,癌细胞CD98的蛋白水平显著下调,干扰CD98蛋白表达水平后,癌细胞黏附能力显著下降,Transwell实验证实与对照组相比,癌细胞的侵袭能力显著下降,划痕实验也证实干涉CD98后癌细胞的迁移能力显著下降.结论 CD98通过增强HCC的黏附及迁徙能力,促进HCC的侵袭和转移,为未来肝细胞癌治疗提供了可能的靶点.     

端锚聚合酶1反义寡核苷酸对人肺癌细胞增殖的影响

目的　探讨端锚聚合酶 1(tankyrase 1,TANK1)反义寡核苷酸对人肺癌细胞的影响 ,为肺癌治疗的靶向研究探索新途径。方法　合成TANK1正义寡核苷酸 (TANK1 SODN)、反义寡核苷酸(TANK1 ASODN) ,待人肺癌细胞株CALU在裸鼠蹊部皮下接种成瘤后 ,将成瘤裸鼠随机分成 3组 :对照组 4只 (每天上午于瘤体内多位点注射生理盐水 2 0 0 μl/只 ) ,正义组 (每天同法注射含TANK SODN10 0 μg的生理盐水 2 0 0 μl/只 )和反义组 (每天同法注射含TANK ASODN 10 0 μg的生理盐水 2 0 0 μl/只 )各 5只 ,观察肿瘤的生长情况及组织学改变。用链霉亲和素 生物素 酶复合物 (SABC)法检测肿瘤细胞Ki6 7及端粒酶反转录酶 (hTERT)的阳性表达率。结果　在裸鼠成瘤部位连续注射相应液体 16d后 ,反义组移植瘤体积为 (1 4 6± 0 70 )cm3 ,明显小于对照组的 (3 2 9± 0 4 7)cm3 及正义组的 (3 14±0 70 )cm3 ,差异有显著性 (P均 <0 0 1) ;肿瘤细胞Ki6 7标记指数及hTERT细胞阳性率均明显低于对照组及正义组 (P均 <0 0 1)。结论　人肺癌细胞株端粒酶呈高度表达 ,TANK1 ASODN可降低瘤细胞端粒酶活性 ,抑制肺癌细胞增殖     

反义myb寡核苷酸对平滑肌细胞增殖抑制作用优于反义myc寡核苷酸

反义ｍｙｂ寡核苷酸对平滑肌细胞增殖抑制作用优于反义ｍｙｃ寡核苷酸杨和平，刘革修，欧和生，万腊香，彭建平，张彤，杨永宗（衡阳医学院分子生物学研究中心，衡阳４２１００１）本室合成了反义ｍｙｂ和反义ｍｙｃＯＤＮ，分别或同时导入培养ＷＫＹ主动脉平滑肌细胞，同...     

反义Kv1.5寡核苷酸转染对人气道平滑肌增殖的影响

大量研究表明，气道平滑肌的增生对气道阻力和气道高反应性有着显著的影响，但目前关于气道平滑肌异常增生的确切机制尚不完全清楚。因此，探讨气道平滑肌的增殖以明确支气管哮喘（以下简称哮喘）的发病机制，并寻找更有效的治疗方法，成为目前国内外哮喘研究的热点。本实验通过观察转染反义Kv1．5寡核苷酸（ODNs）对人气道平滑肌细胞（HASMCs）增殖及凋亡的影响，意在阐明K^＋通道在气道平滑肌增殖中的作用，为临床治疗提供实验资料。     

bcl-2反义寡核苷酸联合三氧化二砷对膀胱癌细胞生长的抑制作用

目的观察bcl-2反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides，ASODN）与三氧化二砷（As2O3）对膀胱癌细胞生长的抑制作用，比较联合或单独用药的抑制效果。方法人工合成包含bcl-2翻译起始位点的ASODN及无义核酸（NSODN），以质脂体（Lipofectamine）作为载体转染T-24膀胱癌细胞株。分为对照组（加PBS）、反义组（ASODN 1μmoL/L）、无义组（NSODN 1μmoL/L）、As2O3组（2μmoL／L）、As2O3＋反义组（联合用药组：As2O3 1μmol／L，ASODN0．5μmol／L）。采用肿瘤细胞生长曲线、四氮唑蓝（MTT）实验和集落形成实验，观察药物对肿瘤细胞生长的抑制作用，流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果从细胞生长曲线看出，与对照组相比，联合用药组肿瘤细胞数减少了62．09％，反义组减少了31．04％，As2O3组减少了39．08％，无义组减少了21．84％。MTT实验，肿瘤细胞抑制率联合用药组为（86．11±7．35）％，As2O3组为（67．21±8．99）％，反义组为（50．23±5.46）％，无义组为（8．22±0．33）％，组间比较差异有统计学意义（F=180．2，P〈0．01）。半数抑制浓度（IC50）联合用药组为（0．98±0．12）μmol／L，As2O3组为（1．53±0．32）μmol／L。反义组的为（1．96±0．22）μmol／L，无义组为（4．33±0．33）μmol／L，组间比较差异有统计学意义（F=354.0，P〈0．01）。肿瘤细胞集落生存率联合用药组为53．76％，反义组为76．32％，As2O3组为75．25％，无义组为90．33％。肿瘤细胞凋亡率联合用药组为（22．66±1．66）％，组间比较均差异有统计学意义（F=232．15，P〈0．01）。结论Bcl-2反义寡核苷酸与As2O3联合应用可明显提高对膀胱癌细胞生长的抑制作用。     

