七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

青蒿琥酯对高糖环境下大鼠下颌下腺上皮细胞凋亡的影响

目的：研究青蒿琥酯（ART）对体外高糖环境下大鼠下颌下腺上皮细胞凋亡的影响。方法：通过体外培养、纯化并鉴定大鼠下颌下腺上皮细胞。使用CCK-8和western blotting检测不同浓度葡萄糖对大鼠下颌下腺上皮细胞增殖和功能的影响。使用含50 mmol/L葡萄糖的培养基模拟体外高糖环境,将细胞分为正常对照组（Con组）、高糖模型组（HG组）和不同浓度ART干预组（HG+5μmol/L ART组、HG+10μmol/L ART组、HG+20μmol/L ART组、HG+40μmol/L ART组）。分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和western blotting法检测细胞水通道蛋白5(AQP5)、Bax、Bcl-2和Caspase-3基因和蛋白表达。结果：随着高糖环境中葡萄糖浓度的增加,大鼠下颌下腺上皮细胞抑制率升高,AQP5蛋白表达水平降低（P<0.05）。与Con组相比,HG组细胞AQP5蛋白、Bcl-2基因和蛋白表达水平明显降低,Bax、Caspase-3基因和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）;与HG组相比,不同浓度ART干预组Bcl-2基因和蛋白...     

δ阿片受体激动剂DADLE对急性全脑缺血再灌注大鼠脑组织Bcl-2、Caspase-3的影响

目的研究全脑缺血再灌注给予δ阿片受体激动剂DADLE前后大鼠脑组织Bcl-2、Caspase-3的表达情况,探讨DADLE在全脑缺血再灌注损伤中对Bcl-2、Caspase-3的影响及与脑保护作用的关系。方法健康雌性SD大鼠50只(180-220g)随机分为5组:假手术组(Sham,n=10):只暴露血管而不夹闭;缺血再灌注组(I/R,n=10):采用改良的二血管阻断加低血压法建立全脑缺血再灌注模型,缺血15min后给予再灌注;DADLE处理组分为2mg/kg组(A,n=10)、DADLE 3mg/kg组(B,n=10)、DADLE 5mg/kg组(C,n=10):在I/R组的基础上于再灌注前经颈外静脉注射DADLE。各组动物再灌注120min后处死,开颅取大脑组织,采用western-bolt技术检测大鼠脑组织Bcl-2、Caspase-3的表达状况。结果 western-bolt检测结果显示,sham组Bcl-2表达水平显著低于其他各组(P<0.05),且Sham组仅少量Caspase-3表达。DADLE处理组与I/R组相比,Bcl-2表达水平上调(P<0.05)而Caspase-3表达水平下调(P<0.05)。各给药组之间Bcl-2为B组与C组的表达显著高于A组(P<0.05),B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05);Caspase-3表达水平为B组与C组的表达显著低于A组(P<0.05),而B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论药物DADLE可能通过上调Bcl-2的表达并抑制Caspase-3的表达,抑制神经细胞的凋亡,减低全脑缺血再灌注损伤,从而对大脑起保护作用。     

参附注射液对脓毒症大鼠心肌组织Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究参附注射对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,阐明参附注射液抗脓毒症心肌损伤的相关机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和参附组,每组8只。以盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)法建立脓毒症大鼠动物模型,观察各组大鼠心肌酶谱变化;凋亡原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组、参附组心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)均明显升高,差异有统计学意义[CK-MB:(4208.51±382.57)U/L、(3584.59±347.06)U/L比(2187.41±556.63)U/L,P0.05;CK:(3216.75±565.42)U/L、(1986.21±366.73)U/L比(1189.40±245.87)U/L,P0.05];与参附组比较,模型组心肌酶明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。三组均可见大鼠心肌细胞凋亡,与假手术组比较,模型组、参附组TUNEL平均光密度(MOD)升高,差异有统计学意义(0.24±0.11、0.18±0.09比0.09±0.05,P0.05);模型组升高最明显,与参附组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组、参附组大鼠心肌细胞Bcl-2 mRNA表达均较假手术组降低,差异有统计学意义[(3.83±0.07)×10~(-3)、(4.86±0.08)×10~(-3)比(5.75±0.09)×10~(-3),P0.05];参附组Bcl-2 mRNA表达高于模型组(P0.05)。模型组、参附组Bax mRNA表达均较假手术组升高[(7.12±0.08)×10~(-3)、(6.26±0.06)×10~(-3)比(4.61±0.05)×10~(-3),P0.05];参附组Bax mRNA表达低于模型组(P0.05)。结论参附注射液能减轻脓毒症大鼠的心肌损伤,其作用机制与上调Bcl-2 mRNA的表达,下调Bax mRNA表达,减少心肌细胞凋亡相关。     

膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的 研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制.方法 将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只.对照组大鼠腹腔注射等量的pH 8.0Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20d.用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化.结果 与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04) vs (0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10) vs (1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14) vs (1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义.结论 膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成.     

肾脑复元汤对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及凋亡相关蛋白的影响

目的观察肾脑复元汤对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠的学习记忆能力及脑内海马神经元凋亡相关蛋白(Bcl-2和Caspase-3)表达的影响。方法将50只SPF级大鼠随机分为假手术组,模型组,肾脑复元汤高、中、低剂量组,每组10只。除假手术组外,其余各组均采用立体定向仪将β淀粉样蛋白(Aβ)25-35注入双侧脑室制备AD大鼠模型。造模后24 h,假手术组、模型组予蒸馏水灌胃,肾脑复元汤高、中、低剂量组予23.2 g/kg、11.6 g/kg、5.8 g/kg剂量肾脑复元汤灌胃。采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆功能,Western Blot方法观察大鼠海马神经元Bcl-2和Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组大鼠在5 d逃避潜伏期,后3 d逃避潜伏期时间均明显延长,大鼠跨越原平台位置的次数明显减少,Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达明显降低,与假手术组比较,差异有统计学意义(P0.01)。经肾脑复元汤治疗后,肾脑复元汤各剂量组大鼠在5 d逃避潜伏期和后3 d逃避潜伏期的时间均明显缩短,而大鼠跨越原平台位置的次数明显增多,Caspase-3表达显著下降,Bcl-2表达显著升高,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01)。结论肾脑复元汤能通过增强受损海马神经元Bcl-2的表达及抑制Caspase-3的表达,对海马神经元有抑制凋亡作用,可改善AD大鼠学习记忆能力。     

肝硬化大鼠模型肠上皮内淋巴细胞表达的研究

目的 研究肝硬化大鼠模型肠上皮内T淋巴细胞的表达,了解肝硬化肠黏膜免疫屏障功能的改变.方法 采用皮下注射40%四氯化碳诱导肝硬化模型,分离大鼠肠上皮内淋巴细胞,分别标记小鼠抗大鼠CD3、CD4、CD8单克隆抗体,流式细胞仪检测T淋巴细胞表达情况.结果 正常对照组和肝硬化模型组分离肠上皮内淋巴细胞数量分别为(2.3±0.5)×105 /cm、(3.4±1.1)×105 /cm,模型组高于对照组(P＜0.05);两组CD3+ T淋巴细胞比例分别为(80±6)%、(76±8)%,模型组有下降趋势,但两组间差异无统计学意义(P＞0.05);两组中CD4+ CD8+亚群细胞分别是(3.7±1.8)%、(6.9±3.3)%,模型组比例多于对照组(P＜0.05);CD4+ CD8-亚群细胞分别是(6.9±3.0)%、(4.4±1.4)%,模型组比例少于对照组(P＜0.05).结论 肝硬化大鼠模型肠上皮内T淋巴细胞表达的变化反映了肝硬化肠黏膜免疫屏障功能的改变.     

