流式细胞光度术在鼻咽癌上皮样细胞株细胞周期动力学研究中的应用

本实验应用流式细胞光度术研究鼻咽癌上皮样细胞株（ＣＮＥ）的细胞周期动力学。结果发现ＣＮＥ细胞仍保持原代细胞的ＤＮＡ含量水平（超三倍体和亚四倍体），随着细胞接种时间的延长细胞周期中Ｇ０／Ｇ１时相细胞的百分数逐渐升高，而Ｓ％和Ｇ２＋Ｍ％则逐渐降低。该项研究还发现随着孵育时间的延长，细胞周期中各时相细胞的运动均逐渐延缓，其中以Ｇ０／Ｇ１和Ｇ２＋Ｍ时相细胞的运动减慢较为明显。     

顺铂对鼻咽癌上皮样细胞株细胞周期进程影响的实验研究

本实验应用流式细胞光度术（ＦｌｏｗＣｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣＭ）检测顺铂（０．５μｇ／ｍｌ）对鼻咽癌上皮样细胞株（ＣＮＥ）细胞周期进程的影响。结果发现用药后第３天和第４天，用药组的细胞数分别为对照组的８１．７１％和７２．１４％；ＣＮＥ细胞的ＤＮＡ指救为１．６５±０．０５，揭示ＣＮＥ细胞仍保持原代细胞的ＤＮＡ含量水平。顺铂导致细胞周期各时相时间延长，其中以Ｇ２阻滞较为明显。     

FCM在照射后CNE细胞周期进程测定中的应用

作者探讨应用流式细胞分析检测体外培养人鼻咽癌上皮样细胞株(CNE)细胞各时期时相及细胞周期时间的计算方法,并据此研究单次~(60)Co照射对CNE细胞周期进程的影响。结果表明2Gy照射后2天内细胞周期时间(TC)延长至对照组的1.3倍(30.7/23.3),其中TG_1,Ts和TG_2 M分别为对照值的1.3倍(13.5/10.6),1.2倍(6.1/5.2)和1.5倍(11.1/7.5);6Gy照射后Tc为对照值的3.4倍(153.5/45.2),其中TG_1,Ts和TG_2 M分别为对照值的3.4倍(66.1/19.6),3.3倍(41.6/12.7)和3.6倍(45.8/12.8)。0     

人鼻咽癌放射抗拒细胞株建立及其细胞周期的观察

-2R的存活率大于CNE-2(89.0% vs 71.7%),P=0.001;细胞分布周期改变,CNE-2R的S期比例增高,G0/G1和G2/M期细胞减少,χ2=7.312,P=0.034; CNE-2R在照射后12～36 h出现明显的G2/M期阻滞,亲本CNE-2仅在照射后12～24 h G2/M期略有增加.结论:人鼻咽癌细胞株CNE-2经间歇性大剂量γ射线多次照射后得到的CNE-2R具有稳定放射抗拒性,并且显示出与亲代不同的细胞周期特征.     

X射线照射对鼻咽癌细胞多药耐药基因表达影响初步研究

目的 RT-PCR法研究累积高剂量X射线照射后多药耐药基因MDR1 mRNA表达随时间的变化趋势,并且探讨Bcl-2、MMP7与MDR1的关系.方法 选取人鼻咽鳞癌CNE1细胞系进行体外培养及X射线照射,累积剂量50 Gy.分别收集CNE1细胞和X射线照后得到的CNE1R细胞,利用MTT法检测CNE1、CNE1R细胞对顺铂的耐药性;RT-PCR技术检测MDR1 mRNA的表达.选取CNE1和MDR1 mRNA表达最高的一组CNE1R细胞检测Bcl-2、MMP7 mRNA的表达情况.结果 CNE1R细胞对顺铂产生耐药性.RT-PCR检测CNE1细胞MDR1 mRNA半定量灰度值为0.47±0.04,照射50 Gy后1、7、21、28、35、42、49 d的CNE1R细胞MDR1 mRNA半定量灰度值均高于CNE1细胞,分别为0.67±0.06(t=-5.44,P=0.003)、0.70±0.01(t=-5.90,P=0.002)、0.73±0.01(t=-6.45,P=0.001)、0.67±0.03(t=-3.97,P=0.011)、0.65±0.01(t=-4.43,P=0.007)、0.62±0.05(t=-2.64,P=0.046)、0.62±0.02(t=-3.34,P=0.021).RT-PCR法检测CNE1细胞和CNE1R细胞中Bcl-2 mRNA表达半定量灰度值不同,分别为0.55±0.02和1.05±0.04(t=-9.93,P=0.000);MMP7 mRNA表达半定量灰度值也不同,分别为0.51±0.01和0.82±0.02(t=-8.51,P=0.000).结论 X射线累积照射50 Gy后CNE1R细胞内MDR1基因表达高于照前CNE1细胞,可能与Bcl-2、MMP7基因表达的同步变化有关.     

