芪蛭胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬相关因子LC3、p62表达水平的影响

目的 通过研究益气活血通络中药芪蛭胶囊对脑缺血再灌注损伤大鼠自噬相关因子LC3、p62表达的影响，阐明该方拮抗脑缺血再灌注损伤的可能分子机制。方法 将大鼠随机分为sham组、I/R组、3-MA组、中药组。中药及3-MA抑制剂干预后，复制MCAO/R模型，再灌注24 h后进行神经功能评分；TTC染色评定脑梗死体积；免疫荧光、Western-Blot及电镜检测自噬发生水平、自噬相关蛋白表达水平、细胞损伤程度。结果 与I/R组相比，中药组大鼠神经功能损伤显著减轻，脑梗死体积显著缩小，LC3BⅡ/Ⅰ比值明显升高，p62蛋白表达量显著降低，中药组细胞形态及细胞器保留较完整，有较多自噬小体及自噬溶酶体出现。结论 芪蛭胶囊可有效缓解脑梗死及神经功能损伤，提高LC3,降低p62的表达，进一步激活细胞自噬，从而有效拮抗CIRI,保护神经元。     

电针预处理通过调控皮层区自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:观察电针"百会""曲池""足三里"对脑缺血再灌注损伤大鼠大脑皮层区自噬的影响,探讨电针预处理改善大鼠脑缺血再灌注损伤的机制。方法:SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组11只。电针组电针"曲池""百会""足三里",每次30 min,每天1次,连续5 d。模型组和电针组大鼠末次电针结束30 min后,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型,使大鼠脑缺血1. 5 h,拔栓再灌注24 h后进行神经功能缺损评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法检测脑梗死体积,高尔基染色法检测神经元树突棘密度,电镜观察大脑皮层缺血区神经元结构及自噬小体形成情况,Western blot法检测大脑皮层缺血区中微管相关蛋白1轻链3(LC3)和选择性自噬接头蛋白sequestosome-1(SQSTM1/p62)的表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0. 01),脑梗死体积显著增大(P<0. 01),自噬小体增多,皮层缺血区LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著增加(P<0. 01),p62的表达显著下调(P<0. 01)。与模型组相比,电针组大鼠神经功能缺损评分明显降低(P<0. 01),脑梗死体积显著减小(P<0. 01),自噬小体减少,皮层缺血区LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著降低(P<0. 01),p62的表达显著上调(P<0. 01)。结论:电针预处理可能通过抑制自噬改善脑缺血再灌注损伤。     

电针水沟穴对脑缺血再灌注大鼠自噬相关蛋白p62表达的影响

目的:探讨电针水沟穴对大鼠脑缺血再灌注(MCAO/R)损伤的保护作用及与自噬相关蛋白p62的关系。方法:线栓法复制大鼠局造性脑缺血再灌注模型。采用Bederson神经功能缺损体征评分法对MCAO/R大鼠进行神经功能评分;Western blot检测MCAO/R大鼠自噬相关蛋白p62的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠有明显神经功能缺损体征,自噬相关蛋白p62的表达明显下调;与模型组相比针刺治疗组大鼠神经功能缺损体征明显减轻,自噬相关蛋白p62的表达明显上调。结论:电针水沟穴可能是通过拮抗自噬相关蛋白p62表达的下调减轻脑缺血再灌注损伤。     

