深圳市结核分枝杆菌耐药变化趋势的Joinpoint回归分析

目的 探讨深圳市结核分枝杆菌对利福平、异烟肼耐药变化趋势,为结核病防控策略调整提供依据。方法 对2002—2017年深圳市登记的所有涂阳肺结核病患者进行痰检,对罗氏培养阳性菌株进行菌型鉴定和耐药检测,采用Joinpoint regression program软件计算年度变化百分比并进行趋势检验。结果 共检测19 098株结核分枝杆菌菌株,其中单耐异烟肼726株,单耐利福平954株,同时耐异烟肼、利福平812株。2002—2011年深圳市结核分枝杆菌异烟肼耐药率以每年3.81%的平均速率下降（P=0.04）;2012—2014年以每年5.34%的平均速率上升（P=0.62）;2015—2017年以每年20.82%的平均速率再次下降（P=0.18）;2002—2004年深圳市结核分枝杆菌利福平耐药率以每年23.89%的平均速率下降（P=0.13）;2005—2015年以每年0.99%的平均速率波动（P=0.15）;2016—2017年以每年46.50%的平均速率下降（P=0.01）;2002—2010年深圳市结核分枝杆菌同时对异烟肼、利福平耐药率以每年4.16%的平均速率下降（P=0.17）;2011—2015年以每年平均2.24%的平均速率上升（P=0.47）;2016—2017年以每年14.26%的平均速率上升,呈加快趋势（P=0.69）。结论 深圳市结核分枝杆菌对异烟肼、利福平耐药率均呈阶段性变化,其中对异烟肼、利福平单耐药率在波动中呈下降趋势,而耐多药结核分枝杆菌检出率近年来在波动中呈上升趋势,且以传播导致的耐药为主,应该调整防控策略,把重点转移至加强结核病患者的主动发现,做好传染源的隔离,特别是痰检阳性耐多药结核病患者。     

利用GenoType~? MTBDRplus技术分析福州市结核耐药基因突变特征

目的了解福州市结核菌的耐药基因突变特征,分析突变位点和突变频率,为本地区耐多药结核病诊疗提供更多的数据。方法利用GenoType~?MTBDRplus技术对福州市近年分离的352株结核分枝杆菌进行检测,分析其rpoB、katG和inhA基因的突变特征。结果福州市352株结核菌株,总耐药率13.92%(49/352),ropB耐药基因突变率7.67%(27/352),异烟肼耐药基因突变率13.92%(49/352),耐多药结核菌(MDR-TB)发生率7.67%(27/352)。利福平耐药基因rpoB突变以S531L位点突变最常见,占55.56%(15/27)。异烟肼耐药katG基因突变占75.51%(37/49),inhA突变占24.49%(12/49)。katG突变以S315T1最常见,占59.18%(29/49);inhA基因突变以inhA C15T最常见,占22.45%(11/49)。MDR-TB以rpoB S531L-katG S315T1突变类型最常见,占40.74%(11/27)。结论福州地区结核分枝杆菌对利福平、异烟肼和MDR-TB耐药率总体水平均低于全国平均水平,耐利福平、耐异烟肼菌株和MDR-TB的基因突变存在主流突变类型,分别为rpoB S531L、katG S315T1和inhA C15T、rpoB S531L-katG S315T1,对今后福州市耐多药结核病的快速诊断和控制提供了理论依据。     

台州地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的流行病学调查

目的 了解台州地区临床流行的结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的表型,为临床有效地治疗结核病提供依据。方法 回顾性分析2015 年8 月至2020 年11 月送检于台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院的482 株临床分离的结核分枝杆菌菌株,采用DNA 微阵列芯片法对利福平耐药相关基因rpoB、异烟肼耐药相关基因katG及inhA 基因进行特异性检测。结果 482 例结核分枝杆菌中利福平耐药基因检测出rpoB 野生型367 例,突变型115 例,其中突变型以rpoB531（C→T）突变为主,检出55 例;检出异烟肼耐药基因katG 和inhA 基因型均为野生型的372 例,突变型110 例,katG 基因突变型中katG315（G→C）突变和katG315（G→A）突变分别是91 例和12 例,inhA 基因突变型只有inhA-15（C→T）突变16 例。2020 年利福平基因耐药率增加到38.46%,异烟肼基因耐药率在6 年间没有明显增长。结论 台州地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因型以野生型为主,但利福平基因耐药率呈上升趋势。     

