地塞米松对原代培养胎盘绒毛滋养细胞11β-HSD2表达影响的研究

目的 探讨地塞米松(DEX)对原代培养的早产胎盘绒毛滋养细胞11β-羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达的影响.方法 采用酶消化法和组织块培养法进行早产胎盘原代绒毛滋养细胞培养、纯化和鉴定;用DEX(100 nmol/L)模拟两疗程糖皮质激素给药干预原代堵养的绒毛滋养细胞,荧光定量PCR和Western blot免疫印迹法检测滋养细胞11β-HSD2 mRNA及蛋白表达情况;此外在DEX干预的同时加入RU486(1 μmol/L),检测滋养细胞11μ-HSD2 mRNA和蛋白表达情况.结果 DEX干预原代培养滋养细胞,培养1 d后11β-HSD2 mRNA表达开始上升.第2 d和第3 d继续升高(P<0.05),第4 d改为无药物培养液后表达明显下降,第5 d～7 d重复给药后再次升高(P<0.05);在DEX干预的同时加入RU486(1μmol/L)共同作用,可见每天滋养细胞11β-HSD2蛋白和mRNA表达下降不显著(P>0.05).结论 重复给予DEX具有刺激原代培养的早产胎盘绒毛滋养细胞增加11β-HSD2蛋白和mRNA表达的作用}故早产胎盘滋养细胞可以通过词节11β-HSD2表达起到保护胎儿的屏障作用.     

11β-羟类固醇脱氢酶1抑制剂改善肥胖大鼠胰岛素抵抗机制的初步研究

目的研究11β-羟类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）抑制剂对饮食诱导肥胖（DIO）大鼠胰岛素敏感性的影响及其可能的机制。方法选择24只雌性SD大鼠为研究对象,随机分为11β-HSD1抑制剂组（n=12）和对照组（n=12）;每组再按食物不同分为普食组（n=6）和高脂组（n=6）。DIO造模成功后,抑制剂组大鼠予11β-HSD1抑制剂（20 mg/kg）灌胃,对照组大鼠给予生理盐水灌胃（20 mg/kg）,2次/d,持续10 d;抑制剂组在灌胃前后分别称体质量,之后分别行腹腔葡萄糖耐量试验（IPGTT）,采血时间点分别为0、15、30、60和120 min,观察血糖及胰岛素敏感性的变化。采用Real-time PCR测定肝脏11β-HSD1、过氧化物酶体增殖剂激活受体-α（PPAR-α）、PPAR-γ和葡萄糖激酶（GcK）mRNA的表达。结果 11β-HSD1抑制剂灌胃后结果显示：抑制剂高脂组大鼠的体质量、血糖和胰岛素水平较灌胃前均有下降;抑制剂普食组大鼠肝脏11β-HSD1的表达上调;抑制剂组和对照组的PPAR-α、PPAR-γ、GcK mRNA的表达均升高,与普食组比较,高脂组升高更明显（P〈0.01）。结论 11β-HSD1抑制剂可减轻大鼠体质量、改善DIO大鼠的胰岛素抵抗和增加胰岛素敏感性,这可能与增加葡萄糖的利用、改善脂代谢有关。     

妊娠期接触糖皮质激素对子代大鼠海马SGK mRNA表达的影响

目的:研究妊娠期大鼠接触糖皮质激素(GCs)对子代大鼠海马组织血清和糖皮质激素调节蛋白激酶(SGK)表达的影响,并初步探讨其可能原因。方法:根据大鼠发情周期进行合笼,次晨阴道涂片发现精子作为受孕0.5 d。孕鼠随机分为对照组和地塞米松组,每组10只。地塞米松组大鼠在妊娠第14 日起皮下注射地塞米松 0.1 mg/ (kg·d) ,对照组注射等量生理盐水。取出生后1、7和42 d的子代大鼠海马组织,采用real-time PCR法检测SGK和糖皮质激素受体(GR)mRNA表达情况。结果:地塞米松组子代出生时体质量明显低于对照组,随后出现追赶性生长;地塞米松组子代在出生后1、7、42 d,其海马组织SGK 和GR mRNA表达较对照组明显减少(P<0.05)。结论:妊娠晚期接触GCs可使子代大鼠海马SGK和GR的基础表达降低。     