竹节参总皂苷调节大鼠海马区自噬减轻脑缺血再灌注损伤

目的探讨竹节参总皂苷对脑缺血再灌注损伤大鼠海马组织中自噬的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、竹节参总皂苷低剂量组(50 mg/kg)、竹节参总皂苷高剂量组(100 mg/kg)。提前连续给药7 d。末次给药30 min后,采用线栓法制备大脑中动脉闭塞模型使大鼠缺血1.5 h,再灌注24 h后进行神经功能评分。TTC染色检测脑梗死范围百分比,电镜观察自噬小体,Western blot检测海马组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬底物蛋白p62的蛋白表达。结果与假手术组相比,模型组大鼠神经功能评分和脑梗死范围百分比增加(P0.01),自噬小体增多,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ增加(P0.01),p62表达下调(P0.01)。与模型组比较,竹节参各组大鼠的神经功能损伤明显改善,脑梗死范围百分比减小(P0.01),自噬小体减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低(P0.01),p62表达上调(P0.01)。结论竹节参总皂苷可能通过抑制自噬的过度激活,从而减轻脑缺血再灌注损伤的发生。     

葛根素调节AMPK-mTOR信号通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤研究

目的探讨葛根素通过腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)-Unc-51样激酶1(Ulk1)通路抑制自噬改善大鼠脑缺血再灌注损伤的作用。方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组及葛根素低、高剂量(50、100 mg/kg)组。各组大鼠连续给药7 d,末次给药30min后,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1.5 h再灌注24 h后,进行神经功能评分,TTC染色观察脑梗死体积,电镜观察自噬小体的形成,Western blotting法检测海马组织中微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62、AMPK、p-AMPK、m TOR、p-mTOR、Ulk1、p S757-Ulk1蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分显著增加,脑梗死体积明显增大,自噬小体增多,LC3-II/LC3-I显著增加,p62蛋白表达水平显著降低,p-AMPK表达水平显著升高,p-m TOR和p S757-Ulk1蛋白表达水平显著降低。与模型组比较,葛根素各组大鼠的神经功能损伤明显改善,脑梗死体积减小,自噬小体减少,LC3-II/LC3-I显著降低,p62蛋白表达水平显著升高,p-AMPK蛋白表达水平显著降低,p-m TOR和p S757-Ulk1蛋白表达水平显著升高。结论葛根素可能通过调控AMPK-m TOR-Ulk1信号通路抑制自噬的过度发生,从而减轻脑缺血再灌注损伤的发生。     

葛根素对脑缺血再灌注大鼠海马组织中Bcl-2、Beclin1及LC3蛋白表达的影响

目的观察葛根素对脑缺血再灌注大鼠海马组织中Bcl-2、Beclin1及LC3表达的影响。方法 28只雄性SD(250~300g)大鼠随机分为假手术组、模型组、葛根素低剂量(50mg/kg)组和葛根素高剂量(100mg/kg)组。连续给药7 d,末次给药1 h后,建立大脑中动脉闭塞模型,缺血90 min后,再灌注24 h,评估神经功能,采用TTC染色观察脑梗死面积,Western Blotting法检测缺血侧海马组织中Bcl-2、Beclin1及LC3蛋白表达的变化。结果与假手术组比较,模型组的大鼠神经功能损伤显著增强,脑梗死面积增加,Bcl-2蛋白表达显著下调,Beclin1蛋白表达显著上调,LC3-II/LC3-I的比值显著上升;与模型组比较,葛根素低、高剂量组随着剂量的增加,大鼠的神经功能损伤逐渐改善,脑梗死面积逐渐减小,Bcl-2的表达逐渐上调,Beclin1的表达逐渐下调,LC3-II/LC3-I的比值逐渐下降,呈剂量依赖性。结论葛根素可通过调控脑缺血/再灌注后凋亡基因Bcl-2的表达,下调自噬相关蛋白Beclin1及LC3蛋白表达,抑制过度自噬,继而达到保护缺血性中风损伤的目的。     