分子线性探针技术分析四川地区结核分枝杆菌耐药情况

摘要：目的应用分子线性探针GenoType®MTBDRplus Assay（GTplus）试剂盒检测四川地区耐多药结核分枝杆菌（MTB）
株的基因型特征,并初步了解耐药结核病的流行情况。方法选取结核确诊患者105份临床标本和68株临床分离株,应
用GTplus 试剂盒检测MTB耐利福平和异烟肼相关的rpoB、katG、inhA 基因的突变,推测其对利福平和异烟肼的耐药
性。结果151例样本的GTplus结果有效,总耐药率和耐多药率分别为29.14%（44/151）和17.22%（26/151）;耐利福平和
高、低水平耐异烟肼的突变菌株分别为21.85%（33/151）、21.19% (32/151）和3.31%（5/151）;突变型以rpoB S531L、katG
S315T1和inhA C-15T为主。痰标本组的耐多药菌株比率明显高于肺外标本组。结论四川地区MTB耐药形势严峻,尤
以耐多药结核病的情况严重,耐药菌株以rpoB S531L和katG S315T1突变型为主,应推广快速分子药敏试剂盒的临床应
用,快速并提高对耐药结核病的诊断。     

痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物．用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段，对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB举因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变，突变位点主要为531、516或526常见密码子，且绝大多数为单碱基突变，发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基岗及其突变，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。     

应用DNA芯片法检测耐多药结核分枝杆菌的研究

目的应用DNA芯片技术快速检测耐多药结核菌的常见突变位点,初步评价其临床应用价值。方法以结核分枝杆菌标准株H37RV为对照,应用基因芯片技术、聚合酶链反应-单链构象多态性技术、聚合酶链反应-直接测序技术检测46株耐多药结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB基因。结果 46例耐多药菌株中,应用基因芯片检测出katG基因突变28株,检出率为60.9%(28/46);检测出rpoB基因突变37株,检出率为80.4%(37/46);同时检测出二者突变共25株,检出率为54.3%(25/46)。结论基因芯片技术操作简单、检测快速,对异烟肼、利福平耐药基因检出率较高,可作为临床耐药检测的辅助手段。     

青岛地区结核分枝杆菌rpoB变异与耐药相关性研究

目的：探讨青岛地区结核分枝杆菌的rpoB变异特征与利福平耐药的关系。方法应用聚合酶链反应（PCR）直接测序法对来自青岛地区54株利福平耐药的结核分枝杆菌和14株利福平敏感的结核分枝杆菌的rpoB基因片段进行分析。结果14株利福平敏感菌株中均未发生rpoB变异,而54株利福平耐药菌株中有46株发生了rpoB变异,变异率为85.19%（46/54）;rpoB变异在利福平敏感菌株和利福平耐药菌株中的分布差异有统计学意义（χ^2=33.072,P=0）;16株利福平低浓度耐药菌株中有10株发生rpoB变异,而38株利福平高浓度耐药菌株中有36株发生rpoB变异,rpoB变异在利福平低浓度耐药菌株和利福平高浓度耐药菌株中的分布差异有统计学意义（χ^2=6.893,P=0.009）;30株单耐利福平菌株中有24株发生rpoB变异,而24株多耐药菌株中有22株发生rpoB变异,rpoB变异在单耐利福平菌株和多耐药菌株中的分布差异有统计学意义（χ^2=5.022,P=0.025）。结论 rpoB的变异是青岛地区结核分枝杆菌对利福平耐药的主要机制,且可能与耐药浓度及是否多耐药相关。     

结核分支杆菌rpoB基因套式PCR在利福平耐药和结核病辅助诊断中的应用

目的 分析耐利福平的结核分支杆菌(Mtb)rpoB基因突变状况。方法 对38株耐利福平Mtb菌株的rpoB基因突变高频区域进行套式PCR扩增，并进一步全自动测序。结果 38株耐利福平Mtb中有36株存在突变(包含5个密码子11种形式的突变)，突变率94．7％。结论 Mtb xpoB基因的突变与利福平耐药高度关联，rpoB基因套式PCR及测序能快速、正确鉴别耐利福平菌株。     

