SB203580对大鼠慢性非细菌性前列腺炎作用的研究

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)特异性抑制剂SB203580对大鼠慢性非细菌性前列腺炎(Chronic nonbacterial prostatitis,CNP)的作用,及对细胞因子肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor α,TNF-α)、基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase 9,MMP-9)、环氧合酶(Cyclooxygenase 2,COX-2)表达的影响.方法:将成年雄性SD大鼠随机分为3组,炎症组和处理组去势后每日皮下注射苯甲酸雌二醇连续4周,同时处理组腹腔注射SB203580隔日1次,对照组不做任何处理.HE染色观察前列腺组织的病理学改变,免疫组化观察TNF-α、MMP-9、COX-2、磷酸化p38(Phosphorylation p38,p-p38)表达,Western blot和RT-PCR检测各组TNF-α、MMP-9、COX-2、p38(p-p38)的表达.结果:光镜下SB203580处理组较炎症组的炎症轻.p38 mRNA的表达在SB203580处理组明显比炎症组低.炎症组TNF-α、MMP-9、COX-2、p-p38蛋白呈高表达,应用SB203580表达显著降低与模型组有差异,与对照组无显著差异.结论:p38 MAPK信号转导途径在CNP中被激活,SB203580能有效地抑制炎症细胞因子TNF-α、MMP-9、COX-2等表达的调控,缓解炎症,这为CNP的治疗提供了新的理论和实验依据.     

二烯丙基二硫下调p38活性抑制乳腺癌MCF-7细胞侵袭和转移

目的探讨大蒜提取物二烯丙基二硫(DADS)对乳腺癌MCF-7 细胞侵袭转移的作用及其机制。方法采用不同浓度（0, 100,200,400 μmol/L）DADS处理MCF-7人乳腺癌细胞24 h,Transwell侵袭实验检测DADS对细胞侵袭的作用,划痕愈合实验 观察DADS对细胞迁移的改变,Western blotting 检测细胞中上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白波形蛋白 （Vimentin）和基质金属蛋白MMP-9的表达和p38活性;TGF-β1上调p-p38表达后上述作用的变化。结果Transwell和划痕愈 合实验发现DADS呈浓度依赖性抑制MCF-7 细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting 结果表明DADS可抑制Vimentin 和 MMP-9 的蛋白表达,上调E-cadherin 的表达而下调p38 活性;TGF-β1 可上调p-p38 和MMP-9 表达,明显抵消DADS对MCF-7 细胞的抑制效果。结论DADS可下调p38活性,抑制MCF-7细胞的侵袭转移。     

氧化苦参碱对子宫内膜癌细胞侵袭转移的抑制作用及其机制探讨

目的:探讨氧化苦参碱对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭转移的作用及其机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率;Transwell小室法观察细胞侵袭转移的改变;Western blot及Real-time PCR法检测p38、p-p38、MMP-2和MMP-9表达水平的变化。结果:一定浓度氧化苦参碱可显著抑制子宫内膜癌细胞HEC-1-B的增殖、侵袭转移,并呈时间和剂量依赖性。氧化苦参碱可显著降低HEC-1-B细胞中p38及MMPs的表达水平。联合应用SB203580能够有效增强氧化苦参碱的抗肿瘤细胞侵袭转移能力。结论:氧化苦参碱可以抑制子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭转移,并下调p38磷酸化以及MMP2、MMP9的表达。     

p38MAPK在体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化中的作用

目的 观察体外培养脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程中p38MAPK活性、TNF-Ot、NO水平及NOS活性的变化,探讨p38MAPK活性变化与脊髓星形胶质细胞活化的关系.方法 分离培养的SPF大鼠脊髓星形胶质细胞设正常对照组(止常组)、SP刺激组(SP组,10-7mol/L)、SB203580阻断p38MAPK组(SB组,10 umol/L)和sP刺激+SB203580阻断p38MAPK组(SP+SB组).WB法、RT-PCR法、ELISA法检测1,3,12,24 h和36 h时p38MAPK、p-p38(磷酸化p38MAPK)含量及GFAP mRNA、TNF-0、NO水平和NOS活性的变化.结果 脊髓星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于95%.SP组脊髓星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,1 h后p-p38开始升高,3 h后GFAP mRNA水平显著增高,同时NO、NOS和TNF-a水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,sP+sB组较sP组p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平显著降低.SB组总p38MAPK、p-p38、GFAP mRNA、NO、NOS、TNF-a水平无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与r脊髓星形胶质细胞P物质刺激活化过程,阻断p38MAPK信号通路可有效降低炎性因子水平.     