游离脂肪酸减弱海马对HPA轴的负反馈调控

目的 探讨短期血浆游离脂肪酸(FFA)升高是否通过改变海马11β-羟类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)或诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达,导致HPA轴的激活.方法 将20只成年雌性SD大鼠分成两组,一组输注20%脂肪乳(FFA组,n＝10),另一组输注0.9%生理盐水作为对照组(NS组,n＝10).输液3h后断头处死大鼠、取血、摘取海马.结果 (1)输注脂肪乳能够激活HPA轴.(2)输注脂肪乳后海马CA4亚区锥体细胞的11β-HSD1 mRNA水平以及蛋白表达水平均明显减少.但是FFA组海马CA4亚区锥体细胞的iNOS mRNA水平以及蛋白表达水平却明显增加.(3)两组间糖皮质激素受体与盐皮质激素受体的mRNA水平以及蛋白表达水平无明显差异.结论 提示FFA水平升高能够激活HPA轴,其激活机制可能与FFA下调海马局部11β-HSD1以及上调iNOS的表达,减弱了海马对HPA轴的抑制调控有关.     

Antenatal dexamethasone downregulates toll-like receptor 4 in neonatal rats with necrotizing enterocolitis

目的 观察产前使用地塞米松(dexamethasone,DEX)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)发生率及肠道Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)表达的影响,探讨其对NEC的保护作用及可能的机制.方法 实验分为正常对照组、产前地塞米松干预组(DEX组)、产前生理盐水干预组(normal saline,NS组)3组,于孕16、17、18 d时DEX组孕鼠肌肉注射DEX 0.5 mg/(kg·d),NS组每天注射NS0.3 ml.DEX组及NS组所生新生鼠建立NEC 动物模型.正常对照组不予处理.于第5天处死新生鼠,观察近回肓部肠组织病理变化并做评分;免疫组化法检测TLR4蛋白的表达;其余小肠部分Q-PCR法检测TLR4 mRNA的表达.结果 与NS组相比,DEX组新生鼠NEC发生率明显降低(P＜0.01).正常对照组未出现NEC症状,NS组新生鼠出现典型的NEC症状,DEX组NEC症状比NS组出现得更晚、更轻;与正常对照组相比,DEX组和NS组肠组织病理学评分及TLR4表达显著增高(P＜0.05);与NS组相比,DEX组肠组织病理学评分及TLR4表达显著降低(P＜0.05).结论 产前使用DEX对NEC大鼠具有保护作用,其机制可能是通过降低TLR4的表达从而发挥抗炎效应.     

大鼠妊娠期肥胖对雌性子代发生PCOS的影响

目的探讨孕鼠肥胖对雌性子代大鼠发生多囊卵巢综合征(PCOS)的影响和可能机制。方法子代实验组为高能饲料喂养诱导的肥胖妊娠期大鼠与正常雄性大鼠合笼后出生的雌性仔鼠,子代对照组为普通的饲料喂养的雌性大鼠与正常雄性大鼠合笼后出生的雌性仔鼠。两组雌性仔鼠(子代对照组17只,子代实验组19只)生长至14~16周处死,取卵巢组织观察两组仔鼠卵巢大体形态并进行HE染色,取静脉血检测大鼠血清睾酮、胰岛素、空腹血糖和血脂水平。蛋白印记检测卵巢组织ERK1和ERK2的表达。结果高脂喂养3周后,母代实验组体重明显大于母代对照组(P0.05);子代实验组卵巢呈多囊性改变,子代实验组血糖和雄激素均高于子代对照组(P0.05)。与子代对照组相比,子代实验组ERK1和ERK2的表达均升高(P0.05)。结论母鼠妊娠期肥胖可能是子代成年期发生PCOS的一个高风险因素。     

11β-HSD1和11β-HSD2在妊娠期糖尿病患者胎盘组织中的差异表达及临床意义

目的 研究妊娠糖尿病患者胎盘组织中11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD1)和11β-HSD2基因和蛋白表达的变化及意义.方法 选择妊娠期糖尿病(GDM)和糖耐量正常孕妇(NGT)各30例,化学发光法测定皮质醇、胰岛素的水平,免疫组织化学法检测11β-HSD1和11β-HSD2在胎盘的表达部位,分别运用荧光定量PCR(real time PCR)和Western blot法测试11β-HSD1和11β-HSD2基因和蛋白水平的差异表达.结果 与NGT组相比,GDM组空腹胰岛素、HOMA-IR、胰岛素分泌指数、母血皮质醇水平明显增高(P<0.05),而空腹血糖、胎儿脐血皮质醇则差异无统计学意义(P>0.05).1β-HSD1和11β-HSD2均在胎盘中有表达,表达部位及水平不同.real time-PCR和Western blot检测结果提示GDM组胎盘11β-HSD1 mRNA和蛋白的表达明显低于NGT组(P<0.05),11β-HSD2 mRNA明显高于NGT组(P<0.05),而蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 妊娠期糖尿病胎盘组织11β-HSD1和11β-HSD2差异表达调整免除母体不佳的妊娠环境将会给胎儿造成的长远伤害.     

