硒化壳聚糖对体外培养人皮肤成纤维细胞分泌细胞因子与一氧化氮的影响

目的观察硒化壳聚糖对体外培养人皮肤成纤维细胞分泌细胞因子及一氧化氮（NO）的影响。方法测定经25,50,100,200,400 mg•L 1硒化壳聚糖作用后,人皮肤成纤维细胞培养上清液中转化生长因子 α（TGF α）、TGF β1、白细胞介素 1β（IL 1β）、IL 6、IL 8、肿瘤坏死因子（TNF）及NO的水平;对照组用等体积细胞培养液处理。结果与对照组比较,硒化壳聚糖作用后皮肤成纤维细胞培养液中TGF α、TGF β1、IL 1β、IL 6、IL 8和TNF水平不同程度升高,差异有显著性或极显著性（P＜0.05或P＜0.01）;而NO水平与对照组比较显著下降（均P＜0.01）。结论硒化壳聚糖通过促进细胞分泌TGF α、TGF β1、IL 1β、IL 6、IL 8及TNF,抑制NO释放来促进皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成。     

钙离子一氧化氮在硒化壳聚糖诱导的皮肤成纤维细胞增殖中的作用

目的观察硒化壳聚糖对体外培养人皮肤成纤维细胞增殖周期及细胞内一氧化氮(NO)水平及钙离子含量的影响。方法皮肤成纤维细胞培养液加入不同浓度的硒化壳聚糖(25、50、100、200、400 mg/L),应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,改良Griess法检测NO,Huo-3AM钙荧光指标剂测定细胞内钙离子浓度,流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组比较,50~400 mg/L硒化壳聚糖作用48 h后,细胞对MTT的吸收明显升高(P<0.05);各浓度硒化壳聚糖组细胞NO水平(72±9)μmol/L~(44±10)μmol/L与对照组(107±9)μmol/L比较均呈不同程度下降,呈剂量依赖性(P<0.01);200、400 mg/L硒化壳聚糖组细胞内钙离子浓度(179±32)mmol/L、(179±14)mmol/L与对照组(147±10)mmol/L比较显著升高(P<0.05);流式细胞分析显示,G0~G1期细胞所占百分率显著性减少,G2~M期和S期细胞所占百分率显著性增加(P<0.01)。结论硒化壳聚糖可通过调节细胞内钙离子含量和NO水平来促进皮肤成纤维细胞增殖。     

芦荟粗多糖对体外培养人表皮细胞增殖作用的研究

目的研究芦荟粗多糖对体外培养人表皮细胞增殖活性、细胞内Ca2+水平及细胞LDH漏出率的影响。方法应用不同浓度(75,150,300,600,1 200 mg.L-1)芦荟粗多糖作用于表皮细胞,观察计算生长曲线和细胞增殖指数,并测定细胞内Ca2+水平和LDH漏出率。结果芦荟粗多糖组表皮细胞培养2 d后增殖速度明显增快,d 3~5细胞增殖指数呈剂量依赖性上升。与对照组比较,600和1 200 mg.L-1芦荟粗多糖组表皮细胞内Ca2+水平升高(P<0.05),而这两组LDH漏出率则下降(P<0.05)。结论芦荟粗多糖具有促进体外表皮细胞增殖和保护表皮细胞的作用,并可能通过调节细胞内Ca2+来发挥其促进细胞增殖作用。     

松萝酸抑制前列腺癌PC-3M细胞增殖的生物学效应

为研究从真菌松萝中提取的松萝酸对体外培养前列腺癌PC-3M细胞增殖的抑制效应,用细胞培养、细胞生长抑制实验(MTT法)观察PC-3M细胞形态、细胞生长密度和检测细胞生长抑制率,用3H-TdR掺入法测定细胞增殖过程中DNA的含量。结果表明,与对照组相比,实验组PC-3M细胞形态异常、细胞生长密度降低,细胞生长抑制率增强,3H-TdR掺入量明显减少,并呈剂量依赖关系,与松萝酸浓度的相关系数分别为0·9799与-0·9525。结论:松萝酸对体外培养PC-3M细胞具有抑制效应,使肿瘤细胞增殖减慢,具有明显的抗肿瘤作用。     

