问号钩端螺旋体溶血素基因特征分析

目的　预测问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株致病因子———溶血素基因 ,并对其编码蛋白结构特征进行深入分析。方法　使用NCBI ,Swissprot/TrEMBL ,ProDom ,Pfam ,Jpred2 ,TMpred ,SignalP ,ClustW对问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株溶血素基因诠释 ,所编码蛋白进行在线分析 ,并使用Bioedit软件进行氨基酸同源性比较分析。结果　确定了问号钩端螺旋体黄疸出血型赖株 9个溶血素基因 ,分为两大类 :鞘磷脂酶类溶血素基因和非鞘磷脂酶类溶血素基因。并对溶血素基因编码蛋白二级结构、结构域、跨膜区域、信号肽及进化等进行了分析。结论　多种类型多条溶血素基因同时存在于钩端螺旋体菌中 ,暗示溶血素基因和钩端螺旋体致病性之间有密切的关系 ,可能在致病过程中起重要作用     

螺旋体传染病

flaB—PCR在钩端螺旋体病检测中应用，钩端螺旋体致病机制的研究进展（综述），钩端螺旋体病26例临床分析，钩端螺旋体疫苗的过去、现在和未来，     

钩端螺旋体的分子分型方法

钩端螺旋体（Leptospira,简称钩体）,属于螺旋体目螺旋体科钩端螺旋体属,分为两个种：双曲钩端螺旋体（Leptospira biflexa）和问号钩端螺旋体（Leptospira interrogans）;前者为腐生性钩端螺旋体,通常对人和动物不致病;后者为寄生性、     

钩端螺旋体V-1单克隆抗体的特异性保护作用的研究

钩端螺旋体的保护性抗体和血清学特异性凝集抗体均为以外膜抗原为基础的免疫学反应。这两种抗体的关系如何,过去各家看法不一。我们应用V-1单克隆抗体的型特异性凝集反应性和金地鼠被动保护力试验,证实了特异性凝集抗体与保护性抗体是一致的。因而提出了一个观点即:两种抗体实质上是钩体外膜抗原刺激机体所产生的一种抗体在不同反应系统中的不同表现。     

问号钩端螺旋体胶原酶在钩体病豚鼠模型的肺组织中的表达

目的通过克隆、表达问号钩端螺旋体赖型赖株的胶原酶基因colA(LA0872),以及制备抗胶原酶的多克隆抗体,观察胶原酶在钩体病豚鼠模型的组织中的表达,为研究其致病机制奠定基础。方法以问号钩端螺旋体赖型赖株基因组DNA为模板,用PCR扩增colA,产物克隆到表达载体pET-28b(+)中,构建含colA的重组质粒;将重组质粒转入E.coli Rosetta(DE3)菌株内,IPTG诱导表达后用Ni-NTA His-Bind亲和层析柱纯化重组蛋白;用纯化的重组蛋白免疫家兔制备抗胶原酶的多克隆抗体;Max Vision二步法染色检测胶原酶在感染钩端螺旋体的豚鼠肺组织中的分布。结果克隆表达目的基因,并成功制备了抗胶原酶的多克隆抗体。免疫组化显示在出血的肺组织中存在胶原酶。结论钩体病豚鼠模型的肺组织中有胶原酶的表达,并且存在于有钩端螺旋体分布的部位。本研究为进一步探讨胶原酶在钩端螺旋体侵袭和宿主组织出血中所起的作用奠定了基础。     

梅毒螺旋体不同血清学检测方法对比分析与评价

<正>梅毒是由梅毒螺旋体苍白亚种感染所致的一种全身性的慢性传染病,主要通过性接触传播。梅毒临床表现复杂多样并可累及全身多个器官,严重危害人群健康。梅毒感染后,机体可产生非特异性和特异性抗体,针对这两种抗体的梅毒螺旋体血清学检测具有重要诊断价值。本研究对目前临床常用的梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)及酶联免疫吸附试验(ELISA)3种不同血     

不同毒力钩端螺旋体引起的细胞因子表达的差异

目的通过比较不同毒力钩端螺旋体引起豚鼠细胞因子表达的差异,探讨钩端螺旋体病的炎症反应及其发病机制。方法豚鼠腹腔内分别注射致病性钩端螺旋体赖型有毒株Lai株,赖型无毒株IPAV株,以及非致病性钩端螺旋体Patoc型Patoc1株,观察豚鼠各脏器的病理改变;EnVision二步法检测钩端螺旋体在各脏器中的分布;应用Real-ti me RT-PCR法检测豚鼠血液中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-12、MCP-1mRNA的表达。结果钩端螺旋体IPAV株和Patoc1株不能引起豚鼠组织病变,但是在感染早期引起细胞因子的高表达;而Lai株可以引起典型的钩端螺旋体病病变,但是在感染早期引起细胞因子较低表达。结论致病性钩端螺旋体赖型毒力株Lai株引起的细胞因子的表达明显低于非致病钩端螺旋体Patoc型Pa-toc1株和赖型无毒株IPAV株,可能与钩端螺旋体病炎症反应轻微有关,有利于钩端螺旋体逃避宿主的免疫反应,在体内繁殖扩散。     

