华支睾吸虫抗体对成虫存活的影响——体外实验

我们曾用华支睾吸虫(Cs)戍虫抗原免疫兔取得抗Cs IgG,并用了放射自显影法检测华支睾吸虫相关Ag的分布。本文则对这种IgG的保护性作了观察。 材料与方法 一、成虫培养:由自然感染的猫取得成虫,用37℃ pH7.2 PBS洗净,用含青、链霉素各400 μg/ml的PBS浸洗10-20分钟灭菌后洗净待用。DMEM中加青、链霉素各100μg/ml为基本培液。分为以下几种,(1)兔抗Cs IgG配成100,200,400μg/ml三种浓度,经0.22μm孔径的微孔滤膜过滤除菌,备用。(2)自然感染肝吸虫的8号及11号猫血清各1份。前     

华支睾吸虫severin蛋白对肝癌细胞SMMC-7402增殖、迁移及侵袭作用的初步研究

目的研究华支睾吸虫Severin蛋白对肝癌细胞株SMMC-7402增殖以及侵袭迁移能力的影响。方法构建Csseverin的慢病毒表达载体,并稳定转染肝癌SMMC-7402细胞。Western blot鉴定得到稳定过表达Csseverin的肝癌细胞系(PEZ-LV203-Csseverin 7402),并通过荧光显微镜观察其细胞内绿色荧光的表达;CCK-8实验检测过表达Csseverin后肝癌细胞SMMC-7402增殖能力的改变;用划痕愈合实验和Transwell小室侵袭实验检测Csseverin对SMMC-7402细胞迁移侵袭能力的影响;RT-PCR检测PEZ-LV203-Csseverin 7402和对照细胞内侵袭相关指标基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9的m RNA水平。结果肝癌细胞SMMC-7402稳定过表达Csseverin后,Western blot检测出PEZ-LV203-Csseverin 7402中的Csseverin蛋白明显增多,荧光显微镜观察细胞有明显的绿色荧光表达;CCK-8实验表明Csseverin能明显促进SMMC-7402细胞的增殖能力。细胞划痕实验显示与对照细胞相比,过表达Csseverin的SMMC-7402细胞的迁移能力明显增强。Transwell小室检测显示,过表达Csseverin后的SMMC-7402中穿膜细胞数高于对照细胞组。RT-PCR检测出PEZ-LV203-Csseverin-7402中的MMP-2和MMP-9 m RNA水平明显高于对照细胞组。结论 Csseverin可促进肝癌细胞SMMC-7402的增殖,可能通过上调MMP-2和MMP-9表达从而促进肝癌细胞SMMC-7402的侵袭迁移能力。     

华支睾吸虫合并HBV感染对肝星状细胞和巨噬细胞作用的体外研究

目的华支睾吸虫合并HBV感染对肝星状细胞和巨噬细胞的作用。方法以华支睾吸虫分泌排泄蛋白(CsESP)(10μg/mL)合并HepG2.2.15细胞(5×10~5个)共孵育人肝星状细胞(LX-2),同时设10μg/mL CsESP、5×10~5个HepG2.2.15单独处理组和PBS组。荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组肝纤维化相关指标α-平滑肌蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ的转录水平;利用CsESP(10μg/mL)合并乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)(5μg/mL)共同刺激巨噬细胞RAW264.7细胞,同时设10μg/mL CsESP、5μg/mL HBeAg单独处理组和PBS组,qRT-PCR法检测各组一氧化氮合酶(iNOS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、NLRP3炎症小体、白细胞介素-1β(IL-1β)的表达情况,同时使用流式细胞术检测其凋亡水平变化。结果 qRT-PCR法检测结果显示,CsESP合并HepG2.2.15处理组中LX-2细胞α-SMA和Collagen-Ⅰ的m RNA水平与CsESP或HepG2.2.15单独处理组相比显著上升,差异有统计学意义(P0.05),而Collagen-Ⅲ表达变化不明显。CsESP与HBeAg共处理诱导RAW264.7细胞中NLRP3、IL-1β、IL-6、TGF-β、TNF-α和iNOS的mRNA水平与CsESP或HBeAg单独刺激组相比显著上升,差异有统计学意义(P0.05)。CsESP与HBeAg共处理组凋亡细胞比率为16.35%,明显高于CsESP、HBeAg单独处理组的6.03%和12.52%,差异有统计学意义(P0.05)。结论华支睾吸虫合并HBV感染体外可促进肝星状细胞的激活,并可促进巨噬细胞炎症因子的释放及细胞凋亡,可能促进肝脏炎症、肝纤维化的进展。     

