取材方法对病理标本结核病原学阳性率的影响及意义

目的 探讨五种病原学检测技术在不同取材方法获取的病理标本中结核阳性率的差异及其临床意义。方法 收集2017年武汉市肺科医院外科手术并临床确诊结核的345份病例的结核病原学检查结果,以标本取材方式不同为分组依据,对各组抗酸染色涂片（AFB）、实时荧光定量PCR（TB-DNA）、RNA恒温扩增实时荧光检测（SAT-TB）、Gene-X-pert/RIF (X-pert)、结核培养（CTB）等结果进行回顾分析。结果 以临床常用的四种方法获取标本,分别为手术345例、穿刺55例、脓肿切排（简称切排）37例和收集分泌物7例。以临床诊断为标准,手术、穿刺、切排和收集分泌物获取的标本病原学总阳性率分别为86.38%、85.45%、100.00%、85.71%;X-pert阳性率分别为86.26%、83.33%、100.00%、85.71%,五种检测技术灵敏度由高到低排序各组前两名均为X-pert、TB-DNA,最低均为AFB;以手术标本结果为诊断标准,虽切排和穿刺标本CTB阳性率均高于手术标本,一致性均为中等（K=0.521、0.530）,但五种病原学阳性率比较差异均无统计学意义（McNemer检验,P>0.05）。结论 病理标本中五种结核病原学检测技术检出率均与取材方法无关,提倡早期对病灶精准穿刺行X-pert、CTB检查以利于疾病的早期诊断和治疗。     

SAT-TB联合FQ-PCR检测在痰涂片阴性肺结核诊断中的效能

目的：分析RNA恒温扩增实时检测技术（SAT-TB）联合荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测在痰涂片阴性肺结核患者诊断中的效能。方法：选取2020年7月至2022年7月该院收治的75例疑似痰涂片阴性肺结核患者进行前瞻性研究。采集所有患者肺泡灌洗液标本,采用SAT-TB、FQ-PCR法进行检测,以结核分枝杆菌痰培养结果为“金标准”,比较SAT-TB、FQ-PCR单项及联合检测在痰涂片阴性肺结核诊断中的效能。结果：金标准结果显示,75例疑似痰涂片阴性肺结核患者中,阳性48例,阴性27例;SAT-TB检测结果显示,阳性36例,阴性39例;FQ-PCR检测结果显示,阳性37例,阴性38例;SAT-TB联合FQ-PCR检测结果显示,阳性47例,阴性28例;SAT-TB联合FQ-PCR检测诊断痰涂片阴性肺结核的灵敏度、准确度均高于SAT-TB、FQ-PCR单项检测诊断,漏诊率低于SAT-TB、FQ-PCR单项检测诊断,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：SAT-TB联合FQ-PCR检测诊断痰涂片阴性肺结核的效能高于二者单项检测诊断效能。     

实时荧光核酸恒温扩增检测技术对痰标本中结核分枝杆菌的诊断价值*

目的 评估实时荧光核酸恒温扩增检测（SAT）技术对痰标本中结核分枝杆菌（MTB）的诊断价值。方法 收集确诊为活动性肺结核（PTB）的115例和无证据显示为活动性PTB的67例总计182例患者的痰液标本,采用集菌涂片法、罗氏培养法、PCR荧光探针法及Xpert MTB/RIF法及SAT法进行检测,分析对比检测结果。结果 SAT法检测PTB患者MTB的检出率为40.00%,与罗氏培养法的检出率（40.87%）比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。以罗氏培养法为标准,SAT法敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、约登指数分别为95.74%（95% CI：0.8975,0.10174）,98.53%（95% CI：95.59%,101.46%）,0.9783（95% CI：0.9345,0.1022）,0.9710（95% CI：0.9304,0.1012）和0.94。其中阳性预测值高于Xpert MTB/RIF法,各指标均优于PCR荧光探针法。ROC曲线结果显示SAT法AUC为0.936。结论 SAT法检测MTB敏感性、特异性和准确度较高,操作简单,检测周期短,其检测结果可以作为临床诊断参考。     

