蝉芩颗粒调控NGF-ERK1/2信号通路对PM2.5致大鼠气道神经源性炎症的影响

【目的】观察蝉芩颗粒调控神经生长因子(NGF)—细胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)信号通路对PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症的影响。【方法】采用PM2.5气道滴注染毒大鼠模型,将40只SD大鼠随机分为5组,即盐水对照组,PM2.5组,蝉芩颗粒低、中、高剂量组,每组8只。盐水对照组、PM2.5组予生理盐水灌胃2周,蝉芩颗粒低、中、高剂量组分别给予剂量为4.42、9.36、12.78 g·kg~(-1)·d~(-1)的蝉芩颗粒灌胃2周。采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠肺组织和背根神经节NGF、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)、ERK1/2、磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、丝裂原细胞外激酶1/2(MEK1/2)蛋白表达。采用免疫组化法检测肺组织NGF、P物质(SP)、SP受体(NK-1R)蛋白表达。【结果】(1)Western-blot结果:与盐水对照组比较,PM2.5组肺组织及背根神经节中NGF、pERK1/2、pMEK1/2蛋白表达升高(P0.05或P0.01)。与PM2.5组比较,蝉芩颗粒中、高剂量组大鼠肺组织及背根神经节中NGF、pERK1/2、pMEK1/2蛋白表达降低(P0.05或P0.01)。(2)免疫组化结果:与盐水对照组比较,PM2.5组大鼠肺组织NGF、NK-1R表达升高(P0.01);与PM2.5组比较,蝉芩颗粒各剂量组的大鼠肺组织中的NGF、NK-1R表达降低(P0.01)。【结论】蝉芩颗粒可通过NGF-ERK1/2信号通路减少下游速激肽的释放,从而减轻PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症。     

蝉芩颗粒对神经生长因子介导的PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症的影响

【目的】探讨蝉芩颗粒对神经生长因子(NGF)介导的PM2.5所致气道神经炎症的影响及其作用机制。【方法】将40只SD大鼠随机分为5组,即盐水对照组、PM2.5染毒组、抗NGF组、蝉芩颗粒组、惠菲宁组,每组8只。复制PM2.5大鼠气道滴注染毒模型。PM2.5染毒组大鼠染毒后给予等体积生理盐水灌胃,抗NGF组抗NGF干预染毒后给予生理盐水灌胃,蝉芩颗粒组染毒后予蝉芩颗粒(9.36 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,惠菲宁组染毒后予惠菲宁糖浆(8 mL·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,盐水对照组大鼠以生理盐水代替PM2.5气道灌注后给予等体积生理盐水灌胃,共2周。给药结束后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清中P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、速激肽A(NKA)、速激肽B(NKB)、NGF的含量,采用免疫组化法检测各组大鼠肺组织、背根神经节中SP、NGF的表达,分别采用免疫印迹(Western blot)法及实时荧光定量逆转录—聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织、背根神经节中NGF蛋白和m RNA的表达。【结果】与盐水对照组比较,染毒组大鼠血清中SP、CGRP、NKA、NKB、NGF值,肺组织NGF,背根神经节SP、NGF的免疫组化平均光密度值,肺组织中NGF蛋白和m RNA及背根神经节中NGF蛋白的表达水平均显著升高(P0.05);与染毒组比较,抗NGF组、蝉芩颗粒组、惠菲宁组上述指标均显著降低(P0.05),但3组比较,差异无统计学意义(P0.05)。【结论】蝉芩颗粒可通过抑制NGF的表达减轻PM2.5所致大鼠气道神经源性炎症。     

当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响

目的探讨当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响。方法使用奥沙利铂腹腔注射造成慢性神经毒性大鼠模型,60只大鼠分空白组、模型组、及当归四逆汤高、中、低剂量组。通过大鼠疼痛行为学、机械疼痛阈值测定检测当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性的缓解作用,并进一步通过RT-PCR、Western blot观察大鼠背根神经节TRPs(TRPV1、TRPA1、TRPM8)mRNA及蛋白表达水平变化。结果大鼠行为学测定显示,与空白组比较,模型组、当归四逆汤低、中剂量组机械疼痛阈值下降(P0.05),而高剂量组未出现明显的下降(P0.05)。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPA1、TRPM8、TRPV1蛋白表达量显著增加(P0.01)。与模型组比较,当归四逆汤低剂量组可降低TRPM8蛋白表达(P0.05),中剂量组可降低TRPA1(P0.01)、TRPM8(P0.01)、TRPV1(P0.05)蛋白表达,高剂量组明显降低三者蛋白表达量(P0.01)。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPM8mRNA表达显著增加(P0.01),与模型组比较,当归四逆汤各组均可显著下调三者表达(P0.01)。结论当归四逆汤可以预防奥沙利铂慢性神经毒性,减缓大鼠机械疼痛阈值下降程度,其机制可能与下调TRPs通道蛋白表达有关。     

