华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型的建立

目的 建立华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型。方法 将BALB/c小鼠随机分为4组,分别以50个、100个和150个囊蚴采用胃饲感染,同时设胃饲生理盐水组为对照。感染后20 d开始采用加藤卡茨法检测小鼠粪便;感染后8周,取小鼠肝脏右外叶组织进行HE和Masson染色,取小鼠肝脏左叶组织进行总蛋白提取,分析肝脏α-SMA的表达情况。结果 感染后31 d小鼠粪便开始检测到华支睾吸虫卵,39 d所有感染组小组均检测到感染。HE及Masson结果显示,与对照组相比,感染组小鼠汇管区出现明显的纤维化改变,且随着胃饲囊蚴数量的增加纤维化越明显,差异具有统计学意义(F=86,P<0.01)。蛋白质免疫印迹试验发现感染小鼠肝脏α-SMA蛋白表达明显高于对照组,且随着胃饲囊蚴数量增加而递增,差异有统计学意义(F=86.5,P<0.05)。结论 成功建立了华支睾吸虫感染BALB/c小鼠肝胆管纤维化模型,为后续研究华支睾吸虫致肝胆管纤维化机制奠定了基础。     

华支睾吸虫感染FVB小鼠不同组织CD4~+T细胞TLR4表达变化

目的观察华支睾吸虫感染小鼠不同组织CD4~+T细胞TLR4的表达变化。方法建立华支睾吸虫感染小鼠模型,分别在感染2、4、8周剖杀小鼠,收集外周血、肝脏和脾脏组织并分离其单核细胞,运用流式细胞术检测CD4~+T细胞TLR4表达水平变化。结果小鼠感染华支睾吸虫2周后,外周血、肝脏、脾脏CD4~+T细胞TLR4表达水平显著高于正常对照组(t值分别为5.87,6.59,4.46,P0.05),感染4周时肝脏和外周血TLR4表达量达到了峰值,随后下降,但到8周时其表达量仍高于正常对照组(t值分别为8.93,17.17,P0.05);脾脏细胞TLR4表达量随着感染时间的延长其表达量逐渐升高,到8周时TLR4表达量高于4周TLR4表达量(t=5.83,P0.05)。结论 FVB小鼠感染华支睾吸虫后CD4~+T细胞TLR4表达水平升高,且随着感染的持续,不同组织TLR4表达水平不同,提示高表达的TLR4在宿主抵抗华支睾吸虫感染及致病中发挥一定作用。     

日本血吸虫感染小鼠肝脏及脾脏NKT细胞的变化

目的观察日本血吸虫感染后小鼠肝脏及脾脏自然杀伤(NK)T细胞的动态变化特征。方法将24只6～8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为4组,其中3组每鼠经腹部皮肤感染(14±2)条日本血吸虫尾蚴,分别于感染后3、6、12周剖杀小鼠,分离肝脏及脾脏单个核淋巴细胞,应用异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CD49b单克隆抗体及藻红蛋白(PE)标记的CD3e单克隆抗体标记细胞,流式细胞仪检测CD3/CD49b双阳性的NKT细胞占单核淋巴细胞的比例。体外刺激实验中将分离的正常小鼠脾脏单个核淋巴细胞,分别用SEA、虫卵蛋白、虫卵脂质作为刺激物,观察其中NKT细胞的比例变化。结果日本血吸虫感染小鼠脾脏中NKT细胞,于感染后12周比例为(4.73±0.41)%,显著高于对照组比例(2.07±0.12)%(P0.01);肝脏NKT细胞在感染后3周(8.03±0.23)%与对照组(8.60±1.48)%无明显变化,但感染后6周及12周NKT比例明显上升,分别为(15.90±0.76)%和(21.00±0.30)%,与对照组相比差异有统计学意义(P0.01)。体外实验结果显示,刺激物为SEA和虫卵脂质时,NKT细胞的比例分别为(0.77±0.03)%及(0.80±0.06)%,明显高于空白对照组(0.53±0.03)%及虫卵蛋白组(0.50±0.06)%(P0.05)。结论日本血吸虫感染导致小鼠脾脏及肝脏中NKT细胞比例上调,其上调可能与虫卵可溶性抗原中的脂质组分有关。     

