青蒿琥酯对恶性疟原虫早期配子体的作用

为了研究青蒿琥酯对恶性疟原虫早期配子体（ＰＦＧｅ）的作用，选择经骨髓涂片查到ＰＦＧｅ，选择经骨髓涂片查到ＰＦＧｅ的改变进行了专门观察。方法是采用青蒿琥酯静脉给药，５ｄ疗程总量３６０￣４２０ｍｇ。治疗后，于当天（Ｄ０）和第７天（Ｄ７）或加第１０天（Ｄ１０）作骨髓涂片，观察ＰＦＧｅ的变化，每天取外周血片计算ＰＦＧｅ和ＰＦＧｍ数，连续２８ｄ或直至ＰＦＧ消失。结果３４例治疗后，Ｄ７骨髓ＰＦＧｅ消失２７例，     

青蒿琥酯肌注与静注治疗无并发症恶性疟的随机比较

目的比较青蒿琥酯肌注与静注治疗无并发症恶性疟的临床疗效和安全性。方法100例无并发症恶性疟病人随机分为青蒿琥酯肌注组和静注组,每组50例,两组给药方案均采用5d疗程成人总量360mg。以治疗后病人退热时间、原虫转阴时间和原虫复燃率以及不良反应作为临床疗效和安全性评价和比较指标。结果青蒿琥酯肌注组与静注组平均退热时间分别为22.5±9.8h和21.3±10.5h,平均原虫转阴时间分别为65.4±12.5h和68.5±12.8h。追踪观察28d原虫复燃率分别为10.8%(4/37)和9.1%(3/33)。两组主要观察比较指标结果相似,差异无统计学意义。两组不良反应少而轻微。结论青蒿琥酯肌注5d疗程总量360mg方案治疗恶性疟具有与同等剂量疗程的青蒿琥酯静注的临床疗效和安全性。     

青蒿琥酯和青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹序贯治疗南苏丹恶性疟疾疗效观察

目的观察注射用青蒿琥酯和青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹片序贯治疗南苏丹恶性疟疾的临床效果。方法选择2016年4月至2017年7月南苏丹朱巴中国维和步兵营一级医院收治的恶性疟疾患者31例,均肌肉注射青蒿琥酯注射液(首剂120 mg,4 h后再次肌肉注射60 mg,然后每日肌肉注射60 mg)1~3 d,体温恢复至正常范围后24、48、72 h口服青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹片2片,共6片;观察治疗效果。结果 31例疟疾患者的总治愈率为100.0%(31/31),其中3 d治愈率为90.3%(28/31),3~6 d治愈率为9.7%(3/31)。4例(12.9%)患者发生恶心、呕吐、食欲减退、腹胀、腹泻、头晕等轻度不良反应,治疗结束后均自行消失。结论注射用青蒿琥酯和青蒿琥酯-盐酸阿莫地喹片序贯治疗南苏丹恶性疟疾疗效显著,且患者耐受性好。     

氯喹敏感与抗性株恶性疟原虫对青蒿琥酯、克林霉素及其联用的体外敏感性

目的 为了解氯喹敏感和抗性株恶性疟原虫对青蒿琥酯、克林霉素及其二联用的敏感性。方法 运用Rieckmann体外微量法测定原虫对药物的敏感性。结果 氯喹敏感株恶性疟原虫对青蒿琥酯、克林霉素及青／克联用的ID50分别为2.8、3784.7及6.4/2046.6nmol/L；抗性株原虫对上述药物的ID50分别为8.1、1652.1及2.35/1409.4nmol/L。结论 抗氯喹恶性疟原虫对克林霉素无交叉抗性。青蒿琥酯与克林霉素联用在体外测定中，其抗疟作用对抗性株明显优于敏感株。     

重组恶性疟原虫乳酸脱氢酶的纯化及免疫活性测定

目的:研究恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDH)重组蛋白纯化和复性的最佳条件。方法:重组质粒PGEX-4T-1-LDH在E.coli BL21中表达，表达产物用酶裂解法洗涤、变性、复性、Q-Sepharose High Performance离子交换层析方法纯化。结果:获得具有生物活性的蛋白，其纯度达到95％。结论:此方法操作简便，纯化效果好。     