肠吉泰对肠易激综合征内脏高敏感大鼠TRPV1表达的影响

目的:探讨中药制剂肠吉泰对内脏高敏感性模型大鼠的调节作用。方法:选择新生SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物Capsazepine组及肠吉泰低、中、高剂量组,每组10只。采用Al-chaer直肠醋酸刺激法建立内脏高敏感性大鼠模型。造模期间阳性药物组给予腹腔注射瞬时感受器电位香草素受体-1(TRPV1)阻断剂Capsazepine,其余各组(除空白组外)均给予相同体积的溶剂腹腔注射;造模结束2周后,肠吉泰各剂量组每日分别给予相应剂量的中药浸膏灌胃,空白组、模型组和阳性药物组分别给予等体积去离子水灌胃。干预4周后,大鼠腹外斜肌埋植电极,外接Power Lab记录仪,采用结直肠气囊扩张法记录大鼠腹外斜肌电压变化以评估内脏敏感性;使用Real-time PCR法检测下丘脑、背根神经节和结肠组织TRPV1mRNA含量。结果:当气囊压力在60 mm Hg时,模型组大鼠腹外斜肌电压值较空白组明显升高(P0.05),肠吉泰高剂量组的电压较模型组明显降低(P0.01)。模型组大鼠下丘脑、背根神经节和结肠组织的TRPV1mRNA表达较空白组均明显增高(P0.05);肠吉泰中、高剂量组背根神经节与下丘脑的TRPV1mRNA表达,以及肠吉泰各剂量组结肠的TRPV1mRNA表达均明显低于模型组(P0.05或P0.01)。结论:肠吉泰可降低内脏敏感性,其作用可能与降低下丘脑、结肠和背根神经节TRPV1mRNA表达有关。     

蝉芩颗粒含药血清对脂多糖诱导人支气管上皮细胞神经源性炎症的干预机制

【目的】探讨蝉芩颗粒对脂多糖诱导人支气管上皮细胞神经源性炎症的干预机制。【方法】将人支气管上皮细胞16HBE随机分为空白组,模型组,蝉芩颗粒高、中、低剂量组,N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）组,除空白组均采用脂多糖诱导构建体外神经源性炎症细胞模型,造模后分别给予相应含药血清干预。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞活力,实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、可溶性鸟苷酸环化酶（sGC）、环磷酸鸟苷（cGMP）依赖性蛋白激酶（PKG）、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、P物质（SP）、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的m RNA表达,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测细胞iNOS、sGC、PKG的蛋白表达,荧光分光光度法检测细胞内钙离子浓度（[Ca2+] i）。【结果】与空白组比较,模型组细胞活力下降,iNOS、sGC、PKG、TRPV1、SP、IL-6、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达增高,iNOS、sGC、PKG蛋白表达增高,[Ca2+] i水...     

当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响

目的 探讨当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性大鼠背根神经节TRPs通道的影响。方法 使用奥沙利铂腹腔注射造成慢性神经毒性大鼠模型,60只大鼠分空白组、模型组、及当归四逆汤高、中、低剂量组。通过大鼠疼痛行为学、机械疼痛阈值测定检测当归四逆汤对奥沙利铂神经毒性的缓解作用,并进一步通过RT-PCR、Western blot观察大鼠背根神经节TRPs（TRPV1、TRPA1、TRPM8）mRNA及蛋白表达水平变化。结果 大鼠行为学测定显示,与空白组比较,模型组、当归四逆汤低、中剂量组机械疼痛阈值下降（P<0.05）,而高剂量组未出现明显的下降（P＞0.05）。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPA1、TRPM8、TRPV1蛋白表达量显著增加（P<0.01）。与模型组比较,当归四逆汤低剂量组可降低TRPM8蛋白表达（P<0.05）,中剂量组可降低TRPA1（P<0.01）、TRPM8（P<0.01）、TRPV1（P<0.05）蛋白表达,高剂量组明显降低三者蛋白表达量（P<0.01）。与空白组比较,其余各组大鼠背根神经节TRPV1、TRPA1、TRPM8 mRNA表达显著增加（P<0.01）,与模型组比较,当归四逆汤各组均可显著下调三者表达（P<0.01）。结论 当归四逆汤可以预防奥沙利铂慢性神经毒性,减缓大鼠机械疼痛阈值下降程度,其机制可能与下调TRPs通道蛋白表达有关。      