BDNF/TrkB通路对硫化氢减轻同型半胱氨酸诱导大鼠海马神经元凋亡的影响

目的 探讨BDNF 受体酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)通路对硫化氢(H2S)减轻同型半胱氨酸(Hcy)诱导大鼠海马神经元凋亡的影响。 方法 将雄性SD大鼠随机分为六组,分别为对照组、损伤组(Hcy,0.6 μmol)、损伤+保护组[Hcy(0.6 μmol)+NaHS(100 μmol/kg)]、对照+保护组[正常+NaHS(100 μmol/kg)]及抑制保护组[Hcy(0.6 μmol)+NaHS(100 μmol/kg)+BDNF/TrkB的特异性抑制剂K252a(1 μg/d)]、对照+抑制组(正常+K252a 1 μg/d),每组8只;Tunel染色法分析大鼠海马CA1区神经元的凋亡情况,蛋白质印迹法(Western blot)分析Caspase-3、Bcl-2在海马中的表达。 结果 与损伤组比较,损伤+保护组大鼠海马CA1区神经元着色细胞数减少,着色变浅,凋亡百分率明显降低(P<0.01),并且Caspase-3蛋白相对表达量明显降低,而Bcl-2蛋白相对表达量升高(P<0.01);与损伤+保护组比较,抑制保护组大鼠海马CA1区神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Caspase-3蛋白相对表达水平升高,而Bcl-2蛋白相对表达水平降低(P<0.01)。 结论 BDNF/TrkB通路参与硫化氢减轻同型半胱氨酸诱导的大鼠海马神经元凋亡。     

ADP-核糖聚合酶、补体C3及调节性T细胞与系统性红斑狼疮患者病情活动度的关系

目的探讨ADP-核糖聚合酶(PARP)、补体C3及调节性T细胞与系统性红斑狼疮(SLE)患者病情活动度的关系。方法选取2014年10月至2015年10月上海中医药大学附属曙光医院收治的84例SLE患者为SLE组,另选取同期80例正常体检者为对照组,应用蛋白印迹法测定PARP水平,散射比浊法测定补体C3水平,免疫荧光法测定外周血CD_4~+CD_(25)~+调节T细胞百分率、叉头蛋白P3抗体(FoxP3~+)调节性T细胞,应用酶联免疫吸附测定检测白细胞介素10(IL-10)及转化生长因子β_1(TGF-β_1)水平。结果 SLE组患者FoxP3~+调节性T细胞、IL-10水平显著高于对照组[(11.09±1.24)%比(6.23±1.01)%、(21.77±2.36)mg/L比(12.98±2.02)mg/L],而PARP、补体C3、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞、TGF-β_1水平显著低于对照组[(5.24±1.02)mg/L比(7.84±2.11)mg/L、(0.84±0.22)g/L比(1.26±0.36)g/L、(3.21±0.34)%比(5.83±0.58)%、(3.62±0.52)ng/L比(4.89±1.56)ng/L,P<0.05]。重度活动性SLE组患者FoxP3~+调节性T细胞、IL-10水平显著高于轻中度组及稳定组,而PARP、补体C3、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞、TGF-β_1水平显著低于轻中度组及稳定组(P<0.05)。SLE合并肾功能损害者FoxP3~+调节性T细胞高于SLE肾功能正常者[(12.60±0.48)%比(10.08±0.50)%],而补体C3水平、PARP、CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞显著低于SLE肾功能正常者[(0.72±0.24)g/L比(0.94±0.32)g/L、(4.22±0.78)mg/L比(5.94±0.82)mg/L、(2.48±0.34)%比(3.69±0.26)%,P<0.05]。FoxP3~+调节性T细胞、IL-10与SLE活动指数呈正相关(r=0.458,0.725,P<0.05),而PARP、CD_4CD_(25)调节性T细胞、补体C3、TGF-β_1水平与SLEDAI呈负相关(r=-0.412,-0.522,-0.623,-0.522,P<0.05)。结论 PARP、补体C3及调节性T细胞与SLE活动度有密切的关系,可作为SLE病情发生及进展的评价指标。     