Aβ（25-35）对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用

目的考察Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、谷氨酸（glutamate,Glu）组及3个浓度的Aβ25-35组,每组各6孔。观察神经元的形态改变,并测定细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活力值。结果与对照组比较,Glu组可造成大鼠皮质神经元明显损伤,形态发生显著改变,细胞存活率为（53.1±5.5）%（P〈0.01）,并且培养液中LDH漏出显著增多,LDH的活力值为（39.9±2.9）U/gProt（P〈0.01）;Aβ25-35三个剂量组神经元存活率均显著降低,分别为（69.3±5.9）%（P〈0.01）、（52.7±3.0）%（P〈0.01）和（33.2±1.8）%（P〈0.01）,Aβ25-35低、中剂量组培养液中LDH漏出未见明显改变,LDH活力值分别为（23.5±1.4）U/gProt和（24.7±1.3）U/gProt（P〉0.05）,Aβ25-35高剂量组培养液中LDH漏出显著升高,LDH活力值为（38.8±2.0）U/gProt（P〈0.01）,与Glu组相当（P〉0.05）。结论 Aβ25-35能剂量依赖性地损伤皮质神经元,1μmol/LAβ25-35剂量组处理24h后细胞存活率可降低50%左右,可用于Aβ25-35体外诱导阿尔茨海默病细胞模型的建立。     

CS/igf-1基因复合物促骨髓基质细胞增殖及分化的研究

目的:研究壳聚糖/igf-1基因(CS/igf-1)复合物对体外培养的骨髓基质细胞(MSC)分化及增殖的影响。方法:自大鼠股骨及胫骨组织中分离培养大鼠骨髓基质细胞,以含有人igf-1基因cDNA的哺乳动物表达载体pTRacer-igf-1与壳聚糖制备成CS/igf-1复合物加入细胞培养基中进行干预;另设空白细胞组、CS/空质粒干预组及单纯CS干预组作为对照。3H-TdR掺入法、甲苯胺兰染色分别检测细胞的增殖情况及成软骨活性。结果:与空白对照细胞相比,壳聚糖可使所培养的骨髓基质细胞表现出明显的成软骨活性。igf-1基因的参与则可显著促进细胞的增殖。结论:CS/igf-1复合物可促进对体外培养的骨髓基质细胞增殖并向成软骨细胞分化。     

丹酚酸B对转化生长因子β1诱导人肺成纤维细胞增殖和分化的影响

目的：观察丹酚酸B（Sal B）对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导的人肺成纤维细胞增殖及分化的影响。方法：将人胚肺成纤维细胞（MRC-5）随机分为6组：对照组（未加入TGF-β1或Sal B）;1μmol/L Sal B组;10μmol/L Sal B组;10ng/mL TGF-β1组;TGF-β1（10ng/mL）＋1μmol/L Sal B组;TGF-β1（10ng/mL）＋10μmol/L Sal B组。采用MTT法观察各组细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞α-SMA mRNA和蛋白的表达情况;免疫荧光方法检测细胞内纤维形肌动蛋白（Factin,Fibrous Actin）重组及观察细胞形态变化。结果：与对照组比较,TGF-β1组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白的表达水平均明显增加,细胞形态发生明显改变,胞内可见大量F-actin聚合形成的应力纤维（stress fiber）（P〈0.01）;与对照组比较,单纯加入Sal B对细胞增殖、α-SMA表达、细胞形态和F-actin重组均未产生影响（P〉0.05）;与单纯TGF-β1组比较,TGF-β1＋Sal B两组细胞增殖率、α-SMA mRNA和蛋白表达水平均下降,发生形态改变的细胞减少,胞内F-actin聚合形成的stress fibers减少（P〈0.05）,且10μmol/L Sal B对TGF-β1抑制效应优于1μmol/L Sal B,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：Sal B体外能够抑制TGF-β1诱导的人肺成纤维细胞增殖和向肌纤维母细胞分化。     