连花清瘟颗粒抗呼吸道合胞病毒感染BALB/c小鼠的药效作用研究

【目的】观察连花清瘟颗粒体内抗呼吸道合胞病毒(RSV)感染的药效作用。【方法】采用BALB/c小鼠RSV感染模型,通过观察小鼠体质量变化、肺病毒滴度、肺内炎症因子m RNA表达及肺组织病理变化评价药物的体内抗病毒药效。【结果】连花清瘟颗粒高剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内病毒滴度(P0.05)。连花清瘟高、低剂量组可显著降低RSV感染小鼠肺内炎症因子白细胞介素IL-6,IL-1βm RNA的表达量(P0.01);肺组织病理检查结果显示:连花清瘟颗粒高、低各剂量组均可以缓解病毒所致肺组织病理性炎症。【结论】连花清瘟颗粒可有效抑制RSV感染小鼠肺内病毒滴度,对小鼠病毒性肺炎具有一定的改善作用。     

大建中汤对脾阳虚疼痛大鼠COX-2mRNA及蛋白和CaMKⅡmRNA的影响

【目的】观察大建中汤对脾阳虚疼痛大鼠脑组织环氧合酶-2(COX-2)m RNA及蛋白和钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)m RNA的影响,探讨大建中汤对脾阳虚疼痛的作用机理。【方法】将SD大鼠40只随机分为正常组,模型组,大建中汤高、低剂量组(剂量分别为3、0.75 g·kg~(-1)·d~(-1))各10只,采用综合造模法复制脾虚动物模型,根据实验分组以灌胃形式连续给药15 d后,断颈处死大鼠并立即取脑组织。采用Real-time PCR法检测脑组织COX-2 m RNA、Ca MKⅡm RNA表达的变化;免疫组织化学法检测COX-2蛋白表达变化。【结果】与正常组比较,脾阳虚模型组大鼠大脑COX-2 m RNA及蛋白表达显著增加(P0.01),Ca MKⅡm RNA表达显著降低(P0.01);大建中汤高、低剂量组COX-2 m RNA与蛋白表达较模型组显著下降(P0.01),Ca MKⅡm RNA表达较模型组显著升高(P0.01)。【结论】大建中汤可通过抑制脾阳虚疼痛大鼠脑组织中COX-2 m RNA及蛋白表达,提高Ca MKⅡm RNA表达来达到治疗疼痛的目的。     

不同时间针刺足三里穴对炎性大鼠脊髓、背根神经节中TRPV4蛋白表达的影响

目的研究不同时间针刺足三里穴对炎性大鼠脊髓及背根神经节中香草酸瞬时电位受体4(TRPV4)蛋白表达的影响。方法将54只清洁级的雄性SD大鼠驯化7 d后,进行基础痛阈筛选,然后按痛阈结果随机分组为造模组36只、空白组18只,造模组在右足足垫部皮内注射完全弗氏佐剂0.1 mL,空白对照组注射0.1 mL生理盐水。造模成功的大鼠又按照基础痛阈随机分为模型组18只和针刺组18只,每组按照不同的处理时间又分为ZT8(15:00)、ZT16(23:00)2个时间亚组,每组9只。在2个时间点进行处理,针刺组在相应时间点手针针刺患侧足三里30 min,其间每5 min捻转1 min,频率为120次/min,模型组、空白组捆绑固定30 min,不做其他处理,1次/d,共治疗7 d。在第7天治理结束后检测相应时间点大鼠的痛阈,痛阈检测后取材,提取大鼠腰椎4～6的脊髓及背根神经节,采用免疫组化的方法检测大鼠背根神经节以及脊髓中TRPV4的表达。结果①在ZT8时间点:模型组大鼠与空白组相比,背根神经节中TRPV4表达量显著增加(P<0.01);脊髓组织TRPV4蛋白表达量明显上调(P<0.05)。针刺组大鼠与模型组相比,针刺组背根神经节TRPV4表达量显著下降(P<0.01),脊髓组织TRPV4蛋白表达量无明显差异(P>0.05)。②在ZT16时间点:与空白组相比,模型组大鼠背根神经节TRPV4表达量明显增加(P<0.05),脊髓组织TRPV4蛋白表达量明显上调(P<0.01)。与模型组相比,针刺组大鼠背根神经节TRPV4表达量无明显差异(P>0.05),脊髓组织TRPV4蛋白表达量降低(P<0.05)。结论炎性痛能够诱发大鼠脊髓和背根局部神经节TRPV4蛋白表达的上调;针刺足三里穴能够调节炎性痛大鼠脊髓与背根神经节TRPV4的蛋白含量。     