华支睾吸虫感染的调查

寄生虫病是危害我国人民健康的重要公共卫生同题之一。根据全国人体寄生虫分布调查结果，我省寄生虫总感染率为17．5％，其中，华支睾吸虫感染率为1．2％，居全国第2位。本文调查华支睾吸虫感染率为11．59％。为引起人们重视，应加强卫生宣传教育，以此作为我省开展防治的寄生虫病重点工作之一。     

华支睾吸虫的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜对华支睾吸虫体表微细结构、感觉器的类型和分布等进行了观察。其中发现腹吸盘腔的底部有互相连接比较粗大的枝状物以及具纤毛的环状乳突和无纤毛的扁平乳突,这些都是过去文献未见报道过的。     

华支睾吸虫感染情况调查

目的 :分析肝吸虫的感染情况 ,为肝吸虫的防治提供依据。方法 :皮试法、直接涂片便检法。结果 :皮试法阳性率为 5 6.87% ,男女无显著性差异 ;便检法感染率为 68% ,男女感染率无显著性差异。结论 :吃生鱼是引起该地肝吸虫感染的主要原因 ,今后要加强肝吸虫病的宣传与治疗 ,改善不良饮食习惯     

华支睾吸虫特异性抗原的筛选

华支睾吸虫特异性抗原的筛选田海生苏畅张耀娟（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词华支睾吸虫；电泳；特异性抗原华支睾吸虫、血吸虫、肺吸虫、肝片形吸虫和姜片虫成虫间存在着共同抗原，并引起交叉反应，已为多年来中外学者的工作所证实［１～４］...     

华支睾吸虫溶血磷脂酶对肝星状细胞体外作用的研究

目的探讨华支睾吸虫溶血磷脂酶(Cs LysoPLA)对肝星状细胞的作用。方法实验分为4组:PBS对照组为PBS孵育肝星状细胞系LX-2细胞24 h;Cs LysoPLA单独刺激组为Cs LysoPLA(10μg/mL)单独孵育LX-2细胞24 h;联合刺激组为不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)孵育LX-2细胞2 h后,IL-13(20 ng/mL)孵育24 h;IL-13单独刺激组为IL-13(20 ng/mL)单独孵育LX-2细胞24 h;逆转录荧光定量PCR(qRT-PCR)检测星状细胞活化指标分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及纤维化相关分子胶原蛋白Ⅰ型(Collagen-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ型(Collagen-Ⅲ)以及促纤维化分子转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)的mRNA水平。Western Blotting检测不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)联合IL-13(20 ng/mL)刺激时LX-2细胞α-SMA蛋白表达量。结果 Cs LysoPLA(10μg/mL)可直接抑制LX-2细胞α-SMA、Collagen-Ⅲ的转录,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P=0.014 2、0.002 7);并且Cs LysoPLA(10μg/mL)可刺激LX-2细胞TGF-β1、PDGF基因转录升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P=0.009 1、0.003 4);Cs LysoPLA(10μg/mL)可以下调IL-13引起的α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TGF-β1的mRNA水平的升高,与单独IL-13刺激组相比差异有统计学意义(P=0.003 0、0.011 9、0.043 0、0.025 6);Western Bloting结果显示,不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)均可以下调IL-13引起的星状细胞活化分子α-SMA的表达,与单独IL-13刺激组相比差异有统计学意义(P=0.008 0、0.000 5、0.000 2)。结论 Cs LysoPLA(10μg/mL)在高浓度下既可以直接抑制LX-2细胞纤维化,又可以抑制IL-13引起的LX-2细胞纤维化,可能在华支睾吸虫严重感染所致纤维化过程中发挥了抑制纤维化的作用。     