醋氨酚所致精密肝切片损伤模型的建立及CYP2E1的调节作用

目的：利用精密肝切片（PCLS）技术,建立醋氨酚所致肝切片损伤的体外模型,并探讨CYP2E1活性变化对肝损伤的调节作用,为研究和筛选肝保护药物提供实验依据。方法：利用振荡切片机制备PCLS,建立培养系统。将终浓度为500μmol/L的醋氨酚分别与切片共孵育0、2、4、6h,测定培养基和切片中的谷胱甘肽S-转移酶（GST）和乳酸脱氢酶（LDH）活性。在体给予不同剂量（0.25、0.5、1.0g/kg）的CYP2E1诱导剂乙醇,每天一次,连续3d。末次给药8h后处死动物,取其肝脏制备PCLS,再与500μmol/L醋氨酚共同孵育6h,检测ALT和LDH漏出率。正常PCLS与不同浓度的二乙基二硫代氨基甲酸酯盐（DDTC,CYP2E1抑制剂）（5、10、20μmol/L）、500μmol/L醋氨酚共同孵育6h,检测ALT和LDH漏出率。结果：与常规培养组比较,醋氨酚孵育4、6h组的GST和LDH漏出率显著升高（P〈0.01）。与醋氨酚模型对照组比较,乙醇中、大剂量组LDH漏出率和小、大剂量组ALT漏出率皆升高（P〈0.01,P〈0.05）;DDTC各浓度组ALT漏出率则降低（P〈0.05）。结论：PCLS与500μmol/L醋氨酚共孵育4h即能成功地建立体外肝切片损伤的模型。抑制CYP2E1活性可能对醋氨酚所致的肝损伤有保护作用,而上调CYP2E1活性则可能加重醋氨酚所致的肝损伤。     

丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax表达的影响

目的：探讨丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及 bax、bcl-2表达的影响。方法取浓度为1.5＆#215;10-5个/ml的 RSC-364成纤维样滑膜细胞悬液100μl加入细胞培养板,培养24 h,加入含不同浓度丹参的培养液,采用 MTT法分析丹参对成纤维样滑膜细胞增殖抑制作用及其时效关系;免疫组化法检测 bcl-2、bax表达情况。结果丹参可明显抑制大鼠成纤维样滑膜细胞增殖,并显示出一定的量效和时效关系。丹参可显著上调大鼠成纤维样滑膜细胞 bax表达,下调 bcl-2表达,与空白对照组比较差异有统计学意义（ P 〈0.05）。结论丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖具有抑制效应,其作用机制可能与调控 bax、bcl-2表达有关。     

翡翠贻贝多糖抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的实验研究

目的观察翡翠贻贝多糖（PVPS）对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。方法体外培养的乳腺癌MCF-7细胞经不同浓度翡翠贻贝多糖处理48h后,经CCK-8试剂盒检测分析细胞存活率、用流式细胞术分析各组细胞凋亡率;光镜下观察40mg/L翡翠贻贝多糖处理细胞不同时间后的细胞形态变化。结果翡翠贻贝多糖40mg/L组和80mg/L组的乳腺癌细胞存活率明显低于对照组,而细胞凋亡率则明显高于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。光镜下可见肿瘤细胞脱落随作用时间延长而明显。结论翡翠贻贝多糖可抑制体外培养乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