青蒿琥酯和双氢青蒿素对华支睾吸虫所致小鼠肝纤维化的治疗作用研究北大核心CSCD

目的观察和评估青蒿琥酯(ART)和双氢青蒿素(DHA)对华支睾吸虫所致小鼠肝纤维化的治疗作用。方法BALB/c小鼠35只,每只小鼠灌胃感染30个华支睾吸虫囊蚴,饲养30 d,建立小鼠华支睾吸虫病肝纤维化模型,随机分为7组,即青蒿琥酯组(ART组)、氯化钠组(NaCl组)、吡喹酮组(PZQ组)、吡喹酮+青蒿琥酯组[(PZQ+ART)组]、双氢青蒿素组(DHA组)、聚氧乙烯蓖麻油组(EL组)、吡喹酮+双氢青蒿素组[(PZQ+DHA)组],每组5只小鼠。采用腹腔注射法(ART)和经口灌胃法(DHA),用药剂量都为20 mg/kg,每天1次,连续用药30 d,合并PZQ用药组于感染华支睾吸虫囊蚴30 d后300 mg/kg PZQ连续灌胃治疗2次。取各组小鼠肝组织,应用苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色显示小鼠肝组织病理学变化和胶原增生情况,应用荧光定量PCR和Western Blot检测肝组织α-SMA、TGF-β、Col I、Col III mRNA和蛋白表达,应用肝功检测试剂盒测定小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)含量。结果HE和Masson染色显示小鼠感染华支睾吸虫囊蚴30 d后肝脏汇管区有炎性细胞浸润,周围出现大量胶原纤维,有肝纤维化形成;Western Blot结果显示,感染组小鼠肝脏Col III表达量(1.26±0.01)高于未感染组(0.75±0.14)(t=2.01,P<0.05)。荧光定量PCR结果显示,接受ART和DHA治疗的小鼠与各自对照组相比,各纤维化相关基因mRNA表达水平没有显著差异。Western Blot结果显示,接受ART治疗后,ART组(0.32±0.04、0.81±0.09)和(PZQ+ART)组(0.16±0.01、1.02±0.18)的Col I、Col III蛋白表达水平都低于NaCl组(1.54±0.38、2.24±0.35),而且PZQ+ART组的Col I表达水平低于ART组(t=1.98,P<0.05);接受DHA治疗的小鼠α-SMA、Col I蛋白表达水平与对照组比较没有显著差异。肝功能检测结果显示,ART组(197.75±8.84)U/L和(PZQ+ART)组(234.66±42.54)U/L血清AST水平与NaCl组(150±20.29)U/L比较明显升高;(PZQ+DHA)组(29±12.98)U/L血清ALT水平较EL组(107.25±54.26)U/L和PZQ组(58±8.71)U/L降低,(PZQ+DHA)组(143±27.43)U/L血清AST水平较EL组(207±42.48)U/L降低(t=0.75,P<0.05)。结论青蒿琥酯(ART)在20 mg/kg剂量下对华支睾吸虫所致小鼠肝纤维化有治疗作用,合并杀虫抗纤维化效果更好,但对肝功有一定影响。双氢青蒿素(DHA)在20 mg/kg剂量下没有明显改善小鼠肝纤维化,但合并吡喹酮(PZQ)可以起到一定程度保肝作用。     