Bcl-2抑制剂对黄芪注射液减轻缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨黄芪注射液(AI)对Bcl-2抑制剂(TW-37)作用下的缺氧缺糖/复氧复糖(H/R)大鼠海马神经元凋亡的影响。方法取原代培养8 d的胎鼠海马神经元,随机分为6组:正常对照组、H/R组、AI组、AI溶剂对照组、Bcl-2抑制剂(TW-37)+H/R组、TW-37+AI+H/R组。除正常对照组外,各组均进行缺氧缺糖0.5 h,再于复氧复糖后七个时间点(0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h、120 h)分别进行指标检测。采用MTT法检测细胞活性,western blot法和RT-PCR法检测海马神经元Caspase-3蛋白和mRNA的表达。结果与正常对照组比,除0 h外,H/R组海马神经元活性明显降低(P0.05),Caspase-3蛋白及Caspase-3 mRNA表达均明显增强(P0.05);与H/R组相比,除0h外,AI组海马神经元活性明显增高(P0.05),Caspase-3蛋白及mRNA表达均明显降低(P0.05);而AI溶剂对照组、TW-37+H/R组及TW-37+AI+H/R组则无显著差异(P0.05)。结论黄芪注射液可通过激活Bcl-2抗凋亡机制增强H/R大鼠海马神经细胞活性、降低Caspase-3表达,Bcl-2是黄芪注射液抑制H/R大鼠海马神经元凋亡的重要靶点之一。     

冬凌草甲素对雨蛙素诱导的重症急性胰腺炎大鼠免疫紊乱和组织损伤的影响

[目的]探讨冬凌草甲素（Ori）在重症急性胰腺炎（SAP）大鼠免疫紊乱和组织损伤中的调节作用。[方法]将50只SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组（SAP组）、SAP+Ori 5 mg/kg组、SAP+Ori 10 mg/kg组、SAP+Ori 20 mg/kg组,每组10只。采用化学诱导法建立SAP大鼠模型,皮下注射雨蛙素（25μg/kg）诱导SAP;计算胰腺质量指数,酶联免疫吸附（ELISA）法测定血清脂肪酶、淀粉酶水平,苏木精-伊红（HE）染色观察胰腺组织病理形态学变化;免疫组化观察半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达;蛋白免疫印记（Western Blot）法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白（Bax）/Bcl-2蛋白表达;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素-10(IL-10)表达水平;实时定量荧光聚合酶链反应（RT-PCR）法检测胰腺组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)mRNA表达水平。[结果]与对照组比较,SAP组大鼠胰腺组织功能明显下降（P<0.05）,...     

韧粘素反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨韧粘素(TN)反义寡核苷酸(ODN)对培养大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用. 方法采用细胞计数及快速竞争性逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,观察不同剂量(5、10、20μg/ml)TN反义ODN和正义ODN对体外培养大鼠VSMC的增殖以及TNmRNA表达水平的影响. 结果TN反义ODN可有效抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖,作用呈剂量依赖性(反义组5、10、20μg/ml剂量细胞计数分别为105/ml×(4.99± 0.21)、(4.08±0.14)、(2.85±0.39),对照组为105/ml×(5.95±0.41),(P＜0.05);TN反义ODN亦可下调TN mRNA表达水平(反义组0.32±0.05,对照组为0.52±0.08;P＜0.01);而TN正义ODN则无上述作用. 结论TN反义ODN可能通过下调TNmRNA表达水平而抑制血管平滑肌细胞的增殖.     

针刺联合亚低温对脑缺血/再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨针刺联合亚低温方法对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤大鼠梗死面积比及Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达的影响. 方法 将 50 只 SD 健康雄性大鼠常规饲养 1 周后, 随机选取假手术组 10 只, 余 40 只用Zea Longa 线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶脑I/R模型,待造模成功后,再将40只SD大鼠随机分为模型组、针刺组、亚低温组、针刺联合亚低温组,每组各10 只. 治疗72 h 后,使用TTC 染色检测脑梗死面积比、免疫组化法检测 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的阳性细胞数. 结果 与假手术组比较,模型组大鼠梗死面积比、Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显增高,Bcl-2表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05 或P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠梗死面积比、Bax、Caspase-3 蛋白表达水平明显降低,Bcl-2表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各治疗组之间Bcl-2、Bax、Caspase-3的差异无统计学意义(P>0.05),但脑梗死面积比针刺联合亚低温组较针刺组和亚低温组低,差异有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01).结论 针刺联合亚低温治疗可通过减少脑梗死面积比、提高Bcl-2表达水平、降低Bax与Caspase-3蛋白表达从而实现对脑细胞的保护作用.     