产前使用地塞米松对坏死性小肠结肠炎新生鼠Toll样受体4表达的影响

目的观察产前使用地塞米松(dexamethasone,DEX)对新生大鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocoli-tis,NEC)发生率及肠道Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)表达的影响,探讨其对NEC的保护作用及可能的机制。方法实验分为正常对照组、产前地塞米松干预组(DEX组)、产前生理盐水干预组(normal saline,NS组)3组,于孕16、17、18 d时DEX组孕鼠肌肉注射DEX 0.5 mg/(kg.d),NS组每天注射NS 0.3 ml。DEX组及NS组所生新生鼠建立NEC动物模型。正常对照组不予处理。于第5天处死新生鼠,观察近回盲部肠组织病理变化并做评分;免疫组化法检测TLR4蛋白的表达;其余小肠部分Q-PCR法检测TLR4 mRNA的表达。结果与NS组相比,DEX组新生鼠NEC发生率明显降低(P<0.01)。正常对照组未出现NEC症状,NS组新生鼠出现典型的NEC症状,DEX组NEC症状比NS组出现得更晚、更轻;与正常对照组相比,DEX组和NS组肠组织病理学评分及TLR4表达显著增高(P<0.05);与NS组相比,DEX组肠组织病理学评分及TLR4表达显著降低(P<0.05)。结论产前使用DEX对NEC大鼠具有保护作用,其机制可能是通过降低TLR4的表达从而发挥抗炎效应。     

11β-羟基类固醇脱氢酶-1在慢性温和应激抑郁大鼠海马组织中的表达

目的 应用慢性温和不可预知刺激( CUMS)建立抑郁症动物模型,探讨大鼠海马组织中11β-羟基类固醇脱氢酶-1(11β-HSD1)蛋白表达以及抑郁症的发病机制.方法 将24只Sprague-Dawley(SD)大鼠分为正常对照组和抑郁模型组,12只/组.建立CUMS模型后,分别采用体质量检测、糖水消耗和旷场试验评估大鼠行为学改变;采用实时荧光定量PCR方法检测大鼠海马组织11β-HSD1基因转录水平;采用组织免疫荧光和蛋白免疫印迹方法检测11 β-HSD1蛋白表达.结果 干预前,两组大鼠体质量和糖水消耗差异无统计学意义(P＞0.05).干预后,CUMS组大鼠体质量、糖水消耗、水平得分和垂直得分均较对照组显著降低(P＜ 0.05,P＜0.01);与对照组相比,CUMS组大鼠海马11β-HSD1 mRNA转录水平下降(31±9)％,蛋白表达显著降低(P＜0.05),11β-HSD1免疫阳性细胞数[(92±11)个]较对照组[(223±13)个]明显下降,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 慢性温和不可预知应激致大鼠产生抑郁行为并引起海马组织11 β-HSD1表达显著降低,其发生机制可能与体内11β-HSD1低表达及糖皮质激素代谢紊乱有关.     

医疗机构“管办分离”的经济法原理分析

目的:探讨高浓度葡萄糖刺激下糖皮质激素对大动脉内皮细胞11β羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)基因表达的影响.方法:将猪髂动脉内皮细胞培养于高糖(30 mmol/L)中,分别加入不同浓度糖皮质激素刺激,用RT-PCR法检测11β-HSDI,11β-HSD2mRNA表达情况,Western-blot方法检测11β-HSD1,11β-HSD2蛋白表达情况.结果:正常对照组中,仅有少量的11β-HSD1 mRNA及蛋白表达,高糖状态下,11β-HSD1 mRNA和蛋白表达升高,且随着可的松浓度的增加而增加(P<0.05);高糖状态下,11β-HSD2 mRNA和蛋白表达元明显变化.结论:糖皮质激素使高糖培养下的动脉内皮细胞11β-HSD1表达增加,可能与糖尿病血管病变的发生发展有关.     