细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞免疫功能的影响

目的探讨不同剂量细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞(natural killer T cells)免疫功能的影响。方法经肝门静脉注射细粒棘球蚴建立C57BL/6小鼠感染模型,对照组注射生理盐水。感染组分为低剂量组(50个原头蚴,LD)、中剂量组(500个原头蚴,MD)和高剂量组(2 000个原头蚴,HD)。于造模后12周采集小鼠肝脏和脾脏标本,采用HE及Masson染色检查肝脏病灶和纤维化程度;采用流式细胞术检测小鼠脾脏NKT细胞表型、不同NKT亚群比例,以及相关细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-10及IL-17A)的表达情况。结果不同剂量细粒棘球蚴感染组小鼠肝脏均可见囊泡结构样病灶,病灶周围出现胶原沉积,对照组肝脏仅汇管区可见少量胶原沉积。中、高剂量感染组小鼠脾脏NKT细胞比例分别为(1.34±0.27)%和(1.33±0.21)%,与对照组(2.54±0.43)%和低剂量组(2.41±0.53)%比较差异有统计学意义(F=16.451,P0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏CD69~+CD4~+ NKT细胞比例分别为(15.6±2.00)%和(17.5±3.98)%,与对照组(11.1±2.82)%和低剂量组(11.1±1.31)%比较差异有统计学意义(F=8.130,P0.05)。高剂量感染组小鼠脾脏CD69~+CD8~+ NKT细胞比例为(70.1±7.52)%,与对照组(85.3±2.68)%和低剂量组(83.1±3.90)%比较差异有统计学意义(F=12.42,P0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏CD69~+DN NKT细胞比例分别为(29.3±2.02)%和(27.2±5.20)%,与对照组(35.6±4.26)%比较差异有统计学意义(F=3.277,P0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏NKT1型细胞分泌IFN-γ比例低于对照组和低剂量组(F=40.00,P0.01)。高剂量感染组小鼠脾脏NKT2型细胞分泌IL-4比例高于对照组、低剂量组和高剂量组(F=10.54,P0.001)。中、高剂量感染组脾脏NKT17型细胞分泌IL-17A比例低于对照组和低剂量组(F=13.00,P0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏NKT10型细胞分泌IL-10比例高于对照组(F=45.59,P0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD4~+NKT1型细胞分泌IFN-γ比例分别为(14.55±2.12)%和(10.43±0.85)%,与对照组(25.88±6.82)%和低剂量组(22.13±4.36)%比较差异有统计学意义(F=16.73,P0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD4~+NKT2型细胞分泌IL-4比例分别为(10.14±1.00)%、(10.64±0.73)%和(12.97±1.66)%,与对照组(7.07±0.72)%比较差异有统计学意义(F=19.99,P0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD4~+NKT17型细胞分泌IL-17A比例分别为(2.46±0.72)%和(2.26±0.57)%,与对照组(4.11±1.07)%和低剂量组(4.56±0.91)%比较差异有统计学意义(F=10.54,P0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD4~+NKT10型细胞分泌IL-10比例分别为(8.42±1.38)%、(12.65±4.19)%和(15.7±3.72)%,与对照组(4.66±0.87)%比较差异有统计学意义(F=15.78,P0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD8~+NKT型细胞分泌IFN-γ比例与对照组和低剂量组比较差异有统计学意义(F=20.08,P0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD8~+NKT型细胞分泌IL-10与高于对照组比较差异有统计学意义(F=24.41,P0.01或P0.001)。中、高剂量感染组脾脏DN NKT型细胞分泌IFN-γ比例与对照组和低剂量组比较差异有统计学意义(F=26.82,P0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏DN NKT型细胞分泌IL-10比例与对照组比较差异有统计学意义(F=22.96,P0.05)。结论细粒棘球蚴感染中期,不同剂量感染诱导小鼠机体产生的细胞免疫反应由NKT1型和NKT17型模式转向NKT2型和NKT10型亚群优势,导致NKT细胞亚群之间的偏移失衡,造成细粒棘球蚴在宿主体内慢性寄生。     

广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫的调查及豚鼠模型的构建北大核心CSCD

目的了解广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫状况,观察豚鼠感染华支睾吸虫后肝组织病理变化。方法解剖当地家猫,取肝脏,检查华支睾吸虫感染情况,阳性肝脏收集成虫,并取肝组织制作切片;采集阳性鱼,分离华支睾吸虫囊蚴,经口感染豚鼠,60个囊蚴/只,60d后解剖豚鼠,检查肝脏,收集成虫,取病变肝组织制作切片,作病理检查。实验设未感染对照组。结果当地猫华支睾吸虫自然感染率为41.47%(214/516);感染豚鼠华支睾吸虫成虫回收率50.83%(305/600)。与对照组比较,实验组豚鼠肝脏肿大,边缘呈球状隆起,部分肝叶表面可见水泡状凸起病变,水泡内液清亮;病变组织横切面可见胆管管壁增厚,管腔内有华支睾吸虫成虫寄生;镜下可见华支睾吸虫虫卵切面,周围大量炎症细胞浸润,胆管管壁增厚,管周纤维组织增生伴胆管扩张,肝小叶结构破坏。结论广州珠三角地区家猫华支睾吸虫感染率较高。豚鼠是华支睾吸虫合适的终末宿主,且肝脏病变明显。     

齐齐哈尔地区麦穗鱼吸虫囊蚴感染情况及其种类鉴定

为了解齐齐哈尔地区麦穗鱼体内吸虫囊蚴感染情况及种类，2021年6—11月每月初从嫩江流域齐齐哈尔段采集麦穗鱼，采用直接压片法检查吸虫囊蚴感染情况，人工消化法分离吸虫囊蚴，通过形态学特征对吸虫囊蚴进行初步分类。用不同类型的囊蚴分别饲喂6周龄昆明小鼠(50～80只囊蚴/鼠)和2周龄雏鸭(80～100只囊蚴/鸭)。分别于感染后第30、25天剖取小鼠和雏鸭肝胆管内的成虫，醋酸洋红染色后进行形态学鉴定。按月、季节统计麦穗鱼囊蚴感染率，分析麦穗鱼吸虫囊蚴感染情况。应用SPSS 26.0软件进行统计学分析，感染率的比较采用χ²检验。结果显示，2021年6—11月共采集麦穗鱼600尾，371尾感染吸虫囊蚴，感染率为61.8%。共获得3种不同形态的吸虫囊蚴，根据囊蚴形态初步鉴定为华支睾吸虫、东方次睾吸虫和台湾次睾吸虫囊蚴，感染率分别为47.7%(286/600)、15.5%(93/600)和23.7%(142/600)。3种吸虫囊蚴感染小鼠和雏鸭后获得的吸虫成虫经形态学鉴定分别为华支睾吸虫、东方次睾吸虫、台湾次睾吸虫。6—11月麦穗鱼华支睾吸虫囊蚴感染率分别为26.0%(26/10...     