螺旋体传染病

梅毒螺旋体特异性抗体对梅毒早期诊断和治疗的评价，温江县钩端螺旋体病发病率大幅下降原因，妊娠期梅毒螺旋体感染11例对围生结局的影响。     

CiaRH生物信息学分析及其在不同猪链球菌血清型中的分布

目的 对猪链球菌2型中二元信号转导系统CiaRH的序列进行分析并评估该系统在不同血清型中的分布。方法 利用生物信息学方法分析其组分蛋白的结构域。PCR及序列分析手段评估CiaRH在不同血清型猪链球菌中的分布情况。结果 比对结果显示,CiaRH同源蛋白存在于链球菌属的不同种细菌中。结构分析发现,在CiaH的N-端包含两个跨膜区,其间的间隔区域发现一个可能用来结合环境信号的PDC结构域;CiaH的C-端为保守的HisKA及HATPase_C结构域。PCR及序列比对结果显示,CiaRH在不同血清型猪链球菌中广泛分布。结论 提示CiaH为胞外感应型组氨酸激酶。在CiaR的N-端为保守的信号接收结构域REC,而C-端为具有DNA结合功能的trans_reg_C结构域。     

两株不同毒力株钩端螺旋体37℃培养条件表达谱的差异

目的 钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株毒力株56601（中赖）与钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株减毒株（法赖）在遗传背景上具有很大的相似性，但毒力却差别很大。本研究利用钩端螺旋体的cDNA芯片在全基因组水平上研究毒力差别的机制。方法 利用钩端螺旋体的cDNA芯片，在37℃培养条件下以钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株毒力株56601（中赖）为测试株，以钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株减毒株（法赖）为对照株，测试了芯片表达谱的变化。结果 在37℃培养条件下，毒力株和减毒株的表达谱具有明显的差别。毒力株上调表达的基因有101个，下调表达的有71个。这些差异表达的基因在功能上可分为12类。结论 这些差异表达的基因可能在钩端螺旋体毒力株致病力方面发挥一定的作用。     

钩端螺旋体外膜蛋白LipL32的重组表达及在ELISA检测中的初步应用

目的 构建L32—pQE32重组质粒，诱导表达重组钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL32，建立以重组外膜蛋白为基础的抗体间接ELISA检测方法。方法 采用PCR法从钩端螺旋体DNA中获取编码LipL32的基因片段。构建重组克隆载体pGEM—T／L32和表达载体L32—pQE32。转化受体菌E．coliDH5α和E．coliM15，IPTG诱导表达重组LipL32蛋白。Ni—NTA亲和层析纯化重组LipL32蛋白。以纯化的重组LipL32蛋白为抗原。特异的钩体抗血清进行ELISA实验。结果 扩增出约750bp的LipL32成熟蛋白基因。LipL32基因插入pQE32表达载体。表达产物6个组氨酸与LipL32蛋白的融合蛋白相对分子量约为31kDa。与预期27．6kDa大小一致。SDS-PAGE电泳显示：LipL32蛋白主要以包涵体形式表达。ELISA显示LipL32蛋白能与钩体抗血清特异结合。方阵滴定试验确定以100ng／孔包被酶标板，酶标抗体稀释度1：20000作为工作浓度。结论 LipL32蛋白能在大肠杆菌中表达，Ni—NTA亲和层析可有效纯化重组LipL32蛋白。重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。     

布鲁氏菌TIR结构域蛋白TcpB的研究进展

布鲁氏菌病是由布鲁氏杆菌感染引起的一种人兽共患病,其感染的重要特征是机体的免疫功能受到抑制。布鲁氏菌TIR结构域蛋白TcpB具有多种免疫抑制功能,在逃避宿主免疫应答中具有重要作用。谨就布鲁氏菌TcpB的基本结构、免疫调节功能和分子机制的研究进展综述,以便理解TIR结构域蛋白TcpB在布鲁氏菌致病中介导的免疫抑制机制,有助于更好理解布鲁氏菌的致病机理,为诊治布鲁氏菌病提供新思路。     

螺旋体传染病

某犬场犬型钩端螺旋体的分离与鉴定——范泉水等；梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室评价；玻片凝集试验和间接血凝试验诊断钩端螺旋体病比较；三种方法检测梅毒螺旋体抗体的比较；400例莱姆病病例临床疾病类型及其治疗效果分析；     

问号钩端螺旋体重要蛋白研究进展

钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白(outer membrane proteins,OMPs)位于钩体表面,与宿主细胞直接接触,是重要的蛋白抗原。钩体OMPs是抗体和补体的作用部位,在致病和免疫应答过程中起重要的作用。一些钩体的外膜蛋白或外膜脂蛋白被证实有良好的抗原性和高度的基因保守性,其抗体具有广泛的交叉免疫凝集作用,这使得新一代基因工程疫苗开发成为可能。本文主要对钩端螺旋体几种重要OMPs的细胞定位、基因结构、在感染动物中的表达状态、在免疫保护中的作用等进行综述。     