华支睾吸虫感染的临床特征分析

目的探讨华支睾吸虫感染者临床表现特征,提高对该寄生虫病诊断和治疗的认识。方法收集2010年住院的906例华支睾吸虫感染者的临床资料,分析其临床特征。结果华支睾吸虫感染者占同期住院患者16.5%,其中男性797例,比例远高于女性（88.0%vs 12.0%）。70.4%患者无明显消化道症状。并发肝胆胰疾病患者总数为220例（24.3%）,以胆石症比例最高（16.0%）,其中胆囊结石伴胆囊炎78例,胆管结石伴胆囊炎67例。粪检虫卵阳性者占90.2%。结论华支睾吸虫感染症状隐匿,与肝胆胰疾病关系密切,粪便反复多次查虫卵简便易行,可作为筛查方法,戒除生食鱼虾习惯对减少感染有重要预防作用。     

华支睾吸虫神经系统的发育观察

通过硫代胆碱法定位华支睾吸虫的胆碱酯酶来展示神经系统的结构，观察了该虫神经系统发育过程。研究表明５天童虫就已初具成虫神经系统的雏形。１０天童虫显示与成虫基本相同的神经系统结构。２０天童虫及３０天性成熟时的虫体其神经系统未见明显发展。至９０天时神经系统则更加发达，其脑神经节、神经干、横向神经及各部分的神经分支相当粗壮，神经网络更为致密。     

华支睾吸虫磷脂酶B和HBx蛋白对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨华支睾吸虫分泌排泄蛋白磷脂酶B(Cs PLB)与乙肝病毒(HBV)X蛋白(HBx)共同作用对HepG2肝癌细胞株增殖、凋亡的影响。方法使用不同浓度的重组Cs PLB(r Cs PLB)刺激本课题组已构建的转染了融合表达HBx慢病毒载体的HepG2细胞(HepG2-plvo-HBx),以转染空白慢病毒载体的HepG2(HepG2-plvo)作为对照细胞。使用CCK8测定细胞的增殖水平,流式细胞术分析细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹(Western blot)检测细胞凋亡相关因子B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶(Caspase)家族中Caspase 3和Caspase 9的蛋白表达水平。结果 CCK8实验结果显示,经过rCsPLB刺激后,HepG2-plvo细胞增殖水平显著下调,HepG2-plvo-HBx细胞增殖水平显著上调,在rCsPLB浓度为5μg/mL时,细胞增殖能力最强,与PBS组相比,差异有统计学意义(P0.05)。Annexin VAPC/7AAD荧光双染检测结果显示,HepG2-plvo细胞凋亡比例(8.07±3.93)%,低于PBS组的(14.50±0.73)%,差异有统计学意义(P0.01);HepG2-plvo-HBx凋亡细胞占比(15.55±1.92)%,高于PBS组的(9.57±2.52)%,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示,HepG2-plvo细胞中Bcl-2的蛋白表达水平高于PBS组,Bax和Caspase 3的蛋白水平低于PBS组,差异有统计学意义(P0.05),Caspase 9蛋白表达差异无统计学意义(P0.05);与PBS组相比,HepG2-plvo-HBx细胞中Bcl-2蛋白表达水平下调,Bax、Caspase 3和Caspase 9蛋白表达水平上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论 rCsPLB与HBx共同作用可促进HepG2细胞的增殖和凋亡。     