氯化锂对脓毒症大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察氯化锂(LiCl)对脓毒症大鼠大脑皮质半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响,探讨其对脓毒症脑损伤的保护作用机制。方法 2015年2—6月于四川大学华西第二医院进行实验,将Wistar大鼠60只按随机数字表法分为假手术组(S组,n=20)、模型组(CLP组,n=20)、氯化锂干预组(CLP+LiCl组,n=20),采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型。CLP+LiCl组于CLP手术后立即给予腹腔注射LiCl溶液(50mg/kg),S组和CLP组给予等量生理盐水腹腔注射。CLP术后8 h、16 h、24 h每组取5只大鼠进行神经功能行为学评分的比较,而后采用断头法将大鼠处死取出脑组织皮质部分,采用Western blot法检测大鼠大脑皮质Caspase-3蛋白的表达;每组再于术后24 h各取5只大鼠断头取脑行免疫荧光法检测Caspase-3蛋白的表达。结果与S组比较,CLP组及CLP+LiCl组术后8、16、24 h大鼠神经功能行为学评分均有降低(F_(8h)=6.07,P=0.015;F_(16h)=14.10,P=0.001;F_(24h)=25.54,P=0.000),免疫荧光法检测大脑皮质Caspase-3蛋白的表达均增加,3组比较差异有统计学意义(分别为0.019 5±0.001 2、0.027 2±0.001 0、0.023 8±0.001 6,F=44.67,P<0.05);Western Blot法检测Caspase-3蛋白表达情况,3组差异有统计学意义(F¨=12.81,P=0.001;F_(16h)=33.01,P=0.000;F_(24h)=107.28,P=0.000);与CLP组同时间点比较,CLP+LiCl组神经功能行为学评分升高(除8 h外),而大脑皮质Caspase-3蛋白的表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化锂可能通过抑制大脑皮质神经元Caspase-3蛋白的表达而起到提高脓毒症大鼠神经行为学评分的作用。     

蛙血清小分子肽对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的 探讨蛙血清小分子肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关蛋白的作用,分析其可能的作用机制.方法 将雄性SD大鼠100只,按随机数字表法分为假手术组、模型组和蛙血清小分子肽高(90 mg/kg)、中(30 mg/kg)、低(10 mg/kg)剂量组,每组20只.采用改良线栓法栓塞大鼠大脑中动脉建立大鼠缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h,进行神经行为评分,后处死;采用TUNEL法检测细胞凋亡;采用免疫组化法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、细胞色素c(Cytc)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况.结果 在神经行为评分上,假手术组为(0.00±0.00)分,模型组为(2.38±0.78)分,小分子肽高剂量组为(1.47±0.41)分,中剂量组为(1.68±0.52)分,低剂量组为(2.01±0.66)分,小分子肽高、中剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);在凋亡细胞计数上,假手术组为(3.37±1.10)个,模型组为(42.80±3.54)个,小分子肽高剂量组为(28.00±2.28)个,中剂量组为(32.40±3.26)个,低剂量组为(41.40±1.20)个,小分子肽高、中剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);在凋亡相关蛋白Bax、Cytc、Caspase-3和Bcl-2表达上(个/高倍视野),假手术组分别为(3.01±1.12)、(2.58±1.74)、(2.34±1.37)、(65.42±3.65),模型组分别为(70.67±3.06)、(58.31±5.04)、(68.04±5.85)、(31.26±2.81),小分子肽高剂量组分别为(40.56±4.52)、(33.65±3.44)、(41.56±4.52)、(55.64±5.49),中剂量组分别为(47.29±5.04)、(38.09±4.24)、(47.29±5.04)、(48.33±4.26),低剂量组分别为(53.20±4.70)、(44.53±4.39)、(53.20±4.70)、(40.35±3.17),小分子肽高、中、低剂量组均能抑制Bax、Cytc、Caspase-3蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),以高剂量组效果最优,且存在量效依赖关系.结论 蛙血清小分子肽是通过增强Bcl-2蛋白表达和抑制Bax、Cytc、Caspase-3蛋白表达来减少神经元细胞凋亡数目,改善神经功能症状,保护脑缺血再灌注损伤.     