温和灸对肛门瘙痒模型小鼠背根节TRPV1表达的影响

目的　观察温和灸对肛门瘙痒模型小鼠背根节TRPV1表达的影响。方法　2016年12月—2017年12月选取SPF级C57BL/6J小鼠40只,随机分为空白组、模型组、治疗组Ⅰ（38 ℃艾灸）和治疗组Ⅱ（46 ℃艾灸）,每组10只。适应性喂养1周后,肛周皮肤剪毛,模型组、治疗组Ⅰ和治疗组Ⅱ分别于肛周皮下注射辣椒素 （50 mg/kg）造模,空白组注射相同剂量的0.9%氯化钠溶液。造模成功后,治疗组Ⅰ和治疗组Ⅱ选取小鼠“长强穴”“神阙穴”去毛后行艾灸治疗,根据水银温度计测量艾灸温度,治疗组Ⅰ于距离长强穴、神阙穴（45±5）mm处艾灸10 min,1次/d;治疗组Ⅱ于距离长强穴、神阙穴（35±5）mm处艾灸10 min,1次/d。空白组与模型组小鼠每日陪同抓取和固定,无任何治疗。治疗时间为1周。治疗1周后取各组小鼠背根节,Western blotting法检测小鼠背根节TRPV1表达水平,实时荧光定量PCR法检测小鼠背根节TRPV1 mRNA表达水平。结果　模型组小鼠背根节TRPV1、TRPV1 mRNA表达水平高于空白组（P<0.05）;治疗组Ⅰ、治疗组Ⅱ小鼠背根节TRPV1、TRPV1 mRNA表达水平低于模型组（P<0.05）;治疗组Ⅱ小鼠背根节TRPV1、TRPV1 mRNA表达水平低于治疗组Ⅰ（P<0.05）。结论　温和灸对肛门瘙痒模型小鼠背根节TRPV1的表达具有抑制作用,且46 ℃艾灸较38 ℃艾灸对小鼠背根节TRPV1表达的抑制作用更强。     

合募配穴针刺对肠易激综合征模型大鼠脊髓背根神经节PAR-2、TRVP1及相关致敏细胞因子表达的影响

目的观察合募配穴针刺对肠易激综合征(IBS)大鼠脊髓背根神经节(DRG)蛋白酶活化受体-2(PAR-2)、P物质(SP)、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)和降钙素相关肽(CGRP)表达的影响,探讨合募配穴针刺对内脏高敏感性的可能作用机制。方法采用雄性SD大鼠慢性应激结合束缚法制备肠易激综合征模型。随机分为空白组、模型组、合募针刺组和药物组。造模成功后,合募针刺组对大肠下合穴上巨虚和募穴天枢穴进行电针干预;药物组给予匹维溴胺灌胃。采用腹部回撤反射(AWR)对大鼠进行内脏敏感性评估并观察大鼠体质量变化情况,用免疫组织化学方法检验脊髓L5-S1段PAR-2、TRVP1、SP和CGRP的表达。结果 AWR评分中,治疗前合募针刺组和模型组与空白组比较差异明显(P0.01),治疗后合募针刺组与模型组比较有显著性差异(P0.01),针刺治疗IBS内脏高敏感性有效;治疗后模型组大鼠与空白组比较,脊髓背根神经节中PAR-2、SP、TRVP1和CGRP的IOD值显著升高(P0.01);合募针刺组和药物组与模型组比较,脊髓背根神经节中PAR-2、SP、TRVP1和CGRP的IOD值明显降低(P0.01)。结论合募配穴针刺干预机制可能是通过PAR-2、TRVP1降低SP和CGRP在DRG神经元中的表达来降低IBS大鼠的内脏高敏感性。     