S100A11对主动脉夹层的影响及其机制

目的 探讨S100A11在主动脉夹层(aortic dissection, AD)中的作用及其可能的机制。方法 在体内实验中,通过饮水摄入β-氨基丙腈建立AD模型。构建S100A11-shRNA慢病毒载体,尾静脉注射AD模型大鼠。HE染色观察主动脉的病理变化,TUNEL染色观察细胞凋亡,免疫组化法检测S100A11、RAGE、p-p38蛋白表达,Western blot检测MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、PCNA和ki67蛋白表达水平。在体外实验中,利用pIRES2-GFP将S100A11过表达载体转染至人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)中。流式检测细胞凋亡,Western blot检测RAGE/p38MAPK通路及MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、PCNA、ki67蛋白表达。最后用RAGE抑制剂FPS ZM1和p38抑制剂SB203580处理细胞,Western blot检测相关蛋白的表达。结果 sh-S100A11能够缓解主动脉病理变化,减少细胞凋亡。与正常组和假手术组相比,AD模型大鼠S100A11、RAGE、p-p38、MMP-2、MMP-9和Bax水平升高,Bcl-2、PCNA和ki67水平降低,而Lv-S100A11-shRNA组趋势相反。细胞实验结果显示S100A11可通过RAGE-p38MAPK通路靶向下游基因MMP-2、MMP-9、Bax、Bcl-2、PCNA和ki67促进细胞凋亡。结论 S100A11基因在AD大鼠中有较高水平表达,干扰或过表达该基因表明S100A11可通过RAGE-p38MAPK通路促进细胞凋亡,提示S100A11可能是AD诊断和治疗的靶点之一。     

p38 MAPK信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体1(s TREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测p38MAPK与磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)蛋白表达水平,RT-PCR法检测p38 MAPK mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养上清液中s TREM-1表达水平。用不同浓度p38 MAPK特异性抑制剂SB203580处理细胞,观察上述指标的变化。结果 LPS可呈时间依赖性诱导RAW264.7细胞p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表达;SB203580可呈浓度依赖性抑制p-p38 MAPK和p38 MAPK mRNA的表达;SB203580阻断p38 MAPK信号转导通路后,LPS对s TREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过p38 MAPK信号通路诱导RAW264.7细胞表达s TREM-1。     

p38 MAPK信号通路在TLR4促进胰腺癌血管生成中的作用

目的 探讨Toll样受体-4(TLR4)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在胰腺癌血管生成中的作用.方法 以脂多糖(LPS)、TLR4-siRNA及p38 MAPK信号通路阻断剂SB203580分别作用于体外培养的胰腺癌PANC-1细胞,Western blot检测TLR4、血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)蛋白表达.收集各种因素处理后的PANC-1细胞培养液,观察其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、迁移和管腔形成的影响.结果 LPS组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数分别为(139.2±12.6)％、48.1±9.1和47.8±9.6,均显著高于对照组(P＜0.05).TLR4-siRNA组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数分别为(60.2±8.7)％、31.3±4.5和17.2±3.3,均显著低于对照组(P＜0.01);SB203580组的HUVECs增殖率[(79.6±8.9)％]、迁移数目(21.6±4.3)和管腔形成个数(23.5±4.3)均较对照组显著减少(P＜0.05);且TLR4-siRNA+ LPS、B203580+LPS组的HUVECs增殖率、迁移数目和管腔形成个数均分别显著低于LPS组(P＜0.01).与对照组相比,LPS组VEGF、p-p38蛋白表达均明显增加,TLR4-siRNA组、SB203580组TLR4、VEGF、p-p38蛋白表达明显减少;且TLR4-siRNA+ LPS组、SB203580+LPS组VEGF、p-p38表达较LPS组明显减少.结论 TLR4可促进胰腺癌的血管生成,其机制与激活p38 MAPK信号通路、促进VEGF表达有关.     