血管内皮生长因子C反义脱氧寡核苷酸对肺癌细胞的作用

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCC)中血管内皮生长因子C(VEGF-C)信使核糖核酸(mRNA)的表达及其反义脱氧寡核苷酸(antisense oligodeoxyribonucleotide,ASODN)对人肺癌细胞的作用.方法 应用原位杂交技术检测48例新鲜肺癌标本中VEGF-C mRNA的表达,将脂质体介导的VEGF-C ASODN转染人肺癌细胞株A-549,用Western印迹法检测肺癌细胞VEGF-C蛋白的表达.结果 VEGF-C mRNA在肺鳞癌和腺癌细胞中的表达阳性率分别为65.4%(17/26)和59.1%(13/22),经VEGF-C ASODN转染的细胞株A-549中,VEGF-C蛋白表达水平明显下降(P＜0.01).结论 VEGF-C mRNA在NSCC中有一定程度的表达,体外实验VEGF-C ASODN通过下调VEGF-C蛋白的表达抑制肺癌细胞的侵袭作用.     

Ku70反义寡核苷酸增强甲状腺癌细胞的辐射敏感性

目的 研究DNA修复基因Ku70反义寡核苷酸(ASODN)对甲状腺癌细胞辐射敏感性的影响.方法 设计合成特异性靶向Ku70的ASODN,以不同浓度转染人甲状腺髓样癌细胞(TT),并设脂质体和正义寡核苷酸(SODN)对照组进行比较.采用Western印迹技术检测各组细胞中Ku70蛋白表达水平.利用不同剂量60 Co γ射线照射细胞后,细胞克隆形成实验检测细胞存活分数.CCK-8法、Annexin-V/PI染色法分析ASODN对细胞活力和细胞凋亡的影响.彗星电泳法比较γ射线照射后DNA双链断裂的修复效率.结果 转染ASODN各组细胞Ku70蛋白表达均较脂质体对照组、SODN组明显降低,并呈浓度依赖性;照射后细胞存活率降低(P＜0.01),凋亡率显著增加(P＜0.01),DNA双链断裂的修复效率降低(P＜0.01).结论 ASODN能够特异性地下调甲状腺癌细胞Ku70的表达,抑制γ射线照射后细胞存活和DNA双链断裂修复,提高肿瘤细胞的辐射敏感性.     

hFXYD6反义核酸对胆管癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响

目的:研究hFXYD6基因反义核酸对人胆管癌QBC939细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法:构建hFXYD6基因反义核酸真核表达载体pcDNA3.1(-)/hFXYD6(-)并转染人胆管癌QBC939细胞,同时设pcDNA3.1(-)空载体对照组和空白对照组.SYBR GreenⅠ荧光定量RT- PCR和免疫组化分别检测hFXYD6 mRNA及蛋白表达;MTT、平板克隆形成实验检测细胞体外增殖活性:流式细胞仪检测细胞周期;Transwell侵袭小室模型检测细胞体外侵袭能力.结果:与空白组和空载组比较,反义组细胞hFXYD6 mRNA及蛋白表达量降低;细胞群体倍增时间增加(46.8 h vs 34.5 h,35.3 h),细胞克隆形成率降低(24.3%±5.3% vs 61.0%±8.5%,58.0%±5.6%,P<0.001);细胞周期中G1期细胞比例明显升高(66.4%±2.9% vs 33.5%±2.3%,39.4%±3.7%,P<0.001),S期比例明显减少(18.6%±1.6% vs 36.2%±2.1%,34.1%±1.6%,P<0.001);Transwell侵袭小室中24 h穿膜细胞数无显著改变.空白组和空载组细胞间均无明显差异.结论:hFXYD6反义核酸抑制人胆管癌QBC939细胞体外增殖能力,但对其侵袭能力无明显作用.