甲状腺激素对新生大鼠海马11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型表达的影响

目的:探讨在大鼠脑的晚期发育过程中,甲状腺激素对海马组织中糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)表达的影响及意义.方法:将妊娠末期SD母鼠用丙基硫氧嘧啶(PTU,50mg/d)灌胃,制造孕晚期甲状腺功能低下的模型;应用Western免疫印迹法,检测实验性妊娠晚期甲状腺功能低下对新生大鼠海马组织11β-HSD1表达的影响;应用薄层层析法和Western免疫印迹法,观察三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine,T3)和人工合成的糖皮质激素(Dex)对体外培养的新生大鼠海马神经元11β-HSD1活性和蛋白的影响.结果:妊娠晚期甲状腺功能低下的母鼠分娩的新生鼠海马组织11β-HSD1酶蛋白的表达量比对照组降低41.6%.T3(10-9、10-8、10-7mol/L)及Dex(10-7mol/L)分别上调原代培养的新生大鼠海马神经元中11β-HSD1酶的活性达29.4%、45.6%、60.9%、39.8%,分别上调酶蛋白的表达量达26.0%、43.2%、64.9%、41.1%,而且T3与Dex之间表现出显著的协同效应,Dex(10-7mol/L) T3(10-7mol/L)组上调该酶活性达114.1%,上调该酶蛋白质表达达123.3%.结论:T3可以单独或与糖皮质激素协同作用上调11β-HSD1酶的蛋白表达和活性,从而进一步增加海马组织局部有活性的糖皮质激素的水平,这可能是甲状腺激素调节脑发育成熟的机制之一.     

11β-羟类固醇脱氢酶1型在小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系NIT-1中的表达

目的 探讨 11β-羟类固醇脱氢酶 1 型(11β-HSD1)在 C57BL/6J 小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系 NIT-1 中的表达及其生物学意义.方法 以11β HSD1 肝脏组织中的表达为阳性参照,RT-PCR 法和 Western blot 法检测小鼠胰腺组织中 11βHSD1 mRNA 和蛋白表达.细胞免疫化学法检测 NIT-1 细胞中 11β-HSD1 的分布与表达,RT-PCR 法和Western blot 法检测 NIT-1 细胞中 11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达.结果 ①在正常 C57BL/6J 小鼠胰腺组织中有 11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达,其表达量均低于肝脏组织(均P<0.01).②细胞免疫化学染色示 NIT-1 细胞胞质见棕黄色染色阳性颗粒,同时 NIT-1 细胞中有11β-HSD1 mRNA 和蛋白表达.结论 小鼠胰腺组织和胰岛β细胞系 NIT-1 中有11β-HSD1 基因表达,为研究糖皮质激素代谢对胰岛细胞功能的影响以及其它潜在的生理功能,提供了一条研究途径.     

妊娠期染毒PFOS对子代成年雄鼠生殖毒性作用及机制探讨

目的 探讨妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄鼠Leydig细胞（adult Leydig cell,ALC）合成睾酮的影响。方法 对妊娠第12 d的SD大鼠采用灌胃方式染毒PFOS（5 mg/kg),1次/d,连续8 d。仔鼠出生后第70 d (PND70),观测子代雄鼠体质量、睾丸系数、精子数量、血清睾酮浓度,并采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾酮合成途径中相关因子 mRNA 的相对表达量。结果 与对照组相比,染毒组子代雄鼠体质量降低（P<0.001）;睾丸系数增高（P<0.001）;精子数量及血清睾酮浓度降低（P<0.05）;ALC中睾酮合成相关基因类固醇能急性调控因子（Star基因）、清除因子受体类 B 成员1（Scarb1基因）、P450scc编码基因（Cyp11a1）、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD3）编码基因（Hsd17b3）的mRNA表达均下降,差异有统计学意义(P<0.05),而胰岛素样生长因子-1基因（Igf1）和胰岛素样因子-3基因（Insl3）的mRNA表达差异无统计学意义。结论 妊娠期染毒PFOS可抑制子代雄鼠睾酮合成途径中相关基因的表达,降低子代雄鼠睾丸ALC合成睾酮的功能。     

宫内发育迟缓胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK基因的表达变化

目的宫内发育迟缓(IUGR)是胰岛素抵抗的独立危险因素,通过检测IUGR胎鼠肝脏糖代谢相关酶的表达,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的分子机制。方法通过孕期蛋白质营养不良法建立大鼠IUGR模型,孕21天时剖宫产,测量胎鼠的体重和肝重,采用RT-PCR和蛋白印迹技术检测胎鼠肝脏PGC-1和PEPCK的mRNA及蛋白表达的变化。结果与正常对照相比,IUGR胎鼠肝脏PGC-1的mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.01),肝中PEPCKmRNA的表达也明显增高(P<0.01)。结论IUGR胎鼠肝脏PGC-1表达增加诱导了糖异生关键酶PEPCK的表达,促进肝脏糖异生,这是IUGR鼠成年后发生胰岛素抵抗的原因之一。     