p53,Ki67,VEGF和MMP-9在胶质瘤中的表达及意义

目的:探讨p53,Ki67,VEGF,MMP-9在胶质瘤组织中的表达及其与肿瘤恶性程度之间的相关性.方法:用免疫组化方法检测10例正常脑组织和38例胶质瘤组织中p53,Ki67,VEGF,MMP-9的表达,并与肿瘤恶性度进行相关性分析.结果:Ki67和MMP-9表达与胶质瘤恶性程度有关(P＜0.05),而其他生物学指标的表达与胶质瘤恶性程度无显著性相关.VEGF和MMP-9的表达呈显著正相关(P＜0.05),p53表达与Ki67,VEGF,MMP-9表达呈显著正相关(P＜0.05).结论:Ki67和MMP-9阳性表达可以作为评价胶质瘤恶性程度的生物学指标.     

水飞蓟宾对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响及机制研究

目的 研究水飞蓟宾(silibinin, SB)对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭能力的影响,并探究其作用机制。方法 CCK-8检测不同浓度SB对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响,筛选SB作用浓度。将细胞分为9组：对照组、SB-L(水飞蓟宾低剂量)组、SB-M(水飞蓟宾中剂量)组、SB-H(水飞蓟宾高剂量)组、PD98059(ERK1/2信号抑制剂)组、SB202190(p38 MAPK抑制剂)组、PD98059+SB组、SB202190+SB组和顺铂组;CCK-8检测细胞增殖能力,Transwell观察各组细胞侵袭情况,实时PCR检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK 1/2)和p38 mRNA表达水平,Western blot检测MMP-2、MMP-9、ERK1/2、p38、p-ERK1/2和p-p38蛋白表达水平。结果 与对照组比较,其余各组细胞的增殖率和侵袭细胞数均显著降低(均P<0.05),MMP-...     

干扰MAD2L1基因表达对乳腺癌细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨干扰有丝分裂阻滞缺陷2样蛋白1(MAD2L1)基因表达对乳腺癌(BC)细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用qRT-PCR检测正常乳腺上皮细胞系MCF-10A和4种BC细胞系(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3和BT-20)中MAD2L1 mRNA表达水平。将MAD2L1 siRNA转染至MDA-MB-231细胞中,qRT-PCR和Western blotting检测细胞中MAD2L1 mRNA和蛋白表达水平;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术法检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK(Thr180/Thr182)和p38MAPK等蛋白表达水平。采用p38MAPK抑制剂SB203580联合处理上述细胞,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率的变化;Western blotting检测Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3、p-p38MAPK和p38MAPK表达水平的变化。结果 BC细胞系中MAD2L1 mRNA表达水平高于MCF-10A细胞,其中M...     

吗啡耐受大鼠背根神经节磷酸化p38 MAPK的表达

 【目的】 观察鞘内慢性注射吗啡是否激活背根神经节(DRG)神经元,使其p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)磷酸化水平发生改变&#65377; 【方法】 通过对成年雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射吗啡15 μg而建立吗啡耐受的动物模型,或连续7 d在吗啡注射前30 min预先鞘内注射p38 MAPK抑制剂SB203580 10 μg,用50 ℃热水甩尾法观察吗啡的镇痛效果,并用免疫组织化学法观察DRG 磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的表达变化&#65377;【结果】 慢性鞘内注射吗啡7 d后,吗啡镇痛作用明显下降(P < 0.001),吗啡耐受形成;而SB203580预处理可明显抑制吗啡耐受的形成(P < 0.001);免疫组织化学染色显示脊髓DRG p-p38 MAPK表达明显上调(P < 0.01),且以小&#65380;中型神经元增加为主&#65377; 【结论】 鞘内慢性注射吗啡可激活脊髓DRG小型和中型神经元,使其p38 MAPK磷酸化水平增加,这可能是吗啡耐受的机制之一&#65377;     