X射线照射对鼻咽癌细胞多药耐药基因表达影响初步研究

Objective To invstigate the effect of high dose X-ray irradiation on the expression of multidrug resistance-1 (MDR1), Bcl-2, MMP7 genes. Methods A nasopharyngeal carcinoma cell line,CNE1, were irradiated with a total dose of 50 Gy. The resistance to the cisplatin of CNE1 cells and the irradiated CNE1 (CNE1 R) cells was detected by MTT. mRNAs expression of MDR1 , Bcl-2 and MMP7 was measured by quantitative RT-PCR. Results The expression of MDR1 increased in CNE1 R cells. The semiquantitative A value of MDR1 mRNA was 0.47 ±0.04, and the value of CNE1R cells (1st, 7th, 21st,28th, 35th, 42nd and 49th days after irradiation) were 0.67 ± 0. 06 (t = -5.44, P = 0. 003) ,0.70 ± 0. 01(t=-5.90,P=0. 002),0.73±0. 01(t= -6. 45,P=0. 001) ,0. 67 ± 0. 03 (t= -3.97,P=0.011),0.65 ±0.01(t = -4.43,P=0. 007),0. 62±0. 05(t= -2. 64,P=0.046) and 0.62 ±0.02(t = -3.34,P=0.021), respectively. Bcl-2 mRNA expression were 0.55 ±0.02 and 1.05 ±0.04(t = -9.93,P=0. 000) and MMP7 mRNA expression were 0.51 ±0.01 and 0.82 ±0.02(t = -8.51,P=0.000) in CNE1and CNE1 R cells. Conclusions The MDR1 expression was increased after a total dose of50 Gy irradiation,which may be related to the synchronous change of Bcl-2 and MMP7 genes.     

X射线照射对鼻咽癌细胞多药耐药基因表达影响初步研究

Objective To invstigate the effect of high dose X-ray irradiation on the expression of multidrug resistance-1 (MDR1), Bcl-2, MMP7 genes. Methods A nasopharyngeal carcinoma cell line,CNE1, were irradiated with a total dose of 50 Gy. The resistance to the cisplatin of CNE1 cells and the irradiated CNE1 (CNE1 R) cells was detected by MTT. mRNAs expression of MDR1 , Bcl-2 and MMP7 was measured by quantitative RT-PCR. Results The expression of MDR1 increased in CNE1 R cells. The semiquantitative A value of MDR1 mRNA was 0.47 ±0.04, and the value of CNE1R cells (1st, 7th, 21st,28th, 35th, 42nd and 49th days after irradiation) were 0.67 ± 0. 06 (t = -5.44, P = 0. 003) ,0.70 ± 0. 01(t=-5.90,P=0. 002),0.73±0. 01(t= -6. 45,P=0. 001) ,0. 67 ± 0. 03 (t= -3.97,P=0.011),0.65 ±0.01(t = -4.43,P=0. 007),0. 62±0. 05(t= -2. 64,P=0.046) and 0.62 ±0.02(t = -3.34,P=0.021), respectively. Bcl-2 mRNA expression were 0.55 ±0.02 and 1.05 ±0.04(t = -9.93,P=0. 000) and MMP7 mRNA expression were 0.51 ±0.01 and 0.82 ±0.02(t = -8.51,P=0.000) in CNE1and CNE1 R cells. Conclusions The MDR1 expression was increased after a total dose of50 Gy irradiation,which may be related to the synchronous change of Bcl-2 and MMP7 genes.     

X射线照射对人鼻咽癌细胞株MDR1及P-gp表达影响的研究

目的:探讨X射线照射前后鼻咽癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)及其糖蛋白(P-gp)的表达随时间变化情况,及其照射与鼻咽癌细胞多药耐药的关系.方法:对CNE-1细胞进行X射线照射.利用RT-PCR检测照射前后细胞MDR1的表达;Western blotting检测照射前后P-gp的表达;MTT法检测照射前后顺铂对细胞的半数抑制率.结果:MTT法检测照射前CNE-1细胞的IC28和35天的IG50值均比照射前增高,其值分别为(1.56±0.10)、(2.41±0.11)、(3.24±0.13)、(2.65±0.09)和(1.83±0.15)μg/mL; RT-PCR检测照射前CNE-1细胞MDR1的半定量值为0.47±0.02,照射后第7、14、21、28和35天MDR1的表达比照射前明显增高,其值分别为0.63±0.02、0.86±0.05、0.75±0.07、0.57±0.03和0.58±0.04;Western blotting检测照射前CNE-1细胞P-gp的半定量值为15.55±1.02,照射后第14、21天比照射前明显增高,其值分别为23.29±1.83、28.98V2.14.结论:X射线照射可引起CNE-1细胞MDR1及P-gp表达增强,同时CNE-1细胞对顺铂产生抵抗.     