清热化瘀方通过调控自噬相关基因P62/LC3保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的:从自噬相关蛋白P62/LC3角度探讨清热化瘀方对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:160只大鼠随机分为4组:假手术组(SO组)、模型组(I/R组)、清热化瘀颗粒组(QRHY组)和清开灵颗粒对照组(QKL组)。分别于再灌注后12 h、1 d、2 d、3 d取材(n=10)。线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,分别采用透射电子显微镜观察神经元自噬及凋亡形态结构变化,qRT-PCR和Western blot观察P62及LC3 mRNA及其蛋白表达变化。结果:①大鼠脑缺血再灌注后激活自噬,再灌注后12 h至3 d可见自噬小体出现,之后自噬表达逐渐下降,细胞发生迟发性神经元死亡; QRHY方能减轻上述损害; ②I/R组LC3 mRNA及其蛋白表达均于缺血再灌注后12h开始明显上升,24 h达高峰(P<0.01),随后其表达渐趋下降(P<0.05); 而P62 mRNA及其蛋白表达时相变化则与之相反(P<0.05或P<0.01); QKL组较I/R组P62表达明显升高,LC3表达明显降低(P<0.05); QRHY 组较QKL组进一步升高P62表达,降低LC3的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:清热化瘀方可能通过调节P62/LC3信号通路而减轻自噬的程度,从而达到减轻脑缺血再灌注损伤,保护神经元的作用。     

眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织自噬的影响

目的:观察眼针疗法对脑缺血再灌注损伤大鼠脑血流以及脑组织自噬的影响,探讨眼针对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织产生保护作用的机制。方法:将50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、眼针组、抑制剂组和增强剂组,每组10只。采用改良线栓法制备脑缺血再灌注损伤大鼠模型。眼针组大鼠在造模成功后0.5 h、12 h及24 h给予眼针干预30 min;抑制剂组和增强剂组大鼠在造模前30 min给予侧脑室注射自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤和自噬诱导剂雷帕霉素,且抑制剂组和增强剂组给予同眼针组相同的眼针干预。在大鼠脑缺血再灌注后24 h用Longa评分法进行神经功能评分,用激光多普勒血流仪测量大鼠大脑皮层血流量和血流速度,用尼氏染色法观察缺血区脑组织神经元损伤情况,用Western blot法测定缺血区脑组织自噬相关蛋白Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分明显升高(P<0.01);大脑皮层血流量和血流速度明显降低(P<0.01);缺血区脑组织尼氏小体数量减少(P<0.01);Beclin-1蛋白表达水平和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高,而p62表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,眼针组和抑制剂组大鼠神经功能缺损评分下降(P<0.01);大脑皮层血流量和血流速度均明显增加(P<0.01);缺血区脑组织尼氏小体的数量增多(P<0.01);Beclin-1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ明显降低,p62的表达水平明显升高(P<0.01)。增强剂组与模型组比较,上述各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:眼针能够改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,其机制可能与增加脑血流量,加快脑血流速度以及抑制缺血区脑组织自噬有关。     

葛根素调节JNK信号通路抑制自噬保护脑缺血再灌注损伤的研究

目的从JNK信号通路探讨葛根素保护脑缺血再灌注损伤的自噬途径研究。方法 35只雄性SD大鼠,随机分为5组:假手术组、模型组、葛根素低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组和高剂量+抑制剂SP600125组。连续给药7 d,末次给药1 h后,采用线栓法制备大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,缺血1.5 h再灌注24 h后,进行神经功能评分,采用TTC染色观察脑梗死面积,Western Blotting法检测海马组织中JNK、p-JNK、LC3及p62蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组神经功能评分明显增加,脑梗死面积明显增大,p-JNK-1/JNK-1、p-JNK-2/JNK-2及LC3-II/LC3-I的比值显著增加,p62的表达显著下降。与模型组比较,葛根素各组大鼠的神经功能障碍明显改善,脑梗死面积缩小,p-JNK-1/JNK-1、p-JNK-2/JNK-2的比值降低,LC3-II/LC3-I的比值显著降低,p62的表达升高;与高剂量组相比,高剂量+SP600125组大鼠神经功能和脑梗死面积均无明显差异,p-JNK-1/JNK-1、pJNK-2/JNK-2、LC3-II/LC3-I的比值及p62的表达均无统计学意义。结论葛根素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与下调JNK信号通路抑制自噬有关。     