转化生长因子β1对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响

目的观察转化生长因子β1（TGF—β1）刺激增生性瘢痕成纤维细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖和趋化能力的影响。方法以增生性瘢痕成纤维细胞为实验组,正常皮肤为对照组,添加TGF—β1（10μg/L）为TGF—β1组,向TGF—β1组内添加丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（Akt）阻断剂Tricirlbine（5Ixmol／L）为Akt阻断剂组,二者皆未添加的瘢痕成纤维细胞为非干扰组,利用各组细胞上清液（条件培养基）培养HUVEC,使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察各条件培养基对HUVEC增殖的影响,并利用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验对HUVEC的趋化情况进行评估。结果对照组吸光度值为0．91±0．34,非干扰组1．75±0．15,TGF—B,组3．26±0．58,Akt阻断剂组1．14±0．81。非干扰组吸光度值与对照组和TGF-β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）;而Akt阻断剂组成纤维细胞增殖吸光度值明显低于TGF—β1组（P〈0．01）。细胞划痕24h后,TGF—β1组促使HUVEC划痕的闭合率较非干扰组高（P〈0．01）;而Akt阻断剂组则明显减弱HUVEC划痕闭合的速度（P〈0．01）。Transwell细胞迁移实验中,TGF—β1组迁移的细胞较非干扰组多[TGF—β1组细胞迁移数目：（1718±15）个,非干扰组：（829±2）个,P〈0．01];而Akt阻断剂组阳性细胞迁移率又明显降低[Akt阻断剂组：（935±11）个,P〈0．01]。对照组血管内皮生长因子（VEGF）（65．2±0．3）ng／L,非干扰组（87．0±0．5）ng／L,TGF—β1组（132．7±0．4）ng／L,Akt阻断剂组（70．5±0．6）ng／L。非干扰组与对照组、TGF-β1组与非干扰组、Akt阻断剂组与TGF—β1组比较,差异均有统计学意义（均P〈0．01）。结论TGF—β1可以通过刺激增生性瘢痕成纤维细胞旁分泌VEGF等细胞因子对血管内皮细胞增殖、趋化等能力产生影响。     

美洛昔康对铝负荷致大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:观察美洛昔康对铝负荷致海马神经元损伤的保护作用。方法:离体培养新生SD大鼠海马神经元7d,分成空白对照组(200μmol·L-1NaCl)、铝模型组(200μmol·L-1AlCl3)、美洛昔康小、中、大剂量(10-8、10-7、10-6mol·L-1)组,给药24h后,检测各组神经元光密度值、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,并观察神经元形态。结果:与空白对照组比较,铝模型组光密度值降低、LDH漏出率升高、SOD活性减弱、MDA含量升高(P<0.01),神经元形态发生明显损伤;与铝模型组比较,美洛昔康各剂量组光密度值升高、LDH漏出率降低、SOD活性增强、MDA含量降低(P<0.01或P<0.05),神经元形态出现明显改善。结论:美洛昔康对于铝负荷致离体海马神经元损伤有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症反应和氧化应激有关。     

芪苈强心胶囊对H2O2诱导的H9C2大鼠心肌细胞PPARα表达的影响

目的观察芪苈强心胶囊对H9C2大鼠心肌细胞PPARα表达的影响,探讨芪苈强心胶囊抗心力衰竭作用的相关机制。方法 30只H9C2大鼠心肌细胞分为正常对照组、模型组、芪苈强心组、WY14643组、芪苈强心组+WY14643组,每组6只,采用100μmol/LH2O2处理6h造成心肌细胞损伤模型,5组给药后继续培养12、24、48h,测定细胞增殖率和LDH漏出率。5组给药孵育48h后,收集细胞,RT-PCR和Westernblot法检测PPARαmRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芪苈强心组、WY14643组、芪苈强心组+WY14643组均能增加H9C2细胞增殖活性(P<0.05或<0.01),抑制LDH漏出率(P<0.05或<0.01),RT-RCR和Westernblot方法结果显示芪苈强心组、WY14643组、芪苈强心组+WY14643组PPARαmRNA和蛋白表达显著上升(P<0.05或<0.01)。结论芪苈强心胶囊可通过上调PPARα的表达,发挥其心肌细胞的保护作用。     