鼻咽癌照射对垂体功能远期影响

鼻咽癌的治疗首选放射治疗,随着疗效的提高,放射的远期效应表现增多。本文对20例5年前放疗前曾作过血浆肾皮质醇含量观测的生存者再作肾皮质醇含量观测,并观察其他临床效应,以检讨鼻咽癌照射对垂体功能的远期影响。 临床资料 性别:男12例、女8例,男:女=1.5:1。年龄:31—40岁 2例、41—50岁8例,51—60岁 9例,>60     

HL-60和SiHA细胞株ATM表达量与60Co照射后细胞周期阻滞之间的关系

背景与目的:毛细血管扩张性共济失调综合征( ataxia telangiectasia,AT)是由 ATM( ataxia telangiectasia mutant)基因所致,其突出特点是对放射线非常敏感,因此, ATM表达与放射敏感性应存在相关性.本研究旨在探讨两种肿瘤细胞株 ATM表达量与 60Co照射后细胞周期阻滞功能之间的关系.方法:使用半定量 RT-PCR和流式细胞仪技术检测 HL-60细胞和 SiHA细胞中 ATM mRNA和 ATM蛋白表达量,同时以 6、 10和 15 Gy 60Co照射 SiHA细胞, HL 60细胞仅以 6、 10 Gy照射,于照射后 6、 12、 24、 48及 60 h观察细胞周期阻滞现象和细胞凋亡率的变化.结果: HL 60细胞 ATM平均蛋白荧光强度为 14.11±2.38, SiHA细胞为 27.74± 1.16,约为 HL-60细胞的 2倍; HL-60细胞 ATM mRNA相对表达量为 0 .09, SiHA细胞为 0.80,约为 HL-60细胞的9倍.照射后 HL-60细胞和 SiHA细胞均表现 G2/M期阻滞.射线对 HL-60细胞周期阻滞功能明显较 SiHA细胞弱.结论:放射线对 HL-60细胞和 SiHA细胞的周期阻滞功能与 ATM表达量相符,即 ATM表达量低,细胞周期阻滞功能差.     

低剂量^60Coγ射线照射人体脾脏临床剂量学

目的：探讨采用常规60Coγ射线机实现低剂量照射人体脾脏的最佳方法，并测试在不同物理条件下刺量学参数的变化。方法：在常规照射和低熔点铅(LML)重过滤初始γ束条件下，采用三维水箱自动测量装置和刺量仪，分别测量PDD、OAR和绝对剂量定标后的K修正系数。结果：^60Coγ射线初始束经重过滤后，PDD在人体脾脏靶区深度5cm～11cm区域平均降低1．2个百分点，OAR较常规^60Co OAR圆弧化，绝对剂量较常规实际减弱80倍，并给出了治疗时间公式。结论：对^60Coγ射线的重过滤，是采用常规^60Coγ射线治疗机实现低剂量照射脾脏的最佳方法。     

细胞周期调节因子对鼻咽癌复发间期的影响

目的：探讨细胞周期调节因子异常表达对鼻咽癌复发间期的影响。方法：采用ＬｓＡＢ法检测原发鼻咽癌组织ｐ５３、ＭＤＭ２、ＷＡＦ１和Ｒａｓ蛋白的表达。结果：ｐ５３或ＭＤＭ２蛋白高表达的鼻咽癌患者的复发间期,比相应蛋白的低表达和阴性者明显缩短,两调节因子无论在单因素分析（分别Ｐ〈０．０５和Ｐ〈０．００５）或多因素分析（分别Ｐ＝０．０３３８和Ｐ＝０．０００３）均有统计学的显著差异。结论：ｐ５３和ＭＤＭ２蛋白表     