线性探针杂交技术在广西百色地区耐药结核病检测中的应用

目的 了解广西百色地区利福平、异烟肼耐药基因的分布情况。评价线性探针杂交技术(LPA)检测耐药结核分枝杆菌的应用价值。方法 利用LPA技术与传统比例药敏试验分别检测496例结核分枝杆菌感染患者痰标本,统计出利福平、异烟肼各个耐药基因的分布情况并与传统比例药敏试验作比较。结果 LPA技术对结核病患者耐多药的检出率和传统比例药敏试验相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。LPA技术检测耐利福平和异烟肼的灵敏度、特异度分别为97.0%、99.1%和77.8%、 99.5%,耐多药结核病的灵敏度和特异度分别为82.8%和99.8%。本地区利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB WT8 占32.4%,其次是ropB MUT3占29.7%;异烟肼耐药基因最常见的突变是 katG WT 占46.8%,其次是katG MUT1 占43.6%。kappa一致性检验评价两种药物耐药性检测方法的kappa值分别为0.965和0.904。结论 广西百色地区结核分枝杆菌利福平的耐药基因以rpoB WT8和ropB MUT3两个位点突变为主,而结核分枝杆菌异烟肼的耐药基因则以katG WT和katG MUT1位点突变多见。LPA技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性,LPA技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性与传统比例药敏试验具有高度的一致性,LPA检测技术可以大大地缩短检测的时限,辅助临床快速诊断出多耐药的结核菌。     

重庆市结核病患者利福平耐药与耐多药的相关性分析

目的 了解重庆市结核病患者利福平（rifampicin, RFP）耐药与耐多药的相关程度,为重庆市RFP耐药及耐多药结核病患者的准确诊断和及时治疗提供科学依据。方法 收集重庆市公共卫生医疗救治中心2017—2019年收治的培养阳性且鉴定为结核分枝杆菌的患者菌株,进行以下十种抗结核药物的药敏试验：RFP、异烟肼（isoniazid, INH）、链霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、对氨基水杨酸和丙硫异烟胺。共收集菌株937例,分析其RFP和INH耐药情况。结果 937例菌株中,RFP耐药菌株288例,RFP耐药INH敏感菌株比例为20.14%（58/288）;RFP敏感菌株为649例,其中INH耐药菌株占比7.09%（46/649）。重庆市耐多药患者比例为24.55%,广泛耐药肺结核患者占比2.99%。无论RFP耐药还是RFP敏感菌株中,INH耐药或敏感的患者在年龄、性别和治疗史方面差异均无统计学意义。结论 重庆市RFP耐药结核病患者中有较高比例为异烟肼敏感患者,RFP耐药不适合作为重庆地区耐多药患者确诊的指标,应采取有效手段同时检测RFP和INH耐药情况,以指导临床医生为结核病患者制定合理的化疗方案,推动重庆市结核病防治工作的进展。     

反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌3种耐药相关基因

目的:观察膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌(MTB)对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)耐药性的效果.方法:用ropB、katG、inhA、rpsL基因的寡核苷酸探针与结核分枝杆菌PCR产物进行反向斑点杂交,并将结果与绝对浓度法药敏试验结果进行比较.结果:INH、RFP和SM的耐药基因检测灵敏度分...     

Molecular characteristics of rifampin and isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Beijing, China