乳腺癌耐药性中MAPK信号转导通路与EGR-1关系的研究

目的探讨乳腺癌细胞阿霉素耐药中p38MAPK通路与EGR-1活性的关系。方法用流式细胞术、四甲基偶氮唑蓝（MTT）、RT—PCR及Western Blot等方法分别检测SB203580（15μmol／L）干预后细胞的凋亡、细胞内阿霉素浓度及细胞对阿霉素敏感性的改变;EGR-1 mRNA表达及P—gP、磷酸化p53蛋白及p38蛋白表达情况。结果经SB203580（15μmol／L）干预,流式细胞仪检测见MCF-7／Adr细胞发生显著凋亡,并呈一定时间依赖性;细胞内阿霉素浓度显著增加;MCF-7／Adr细胞对阿霉素药物的耐受性显著降低;伴随p38MAPK通路活性抑制和EGR—1mRNA表达增加,磷酸化p53蛋白表达显著上调,而P—gP蛋白显著下调。结论提示p38MAPK通路与乳腺癌细胞阿霉素耐药密切相关,p38MAPK通路调控的EGR—1激活参与乳腺癌细胞阿霉素耐药的形成。     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞p38MAPK和VEGF表达的调控

目的:探讨丝裂素活化蛋白激酶p38(p38MAPK)和血管内皮生长因子(VEGF)的关系,从而研究p38MAPK和VEGF在糖尿病肾病中的作用及硒在抗糖尿病肾病中的作用机制.方法:分别以高葡萄糖、糖基化终产物,高胰岛素和过氧化氢孵育大鼠肾小球系膜细胞(RMCs);以p38MAPK特异抑制剂SB203580和亚硒酸钠分别预处理RMCs,再给予上述四种刺激因素孵育RMCs,观察RMCs p38MAPK和VEGF蛋白表达.结果:高葡萄糖、糖基化终产物、高胰岛素和过氧化氢均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,VEGF表达也明显增加:SB203580预处理后,VEGF表达被显著抑制;亚硒酸钠预处理后,p38MAPK磷酸化被明显抑制,同时VEGF表达显著降低.结论:p38MAPK调控VEGF的表达,表明p38MAPK和VEGF参与了糖尿病肾病的发生发展;亚硒酸钠可通过抑制p38信号通路而抑制VEGF的表达,从而有效地防治糖尿病肾病.     

ERK1／2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

 【目的】研究瘦素（1epfin）诱导小鼠腹腔巨噬细胞（PM）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响，以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs，按瘦素不同浓度和，或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液，用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中TNF-α水平。用蛋白印迹（Westem blot）方法测定细胞内p-ERK1／2、p-p38，以及p-JNK的表达水平，用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）测定TNF-α mRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α，在瘦素质量浓度为75ng／mL时TNF-α表达至峰值，是对照组的6．6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38 MAPK信号转导通路，瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2．3、2．4和2．6倍。ERK1／2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1／2、p38蛋白磷酸化以及TNF-α mRNA增加，两者的联合作用可以强烈抑制TNF-α mRNA的表达，而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1／2、p38 MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。     