柚皮素对脑缺血损伤小鼠神经细胞线粒体自噬的影响实验研究

目的:探讨柚皮素对脑缺血小鼠神经细胞的保护作用,并从线粒体自噬途径探讨其保护作用的机制。方法:采用大脑中动脉栓塞造模(MCAO)的脑缺血再灌注损伤小鼠模型,原代皮层神经元的糖氧剥夺再灌注模型。动物实验分为空白组、假手术组、模型组、溶剂组、柚皮素组、抑制剂组、抑制剂+柚皮素组。细胞实验分为正常组、模型组、模型+柚皮素组、正常+柚皮素组、模型+抑制剂组、柚皮素+抑制剂组。检测神经功能缺损评分、脑梗死体积、细胞活力,观察小鼠脑组织神经细胞内粒体结构和线粒体自噬体分布情况,检测线粒体相关蛋白TOMM20、COX4I1、P62、LC3、Cyt C表达水平。结果:柚皮素可以降低MCAO小鼠的神经功能缺损评分,缩小脑梗死体积,增强神经细胞活力。电镜及Western blot结果发现柚皮素可以激活并促进MCAO小鼠神经细胞线粒体自噬。结论:柚皮素可以激活脑缺血后神经细胞线粒体自噬,减轻脑缺血后神经细胞损伤。     

电针对脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞自噬影响的实验研究

目的:探讨电针对脑缺血再灌注模型大鼠缺血半暗带区自噬相关蛋白LC3A/B表达的影响。方法:75只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、自噬抑制剂3-MA组、电针+3-MA组,共5组;每组根据缺血2 h再灌注时间分为IR24 h、IR72 h、IR7 d共3个亚组(n=5)。每组大鼠在IR24 h、IR72 h、IR7 d时间点分别进行复合神经功能评分、悬线测试评分和平衡行走测试评分测定;免疫组化检测自噬相关蛋白LC3A/B表达水平。结果:神经功能评分:电针组可减轻MCAO/R大鼠神经功能缺损体征,与模型组比较,差异极显著(P 0. 01); 3-MA组可加重大鼠神经功能缺损体征,与模型组比较,差异极显著(P 0. 01)。而3-MA+电针组无明显改善大鼠神经功能缺损,与模型组比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。免疫组化结果:模型组大鼠在各时间点均出现明显的LC3A/B蛋白表达上升,与假手术组比较,差异显著(P 0. 05),并在IR72 h时达到高峰;电针组大鼠在IR72 h,LC3A/B蛋白表达较模型组明显升高(P 0. 05),而在IR7 d时与模型组相比又出现明显降低(P 0. 05); 3-MA组能明显下调LC3A/B蛋白含量表达,而在抑制剂基础上给予电针干预能在IR72 h、IR7 d上调蛋白的表达,与3-MA组比较,差异显著(P 0. 05)。结论:头穴透刺配合电针可明显改善MCAO/R大鼠的神经功能缺损,具有神经保护作用。头穴透刺配合电针可调节MCAO/R大鼠缺血半暗带区LC3A/B蛋白表达,从而调节神经细胞自噬。头穴透刺配合电针在脑缺血再灌注早期可上调缺血半暗带LC3A/B蛋白表达、适度激活MCAO/R大鼠的神经细胞自噬,保护受损的神经元;而在再灌注中晚期降低LC3A/B蛋白表达、抑制MCAO/R大鼠神经细胞自噬的过度激活,从而拮抗神经元进一步损伤。     