妊娠期接触糖皮质激素对子代大鼠心肌血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1表达和心脏功能的印迹效应

目的 揭示妊娠期暴露于糖皮质激素(glucocorticoids,GCs)对子代大鼠心脏功能的印迹效应,探索GCs对子代心肌保护性因子的调节作用及其可能机制.方法 构建妊娠后期GCs暴露大鼠模型,通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察子代心肌缺血再灌注损伤后的梗死程度;实时定量PCR检测心肌保护因子血清和糖皮质激素调节的蛋白激酶1(Sgk1)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)受体2(Crhr2)、CRH家族肽urocortin (Ucn)和Ucn2等基因的表达;蛋白质印迹分析检测SGK1蛋白的表达;亚硫酸氢盐处理后测序确定Sgk1基因启动子的甲基化水平.结果 妊娠期GCs暴露大鼠子代出生时和成年后体质量减轻(P＜0.01),子代雄性大鼠心肌对缺血再灌注损伤的耐受性下降(P＜0.01);SGK1的mRNA和蛋白在子代雄性大鼠心肌中的表达降低(P＜0.01或P＜0.05);Ucn和Ucn2在子代雌性大鼠心肌中的表达下降(P＜0.05);Sgk1基因启动子区域存在多个CpG岛,且近端CpG岛的甲基化水平在妊娠期GCs暴露的子代雄性大鼠心肌中升高(P＜0.01).结论 妊娠期GCs暴露可能通过下调心肌保护因子SGK1的表达对子代雄性大鼠心肌功能产生印迹效应,而Sgk1基因启动子区域CpG岛的高甲基化改变可能是介导GCs对Sgk1的印迹效应的重要机制.     

血管紧张素Ⅱ1型受体在孕期糖尿病大鼠子代肾脏中的表达

目的探讨孕期糖尿病大鼠子代肾脏血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1receptor,AT1R)在子代高血压发生中的作用及其机制。方法将20周龄SD雌性大鼠20只(体质量250~280 g)分别与20只SD雄性大鼠(体质量250~280 g)进行交配。将次日见阴栓的雌鼠视为孕鼠(阴栓为白色结晶状颗粒),得到12只孕鼠,分为糖尿病组孕鼠和对照组孕鼠,每组6只。糖尿病组孕鼠在孕期第0天单次腹腔注射链菌霉素(STZ)35 mg/kg,对照组孕鼠注射等体积生理盐水。采用鼠尾无创血压测量法持续监测子代大鼠血压;分别从糖尿病组孕鼠和对照组孕鼠的子代大鼠中各随机选取6只20周龄雄性大鼠(体质量250~280 g)用于实验。代谢笼测定24 h尿量,肾上腺动脉灌注AT1R阻断剂(坎地沙坦)测定尿钠排泄;qRT-PCR检测大鼠肾脏AT1R的mRNA表达;免疫印迹检测大鼠肾脏AT1R的蛋白表达。结果 12、16、20、24周龄时,糖尿病组子代大鼠血压均高于同龄期对照组子代大鼠[分别为(118±4)vs(105±3),(124±2)vs(114±2),(135±3)vs(118±2),(140±4)vs(120±3)mm Hg,P<0.05]。24 h尿液分析结果显示,STZ组子代大鼠的基础尿量及尿钠排泄率明显低于对照组子代大鼠[(558.8±40.5)vs(764.3±87.6)μmol/(kg·d),P<0.05]。肾上腺动脉灌注AT1受体阻断剂后,糖尿病组子代大鼠的排钠利尿作用明显高于对照组[(1 560±87)vs(760±60)μL/min,P<0.05],其肾脏AT1R的蛋白表达及mRNA均显著高于对照组[(1.27±0.08)vs(0.57±0.05),(1.2±0.1)vs(0.5±0.2),P<0.05]。结论孕期糖尿病导致大鼠子代血压升高,其可能机制是子代大鼠肾脏AT1R的蛋白表达增高,体内存在水钠潴留所致。     