Background China is one of the high burden countries of Mycobacterium tuberculosis （TB） infection globally, with high incidence and mortality. We studied the molecular characteristics of rifampin （RIF） and isoniazid （INH） resistant Mycobacterium tuberculosis strains from Beijing, China, in order to find out the genetic marker for rapid detection of specific drug resistance. Methods Forty pansusceptible and 81 resistant strains of Mycobacterium tuberculosis isolated from Beijing, China during 2002-2005 were analyzed. The modified rifampin oligonucleotide （RIFO） assay based on reverse line blot hybridization was used to detect mutations in the 81 bp hot-spot region of rpoB gene, which is associated with RIF resistance. The INH resistance associated genes, regulatory region mab-inhA （-15C/T） and structural gene katG S315T were detected by reverse line blot hybridization and PCR-restriction fragment length polymorphism （RFLP） method respectively. All the strains were typed by spoligotying and the Beijing genotype was further subdivided by NTF locus analysis. The distribution of drug resistance associated mutations in the above genes was compared in these groups. Results Sixty-five （91.5%） of 71 RIF resistant and 52 （92.9%） of 56 multidrug-resistant （MDR, i.e. resistant to at least RIF and INH） strains were found to harbor mutations in the rpoB hot-spot region. No mutation was detected in RIF sensitive strains. The specificity and sensitivity of the modified RIFO assay were 100% and 91.5%, respectively, katG315 AGC〉ACC and inhA-15C〉T mutations were found in 40 （60.6%） and 10 （15.2%） of 66 INH resistant strains, respectively; 7.6% of INH-resistant strains had mutations in both of these genes. Therefore, a combined use of both katG315 and inhA-15 identified 68.2% of INH-resistant strains. The Beijing genotype accounted for 91.7% of total strains and was further subdivided into ＂modern＂ （76.6%） and ＂ancestral＂ （23.4%） group. There is no significant difference between ＂ancestral＂ and ＂modern＂ group in prevalance of drug resistance-associated gene mutations. Conclusions The hot-spot region of rpoB gene can be used as genetic marker for detection of RIF resistant strains; a combined use of both katG315 and inhA-15 can improve the detection rate of I NH resistant strains; the Beijing genotype is prevalent in Beijing, China; the modified RIFO assay can be a practical tool for rapid detection of RIF resistant and MDR isolates in the routine diagnostic work.     

呼吸机相关性肺炎患者病原菌分布及危险因素分析

目的 了解呼吸机相关性肺炎（ventilator-associated pneumonia, VAP）患者病原菌分布,并分析其危险因素,为呼吸机相关性肺炎防治提供依据。方法 收集2019年1月—2021年12月在遂宁市中心医院接受机械通气治疗患者,以拔管48 h内出现肺部感染性肺炎41例患者为VAP组,拔管48 h未内出现肺部感染性肺炎135例患者为非VAP组。收集两组患者的临床资料,了解VAP分布特点以及影响VAP发生的相关因素。结果 机械通气患者VAP发生率为23.30%(41/176),从41例VAP患者痰培养液中分离出59株病原菌,其中革兰阴性菌37株（占62.71%）。单因素分析显示,VAP组侵入性操作、胃肠道反流及误吸、合并低蛋白血症、使用抑酸剂及采用平卧患者占比高于非VAP组,差异有统计学意义（P<0.05）,VAP组患者的抗菌药物使用时间、机械通气时间长于非VAP组,差异有统计学意义（P<0.05）,年龄、急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（acute physiology and chronic health evaluationⅡ,APACHEII）、插管次...     

耐药肺结核的病因及治疗

目的总结分析耐药肺结核的原因及左旋氧氟沙星在耐药肺结核治疗中的作用。方法对142例耐药肺结核患者的临床资料进行回顾性分析,并探讨左旋氧氟沙星在耐药肺结核治疗中的作用。结果142例耐药肺结核患者单耐异胭肼26例,单耐利福平12例,同时耐异烟肼、利福平34例,同时耐异烟肼、链霉素、乙胺丁醇12例,同时耐利福平、链霉素10例,同时耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇14例,同时耐异烟肼、利福平、链霉素34例。其原因为方案不合理56例,自行停药32例,由药物引起的不良反应而停药20例,医源性因素34例。含左旋氧氟沙星治疗方案症状消失62例,症状明显吸收58例,痰菌阴转率65％,两者相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论耐药肺结核的原因有医生、患者和药物三方面的因素,左旋氧氟沙星在治疗耐药肺结核中有重要作用。     

结核分支杆菌临床分离株多耐药特点研究

目的 测定武汉和海口结核分支杆菌分离株对５种抗结核药的ＭＩＣ并分析其耐药特征。方法 ＢＡＣＴＥＣ技术和改良罗氏培养用于ＭＩＣ的测定。结果 ６６株结核菌对ＩＨＮ,ＳＭ,ＰＡＳ,ＥＭＢ和ＥＦＰ的耐药率分别是３９．４％,２４．２％,１６．７％,２４．２％和３７．９％。武汉和海口分离株的耐药率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）。总耐药率为５７．６％。多耐药率为４２．２％。多耐药株占总耐药株的７３．７％。多耐药菌     