针刺介导miR-34c-5p调控脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞自噬的研究

目的:观察针刺对脑缺血再灌注损伤(CI/RI)大鼠缺血侧海马组织miR-34c-5p、自噬相关蛋白表达及凋亡率的影响,探讨针刺通过miR-34c-5p调控CI/RI大鼠海马神经细胞自噬的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组及针刺组,每组20只。采用线栓法制作大脑中动脉阻塞再灌注大鼠模型。假手术组只剥离血管,不插入线栓。针刺组针刺“大椎”“百会”“水沟”,每15 min行针1次,留针30 min;药物组腹腔注射依达拉奉(5 mg/kg);均1次/12 h,共7次。用改良Garcia评分法评估神经功能损伤程度,TTC法测定脑梗死面积百分比,透射电镜观察缺血侧海马区神经细胞超微结构,实时荧光定量PCR法检测海马miR-34c-5p的表达量,Western blot法检测海马Beclin-1、LC3B、p62的表达,TUNEL法检测缺血侧脑组织细胞凋亡率。结果:与假手术组比较,模型组Garcia评分明显降低(P<0.01),脑梗死面积百分比、细胞凋亡率明显升高(P<0.01),海马miR-34c-5p、Beclin-1、p62表达及LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ均降低(...     

电针“水沟”“百会”穴对脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元自噬的影响

目的:探讨电针“水沟”“百会”穴对脑缺血再灌注(I/R)损伤大鼠海马神经元自噬的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组16只。采用一侧大脑中动脉栓塞(MCAO)的方法复制I/R损伤大鼠模型。电针组予“水沟”“百会”电针治疗,20 min/次,1次/d,共5 d。以Longa神经功能评分法评价神经功能;TTC染色法测定大鼠脑梗死体积百分比;ELISA法检测脑脊液白细胞介素(IL)-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;荧光定量PCR和Western blot法分别检测缺血区海马组织自噬相关蛋白腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、Beclin-1、VPS34、LC3B mRNA和蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组神经功能评分明显升高(P<0.01),大鼠脑梗死体积百分比明显增大(P<0.01),脑脊液IL-6、IL-18、TNF-α含量明显升高(P<0.01,P<0.05),海马组织AMPK、Beclin-1、VPS34蛋白和mRNA表达水平,以及LC3B mRNA表达水平和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值均升高(P<0.01...     

针刺调控自噬流拮抗大鼠脑缺血损伤

目的:观察针刺对脑缺血损伤大鼠脑梗死体积及自噬相关蛋白表达的影响,探讨针刺拮抗大鼠脑缺血损伤的效应及其可能的机制。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组,每组根据缺血时间不同分为3、6、12和24 h亚组,每个亚组7只。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型。造模成功后,各针刺组于“水沟”“内关”进行针刺,留针30 min。观察干预后不同时点各组大鼠神经功能缺损评分变化;用2,3,5-三苯基氯化四氮唑染色法观察各组大鼠脑梗死体积百分比;Western blot法检测各组大鼠大脑皮层缺血区域自噬相关基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62的表达。结果:与同时点假手术组比较,模型组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积百分比、大脑皮层Beclin1蛋白表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均明显升高(P<0.01,P<0.05),p62蛋白表达水平降低(P<0.01)。与同时点模型组比较,针刺组大鼠6、12、24 h神经功能缺损评分及各时点脑梗死体积百分比、3 h的p62表达水平降低(P<0.01,P<0.05),6、12 h的Beclin1表达水...     

电针预处理对急性心肌梗死无复流大鼠心肌自噬与凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察电针预处理对急性心肌梗死大鼠心肌无复流及对缺血区心肌组织自噬、凋亡相关蛋白表达的影响。方法 40只清洁级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针预处理组和阿托伐他汀组,采用结扎左冠状动脉的方法复制急性心肌梗死无复流模型。6%硫磺素、伊文思兰和TCC染色观察心肌缺血、无复流及梗死的范围;Western blotting法检测缺血区心肌组织中自噬相关蛋白(Beclin1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62/SQSTM1)和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax)的表达。结果电针预处理组心肌无复流和梗死面积显著减少(P0.01);此外,电针还能够显著降低再灌注大鼠心肌组织中Beclin1、LC3Ⅱ、p62/SQSTM1和Bax蛋白,增加LC3Ⅰ、Bcl-2蛋白的表达,调控再灌注大鼠心肌组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Bcl-2/Bax的比例,与模型组比较,差异均具有显著统计学意义(P0.01)。结论电针预处理能够通过调控心肌细胞自噬和凋亡水平,改善急性心肌梗死再灌注无复流现象,减少心肌梗死的面积。     