鼻咽癌细胞潜在性倍增时间的流式细胞计量术研究

目的研究目前文献中常用的计算方法和５－溴脱氧尿苷（ＢｒｄＵ）标记方法对不同生长状态肿瘤细胞潜在性倍增时间（Ｔｐｏｔ）检测结果的影响。方法应用ＢｒｄＵ／ＤＮＡ双参数流式细胞分析和相对运动法对鼻咽癌细胞株ＣＮＥ进行研究。结果ＢｒｄＵ标记浓度１０～１００μｍｏｌ／Ｌ、标记时间５～３０ｍｉｎ和相对运动时间１．５～８．５ｈ对Ｔｐｏｔ检测结果无显著影响（Ｐ＜０．０５）；平台期ＣＮＥ细胞未能被ＢｒｄＵ标记，而指数生长期ＣＮＥ细胞和平台期ＣＮＥ细胞换新鲜培养液后ＢｒｄＵ标记指数分别为４８．８％和３３．６％。结论本方法适宜于今后的临床应用，有助于解释临床上肿瘤加速再增殖发生的时间问题。     

BHRF1表达对~(60)Co照射后CNE2细胞周期分布的影响

目的：了解ＢＨＲＦ１基因表达对６０Ｃｏ照射后ＣＮＥ２细胞周期分布的影响。方法：构建ＢＨＲＦ１高表达载体并转入ＣＮＥ２细胞中，通过检测癌细胞增殖细胞核抗原（Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）表达和在６０Ｃｏ照射后不同时期细胞周期分布的改变。结果：ＢＨＲＦ１可抑制细胞ＰＣＮＡ的表达及降低Ｓ期的百分率；经６０Ｃｏ照射后，ＢＨＲＦ１ＣＮＥ２细胞的凋亡率较低（Ｐ＜００１），Ｓ期细胞数下降不明显（Ｐ＞００５）；在辐射后的２４小时到７２小时，其Ｓ期和Ｇ２期细胞百分率先后升高。结论：ＢＨＲＦ１基因的表达可抑制细胞的增殖并增强其抵抗辐射诱发的细胞凋亡的发生。     

芦笋对^60Co—γ—射线和环磷酰胺所致的骨髓抑制的保护作用

芦笋是百合科植物,学名石刁柏(As-paragus officinalis).现报告芦笋对骨髓造血机能的影响.1 对外周血白细胞(WSC)数的影响小鼠给予鲜芦笋1g/d,每3d计数WBC,共观察21d,7次计数与对照组均无显著差异(P>0.05).应用~(60)CO—γ射线给小鼠一次照射,剂量4cGy.在照射前3d始给予芦笋1g/d,观察12d,照射对照组d3WBC降到未照射前的24%,d12仅恢复到原水平的63%;芦笋照射组d3的WBC为原水平的35%,d6WBC与照射前已无显著差异.给小鼠皮下     

酸角抗^60Coγ射线和MMC诱变作用的研究

本文用人体外周血淋巴细胞微核和姐妹染色体互换试验研究酸角的抗突变作用。全血经~(60)Cor射线照线,37℃温育2h后加酸角培养,微核发生率比阳性对照组显著降低,有剂量-反应关系,最高剂量组降低了3.65倍。全血、丝裂霉素C、酸角同时加入,4℃放3h后培养,微核发生率和姐妹染色单体互换频率比阳性对照组明显降低,剂量-反应关系明确,最高剂量组分别降低了2.30和0.85倍。结果表明,酸角对丝裂霉素C和~(60)Cor射线所致人体细胞的遗传损伤有阻抑和修复作用。     

鼻咽癌相关基因NAG7对鼻咽癌细胞周期及凋亡的影响

背景与目的NAG7基因是我室克隆的鼻咽癌相关的肿瘤抑制候选基因,其功能与作用机制目前尚不清楚.研究鼻咽癌相关的潜在抑瘤基因NAG7对鼻咽癌细胞系(HNE1)细胞周期和细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法采用脂质体转染技术将NAG7基因导入HNE1细胞,建立稳定表达NAG7的细胞株,Northernblot分析转染细胞NAG7基因的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期、细胞周期素及细胞凋亡的改变,并用westernblot验证.结果NAG7基因重表达的HNE1细胞与空载体转染的HNE1和HNE1细胞相比G0/G1期细胞数增加(P<0.05),S期细胞数减少;细胞凋亡数目增加(P<0.05);细胞周期素A、D1、E表达明显降低(P<0.05),细胞周期素B1表达降低,Westernblot检测亦证实cyclinD1和cyclinE表达明显下调.结论NAG7的重表达导致细胞周期素表达下调,从而延缓细胞经G1期进入S周期及诱导细胞凋亡增加进而抑制NPC细胞的过度增殖.