血性标本对实时荧光定量PCR检测的影响

目的探讨血性标本在PCR-DNA-Tb检测中影响。方法用23例非血性标本和37例血性标本同时直接法和预处理法进行实时荧光定量PCR-DNA-Tb检测。结果23例非血性标本两法检测结果差异无显著性(P>0.05),37例血性标本预处理法与直接法检测结果差异显著(P<0.01)。结论血性标本预处理后进行PCR-DNA-Tb检测可提高检出阳性率,减少假阴性。     

血清中不同基因型丙型肝炎病毒RNA含量的测定

目的了解血清中不同基因型丙型肝炎病毒HCVRNA的含量。方法用实时荧光定量RTPCR和逆转录型特异性引物PCR同时检测21例费城酒精依赖丙肝患者的血清HCVRNA拷贝数并分析HCV基因型。结果21份血清标本中,有17份为HCVRNA阳性。这些阳性血清的HCVRNA含量波动范围在104.60～106.20拷贝/ml。检测到1a和1b两种HCV基因型,其中1a型7例,RNA平均滴度为105.28±0.75拷贝/ml,1b型(9例)RNA平均滴度为105.28±0.28拷贝/ml。结论定性和定量检测结果有极佳的一致性,酒精依赖丙肝基因型1a和1b血清中HCV含量无显著性差异。     

不同检测方法对痰液标本中结核杆菌检测效果的比较分析

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果.方法 80份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别采用涂片抗酸染色法、快速结核菌培养法和荧光定量PCR技术对痰结核分枝杆菌进行检测,并对其检出率进行比较.结果 RT-PCR法、菌培养法、染色法的检出率分别为93.75%、71.25%、56.25%.RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法,菌培养法检出率高于染色法.结论 荧光定量PCR技术能对痰结核分枝杆菌进行简便快速、敏感、特异的检测,值得推广应用.     

膜-反向斑点杂交技术检测肺结核患者肺组织和肺泡灌洗液中的结核杆菌

目的探讨膜-反向斑点杂交技术（RDB）在病理石蜡组织和肺泡灌洗液检测结核杆菌的临床应用价值。方法以97例病理石蜡组织、97例肺泡灌洗液为研究对象,分别以膜-反向斑点杂交、实时荧光PCR（RT—PCR）、抗酸染色三种方法检测结核杆菌,对三种方法进行方法学评价。结果结核组病理石蜡组织、肺泡灌洗液三种方法检测的总阳性率分别为：抗酸染色为32．8％,RT—PCR阳性率为82．8％,RDB阳性率为89．9％,两两比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,对照组三种方法检测结果均为阴性;三种结核杆菌的检测方法的方法学评价,RDB灵敏度（90．6％）、约登指数（0．91）、符合率（93．9％）、阴性预测值（85．0％）均较好。结论膜-反向斑点杂交技术在病理石蜡组织和肺泡灌洗液结核杆菌的检测上有很高的临床应用价值,值得临床推广应用。     

不同引物及数据分析方法对定量PCR结果的影响

目的:研究不同引物及数据分析方法对实时荧光定量PCR SYBR Green染料法检测基因表达差异结果分析的影响.方法:通过Primer Express 2.0软件对目的基因CCNDI、C-JUN分别设计4对不同引物进行SYBR Green染料法定量PCR扩增.并分别使用2-△△CT法、Pfaffl法及相对标准曲线法计算肺癌紫杉醇敏感细胞株及耐药细胞株问日的基因的表达差异.分析不同引物和数据计算方法对实验结果的影响.结果:统计学分析表明,引物的扩增效率对定量PCR结果分析有显著影响.不同引物特异性扩增得到的样本间表达倍数有显著差异(P<0.05).3种计算方法中,Pfaffl法与相对标准曲线法无统计学差异(P>0.05),而2-△△CT法与其他2种方法均有显著差异(P<0.05).结论:引物的选择对于定量PCR结果有显著影响;Pfaffl法是更准确,更合理的相对定量计算方法.     