海马神经元凋亡通路在氯胺酮抗抑郁中的变化

目的全身麻醉药氯胺酮具有快速有效抗抑郁作用,但其具体机制尚不完全清楚。文中观察大鼠海马神经元凋亡通路在氯胺酮抗抑郁中的变化。方法健康成年雄性SD大鼠48只,随机数字表法分为3组(n=16):对照组、不可预知应激组及氯胺酮组。对照组不予处理,不可预知应激组及氯胺酮组采用慢性不可预知应激建立抑郁模型。对照组、不可预知应激组经腹腔分别注射等渗盐水1 m L,氯胺酮组注射氯胺酮(10 mg/kg)。给药后1 h,每组随机取8只大鼠行强迫游泳实验和糖水消耗实验观察其行为学变化;其余8只采用Western blot法检测海马Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平。结果氯胺酮组强迫游泳时间[(115.83±9.17)s]较不可预知应激组[(165.33±4.59)s]明显缩短(P<0.01),与对照组[(110.50±12.28)s]差异无统计学意义(P>0.05);不可预知应激组较对照组强迫游泳时间明显延长(P<0.01)。氯胺酮组糖水消耗比例[(80±6)%]较不可预知应激组[(58±5)%]明显增加(P<0.01),与对照组[(86±10)%]差异无统计学意义(P>0.05);不可预知应激组较对照组糖水消耗比例明显减少(P<0.05)。氯胺酮组Bcl-2表达水平[(157±21)%]较不可预知应激组[(73±3)%]明显上升(P<0.05),Bax表达水平[(114±6)%]、Caspase-3表达水平[(78±13)%]较不可预知应激组[(175±4)%、(165±6)%)]明显降低(P<0.01);不可预知应激组Bcl-2表达水平较对照组明显减少(P<0.05),Bax、Caspase-3表达水平明显增加(P<0.05)。结论氯胺酮可能通过抑制大鼠海马神经元凋亡通路参与其抗抑郁作用。     

奥拉西坦联合rTMS减轻脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧脑皮质神经元氧化应激损伤

目的分析奥拉西坦(Oxi)联合重复经颅磁刺激(rTMS)减轻脑缺血再灌注损伤(I/RI)大鼠缺血侧脑皮质神经元氧化应激损伤的机制。方法60只大鼠随机分为对照组、I/RI组、Oxi组、rTMS组和Oxi+rTMS组。比较各组大鼠神经体征缺失评分(NDS)、脑梗死体积和神经元细胞凋亡率,检测缺血侧脑皮质组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、活化的Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO-1)蛋白表达。结果与对照组比较,I/RI组NDS评分和神经元细胞凋亡率升高,SOD和GSH-Px水平下降,MDA水平、Nrf2、HO-1、NQO-1、Cleaved Caspase-3/Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达升高(P＜0.05)。与I/RI组比较,Oxi组、rTMS组和Oxi+rTMS组NDS评分、脑梗死体积和神经元细胞凋亡率下降,SOD和GSH-Px水平、Nrf2、HO-1、NQO-1蛋白表达升高,MDA水平、Cleaved Caspase-3/Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.05);与Oxi组和rTMS组比较,Oxi+rTMS组上述改变更为显著(P＜0.05)。结论Oxi联合rTMS可降低脑I/RI大鼠脑组织氧化应激水平,抑制缺血侧脑皮质神经元细胞凋亡,减轻脑组织氧化应激损伤。     

帕金森病模型小鼠海马神经炎症、凋亡及自噬蛋白的表达研究

目的 观察MPTP诱导的帕金森病模型小鼠海马区域神经炎症,细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。方法 雄性C57BL/6J小鼠连续腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)30 mg/kg 5 d,对照组小鼠腹腔注射生理盐水5d,与模型组小鼠同日处死取材。用RT-PCR、Western blot和免疫荧光等方法检测小鼠海马内神经炎症相关因子NF-κB,凋亡相关因子PARP1、Caspase-3、Drp1和细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ的表达情况。结果 模型组海马NF-κB表达水平(1.81±0.62)较对照组(1.21±0.28)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马Caspase-3表达水平(1.05±0.22)较对照组(0.81±0.14)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马Drp1表达水平(1.18±0.21)较对照组(0.85±0.24)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马LC3-Ⅱ表达水平(1.76±0.71)较对照组(1.16±0.27)明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);模型组海马PARP1表达水平(1.17±0.35)较对照组(1.62±0.45)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 MPTP造模可以诱导NF-κB介导的海马神经炎症发生,自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和凋亡相关蛋白Caspase-3、PARP1、Drp1参与其中。     