芜湖水域麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的调查

目的 旨在了解芜湖地区部分水域野生麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况,为华支睾吸虫病的防治工作提供参考。方法 从芜湖地区部分水域(牛屯河、扁担河、漳河、奎湖和龙窝湖)捕捞麦穗鱼,采用鱼肉直接压片镜检法和胃蛋白酶消化法从麦穗鱼肌肉中分离囊蚴,并利用获得的囊蚴感染家猫,证实麦穗鱼所感染华支睾吸虫囊蚴。结果 芜湖5个水域中的麦穗鱼均有华支睾吸虫囊蚴感染,其平均感染率为34% (34/100),平均感染度为120.1个/条,且阳性麦穗鱼背部肌肉(前背肌肉、中背肌肉、后背肌肉)均有华支睾吸虫囊蚴的感染,腹部肌肉和尾部肌肉的感染率较低。结论 芜湖地区部分水域野生麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况较为普遍,应加强宣传和防治工作,以防止华支睾吸虫病的流行。     

日本血吸虫感染小鼠肝脏和脾脏淋巴细胞及其表面程序性死亡配体1表达动态变化的研究

目的初步研究日本血吸虫感染对小鼠肝脏和脾脏淋巴细胞数量及其表面程序性死亡配体1(PD-L1)功能的影响。方法 30只BALB/c小鼠随机分为感染组和未感染组,每组15只,感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(20±2)条/鼠。感染后2、 4、 6、 8和10周,分别随机取两组小鼠各3只,颈椎脱臼处死小鼠,分离小鼠肝脏和脾脏的淋巴细胞,采用流式细胞术检测CD3~+T细胞(CD3~+CD19~-)、 CD19~+B细胞(CD3~-CD19~+)、 CD4~+T细胞(CD3~+CD19~-CD4~+CD8~-)和CD8~+T细胞(CD3~+CD19~-CD4~-CD8~+)淋巴细胞比例的动态变化,以及这些细胞群上的PD-L1表达变化。组间差异比较采用ANOVA检验。结果感染日本血吸虫后4～8周,小鼠肝脏和脾脏中的CD3~+T细胞、 CD19~+B细胞和CD4~+T细胞比例均低于未感染组(P 0.05或0.01,P 0.05)。感染日本血吸虫后6周的小鼠肝脏中CD8~+T细胞比例增加[(38.03±7.41)%],与未感染组[(23.37±3.98)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01);但脾脏中无明显变化。在感染日本血吸虫后6周,小鼠肝脏中CD19~+B细胞上PD-L1的表达被显著抑制[(7.25±3.47)%],与未感染组[(22.77±8.90)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01);脾脏相对肝脏较晚,感染后8周CD19~+B细胞上PD-L1的表达被抑制[(22.37±4.01)%],与未感染组[(51.97±1.62)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01),且此后在肝脏和脾脏中保持低水平表达。感染后2～10周,肝脏中的CD3~+T和CD4~+T细胞表面PD-L1的表达低于未感染组(P 0.05或0.01, P 0.05),脾脏中的CD3~+T和CD4~+T细胞表面PD-L1的表达分别于感染后4～8周和6～10周低于未感染组(P 0.05)。肝脏和脾脏中CD8~+T细胞上PD-L1的表达在感染早期无变化,感染后10周比例增加,为(34.80±3.68)%、(31.90±2.53)%,与未感染组[(25.5±0.80)%、(29.91±3.55)%]比较,差异有统计学意义(P 0.01)。结论日本血吸虫感染BALB/c小鼠后,肝脏和脾脏中CD19~+B、 CD3~+T和CD4~+T淋巴细胞亚群的比例显著降低,但对CD8~+T细胞比例影响不明显。感染对PD-L1在上述淋巴细胞亚群的表达也有相同的变化,在CD19~+B、CD3~+T和CD4~+T细胞上表达受抑制,在CD8~+T细胞上的表达影响较小,且肝脏局部淋巴细胞的变化早于脾脏。     