不同脱蜡剂对实时荧光定量PCR检测石蜡块EGFR基因突变结果的影响

目的 观察不同的脱蜡剂对实时荧光定量PCR检测表皮生长因子受体(EGFR)基因结果判读的影响.方法 从2014年11月起,连续6个月收集该院病理科石蜡标本切片68份,均分成A组(二甲苯脱蜡)和B组(松节油脱蜡)进行石蜡块EGFR基因突变检测.结果 同一份石蜡切片.检测EGFR的6个靶点两组结果均相同.两组同一份标本的内质控(内参)扩增曲线CT值之差均小于0.99;同一份标本,两组检测相同靶点时有效的扩增曲线CT值之差均小于0.99,且结合内质控(内参)CT值分析最终判定两组靶点检测的阳性、阴性结果完全相符.结论 采用松节油与二甲苯脱蜡后检测EGFR基因突变的实时荧光定量PCR结果一致,对检测的靶点无影响,松节油可用作分子实验室的脱蜡剂.     

5种病原学检查在结核性病理组织及气道分泌物中的检测差异

目的 探讨5种病原学检查在结核性病理组织及气道分泌物标本中的阳性率差异及意义。方法 收集2017年武汉市肺科医院外科经手术确诊结核合并肺结核且接受气道分泌物检查的166份病例的结核病原学检查结果,根据标本来源不同分为手术标本病原学检查组（简称手术标本组）与气道分泌物标本病原学检查组（简称气道分泌物标本组）,对抗酸染色涂片（AFB）、实时荧光定量PCR（TB-DNA）、RNA恒温扩增实时荧光检测（SAT-TB）、Gene-X-pert/RIF (X-pert)、结核培养（CTB）等结果进行回顾分析。结果 以临床诊断为标准,手术标本组和气道分泌物标本组总阳性率分别为86.14%、21.08%,X-per阳性率分别为85.89%、29.76%;两组的五种检测技术阳性率由高到低排序一致,均为X-pert、TB-DNA、SAT-TB、CTB、AFB;以手术标本结果为诊断标准,气道分泌物标本结果与其一致性均较差（Kappa<0.4）,五种检查阳性率均低于手术标本,且差异具有统计学意义（McNemer检验,P<0.05）。结论 病理组织标本结核病原学阳性率高于气道分泌物标本,临床应重视对菌阴肺结核患者的病理组织标本进行X-pert、CTB等检查。     

肝内嵌合Sertoli细胞对肝组织中Fas/FasL表达的影响及其意义

目的 :探讨大鼠肝内嵌合Sertoli细胞对肝组织中Fas/FasL表达的影响及其意义 .方法 :将雄性SD大鼠的睾丸Sertoli细胞以不同浓度 (1× 10 5·mL-1、1× 10 6·mL-1,1×10 7·mL-1,1× 10 8·mL-1)和培养 4 8h的上清液 ,经门静脉向每只雌性SD大鼠肝内注入 1mL .2wk后取肝组织 ,应用半定量RT PCR(QRT PCR)的方法检测各组肝组织中Fas/FasLmRNA相对含量 ,与正常肝组织比较 .结果 :正常、上清液组及 1× 10 5·mL-1,1× 10 6·mL-1,1× 10 7·mL-1,1× 10 8·mL-1浓度组肝组织中FasmRNA表达相对量分别为 :0 .77±0 .0 5 ,0 .78± 0 .0 4 ,0 .78± 0 .0 4 ,0 .78± 0 .0 4 ,0 .81± 0 .0 3,0 .80± 0 .0 4 ,FasLmRNA表达相对量分别为 :0 .18± 0 .0 4 ,0 .2 0± 0 .0 4、0 .2 4± 0 .0 4 ,0 .2 4± 0 .0 4 ,0 .4 3± 0 .0 4 ,0 .4 3± 0 .0 4 .各组间FasmRNA表达水平无显著差异 ;FasLmRNA相对含量 ,正常、上清液组与 1× 10 5·mL-1和 1× 10 6·mL-1组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,与 1× 10 7·mL-1和 1× 10 8·mL-1组比较相差非常显著 (P <0 .0 1) .结论 :Sertoli细胞经门静脉肝内注入 ,可在肝内嵌合并能有效提高FasL表达     

荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比较

目的 比较荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤脱氢酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量的差异,为改进实验研究方法学提供参考依据。方法 提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR与半定量PCR进行相对定量检测,结果做比对分析。结果 两种检测方法均能检测到健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织0.4ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,半定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织15.625 ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR较半定量灵敏度高39倍。两种方法检测结果均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR与半定量PCR检测结果存在有一定差异。结论 两种方法均可用于检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量,荧光实时定量PCR灵敏度较高于半定量PCR法。     

云芝胞内糖肽联合左氧氟沙星治疗肺结核的疗效及对免疫功能的影响

目的观察云芝胞内糖肽联合左氧氟沙星治疗肺结核的疗效及对免疫功能的影响。方法将本院192例肺结核患者随机均分为常规治疗组和联合治疗组,常规治疗组予以常规抗结核方案治疗,联合治疗组在常规治疗组基础上,予以云芝胞内糖肽联合左氧氟沙星治疗。检测两组Th1、Th2细胞水平及血清白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)的水平。观察两组痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞闭合率及疗效和不良反应。结果治疗后,两组Th1细胞水平较治疗前升高,Th2细胞、IL-6、CRP水平较治疗前降低(P＜0.05),且联合治疗组Th1细胞水平高于常规治疗组,Th2细胞、IL-6、CRP水平低于常规治疗组(P＜0.05)。联合治疗组痰菌阴转率、病灶吸收率、空洞闭合率均高于常规治疗组(P＜0.05)。治疗后,联合治疗组总有效率高于常规治疗组(P＜0.05)。联合治疗组不良反应发生率低于常规治疗组(P＜0.05)。结论云芝胞内糖肽联合左氧氟沙星可改善肺结核患者的临床症状,提高其疗效,降低不良反应且具有增强免疫及抗感染的优势。     

MST4表达对MHCC97H肝癌细胞细胞因子、ERK蛋白、p-ERK蛋白表达的影响及其意义

目的:探讨MHCC97H肝癌细胞中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶4/（MST4）的表达与细胞因子、ERK蛋白、p-ERK蛋白表达的关系及其意义。方法:将MHCC97H肝癌细胞培养至对数生长期后,接种于96孔板上培养,分为空白组、高表达组（MST4转染高表达）、低表达组（MST4转染siRNA）,采用Western-blot法检测各组共培养24 h后的MST4蛋白表达水平,采用ELISA法检测各组培养24 h后上清液中白细胞介素-2（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、趋化因子-2（CCL2）,采用Western-blot法检测各组的细胞外信号调节激酶（ERK）、磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达,采用MTT实验检测3组肿瘤细胞的增殖能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭迁移能力。结果:高表达组的MST4蛋白表达显著高于空白组和低表达组（P<0.05）;空白组和低表达组的MST4蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;高表达组的上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、CCL2水平均显著高于空白组和低表达组（P<0.05）;空白组和低表达组的上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α、CCL2水平差异无统计学意义（P>0.05）;空白组、高表达组和低表达组的ERK蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）;高表达组的p-ERK蛋白显著高于空白组和低表达组（P<0.05）;空白组和低表达组的p-ERK蛋白差异无统计学意义（P>0.05）;高表达组的MTT实验吸光度值、Transwell实验MHCC97H肝癌细胞迁移数目高于空白组和低表达组（P<0.05）;空白组和低表达组的MTT实验吸光度值、Transwell实验MHCC97H肝癌细胞迁移数目差异无统计学意义（P>0.05）。结论:MHCC97H肝癌细胞中MST4高表达,将会激活p-ERK蛋白表达,从而提高细胞因子的表达,提高MHCC97H肝癌细胞的增殖、侵袭能力。     