髓核源性坐骨神经痛大鼠背根神经节磷酸化 p38MAPK表达的变化

 【目的】 观察髓核源性坐骨神经痛大鼠模型中背根神经节磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化及其与炎性反应和机械痛敏的关系,以探讨腰椎间盘突出症的病理机制&#65377; 【方法】 选择成年SD雄性大鼠66只随机分为空白组(12只)&#65380;假手术组(18只)和模型组(36只)&#65377;模型组在左腰5神经背根神经节(L5DRG)自体髓核移植以建立大鼠非压迫性腰椎间盘突出模型,假手术组自体肌肉移植&#65377;空白组不进行手术&#65377;测量各组大鼠术前至术后21 d的左后肢50%机械性撤足阈值(50%PWT)以测定机械痛敏的变化,空白组&#65380;假手术组术后7 d及模型组术后7&#65380;14&#65380;21 d各12只大鼠取左腰5DRG用免疫组化法测定环氧化酶-2(COX-2)与p-p38MAPK的阳性细胞比率&#65377; 【结果】 假手术组50%PWT术后无明显变化,模型组术后7 d出现明显的50%PWT下降损伤,术后14 d达最低值,术后21 d部分恢复;空白组&#65380;假手术组术后7 d DRG 的 COX-2和p-p38MAPK微弱表达,模型组术后7 d DRG的COX-2和p-p38MAPK高表达,模型组术后14 d DRG的COX-2和p-p38MAPK表达更高,模型组术后21 d DRG的COX-2和p-p38MAPK表达减弱&#65377;【结论】 背根神经节的p-p38MAPK的表达与非压迫性髓核所致炎性反应和坐骨神经病理性神经痛的变化密切相关&#65377;     

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠OX62、Fas及TNFR1表达的影响

【目的】探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠OX62、Fas及肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)表达的影响。【方法】将30只Wistar大鼠随机分为3组,即空白组、模型组、中药组,每组10只。以D-氨基半乳糖(D-Gal N)600 mg/kg联合脂多糖(LPS)20μg/kg一次性腹腔注射复制急性肝衰竭大鼠模型。中药组大鼠在造模前5 d即开始给予解毒化瘀颗粒预处理,造模成功后24 h处死各组大鼠取肝组织,采用反转录实时定量聚合酶链反应(RT-q PCR)法检测OX62 m RNA表达,采用免疫组织化学法检测OX62、Fas及TNFR1的表达。【结果】模型组大鼠肝组织OX62 m RNA,OX62、Fas、TNFR1蛋白表达水平显著增高,与空白组比较,差异均有统计学意义(P0.05);经解毒化瘀颗粒干预治疗,中药组大鼠肝组织OX62 m RNA,OX62、Fas、TNFR1蛋白表达水平下降,与模型组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。【结论】解毒化瘀颗粒可能是通过下调OX62、Fas及TNFR1的表达来调控免疫反应,进而抑制细胞毒性T细胞介导的肝细胞凋亡。     

祛风止咳方对咳嗽敏感性增高豚鼠模型TRPV1通路的影响

目的 观察祛风止咳方对咳嗽敏感性增高豚鼠模型TRPV1通路表达的影响,探讨其干预喉源性咳嗽的作用机制。方法 采用卵蛋白腹腔注射致敏,结合烟熏的方法制备喉源性咳嗽(咳嗽敏感性增高豚鼠)模型,随机分为空白组、模型组、激动剂组(祛风止咳方+辣椒素)、中药组(祛风止咳方)、对照组(美敏伪麻溶液)。观察各组给药前后咳嗽次数变化,HE染色观察咽喉黏膜、气管黏膜、肺组织形态结构变化,ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-10、IgE表达,咽喉、气管黏膜中瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经激肽A(NKA)、P物质(SP)表达水平,Western blot法检测延髓咳嗽中枢IL-1β、TRPV1、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、神经生长因子(NGF)的表达。结果 与空白组比较,模型组咳嗽敏感性显著增高(P<0.01),咽喉、气管黏膜、肺组织可见黏膜下水肿、炎细胞浸润,嗜酸性粒细胞计数增加,血清IL-1β、IgE表达升高(P<0.01),IL-10表达降低(P<0.01),咽喉、气管黏膜的TRPV1、NKA、CGRP、SP含量增加(P...     