ERK1／2和P38信号通路在瘦素诱导巨噬细胞TNF-α表达中的作用

【目的】研究瘦素（1epfin）诱导小鼠腹腔巨噬细胞（PM）分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）的影响,以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在这一过程中的作用。【方法】体外培养小鼠PMs,按瘦素不同浓度和,或MAPK特异性抑制剂PD98059、U0126、SB203580、SP600125进行分组。分别收集培养细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定培养上清中TNF-α水平。用蛋白印迹（Westem blot）方法测定细胞内p-ERK1／2、p-p38,以及p-JNK的表达水平,用逆转录一聚合酶链式反应（RT-PCR）测定TNF-α mRNA的表达。【结果】瘦素能够剂量依赖性的诱导小鼠PM产生TNF-α,在瘦素质量浓度为75ng／mL时TNF-α表达至峰值,是对照组的6．6倍。瘦素可以活化ERK1/2和p38 MAPK信号转导通路,瘦素处理组的p-ERK1、p-ERK2、p-p38表达水平分别是对照组的2．3、2．4和2．6倍。ERK1／2的特异性抑制剂PD98059、U0126和p38的特异抑制剂SB203580能够分别抑制瘦素引起的ERK1／2、p38蛋白磷酸化以及TNF-α mRNA增加,两者的联合作用可以强烈抑制TNF-α mRNA的表达,而JNK信号转导途径与瘦素诱导PM表达TNF-α无关。【结论】瘦素在小鼠PM中通过同时活化ERK1／2、p38 MAPK信号转导通路而诱导细胞产生TNF-α。     

乳腺癌耐药性与MAPK信号转导关系的研究

目的探讨乳腺癌细胞阿霉素耐药性与p38MAPK通路的关系。方法用流式细胞术检测SB203580(15μmol/L)干预后细胞的凋亡、细胞内阿霉素浓度的改变、细胞对阿霉素敏感性。结果经SB203580(15μmol/L)干预24h和48h后,流式细胞仪检测见MCF-7/Adr细胞发生显著凋亡,凋亡率分别为25.36±1.17%和38.21±1.25%,并呈一定时间依赖性(P<0.05);显著高于空白对照组及DMSO组MCF-7/Adr细胞的0.65±0.21%和0.81±0.16%(P<0.01);细胞内阿霉素浓度亦显著增加,平均荧光强度分别为32.45±2.36及41.66±3.12,均显著高于空白对照组及DMSO组的14.17±1.45及16.28±0.63(P<0.01);另外,SB203580干预48h使MCF-7/Adr细胞内阿霉素浓度增加的作用强于24h组,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论提示p38MAPK通路与乳腺癌细胞阿霉素耐药密切相关。     

P38丝裂原活化蛋白激酶对溃疡性结肠炎大鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的观察大鼠实验性结肠炎肠组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化及对淋巴细胞凋亡的影响。方法 30只健康SD大鼠随机均分为正常对照组、结肠炎模型组、SB203580组。以三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,采用DNA缺口末端标记技术(TUNEL)检测凋亡细胞,免疫组织化学方法检测活化转录因子2(p-ATF2)、Bcl-2和Bax表达。同时分析p-p38,p-ATF2水平与肠道病理损伤指数、MPO含量、Bcl-2和Bax表达的关系。结果与正常组相比,模型组大鼠肠组织磷酸化p38、p-ATF2,Bcl-2表达和凋亡阳性细胞数百分比及MPO含量显著增高(P<0.01),SB203580组显著降低。Bax表达在模型组明显降低,与SB203580组相比无明显差异。结论 p38蛋白激酶激活参与了溃疡性结肠炎发病,其机制可能与延迟肠组织淋巴细胞凋亡有关。     

朝药鹿茸及SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响

[目的]探讨朝药鹿茸与特异性p38蛋白激酶(p38MAKP)抑制剂SB203580对支气管哮喘小鼠气道炎症的影响.[方法]将BABL/c小鼠随机分为正常组、哮喘模型组、鹿茸低、高剂量组、SB203580组.每日分别灌胃给予鹿茸低、高剂量组2,18mg用生理盐水溶解的鹿茸冻干粉0.4mL,腹腔注射给予SB203580组5mg/kg SB203580.分别采用ELISA法和蛋白质印迹法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性细胞分类及计数、炎性细胞因子白细胞介素(IL)-4,IL-5水平及肺组织磷酸化p38MAPK表达,并观察肺组织病理学改变.[结果]与正常组比较,哮喘模型组BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平及肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均显著增高(P<0.05);与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组和SB203580组BALF中炎性细胞计数、IL-4,IL-5水平及肺组织中磷酸化p38MAPK表达水平均明显降低(P<0.05).与哮喘模型组比较,朝药鹿茸低、高剂量组和SB203580组肺组织病理学改变均明显减轻(P<0.05),而朝药鹿茸低、高剂量组与SB203580组间差异无统计学意义(P>0.05).[结论]朝药鹿茸和SB203580均具有治疗哮喘作用,其机制与抑制哮喘小鼠p38MAPK信号通路的表达相关.     

Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系

目的 探讨Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促进人胃癌细胞迁移和侵袭中的作用及相互关系.方法 实验设正常对照组(细胞未作其他处理)、人乙酰肝素酶重组蛋白处理组(5、10 μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特异性抑制剂pp2(5 μmol/L)或p38激酶特异性抑制剂SB 203580(1 μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重组蛋白(10 μg/ml)作用24 h组.利用划痕损伤实验和Transwell小室基质侵袭实验分别检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测各处理组对人胃癌MGC-803细胞、高表达乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901细胞和乙酰肝素酶表达被下调的SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表达的影响.结果 与正常对照组比较,5和10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白均能明显增强人胃癌MGC-803细胞迁移和侵袭能力(P<0.05);与未加抑制剂的人乙酰肝素酶重组蛋白比较,抑制剂pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重组蛋白增强的人胃癌MGC-803细胞的迁移和基质侵袭能力(P<0.05).10 μg/ml人乙酰肝素酶重组蛋白促进人胃癌MGC-803细胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)细胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表达水平较SGC-7901细胞明显下调(P<0.01);抑制剂pp2和SB 203580对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶蛋白表达无明显影响;在人胃癌SGC-7901细胞和MGC-803细胞中,Src激酶的抑制剂pp2抑制磷酸化p38蛋白的表达,而p38激酶的抑制剂SB 203580对磷酸化Src蛋白表达无明显影响.结论 乙酰肝素酶可能通过促进Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促进Src激酶磷酸化再促进p38激酶的磷酸化,从而促进人胃癌细胞迁移和侵袭能力.乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌细胞内存在的与细胞迁移和侵袭有关的信号转导通路.     

抑制p38MAPK信号通路对尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡的影响及其作用机制

目的 探讨抑制p38MAPK信号通路对尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 将60只新西兰兔按随机数字表法分为4组:假手术组(sham)、模型组(Model)、p38MAPK抑制剂SB203580组(SB203580)、SB203580 +p53激活剂Nutlin-3组(SB203580+ Nutlin-3),每组15只.采用输尿管近端注入大肠埃希菌菌液法制作尿源性脓毒血症模型,术前30 min静脉注射30 μg/kg SB203580或腹腔注射128 mg/kg Nutlin-3进行干预,1次/d,共3d.记录术后24、48、72 h时各组兔肛温、呼吸频率和心率;全自动分析仪检测白细胞计数以及血清肌酐、尿素氮含量;ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;qRT-PCR法检测肾组织MDM2和p53 mRNA表达水平;Western blot法检测肾组织Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、p-p38MAPK、MDM2、p53和PUMA等蛋白表达水平.结果 与Model组比较,SB203580组兔肛温、呼吸频率、心率、白细胞计数、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及血清肌酐和尿素氮含量降低(P＜0.05),同时肾组织细胞凋亡率、p53 mRNA以及p53、Cleaved caspase-3、Bax、PUMA、p-p38 MAPK等蛋白水平降低(P＜0.05),而MDM2 mRNA以及MDM2、Bcl-2等蛋白水平增加(P＜0.05).与SB203580组比较,SB203580+ Nutlin-3组兔肛温、呼吸频率、心率、白细胞计数、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平以及血清肌酐和尿素氮含量升高(P＜0.05),同时肾组织细胞凋亡率、p53 mR-NA以及p53、Cleaved caspase-3、Bax、PUMA等蛋白水平增加(P＜0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P＜0.05),而MDM2 mR-NA以及MDM2、p-p38MAPK等蛋白水平无显著变化(P＞0.05).结论 抑制p38 MAPK信号通路通过促进MDM2表达而抑制p53介导的细胞凋亡途径,从而减少尿源性脓毒血症兔肾组织细胞凋亡.