加味涤痰汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞自噬相关蛋白表达的影响

目的:探讨加味涤痰汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑细胞自噬相关蛋白表达的影响。方法:采用可逆性脑中动脉闭塞线栓法栓塞右侧大脑中动脉,构建脑缺血再灌注(CIR)损伤模型,随机分为假手术组、模型组、加味涤痰汤高、低剂量组(0. 768,0. 384 g·kg~(-1))和吡拉西坦组(0. 1 g·kg~(-1))。假手术组和模型组灌胃生理盐水,加味涤痰汤高、低剂量组灌胃加味涤痰汤,吡拉西坦组灌胃吡拉西坦片,灌胃10 m L·kg~(-1);给药7 d。给药24 h内,处死后行组织病理学检查,比较脑梗死体积、神经细胞凋亡和血清炎症因子水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定脑组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ,Beclin1,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和p62的表达。结果:模型组脑组织梗死灶内细胞和血管坏死,神经元肿胀,间质水肿;加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组脑组织少数神经细胞死亡,水肿减轻,神经细胞肿胀减轻。加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组脑梗死体积和神经细胞凋亡低于模型组(P 0. 05),加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-8(IL-8)水平降低(P 0. 05)。与假手术组比较,模型组LC3Ⅱ,Bcl-2和Beclin1蛋白及mRNA表达明显升高,p62蛋白及mRNA表达明显下降;与模型组比较,加味涤痰汤高、低剂量组及吡拉西坦组LC3Ⅱ和Beclin1蛋白及mRNA表达均明显降低,p62蛋白及mRNA表达明显升高,差异均具有明显性(P 0. 05)。结论:加味涤痰汤可改善MCAO/R脑组织损伤和自噬,减轻炎症反应,调节自噬活性,可能与下调LC3Ⅱ,Beclin1表达,上调p62表达有关。     

回神颗粒对大鼠局灶性脑缺血再灌注脑损伤的保护机制研究

目的:观察回神颗粒对缺血性卒中脑海马区不同时间点S100B蛋白表达的动态变化,研究回神颗粒对局灶性脑缺血再灌注损伤影响的可能机制。方法:取45只Wistar大鼠建立局灶性脑缺血再灌注(I/R)模型,随机分成假手术对照组、脑I/R组、回神颗粒治疗组,缺血2h后开始再灌注。免疫组化法检测缺血不同时间各组脑海马缺血中心和周围区S100B蛋白,原位末端标记技术检测各组脑海马缺血中心和周围区神经细胞凋亡。结果:脑I/R损伤组与假手术对照组比较,细胞凋亡数明显增多(P0.05),回神颗粒治疗组与脑I/R组相比,凋亡细胞数明显减少(P0.05);免疫组化检测结果显示,I/R组与假手术对照组相比,S100B蛋白表达明显增加(P0.05),回神颗粒治疗组与脑I/R组相比,S100B蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:回神颗粒可能通过减少S100B蛋白表达、抗凋亡对局灶性脑缺血再灌注损伤(I/R)产生保护作用。     