螺旋体传染病：问号钩端螺旋体胶原酶在钩体病豚鼠模型的肺组织中的表达

[目的：通过克隆、表达问号钩端螺旋体赖型赖株的胶原酶基因colA（LA0872），以及制备抗胶原酶的多克隆抗体，观察胶原酶在钩体病豚鼠模型的组织中的表达，为研究其致病机制奠定基础。方法：以问号钩端螺旋体赖型赖株基因组DNA为模板，用PCR扩增colA，产物克隆到表达载体pET-28b（＋）中，构建含coLA的重组质粒；将重组质粒转入E．coli Rosetta（DE3）菌株内，IPTG诱导表达后用Ni—NTA His-Bjnd寨和屡析梓绅化雷绢蛋白;[编者按]     

梅毒螺旋体编码抗氧化蛋白基因及其编码产物的研究进展

梅毒是由苍白密螺旋体引起的慢性、全身性疾病。由于梅毒螺旋体体外培养困难,很大程度上限制了对于梅毒致病机制、实验室诊断及治疗等方面的研究。随着梅毒螺旋体基因组序列解析、基因重组技术及免疫学发展,使梅毒螺旋体的研究取得一定进展。对于梅毒螺旋体脂蛋白、膜蛋白的研究层出不穷,但对于抗氧化相关蛋白的阐述仍较少,抗氧化相关蛋白对于明确梅毒致病机制及早期诊断梅毒均有一定意义,故现对编码抗氧化蛋白基因及其编码产物的研究进展作一简要阐述。     

问号钩端螺旋体GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学分析

目的分析问号钩端螺旋体(钩体)环二鸟苷酸(Cyclic dimeric-GMP,c-di-GMP)调节相关的GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白生物信息学结果,为后续的功能研究奠定基础.方法 PSI-BLAST方法分析编码GGDEF和EAL/HD-GYP结构域蛋白的基因;利用相应生物信息学软件对蛋白信号肽序列,跨膜序列,蛋白结构,同源性进行分析并构建目的蛋白进化树.结果 问号钩体中22个蛋白分别含有GGDEF或EAL/HD-GYP结构域,多数蛋白均有感受器结构域和跨膜区.7个具有PAS输入感受器的GGDEF结构域蛋白进化较为独立,位于单独的一个分支,其余6个GGDEF结构域蛋白则分散在不同的分支上.4个EAL结构域蛋白和2个HD-GYP结构域蛋白进化上也较为独立,分别处于同一进化分支.3个GGDEF和EAL结构域耦合的蛋白在进化关系上更趋向于PDE活性蛋白.结论 钩体具有多拷贝的合成和降解c-di-GMP相关蛋白编码基因,表明在钩体中c-di-GMP网络具有高度复杂性,同时反映出钩体对环境条件的改变具有复杂的应对机制.     

螺旋体传染病

问号钩端螺旋体鞭毛相关基因flhA、flhB2和fliR的克隆及原核表达系统的构建； 浙江省首次在蜱中检测到莱姆病螺旋体DNA片段；梅毒螺旋体不同血清学检验方法的应用评价；梅毒螺旋体明胶颗粒凝集法改良微板技术的建立及应用；牙周基础治疗对龈下菌斑中螺旋体及牙周状态影响的研究；梅毒螺旋体特异性IgM抗体检测的临床评价；     

莱姆病与钩端螺旋体病血清学交叉反应问题的研究

钩端螺旋体病患者与伯氏疏螺旋体偶尔可出现交叉反应,在动物试验亦得到证实,但出现频度和滴度均不高。莱姆病患者血清则未出现钩端螺旋体抗体。     

江西口岸及国检监管区鼠类感染钩端螺旋体的检测及基因序列分析

目的为了解江西省口岸及国检监管区鼠类携带的钩端螺旋体情况,2015年7-12月,对江西省2个一类口岸和9个国检监管区捕获的鼠类携带的钩端螺旋体进行了检测。方法采用荧光定量PCR和特异性PCR扩增两种方法对样本进行检测。结果研究发现捕获的107只鼠类中存在12例致病性钩端螺旋体阳性,阳性率为11.2%。包括褐家鼠6只,黄毛鼠3只,黄胸鼠1只,社鼠2只,分布在昌北机场、康替龙国检监管区、南丰国检监管区、鹰潭国检监管区和瑞金国检监管区。同源性对比和系统进化分析显示,12例钩端螺旋体中11例为问号钩端螺旋体,另1例为博氏钩端螺旋体。结论在江西口岸及国检监管区鼠类中存在问号钩端螺旋体和博氏钩端螺旋体感染。两种PCR检测方法均可适用于口岸及国检监管区对钩端螺旋体的检测,防止相应传染病在口岸的爆发与传播,保卫口岸安全。