A型肉毒毒素对腰5前根切除大鼠模型中辣椒辣素受体表达的影响

目的 观察A型肉毒毒素对L5前根切除大鼠模型中辣椒辣素受体表达的影响.方法 雄性SD大鼠84只,分给药组和不给药组,在不同时间分别灌注后取脊髓背角与背根神经节,分别用免疫荧光及Western blot方法观察TRPV1的表达.结果 不给药组,VRT组在术后7 d起双侧L4及L5的背根神经节的TRPV1表达明显升高.术后21 d为高峰.相应节段的脊髓背角TRPV1表达也呈增加趋势,与对侧比较差异有统计学意义.药物干预组：3 d模型组给BTX-A后,同侧背根神经节及脊髓的TRPV1表达在给药后7 d起明显下降,与假手术组和对照组相比差异有统计学意义;14 d组TRPV1变化趋势与3 d组一致,但下降幅度较小;高剂量BTX-A（20 U/kg）时TRPV1减少也具有统计学意义（P〈0.001）.Western blotting结果显示TRPV1变化趋势与免疫荧光染色受体表达变化一致.结论 A型肉毒毒素能缓解神经病理性疼痛,其作用部分与抑制TRPV1表达有关.     

瞬时感受器电位香草酸受体1在糖尿病神经病理性痛大鼠背根神经节中的表达

目的:探讨瞬时感受器电位香草酸受体1(TRPV1)在糖尿病大鼠神经病理性疼痛形成中的作用。方法:64只Wistar大鼠腹腔注射链脲菌素制备糖尿病模型,随机分为糖尿病神经病理性疼痛组(D组)和TRPV1抑制剂组(E组),E组大鼠腹腔再注射TRPV1拮抗剂SB366791。分别于第2、4、6、8周末测定每组大鼠机械缩足反应阈值(MWT)、左侧坐骨神经传导速度(NCV)、背根神经节(DRG)中TRPV1表达情况。另取32只大鼠做空白对照组(C组)。结果:随糖尿病时间延长,D组MWT和NCV值逐渐降低,TRPV1水平逐渐升高(P<0.05);E组MWT和NCV值逐渐增高,TRPV1水平逐渐降低(P<0.05)。结论:糖尿病大鼠神经病理性疼痛的形成和维持与大鼠背根神经节中TRPV1表达水平上调有关。     

复方土茯苓颗粒对大鼠滑膜细胞炎症因子及mi-RNA的影响

【目的】观察复方土茯苓颗粒含药血清对大鼠滑膜细胞痛风模型的影响以及与白细胞介素-1β/白细胞介素-6(IL-1β/IL-6)、小片段RNA miR-146a的关系。【方法】从SD大鼠身上摘取膝关节滑膜组织进行原代培养并传代,将滑膜细胞分成空白对照组,空白血清组,模型组,中药血清低、中、高剂量组6组;分别制备复方土茯苓颗粒中药血清和尿酸盐晶体混悬液,并进行细胞活性试验后,按组进行相应的干预,然后收集细胞培养液采用酶联免疫吸附反应(ELISA)法检测IL-1β/IL-6水平;提取滑膜细胞总RNA并进行逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-146a表达,并分析它们的关系。【结果】模型组滑膜细胞培养液中IL-1β/IL-6的含量显著升高(P0.05),滑膜细胞miR-146a表达显著下调(P0.05);中药血清各剂量组IL-1β/IL-6的含量显著降低(P0.05),miR-146a则显著上调(P0.05);IL-1β/IL-6与miR-146a表达呈反比关系。【结论】复方土茯苓颗粒含药血清可能是通过上调大鼠滑膜细胞miR-146a的表达,抑制IL-1β/IL-6,从而缓解炎症反应。     

痛泻安肠方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠TRPV1表达及血浆SP、CGRP含量的影响