细粒棘球蚴感染小鼠髓源抑制性细胞与Th17细胞比例的变化

目的分析细粒棘球蚴感染小鼠体内髓源抑制性细胞(MDSCs)和Th17细胞比例的变化及意义。方法将20只6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为感染组和对照组,每组10只。感染组每只小鼠腹腔注射细粒棘球绦虫原头节约2 000个,对照组注射等体积生理盐水。感染后8个月(感染晚期)收集感染组和对照组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞和腹腔细胞,采用流式细胞术检测小鼠MDSCs及其亚型(M-MDSCs、PMN-MDSCs)和Th17细胞比例,采用Pearson相关性分析MDSCs、M-MDSCs、PMN-MDSCs与Th17细胞比例的相关关系。结果感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中MDSCs比例分别为(14.72±4.27)%、(57.04±6.78)%和(15.35±5.56)%,对照组分别为(8.84±2.12)%、(30.53±1.58)%和(1.74±0.63)%,感染组与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05);感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中M-MDSCs比例分别为(1.29±0.24)%、(6.27±2.11)%、(2.14±0.94)%,对照组分别为(0.72±0.25)%、(2.11±1.27)%、(0.25±0.06)%,感染组与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05);感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中PMN-MDSCs比例分别为(9.31±2.65)%、(46.72±5.67)%、(7.06±2.36)%,对照组分别为(7.07±3.20)%、(25.42±2.05)%、(1.08±0.40)%,感染组与对照组间外周血白细胞和腹腔细胞的PMN-MDSCs比例差异有统计学意义(P0.05)。感染组小鼠脾脏细胞、外周血白细胞、腹腔细胞中Th17细胞比例分别为(1.31±0.38)%、(1.85±0.77)%和(2.90±0.24)%,对照组分别为(0.59±0.07)%、(0.35±0.15)%和(0.41±0.12)%,感染组与对照组相比差异均有统计学意义(P0.05)。Pearson相关性分析结果显示,感染组小鼠脾脏、外周血和腹腔细胞中MDSCs与Th17细胞比例之间无相关关系(r=-0.354、-0.746、0.801,P0.05),感染组小鼠脾脏M-MDSCs与Th17细胞比例呈负相关关系(r=-0.896,P0.05)。结论在细粒棘球蚴感染小鼠8个月后MDSCs与Th17细胞比例均增加,感染组小鼠脾脏M-MDSCs与Th17细胞比例呈负相关关系。     

咸宁市淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况调查

目的了解目前咸宁市常见食用淡水鱼感染华支睾吸虫囊蚴的情况,为华支睾吸虫病的预防和健康教育工作提供依据。方法从咸宁市区不同的方位随机选取4个集贸市场,在每个市场购买市民经常食用的淡水鱼进行检测,包括:鳙鱼、鲫鱼、团头鲂(武昌鱼)、麦穗鱼,用胃蛋白酶消化法检测鱼肉中华支睾吸虫囊蚴。结果共检查鳙鱼76尾、鲫鱼87尾、团头鲂(武昌鱼)92尾、麦穗鱼189尾,华支睾吸虫囊蚴阳性率分别为23.68%、43.68%、39.13%和75.13%,阳性鱼平均感染度(个/尾)分别为15.11、9.97、10.06和48.25。结论咸宁市区的淡水鱼中存在一定程度的华支睾吸虫感染,其中麦穗鱼的感染情况较严重。     

同一鱼塘中3种鱼华支睾吸虫囊蚴感染度的调查

珠江三角洲是华支睾吸虫 (Clonorchis sinensis)的主要分布区。虽然随着人们防病意识的增强 ,使许多地区塘鱼的华支睾吸虫的感染有所降低 ,但由于当地人群独特的饮食习惯使华支睾吸虫的感染仍然普遍存在 [1 ]。本实验对广东顺德市杏坛镇同一鱼塘中的 3种鱼进行了华支睾吸虫囊蚴感染度的调查 ,以了解不同鱼类对华支睾吸虫囊蚴的感染情况。1　材料和方法1.1　鱼的来源　 3种鱼均来源于广东省顺德市杏坛镇某同一鱼塘。选择其中的草鱼 (Ctenopharygodon idellus) 5 0条 (平均体重 2 .8g/条 )、鳙鱼 (Aristichthys nobilis) 5 0条 (平均体重 9.…     