恶性疟原虫FCCl／HN株LDH基因的克隆及序列分析

目的 克隆并测定恶性疟原虫海南(FCCl／HN)株LDN基因序列,比较FCCl/HN株与国外分离株LDH基因序列的差异。方法 根据LDH基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从FCCl/HN株基因组DNA中扩增LDH基因,并将其克隆入pMDl8-T载体。用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定,并用分子生物学软件进行不同分离株LDH基因序列的同源性比较。结果 PCR扩增得到特异的FCCl／HN株LDH基因片段并构建了pT—LDH重组质粒。恶性疟原虫FCCl／HN株LDH基因全长951bp,编码316个氨基酸。序列分析表明,我国恶性疟原虫FCCl／HN株与国外的3所、Honduras 1株LDH基因编码氨基酸序列完全一致。结论 成功克隆恶性疟原虫FCCl,HN株LDH基因。序列测定及同源性分析表明,FCCl/HN株与其它分离株的LDH基因序列高度保守。     

青蒿琥酯注射液治疗恶性疟疾的临床观察

目的:观察青蒿琥酯注射液治疗恶性疟疾的临床疗效.方法:用青蒿琥酯注射液静脉推注治疗恶性疟疾54例,用复方奎方(Quinimax)注射液静脉滴注治疗46例.结果:青蒿琥酯组有效率96.3%,疟原虫转阴率94.4%;复方奎方组有效率90.3%,疟原虫转阴率91.3%.两组比较,P<0.05.结论:青蒿琥酯和复方奎方均能治疗恶性疟疾,通过对疟原虫无性体强力的杀灭作用,能迅速控制症状和杀灭疟原虫.但青蒿琥酯比复方奎方疗效似更好,副作用少.     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶活性测定及在药物疗效监测方面的初步观察

目的 探讨疟原虫乳酸脱氢酶（Plasmodium lactate dehydrogenase,pLDH)活性与原虫密度，培养时间的关系。以及在监测药物疗效等方面的作用。方法 利用酶比色法对不同原虫密度不同培养时间以及药物治疗前后患者的血样进行pLDH活性检测。结果 pLDH的活性随恶性疟原虫感染率的提高，培养时间的增加而明显地升高，最大活性是在虫体培养36-48h之间，虫体主要处在裂殖体期和滋养体期；混合感染（恶性疟原虫和间日疟原虫）患者经药物治疗后血液中pLDH活性明显降低，治疗5d后已检测不到pLDH的活性。结论 pLDH活性检测对于疟原虫克隆株鉴定，药物的疗效监测等方面具有一定的应用价值。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法 以恶性疟原虫EBA-175(II区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果 筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256~1:512,腹水效价为1:12800~1:25600,间接ELISA显示其中4株McAb1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Westernblot试验中识别恶性疟原虫M_r约35000的虫源蛋白。结论 获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶的表达及免疫活性鉴定

目的在大肠杆菌中表达恶性疟原虫谷氨酸脱氢酶(GDH)与谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白,测定重组蛋白的免疫活性。方法采用PCR方法特异性扩增恶性疟原虫(海南株)GDH基因,双酶切后克隆入pGEX-4T-1载体中进行诱导表达,重组蛋白纯化后免疫小鼠制备特异性血清,并用琼脂双向扩散法检测效价,ELISA、Western blotting检测重组抗原的免疫活性。结果获到了重组表达的抗原蛋白,表达产物能与鼠抗恶性疟原虫血清发生特异反应,并能诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,免疫琼脂扩散法检测抗体滴度为1∶16。结论恶性疟原虫GDH在大肠杆菌中获得高效表达且表达产物具有良好的抗原性。     

用乳酸脱氢酶为靶分子的免疫层析技术检测恶性疟原虫

目的 建立一种免疫胶体金层析(GICA)法用于恶性疟原虫的检测。方法 采用杂交瘤技术制备恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)单抗,利用筛选出来的单抗制成诊断恶性疟原虫的免疫层析条,以镜检和PCR法为对照,用GICA条检测门诊"四热"病人血样,评价其敏感性和特异性,并对其稳定性进行了初步研究。结果 筛选出4株抗LDHpf单抗,间接ELISA表明4株单抗仅与恶性疟原虫发生反应,而与间日疟原虫、红细胞蛋白、刚地弓形虫和日本血吸虫不发生交叉反应。Western-blot结果显示4株单抗能识别恶性疟原虫相对分子质量约为33000处的虫源蛋白。以镜检法和PCR法为标准,GICA条检测恶性疟原虫的敏感性分别为88.37%和86.67%,GICA与镜检法的符合率均为91.55%。结论 GICA检测恶性疟原虫简易快速、灵敏度高,无需特殊仪器设备,有望成为一种恶性疟原虫快速免疫诊断试剂盒。     

Sequence analysis and genotypes of glutamate rich protein of Plasmodium falciparum isolates from different malaria endemic areas in China