目的探讨痛泻安肠方对腹泻型肠易激综合征模型大鼠结肠TRPV1的表达及血清SP、CGRP含量的影响。方法采用冰醋酸灌肠、球囊直肠扩张联合夹尾刺激的方法制备腹泻型肠易激综合征模型,造模成功后,将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、得舒特及痛泻安肠方低、中、高剂量组共6组。观察各组大鼠治疗前后腹壁撤退反射(AWR)评分、粪便Bristol分级评分;采用Western Blot检测结肠TRPV1蛋白表达,采用RealTime PCR检测结肠TRPV1 mRNA的表达,用Elisa测定血清P物质(SP)和降钙素基因相关肽(CGRP)的表达。结果模型组大鼠较空白组内脏敏感性阈值下降(P0.05,P0.01),粪便Bristol分级评分明显升高(P0.01);治疗后,痛泻安肠方低、中、高剂量组和得舒特组大鼠内脏敏感性阈值升高(P0.05,P0.01),粪便Bristol分级评分降低(P0.01),结肠TRPV1蛋白表达下降(P0.05,P0.01),TRPV1 mRNA表达降低(P0.01),血清SP、CGRP水平下降(P0.05,P0.01)。结论痛泻安肠方能降低腹泻型肠易激综合征大鼠内脏高敏感性,其机制可能是通过下调结肠TRPV1蛋白表达,降低结肠TRPV1 mRNA表达,降低血清SP、CGRP水平,上调内脏敏感性而实现的。     

清肺透邪方对肺炎支原体肺炎小鼠Notch信号通路的影响

【目的】观察清肺透邪方对肺炎支原体肺炎小鼠肺组织Notch信号通路的影响,探讨其抗肺炎支原体感染的分子机制。【方法】将144只SPF级BABL/c小鼠随机分成6组,即正常组,模型组,西药组,中药大、中、小剂量组,每组24只。除正常组外,采用鼻腔接种肺炎支原体菌株法将其余5组小鼠复制肺炎支原体肺炎模型。造模结束后,西药组小鼠给予阿奇霉素片(剂量为2.6 mg/mL)灌胃5 d,5 d后继续灌胃等体积生理盐水,中药大、中、小剂量组分别予清肺透邪方颗粒剂(剂量分别为1.950 0、0.975 0、0.487 5 g/mL)灌胃,正常组与模型组小鼠给予等体积生理盐水灌胃。灌胃0.2 mL/d,共14 d。于给药后第3、7、10、14天进行取材。采用苏木素—伊红(HE)染色法观察小鼠肺组织病理表现,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测小鼠肺组织Notch1、Notch2、Notch3蛋白表达水平,采用定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法测定小鼠肺组织Notch1、Notch2、Notch3 m RNA表达水平。【结果】小鼠肺炎支原体感染后镜下符合肺炎表现;西药组,中药大、中剂量组小鼠肺部炎症明显改善,且清肺透邪方作用呈时间、剂量依赖性。模型组小鼠肺组织Notch1、Notch2蛋白及mRNA表达水平较正常组显著升高(P 0.05),西药组,中药大、中剂量组Notch1、Notch2蛋白及mRNA表达水平均较模型组降低(P 0.05),且清肺透邪方作用呈时间、剂量依赖性。各组Notch3蛋白及m RNA表达比较,差异均无统计学意义(P 0.05)。【结论】清肺透邪方可以减轻肺炎支原体肺炎小鼠肺部炎症,其机制可能与抑制肺组织Notch通路中Notch受体的表达有关。     

麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘大鼠IL-6/STAT3信号通路及TRPV1感受器的影响

【目的】探讨麻杏石甘汤对咳嗽变异型哮喘（CVA）大鼠的治疗作用及机制。【方法】将60只大鼠随机分为正常组,模型组,麻杏石甘汤低、高剂量组,麻杏石甘汤高剂量+信号转导和转录激活因子3(STAT3)激活剂Colivelin(Col)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用腹腔注射卵清蛋白结合艾条熏蒸法构建CVA模型。对应治疗后,观察大鼠体征和咳嗽次数,肺功能仪检测气道阻力（RE）,Diff-Quik染色计数嗜酸性粒细胞（EOS）,苏木素-伊红（HE）染色法观察肺、支气管组织病理学特征,酶联免疫吸附分析（ELISA）检测肺组织单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,Western Blot法检测肺组织白细胞介素6(IL-6)、STAT3、瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组大鼠出现明显哮喘症状,肺组织可见炎性细胞浸润严重,支气管上皮细胞坏死、纤毛粘连、黏液多,RE,EOS数目,MCP-1、TNF-α含量,以及IL-6、STAT3、TRPV1蛋白表达水平均升高（P<0.05）;与模型组比较,麻杏石甘汤低、高剂量组...