邳州市和新沂市华邳州市和新沂市华支睾吸虫第二中间宿主流行病行病学调查

目的了解江苏省邳州市和新沂市华支睾吸虫在淡水鱼中的流行状况,为下一步的防治提供科学依据。方法在邳州市和新沂市自然水域中抓取野生麦穗鱼和棒花鱼,用压片镜检法检测鱼体内的华支睾吸虫囊蚴,分析感染数据。结果共解剖麦穗鱼和棒花鱼1 117条,其中麦穗鱼792条(占70.90%),棒花鱼325条(占29.10%)。麦穗鱼和棒花鱼华支睾吸虫囊蚴总感染率分别为29.80%(236/792)和4.62%(15/325),差异有统计学意义(χ~2=83.88,P0.01)。结论新沂市和邳州市淡水鱼华支睾吸虫囊蚴感染率较高,当地居民面临着较高的感染华支睾吸虫的风险。     

华支睾吸虫生活史的微小生态环境建立

目的探索建立经济适用的华支睾吸虫生活史微小生态环境的方法。方法修建一个容积约1 m~3的饲养池;在池底种植水草;池内饲养纹沼螺、麦穗鱼。将含有华支睾吸虫虫卵的猫粪沉渣施放入池,感染纹沼螺。结果收集池内的纹沼螺、麦穗鱼,检查结果显示纹沼螺感染华支睾吸虫尾蚴的阳性率分别为3.00%(3/100)、2.50%(2/80)。麦穗鱼感染华支睾吸虫囊蚴的阳性率为96.67%(29/30)。结论该华支睾吸虫生活史微小生态环境适用于实验研究。     

细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞免疫功能的影响北大核心CSCD

目的探讨不同剂量细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞(natural killer T cells)免疫功能的影响。方法经肝门静脉注射细粒棘球蚴建立C57BL/6小鼠感染模型,对照组注射生理盐水。感染组分为低剂量组(50个原头蚴,LD)、中剂量组(500个原头蚴,MD)和高剂量组(2 000个原头蚴,HD)。于造模后12周采集小鼠肝脏和脾脏标本,采用HE及Masson染色检查肝脏病灶和纤维化程度;采用流式细胞术检测小鼠脾脏NKT细胞表型、不同NKT亚群比例,以及相关细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-10及IL-17A)的表达情况。结果不同剂量细粒棘球蚴感染组小鼠肝脏均可见囊泡结构样病灶,病灶周围出现胶原沉积,对照组肝脏仅汇管区可见少量胶原沉积。中、高剂量感染组小鼠脾脏NKT细胞比例分别为(1.34±0.27)%和(1.33±0.21)%,与对照组(2.54±0.43)%和低剂量组(2.41±0.53)%比较差异有统计学意义(F=16.451,P<0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏CD69^(+)CD4^(+) NKT细胞比例分别为(15.6±2.00)%和(17.5±3.98)%,与对照组(11.1±2.82)%和低剂量组(11.1±1.31)%比较差异有统计学意义(F=8.130,P<0.05)。高剂量感染组小鼠脾脏CD69^(+)CD8^(+) NKT细胞比例为(70.1±7.52)%,与对照组(85.3±2.68)%和低剂量组(83.1±3.90)%比较差异有统计学意义(F=12.42,P<0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏CD69^(+)DN NKT细胞比例分别为(29.3±2.02)%和(27.2±5.20)%,与对照组(35.6±4.26)%比较差异有统计学意义(F=3.277,P<0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏NKT1型细胞分泌IFN-γ比例低于对照组和低剂量组(F=40.00,P<0.01)。高剂量感染组小鼠脾脏NKT2型细胞分泌IL-4比例高于对照组、低剂量组和高剂量组(F=10.54,P<0.001)。中、高剂量感染组脾脏NKT17型细胞分泌IL-17A比例低于对照组和低剂量组(F=13.00,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏NKT10型细胞分泌IL-10比例高于对照组(F=45.59,P<0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT1型细胞分泌IFN-γ比例分别为(14.55±2.12)%和(10.43±0.85)%,与对照组(25.88±6.82)%和低剂量组(22.13±4.36)%比较差异有统计学意义(F=16.73,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT2型细胞分泌IL-4比例分别为(10.14±1.00)%、(10.64±0.73)%和(12.97±1.66)%,与对照组(7.07±0.72)%比较差异有统计学意义(F=19.99,P<0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT17型细胞分泌IL-17A比例分别为(2.46±0.72)%和(2.26±0.57)%,与对照组(4.11±1.07)%和低剂量组(4.56±0.91)%比较差异有统计学意义(F=10.54,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT10型细胞分泌IL-10比例分别为(8.42±1.38)%、(12.65±4.19)%和(15.7±3.72)%,与对照组(4.66±0.87)%比较差异有统计学意义(F=15.78,P<0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD8^(+)NKT型细胞分泌IFN-γ比例与对照组和低剂量组比较差异有统计学意义(F=20.08,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD8^(+)NKT型细胞分泌IL-10与高于对照组比较差异有统计学意义(F=24.41,P<0.01或P<0.001)。中、高剂量感染组脾脏DN NKT型细胞分泌IFN-γ比例与对照组和低剂量组比较差异有统计学意义(F=26.82,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏DN NKT型细胞分泌IL-10比例与对照组比较差异有统计学意义(F=22.96,P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染中期,不同剂量感染诱导小鼠机体产生的细胞免疫反应由NKT1型和NKT17型模式转向NKT2型和NKT10型亚群优势,导致NKT细胞亚群之间的偏移失衡,造成细粒棘球蚴在宿主体内慢性寄生。     