To sequence the gene encoding glutamate rich protein (GLURP) and identify the genotypes of geographically different Plasmodium falciparum (P. f ) isolates from China. Methods The gene of R2 repeat region of GLURP was amplified by nested polymerase chain reaction and cloned into T-vector. The nucleotide sequence of GLURP gene was determined by automatic sequencer (Dideoxy termination method) and analyzed by DNA Star software. Results At least 7different GLURPgenotypesranging from 600 bp to 1 500 bp were found in Yunnan and Hainan provinces. R2 region of GLURP gene consisted of several repeat units. Each repeat unit was composed of 19-20 residues which were shown to be highly conserved. GLURP gene was also size polymorphic due to differences in the number of repeat units, whereas the repeat sequence was conserved. Sequence analysis showed that DNA sequences and deduced amino acid sequences were highly homologous among the geographically dispersed isolates or various isolates from the same geographical region. No obvious differences were found in the GLURP gene sequences among geographically different isolates. Conclusion GLURP gene is highly structure conserved and size polymorphic, and so is useful in searching for malaria vaccine candidate antigen and developing a genotyping method for malaria research.     

恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因的构建及其高效表达

目的:构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因(PfCP-TCL),并在毕氏酵母中进行高效分泌表达.方法:选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原CSP、TRAP和LSA-1中的一些重要T、B细胞表位,按一定的次序加以串联连接,并全合成该融合基因.在毕氏酵母中进行分泌表达,并纯化表达产物.结果:合成的基因在毕氏酵母中高水平分泌表达,产量达1 g/L以上.经离子交换和凝胶过滤2步纯化过程,获得纯度在95%以上的重组蛋白.结论:全合成的多表位融合抗原基因能在毕氏酵母中高水平分泌表达,并产生一种工艺简易的纯化方法.大量获得该重组蛋白为探讨其免疫学功能及作为多价联合疫苗的成分提供了基础.     

恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9在不同品系小鼠中的免疫特性

目的:探讨恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9在不同品系小鼠(BALB/ca、C57BL/6J、C3H/He、DBA/2J及昆明种)中的免疫原性和免疫反应特性.方法:以ISA720为佐剂,PfCP-2.9抗原皮下免疫5种品系小鼠3次,间隔3周.以ELISA检测免疫血清中特异性抗体的动态变化、IgG抗体亚型及对融合抗原各组分的抗体水平,以间接荧光抗体实验分析免疫血清对恶性疟原虫天然抗原的识别情况.结果:5种品系小鼠均能产生针对PfCP-2.9的免疫应答,3次免疫后血清中特异性抗体滴度达105以上.PfCP-2.9所诱生的免疫血清不但能识别MSP1-19和AMA-1(Ⅲ)两个主要片段,而且能识别恶性疟原虫天然抗原.所诱导的4种IgG抗体亚型中,IgG1和IgG2a是免疫血清中主要的抗体类型.但特异性抗体水平及抗体亚型分布因遗传背景不同而异.结论:融合蛋白PfCP-2.9在5种不同品系小鼠中具有强的免疫原性,其抗体能识别疟原虫天然蛋白.     

艾康恶性疟/间日疟免疫层析检测试剂盒效果评价

目的 评价艾康恶性疟／间日疟（P．f／P．v）胶体金免疫层析检测试剂盒诊断疟疾效果。方法 以镜检法为金标准。采用盲法实验室测试疟痰阳性和阴性血样。结果 共测试331例血样，其中疟痰血样121倒。对疟疾的灵敏性和特异性分别为92．56％和98．57％，与镜检符合率为96．38％；其中恶性疟的灵敏性和特异性分别为1130．00％和98．57％，重复性为100．00％；对间日疟的灵敏性和特异性分别为86．96％和100．00％，恶性疟和间日疟之间无交叉反应。结论 艾康P．f．／P．v肢体金免疫层析检测试剂盒诊断疟痰具有快速、简便、准确、直观以及不需要特殊仪器优点，能同时诊断单纯恶性疟和单纯间日疟，但不能鉴别诊断混合感染。     

恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫效应检测

目的探讨恶性疟原虫AMA-1(Ⅲ)重组蛋白的免疫活性。方法利用毕赤酵母高效表达系统分泌表达AMA-1(Ⅲ),表达产物用纯化后免疫新西兰兔,检测其血清中IgG滴度的变化,观察重组AMA-1(Ⅲ)免疫效应。结果重组AMA-1(Ⅲ)免疫后,ELISA检测新西兰兔血清中IgG滴度发现在3次免疫后OD490值明显高于佐剂免疫对照组(P<0.01)。结论AMA-1(Ⅲ)重组蛋白具有较好的免疫原性。