活血荣络方对脑缺血再灌注损伤大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响

目的观察活血荣络方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)大鼠PINK1/Parkin信号通路的影响,从线粒体自噬角度探讨其干预CIRI的作用机制。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、活血荣络方(HXRLF)组和自噬激活剂(RAP)组,采用线栓法建立CIRI大鼠模型。HXRLF组于造模前36 h开始灌胃活血通络方药液11.7 g/kg,每24 h灌胃1次,共3次;RAP组于再灌注同时腹腔注射雷帕霉素1.5 mg/kg。再灌注24 h后,对大鼠神经功能进行评分,尼氏染色检测大鼠皮质区完整神经元数目,JC-1荧光探针检测皮质区线粒体膜电位(MMP),透射电镜观察大鼠皮质区超微结构,免疫组化和Western blot检测皮质区p62、LC3B、TOMM20蛋白表达,Western blot和RT-PCR分别检测皮质区PTEN诱导激酶1(PINK1)、帕金蛋白(Parkin)蛋白和m RNA水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能评分明显升高,神经功能缺损严重;皮质区完整神经元数量明显减少,自噬小体数目增多,MMP降低;皮质区p62、LC3B蛋白表达升高,TOMM20蛋白表达降低,PINK1、Parkin蛋白和m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。与模型组比较,HXRLF组和RAP组大鼠神经功能评分明显降低,神经功能缺损改善;皮质区完整神经元数量明显增多,自噬小体数目增多,MMP升高;皮质区p62、TOMM20蛋白表达降低,LC3B蛋白表达升高,PINK1、Parkin蛋白和m RNA表达升高,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论活血荣络方可能通过激活PINK1/Parkin信号通路上调线粒体自噬,减轻大鼠神经功能损害,从而发挥神经保护作用。     

脑缺血激活氯苯氨丁酸对ORP150蛋白及海马CA1区神经元的影响

目的：探讨脑缺血激活氯苯氨丁酸（baclofen）对氧调节蛋白150（Oxygen-regulated proteins,ORP150）表达量及海马CA1区神经元的影响。方法：四动脉结扎建立大鼠全脑缺血模型,实验动物随机分为假手术组、缺血再灌注组（I/R）、溶剂对照组、氯苯氨丁酸（baclofen）处理组;缺血5min后腹腔注射baclofen 20mg/kg,Western blot法检测大鼠海马CA1区OPR150和Bcl-2的表达情况;NeuN染色和TUNEL法分别观察海马CA1区神经元的存活和凋亡情况。结果：缺血再灌注30min,baclofen处理组的OPR150蛋白表达水平较I/R组显著升高（P<0.05）;缺血再灌注6h,baclofen处理组的Bcl-2蛋白表达水平较I/R组显著升高（P<0.05）。baclofen处理组海马CA1区存活神经元细胞较I/R组明显增加（P<0.05）,其凋亡样损伤神经元较I/R组显著减少（P<0.05）。结论：氯苯氨丁酸通过增强OPR150蛋白表达水平来减少脑缺血诱导的神经细胞凋亡。     

二氢杨梅素对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对小鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的保护作用。方法雄性昆明种小鼠随机分为4组,即假手术组,I/R模型组,DMY高(500 mg·kg-1)、低剂量(250 mg·kg-1)组。改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型,缺血3 h再灌注24 h;术前10 d开始灌胃给药,每天1次,并在缺血前1 h及再灌注后12 h各给药1次。再灌注24h后观察小鼠神经功能缺损评分,取脑测定脑梗死比(%)及脑含水量(%),HE染色观察脑组织病理学改变并计数皮层半暗带区神经元数目,同时测定脑组织MDA含量及SOD、GSH-Px活性。结果与模型组比较,DMY 500 mg·kg-1可减轻脑I/R损伤后神经功能缺损评分,降低脑梗死比和脑含水量,改善脑组织病理学变化及增加皮层半暗带区神经元数量(P0.05,P0.01);DMY 500 mg·kg-1还能明显降低脑组织MDA含量及提高SOD、GSH-Px活性(与模型组比较,P0.05,P0.01)。DMY 250 mg·kg-1可降低脑I/R损伤后脑梗死比(与模型组比较,P0.05)。结论 DMY对局灶性脑I/R损伤有一定的保护作用,保护机制与其抗氧化作用有关。