华支睾吸虫感染与胆囊结石研究报告

目的 探讨华支睾吸虫感染与胆囊结石的关系.方法 随机抽取2006年12月～2009年1月在该院普外科实施内镜保胆取石手术的204例患者的胆囊结石,将结石磨碎过滤后涂片镜检.同时随机抽取同期108例实施内镜保胆取石手术患者的胆汁,离心后将沉渣涂片镜检.结果 204例胆囊结石中163例检出华支睾吸虫卵,检出率79.9%,108例胆汁中,46例检出华支睾吸虫卵,检出率42.6%,两组相比较有统计学意义(P＜0.0001).华支睾吸虫卵在胆色素性结石、胆固醇性结石和混合性结石中的检出率分别为89.6%、57.9%和70.0%,三组相比较有统计学意叉(P＜0.0001);204例胆囊结石中,159例来自华支睾吸虫病流行区.如广东、广西(胆色素性结石占69.2%,胆固醇性结石占5.7%,混合性结石占25.2%),45例来自华支睾吸虫病非流行区,如甘肃(胆色素性结石占11.1%,胆固醇性结石占22.2%,混合性结石占66.7%),两组构成比差异有统计学意义(P＜0.0001).结论 结果第一次表明:华支睾吸虫感染与胆囊结石有密切关系;在华支睾吸虫病流行区,胆囊结石以胆色素性结石为主,在非流行区以胆固醇性结石和混合性结石为主;华支睾吸虫卵在胆囊结石中的检出率明显高于胆汁;胆囊结石磨碎过滤镜检是诊断华支睾吸虫感染简单而有效的方法.     

华支睾吸虫抗原纯化研究现况

随着华支睾吸虫防治工作的进展 ,其患病率及感染率逐步下降 ,而诊断的难度渐趋加大 ,原主要诊断方法——粪检固有的缺陷 (工作量大 ,工作效率低 ,易漏检 ,群众不乐意接受 )愈加突出 ,免疫诊断在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中占据愈来愈重要的地位。诊断抗原的优劣决定着血清抗体检测、皮肤试验等免疫方法的诊断效果。目前所用的抗原主要为粗制成虫抗原 ,严重影响免疫诊断效果 ( 1)。因此 ,已有不少学者用不同方法对华支睾吸虫成虫粗抗原进行纯化研究。现按不同的研究方法综述如下。1　饱和硫酸铵沉淀法　　张夏英等( 2 ) 用 2 5%、50 %…     

华支睾吸虫囊蚴感染鸡鸭实验报告

对于家禽类能否作为华支睾吸虫保虫宿主的问题,迄今尚有争论,有人通过流行病学调查认为鸡、鹅、鸭可作为本虫的保虫宿主。江西易明华通过实验感染也曾二次报道鸡、鸭体内可查见成熟的华支睾吸虫成虫及虫卵。但更多的是持否定态度的文第报道。为弄清这一问题,我室于1987年11月对鸡、鸭作实验感染试验、现报道如下。材料和方法 1实验动物从广州郊区太和养鸭场购买童鸭六只,在菜市场购买健康本地鸡二只,经粪检均未发现华支睾吸虫虫卵。     

华支睾吸虫致胆囊结石1例

华支睾吸虫又称肝吸虫，为可感染人和犬、猫等多种动物．肝吸虫病为人兽共患寄生虫病，肝吸虫常寄生于肝胆管内，引起肝胆组织的病理变化，临床上可表现为胆管炎、胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍，重者可发生肝硬化，亦可诱发肝癌．目前中国除西北地区外，25个省、市、自治区均报告过肝吸虫病的流行或散发病例，已被卫生部列为中国重点预防与治疗的食源性寄生虫病之一。     

华支睾吸虫颗粒蛋白在虫体及宿主中的表达

目的探讨华支睾吸虫颗粒蛋白(CsGRN)在虫体和宿主中的表达。方法使用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测华支睾吸虫成虫、囊蚴和虫卵及猫的肝脏、胆管组织和全血CsGRN基因mRNA表达水平;免疫组化检测CsGRN在成虫及宿主猫、人和实验感染的Balb/c小鼠肝脏中的定位。结果 CsGRN基因mRNA在虫体的各阶段都有表达,在感染的猫肝和胆管组织中高表达;CsGRN主要定位在成虫的睾丸、外膜和虫卵,在宿主人、猫和小鼠中主要分布在胆管上皮和肝细胞。结论 CsGRN可能参与虫体的生长发育,它作为分泌排泄抗原之一可能损害肝胆管组织,有进一步研究价值。     