桔梗皂苷D对人乳腺癌细胞体外杀伤效应及机制研究

目的探讨桔梗皂苷D对人乳腺癌细胞体外杀伤效应及机制。方法将人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231用桔梗皂苷D干预后,采用MTT法检测桔梗皂苷D对这两种乳腺癌细胞系的抑制率;采用流式细胞术检测桔梗皂苷D对MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot法检测桔梗皂苷D干预后MCF-7细胞caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平。结果 MCF-7细胞抑制率:2.5μg/mL桔梗皂苷D组(8.9±2.4)%,5μg/mL桔梗皂苷D组(24.6±3.6)%,10μg/mL桔梗皂苷D组(39.7±4.1)%,20μg/mL桔梗皂苷D组(64.8±5.2)%,40μg/mL桔梗皂苷D组(82.4±6.5)%;MDA-MB-231细胞抑制率:2.5μg/mL桔梗皂苷D组(5.3±1.7)%,5μg/mL桔梗皂苷D组(17.3±2.9)%,10μg/mL桔梗皂苷D组(28.4±3.5)%,20μg/mL桔梗皂苷D组(50.5±4.0)%,40μg/mL桔梗皂苷D组(71.3±6.1)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05);MCF-7细胞的凋亡诱导率:5μg/mL桔梗皂苷D组为(9.7±1.6)%,20μg/mL桔梗皂苷D组(29.8±3.1)%,高、低剂量桔梗皂苷D组与对照组比较,差异有统计学意义(P均0.05);与相同剂量桔梗皂苷D组比较,zVAD-fmk可有效抑制桔梗皂苷D对MCF-7细胞的凋亡诱导效应(P0.05);桔梗皂苷D能显著降低MCF-7细胞Bcl-2表达水平(0.43±0.07、0.24±0.04 vs 0.78±0.09,P均0.05),但对Bax表达无影响(0.38±0.05、0.41±0.04 vs0.42±0.05,P0.05)。结论桔梗皂苷D诱导乳腺癌细胞进入caspase-3依赖的凋亡过程,其机制可能与降低Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax比例有关。     

甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水通道蛋白5的影响

目的 观察甲基丁香酚对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜水通道蛋白(aquaporin,AQP)5表达的影响,并探讨其意义。方法 Wistar 大鼠126只随机分为正常对照组,变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)模型对照组,布地奈德阳性对照组,甲基丁香酚80 mg/kg组、40 mg/kg组、20 mg/kg组及10 mg/kg组,每组18只,除正常对照组外,其余组大鼠经卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏建立变应性鼻炎模型,造模成功后分别给予蓖麻油、布地奈德及对应剂量甲基丁香酚干预,于给药1、2、4周后应用免疫组织化学方法观察鼻黏膜AQP5的分布,Western blotting比较各组鼻黏膜中AQP5的表达,Real-time PCR比较AQP5 mRNA的表达。结果 AQP5主要位于鼻黏膜腺上皮及导管上皮细胞的胞膜和胞质。AR模型对照组大鼠鼻黏膜的AQP5及AQP5 mRNA均较正常对照组表达减少(P<0.05)。各给药组大鼠鼻黏膜AQP5及AQP5 mRNA均较AR模型对照组有不同程度增高。药物干预1、2、4周,布地奈德阳性对照组AQP5的表达与正常对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05), 与AR模型对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05);布地奈德阳性对照组的AQP5 mRNA分别与正常对照组及AR模型对照组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05)。干预2周后,甲基丁香酚各剂量组AQP5的表达即与布地奈德阳性对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。干预1周, 20 mg/kg组的AQP5 mRNA与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 甲基丁香酚可能通过上调AQP5的表达减轻鼻黏膜腺体水肿程度、减少腺体分泌,从而缓解变应性鼻炎鼻痒、喷嚏及流涕等症状。