CCl4诱导肝纤维化小鼠模型中肝脏巨噬细胞及淋巴细胞亚群变化的初步分析

目的研究CCl_4诱导肝纤维化小鼠模型中肝脏免疫细胞包括巨噬细胞、淋巴细胞亚群的变化。方法 C57BL/6小鼠给予CCl_4腹腔注射建立肝纤维化模型,通过HE和Masson染色评价小鼠肝损伤及纤维化程度。采集小鼠外周血清,检测肝功能指标和血脂水平。取小鼠肝脏制备单个核细胞悬液,用多色流式细胞术检测肝脏免疫细胞亚群的分布。结果实验组小鼠ALT、AST明显高于对照组,TG、LDL-C显著性升高,平均病理评分达到F3级。实验组小鼠库普弗细胞比例(13.33±1.91)%显著高于对照组(8.17±2.00)%,其中以CD11c+标记M1型库普弗细胞比例明显升高,而以CD206+标记M2型库普弗细胞无显著变化。实验组小鼠淋巴细胞中T细胞比例(20.17±4.07)%显著低于对照组(36.00±4.61)%;NKT细胞比例(8.71±1.37)%较对照组(23.41±3.38)%明显降低;而两组间NK细胞和B细胞比例均无明显变化。结论 CCl_4诱导小鼠肝纤维化模型中,肝脏内库普弗细胞的明显增加是以具有促炎效应的M1型巨噬细胞为主,而NKT细胞和T细胞比例则明显减少。M1型巨噬细胞对肝纤维化发展的作用需进一步深入探讨。     

广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫的调查及豚鼠模型的构建

目的了解广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫状况,观察豚鼠感染华支睾吸虫后肝组织病理变化。方法解剖当地家猫,取肝脏,检查华支睾吸虫感染情况,阳性肝脏收集成虫,并取肝组织制作切片;采集阳性鱼,分离华支睾吸虫囊蚴,经口感染豚鼠,60个囊蚴／只,60d后解剖豚鼠,检查肝脏,收集成虫,取病变肝组织制作切片,作病理检查。实验设未感染对照组。结果当地猫华支睾吸虫自然感染率为41．47％（214／516）;感染豚鼠华支睾吸虫成虫网收率50．83％（305／600）。与对照组比较,实验组豚鼠肝脏肿大,边缘呈球状隆起,部分肝叶表面可见水泡状凸起病变,水泡内液清亮;病变组织横切面可见胆管管壁增厚,管腔内有华支睾吸虫成虫寄生;镜下可见华支睾吸虫虫卯切面,周围大量炎症细胞浸润,胆管管壁增厚,管周纤维组织增生伴胆管扩张,肝小叶结构破坏。结论广州珠三角地区家猫华支睾吸虫感染率较高。豚鼠是华支睾吸虫合适的终末宿主,且肝脏病变明显。     

华支睾吸虫感染小鼠模型的建立及比较

目的观察3个品系小鼠分别感染不同剂量华支睾吸虫囊蚴后其粪便巾虫卵检出率及肝组织的病理变化。方法分别以10、20、30个囊蚴／鼠经口感染BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）各3组。同时设不感染对照组。于感染后第20～30d采用NaOH消化法粪检虫卵，感染30d后剖杀部分小鼠，取肝脏作组织切片。各组剩余小鼠继续观察至感染后12周。结果BALB／c（Ⅰ）、C57BL／s（Ⅱ）、昆明鼠（Ⅲ）粪检虫卵阳性率分别为79．17％、12．50％和37．50％，差异有显著性（P〈0．005）。受染BALB／c和昆明鼠肉眼可见肝脏肿大，镜下均见胆管扩张、管壁增厚、炎细胞浸润，并随感染度增加程度加重，C57BL／s肝脏未见明显病理改变。结论BABL／c对华支睾吸虫感染的敏感性最高，昆明鼠次之，C57BL／6不敏感。动态观察小鼠宿主状态及相关研究的适宜感染剂量为每鼠30个囊蚴。     