合并感染华支睾吸虫对慢性乙肝患者凝血指标的影响

目的 分析乙型肝炎合并感染华支睾吸虫患者凝血相关指标的变化,为临床诊断和治疗以及预后监测提供参考价值。方法 将收集的患者标本分为6个组,分别是健康组40例、慢性乙肝组47例、慢性乙肝肝硬化组47例、单纯感染华支睾吸虫组40例、慢性乙肝合并感染华支睾吸虫组30例及慢性乙肝肝硬化合并感染华支睾吸虫组27例,并检测凝血4项指标做统计分析,比较各组之间凝血指标的变化差异。结果 与健康组相比,单纯华支睾吸虫组的纤维蛋白原（FIB）水平升高,凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）指标延长,同时乙肝感染组及合并感染组的凝血酶时间（TT）、PT、APTT指标延长,FIB指标下降,差异有统计学意义（P<0.05）;与慢性乙肝组相比,慢性乙肝肝硬化组与合并感染乙肝组的PT、APTT、TT指标延长,FIB指标水平下降,差异有统计学意义（P<0.05）;同时与慢性乙肝肝硬化组和合并感染乙肝组相比,合并感染乙肝肝硬化组的PT、APTT、TT指标显著延长,FIB指标水平显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 合并感染华支睾吸虫会进一步加重乙肝患者的凝血功能障碍,影响疾病的治疗和预后,并且慢性乙肝患者随着疾病的进展至肝硬化会加重凝血功能发生障碍。因此,在治疗乙肝患者的同时要警惕是否有华支睾吸虫的感染,以进一步指导临床用药和监测预后。     

海南省华支睾吸虫感染情况的调查

用改良加藤氏厚涂片法,采取随机整群抽样法,抽取琼海、昌江、三亚、临高、琼中5个县(市)15个乡镇7958人进行调查,查见华文睾吸虫感染者32人,感染率0.4％。15个点中有9个点查见华支睾吸虫感染者,占调查点的60％。其中临高调查5个点中有4个点,琼海调查4个点中有3个点查见华支睾吸虫感染者。     

合并感染华支睾吸虫对慢性乙肝患者肠道菌群的影响

目的 了解慢性乙肝患者合并华支睾吸虫感染后肠道菌群的生长状况,探索肠道菌群与合并感染状态的相互关系,从而为临床预防和治疗提供帮助。方法 运用稀释平板菌落计数法,收集健康人、单纯患慢性乙肝的患者、单纯感染华支睾吸虫的患者、慢性乙肝合并华支睾吸虫感染者4组人群的新鲜大便标本各30例进行培养,并以肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌以及双歧杆菌四种菌群为研究对象进行统计分析,比较4组人群肠道菌群的变化,分析合并感染华支睾吸虫对慢性乙肝患者肠道菌群的影响。结果 与健康对照组相比,单纯患慢性乙肝的患者组和单纯感染华支睾吸虫的患者组肠杆菌、肠球菌数量增加,乳酸杆菌、双歧杆菌数量减少,差异具有统计学意义（P<0.05）;同时,合并感染组与健康对照组相比,肠杆菌、肠球菌数量显著增加,乳酸杆菌、双歧杆菌数量显著减少,且差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 单纯患慢性乙肝的患者组和单纯感染华支睾吸虫的患者组存在不同程度的肠道菌群失调,当慢性乙肝患者合并感染华支睾吸虫后,菌群失调状况加剧,使疾病的进程进一步恶化,导致肠道菌群的失调和病程的恶化相互作用,对疾病的预防和治疗产生不良影响。