一起由两种罕见血清型副溶血性弧菌引起食物中毒事件分析

目的 分析一起由两种罕见血清型混合感染引起的副溶血性弧菌食物中毒病原学的检测结果,为食物中毒病原学检查途径提供依据。方法 对一起在龙门县人民医院就诊食物中毒事件的9例患者采集其肛拭子样本,参照《食品微生物学检验副溶血性弧菌检验》( GB 4789.7—2013) 等标准进行病原学分析鉴定。结果 本次事件出现临床症状者9例,其中≤20岁2例,20~<40岁1例,40~<60岁4例,≥60岁2例;9份肛拭子样本检出8株副溶血性弧菌,血清分型O2:K28构成比占25.00%(2/8);O8:K21构成比占75.00%(6/8);经PFGE分子分型,2株O2∶K28血清型(VP18171、VP18175)相似度为66.7%;3株O8∶K21血清型(VP18172、VP18173、VP18176)相似度为100.0%,与另外3株O8∶K21血清型(VP18177、VP18174、VP18170)相似度为88.4%~95.2%;药敏试验结果显示,除有1株菌株对氨苄西林、头孢唑林二重耐药、1株菌株对氨苄西林耐药、3株菌株对头孢唑林耐药外,其它菌株对所有测试药物均敏感,无多重耐药现象。结论 此次食物中毒是由O2:K28和O8:K21这两种罕见血清型的副溶血性弧菌混合感染引起的。     

阴道白念珠菌毒力因子表达水平及与耐药的相关性

目的 了解复发性念珠菌性阴道炎（RVVC）患者与阴道白念珠菌定植者的阴道白念珠菌的生物膜、水解酶和菌丝壁蛋白1(HWP1)基因等毒力因子的体外表达水平及其耐药性,初步探究白念珠菌致病性和耐药性与毒力因子之间的关系,为进一步探明白念珠菌引起的RVVC的致病和耐药机制提供资料。方法 前瞻性收集分离来源于成年女性RVVC患者和阴道白念珠菌定植者的100株阴道白念珠菌,采用酵母样真菌药物敏感性试剂盒检测对5种常用抗真菌药物的敏感性,采用结晶紫染色法检测其生物膜形成能力,采用牛血清白蛋白平板、卵黄琼脂平板和三丁酸甘油脂平板检测阴道白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶（SAP）、磷脂酶（PL）和脂肪酶（Lip）的活性,采用实时荧光PCR检测HWP1基因的表达。结果 5种常用抗真菌药物中至少1种耐药的白念珠菌RVVC患者来源有13株,阴道定植者来源有10株;RVVC患者来源菌株的生物膜、3种分泌型水解酶和HWP1基因体外表达水平均高于阴道定植者来源菌株（均P<0.05）,两组在生物膜形成强弱、3种水解酶表达高低等定性角度,差异均有统计学意义（均P<0.05）;耐药性菌株生物膜表达水平高于非耐药性...     

PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌耐药性

目的：探讨耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药性的关系以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(poly merase chain reaction-single strand cinfomlation polymorphism，PCR-SSCP)方法的临床应用价值。方法：用PCR-SSCP方法检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比。结果：经常规药敏试验检测，58株结核分枝杆菌临床分离株中共有41株耐药，其中，耐异烟肼(INH)为35株，高耐药株27株；耐利福平(RFP)为31株，高耐药株24株；耐链霉素(SM)有31株，高耐药株26株。同时耐3种药物的有21株(51．2％)，耐2种药物的14株(34．1％)，单耐药株6株(14．6％)．PCR-SSCP方法对58株临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变的检测率为40％(23／58)，45％(26／58)，38％(22／58)，其中检出3个基因同时突变的有13株(32％)，2种基因突变的12株(29％)，1种基因突变的有10株(23．8％)．常规药敏试验与PCR-SSCP法检出结核分枝杆菌同时耐3种药物的符合率为61．9％(13／21)，检出耐2种药物的符合率为85．70k，(12／14)，检出耐1种药物的符合率为50％(3／6)．高耐药株中突变率为80．5％(62／77)，低耐药株中突变率为60％(12／20)．结论：PCR-SS-CP方法对耐2种以上药物的结核杆菌检出率较高，且耐药基因突变率随着耐药浓度增高而增高。将PCR-SSCP法与药敏试验联合应用可互相弥补，已成为临床指导用药的好方法。