不同剂量非奈利酮治疗早期2型糖尿病肾病的疗效及对血清IGF-1、IL-6水平的影响

目的 探讨不同剂量非奈利酮治疗早期2型糖尿病肾病(DKD)患者的临床疗效及对血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、白介素-6(IL-6)水平的影响。方法 选取2023年1月至2023年8月荆州市中心医院就诊的76例早期DKD患者为研究对象,随机分为小剂量组(10 mg/d,n=38)和大剂量组(20 mg/d,n=38),比较两组治疗前及治疗12周后肾功能指标[尿白蛋白/肌酐比值(UACR)、血清肌酐(Scr)、肾小球滤过率(eGFR)]、血钾、血压及血清IGF-1、IL-6水平的变化。结果 治疗后,两组UACR、Scr、IGF-1、IL-6均低于治疗前(P<0.05),eGFR、血钾均高于治疗前,且大剂量组上述指标改善效果优于小剂量组(P<0.05);两组治疗后SBP、DBP与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析显示,治疗前UACR与血清IGF-1、IL-6水平呈正相关;治疗后,大剂量组UACR与血清IGF-1、IL-6水平呈正相关,小剂量组UACR与血清IGF-1、IL-6水平无相关性。结论 与小剂量非奈利酮相比,大剂量非奈利酮能减少早期DKD患者的尿蛋白,降低血清IGF-1与IL-6水平,进一步改善肾功能,但可能有一定的血钾升高风险,临床应用时需关注。     

不同时间点静脉滴注氨甲环酸对老年股骨转子间骨折行InterTan内固定术后失血量的影响及安全性评估

目的探讨不同时间点静脉滴注氨甲环酸对老年股骨转子间骨折行InterTan内固定术后失血及术后深静脉血栓栓塞(DVT)的影响。方法选择105例老年股骨转子间骨折患者随机分为5组,每组21例,A组于手术结束前15 min给予1 g氨甲环酸静脉滴注;B组于手术结束前15 min、术后7 h给予1 g氨甲环酸静脉滴注;C组于手术切皮前给予1 g氨甲环酸静脉滴注;D组于手术切皮前给予1 g氨甲环酸,7 h后再给予1 g氨甲环酸静脉滴注;E组为对照组,不给予氨甲环酸。检测术后第1、3天血红蛋白、红细胞压积,术后第1天活化部分凝血酶时间等血液学指标,通过Gross方程计算围术期总失血量,比较5组患者术中、术后失血量差异,以及患者输血率、血栓性并发症发生情况。结果 D组围手术期总失血量,术后第1、3天血红蛋白及红细胞压积分别为(831.9±246.7)mL、(95.8±3.8)g/L、(86.6±6.7)g/L、(32.1±5.2)%、(29.3±4.1)%,均少于A组、B组、C组及E组(P0.05)。E组5项数值与其他各组比较有统计学意义(P0.05)。A、B、C、D组患者的输血率(28.5%、19.0%、14.2%、9.5%)显著低于E组患者(42.8%),差异有统计学意义(P0.05)。5组患者术后24 h凝血指标比较差异均无统计学意义(P0.05)。5组患者术后均无腘静脉及其近端深静脉血栓及肺栓塞发生。结论手术切皮前给予1 g氨甲环酸,7 h后再给予1 g氨甲环酸静脉滴注在围手术期能够最大限度地减少术中及术后出血量。氨甲环酸在减少患者术后出血和输血率的同时,并不会增加DVT的发生。