硒化壳聚糖对HL60细胞的诱导分化作用

目的:研究硒化壳聚糖对人早幼粒细胞性白血病HL60细胞分化的影响,并探讨该影响与细胞c-myc和c-fos蛋白表达的关系。方法:取HL60细胞分为5组,分别为25、50、100mg·L-1硒化壳聚糖组、空白对照组(培养液)和阳性对照组(二甲基亚砜)。各组经相应试药作用后,采用硝基蓝四氮唑(NBT)还原法检测HL60细胞分化情况,观察NBT阳性细胞数;流式细胞术检测c-myc和c-fos蛋白表达。结果:与空白对照组比较,硒化壳聚糖各组作用与阳性对照组相似,NBT还原阳性细胞明显增多,c-myc蛋白表达显著下降(P<0.01或P<0.05),c-fos蛋白表达显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论:硒化壳聚糖可能通过增强HL60细胞c-fos表达及下调c-myc表达来诱导细胞分化。     

诃子提取物对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的研究诃子提取物对过氧化氢（H2O2）所致心肌细胞损伤的保护作用。方法采用H2O2处理体外培养心肌细胞,造成氧化应激模型,通过检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）漏出量,丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性来反映诃子提取物对H2O2氧化模型的影响,并采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞的代谢率。结果与模型组相比,诃子提取物能显著减少LDH和CK漏出量（P〈0.01）,升高A值（P〈0.01）,降低培养液中MDA含量（P〈0.05,P〈0.01）,升高SOD活性（P〈0.01）。结论诃子提取物可减轻H2O2对心肌细胞的损伤程度,对心肌细胞具有保护作用,其机制可能与稳定细胞膜和抗氧化有关。     

亚硝基乙酰青霉胺抑制人血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的探讨亚硝基乙酰青霉胺对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用。方法将不同浓度的亚硝基乙酰青霉胺300、500、800、1000μmol/L作用于体外培养的血管平滑肌细胞(VSMC),采用氚-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入的方法检测细胞的增殖。结果在500、800、1000μmol/L的亚硝基乙酰青霉胺作用下,VSMC的3H-TdR掺入量cpm分别为1096.33±85.60、852.00±57.80、693.00±49.60,均与对照组的1270.00±96.50有显著性差异(P<0.01),并表现为剂量依赖性(P<0.01)。结论亚硝基乙酰青霉胺能够抑制人VSMC的增殖,可能有防治经皮腔内冠状动脉成形术后再狭窄的作用。     

不同浓度bFGF对体外培养人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对体外人视网膜色素上皮细胞（hRPE）增殖调控的剂量-效应关系、时间-效应关系,明确bFGF体外培养hRPE增殖的最佳浓度和时间,为hRPE替代疗法治疗视网膜变性疾病提供新思路。方法采用经细胞化学染色法鉴定确认的hRPE细胞株,用CCK-8法检测不同浓度bFGF（0、2、4、8、16、32ng/ml）在不同作用时间（0、24、48、72、96 h）对hRPE增殖的影响。结果在相同浓度bFGF作用下,hRPE吸光度值（A值）随作用时间延长而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）。在相同培养时间条件下,hRPE A值随bFGF浓度增加而增加,与对照组比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF浓度〈16 ng/ml的各组相邻浓度实验组组间A值比较的差异有统计学意义（P〈0.05）;bFGF浓度≥16 ng/ml的相邻浓度实验组组间A值比较的差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 bFGF对体外培养hRPE增殖的调控有剂量-效应关系和时间-效应关系。bFGF的促增殖作用在16 ng/ml浓度以上逐渐达到饱和,故促体外培养hRPE细胞增殖的bFGF浓度应以16 ng/ml为佳。     

芦荟大黄素对硬皮病成纤维细胞增殖的影响

目的探讨芦荟大黄素对系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法以不同浓度的芦荟大黄素处理体外培养的成纤维细胞,显微镜下观察成纤维细胞生长状况并摄片;用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法测定芦荟大黄素对成纤维细胞增殖的影响。结果荟大黄素对硬皮病成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用。结论芦荟大黄素可显著的抑制硬皮病成纤维细胞的生长,降低成纤维细胞的增殖指数并诱导其调亡。