多房棘球蚴感染对小鼠脾自然杀伤T细胞及其亚群的影响

目的探讨多房棘球蚴感染对小鼠脾自然杀伤T细胞(NKT)及其亚群的影响。方法 24只C57BL/6小鼠随机分为低、中、高感染组和对照组,每组6只。低、中、高感染组每鼠分别经肝门静脉注射50、500、 2 000个多房棘球蚴原头节,对照组注射等量生理盐水。感染后2周,无菌条件下取各组小鼠肝脏,制备肝组织切片,常规Masson染色后观察多房棘球蚴病灶和肝纤维化情况;取脾组织制备淋巴细胞悬液,流式细胞术检测NKT细胞不同亚群及分泌细胞因子的水平。结果 Masson染色结果显示,感染2周后,对照组小鼠肝无明显变化;低、中感染组小鼠肝组织仅可见少量肉芽肿,炎性反应较弱,向纤维化修复转变;高感染组肝病灶形成较小的生发层结构,周围炎性细胞分布密集,可见纤维结缔增生。中、高感染组脾NKT细胞绝对数分别为(6.32±0.53)×105、(7.37±1.72)×105,高于对照组的(5.02±1.08)×105和低感染组的(4.90±1.27)×105(P 0.01)。中、高感染组分泌γ干扰素(IFN-γ)的脾NKT1型细胞比例分别为(13.93±1.61)%、(10.9±3.04)%,低于对照组的(17.3±3.18)%和低感染组的(19.42±2.82)%(P 0.01);低、中、高感染组分泌IL-4的脾NKT2型细胞比例分别为(5.62±0.58)%、(5.86±1.43)%和(5.92±0.94)%,高于对照组的(4.37±0.83)%(P 0.05);低、中感染组分泌IL-17A的脾NKT17型细胞比例分别为(7.02±1.19)%和(6.62±0.41)%,高于对照组的(4.68±0.73)%和高感染组的(3.73±1.04)%(P 0.01)。中、高感染组脾CD4+NKT细胞绝对数分别为(1.75±0.36)×105、(1.82±0.24)×105,高于对照组的(1.24±0.26)×105(P 0.05);高感染组脾DN NKT细胞绝对数为(2.15±0.78)×105,分别高于对照组的(1.27±0.36)×105、低感染组的(1.20±0.49)×105和中感染组的(1.43±0.19)×105(P 0.01)。低、中、高感染组分泌IFN-γ的脾CD4+NKT1型细胞比例分别为(19.42±2.82)%、(14.40±1.81)%、(12.5±2.96)%,低于对照组的(21.16±2.83)%(P 0.01);低、中、高感染组分泌IL-17A的脾CD4+NKT17型细胞比例分别为(18.73±1.99)%、(16.06±1.42)%和(14.41±3.55)%,高于对照组的(10.27±1.79)%(P 0.01)。低、中、高感染组分泌IFN-γ的CD8+NKT细胞比例分别为(10.04±0.92)%、(13.43±0.92)%和(9.24±1.37)%,低于对照组的(15.83±1.59)%(P 0.01);中、高感染组分泌IL-10的脾CD8+NKT细胞比例分别为(4.07±0.48)%、(3.92±0.75)%,高于对照组的(2.85±0.64)%(P 0.05)。中、高感染组分泌IFN-γ的脾DN NKT细胞比例分别为(17.48±2.50)%和(14.06±3.95)%,低于对照组的(25.18±5.78)%(P 0.01)。结论小鼠感染多房棘球蚴后,脾NKT细胞及其亚群发生明显变化,其中低、中感染组小鼠以CD4+NKT17型免疫应答优势对虫体起杀伤和清除作用,高感染组小鼠以CD4+NKT17型、 NKT2型和NKT10型细胞亚群的混合优势,且NKT细胞呈抑制性表型,使NKT1型免疫应答能力下降,利于棘球蚴寄生。     

两种检测华支睾吸虫囊蚴方法的比较

目的 比较肌肉压片法和消化法检测野生淡水鱼中华支睾吸虫囊蚴的检出率.方法 从华支睾吸虫病重流行区广西横县旺天塘采集野生淡水鱼样本,分别采用肌肉压片法和消化法检测每尾鱼感染华支睾吸虫囊蚴情况.计算华支睾吸虫囊蚴的检出率,采用配对卡方检验对2种方法的检出率进行比较.结果 共检测了210尾鱼,总检出率为36.67％(77/2...