共轭亚油酸对妊娠期糖尿病大鼠胎盘脂联素基因表达影响的研究

目的:探讨共轭亚油酸对妊娠期糖尿病大鼠胎盘脂联素基因表达水平的影响。方法:育龄雌性SD大鼠受孕后随机分为正常妊娠组,妊娠期糖尿病组,共轭亚油酸治疗组。腹腔内注射45mg/kg链尿佐菌素,建立妊娠期糖尿病模型。打药3d后用共轭亚油酸3.0g/(kg·d)灌胃至孕19d,建立共轭亚油酸治疗组模型。采用葡萄糖氧化酶法测定血糖;采用RT-PCR技术检测胎盘脂联素基因mRNA的表达水平,并进行半定量分析。结果:(1)孕前3组血糖差异无统计学意义;孕3d后妊娠期糖尿病组、共轭亚油酸治疗组血糖水平显著高于正常妊娠组,妊娠期糖尿病组与共轭亚油酸治疗组差异无统计学意义;孕19d后妊娠期糖尿病组血糖水平显著高于正常妊娠组,共轭亚油酸治疗组血糖水平显著低于妊娠期糖尿病组,但仍高于正常妊娠组;(2)胎盘组织中有脂联素基因表达。(3)妊娠期糖尿病组胎盘脂联素基因mRNA的表达水平显著低于正常妊娠组;共轭亚油酸治疗组胎盘脂联素基因mRNA的表达水平显著高于妊娠期糖尿病组,但仍低于正常妊娠组。结论:(1)共轭亚油酸可降低妊娠期糖尿病大鼠血糖水平;(2)胎盘部位有脂联素基因表达,妊娠期糖尿病病理状态可影响脂联素基因在胎盘的表达水平;(3)共轭亚油酸有上调脂联素基因表达水平的作用,可改善妊娠期糖尿病大鼠的糖脂代谢。     

胚胎期地塞米松暴露对子代大鼠脾脏糖皮质激素受体亚型生成的影响

目的探讨胚胎期地塞米松(DEX)暴露对子代大鼠脾脏组织糖皮质激素受体(GR)亚型(α和β)m RNA生成的影响及可能的机制。方法地塞米松组母鼠孕期第3周DEX[0.2 mg/(kg·d)]干预,生理盐水组给予生理盐水,QRT-PCR检测两组成年子代鼠脾脏GR基因不同启动子的调用和GRα、GRβmRNA的表达水平。RT-PCR分析GR基因不同启动子exon1s与GRα、GRβmRNA之间的关联;QRT-PCR对exon1s-GRmRNA与GRα、GRβmRNA表达水平定量,并分析它们间的关联强度。结果地塞米松组子代鼠出生体重明显低于生理盐水组(P<0.05)。与生理盐水组比较,地塞米松组脾脏exon1.1-GRmRNA、exon1.6-GRmRNA、exon1.10-GRmRNA和exon1.11-GRmRNA表达水平显著降低(P<0.05),exon1.7-GRmRNA表达显著升高(P<0.05);GRαmRNA亚型表达水平显著降低(P<0.05),GRβmRNA亚型表达无显著改变。PCR电泳结果显示,exon1.1-GRαmRNA、exon1.4-GRαmRNA、exon1.5-GRαmRNA、exon1.6-GRαmRNA、exon1.6-GRβmRNA、exon1.7-GRβmRNA、exon1.10-GRαmRNA、exon1.10-GRβmRNA、exon1.11-GRαmRNA和exon1.11-GRβmRNA有扩增。exon1.1-GRmRNA、exon1.6-GRmRNA、exon1.10-GRmRNA和exon1.11-GRmRNA表达量分别与GRαmRNA成正相关(r分别为0.639、0.768、0.804、0.647,P<0.05);exon1.6-GRmRNA、exon1.10-GRmRNA和exon1.11-GRmRNA分别与GRβmRNA表达量成正相关(r分别为0.656、0.534、0.569,P<0.05)。结论胚胎期暴露于地塞米松,导致子代鼠脾脏GRmRNA亚型生成的改变,这种改变可能来源于GR基因不同启动子的差异化调用。     

FXR、CYP7A1在妊娠期肝内胆汁淤积症孕鼠胆汁酸代谢中的作用

目的分析法尼醇受体（FXR）及其靶基因胆固醇7α羟化酶（CYP7A1）在妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP）孕鼠肝脏的表达情况，探讨FXR与CYP7A1在ICP发病机制中的作用。方法用随机数字表法将30只孕15d的SD大鼠分成2组：生理盐水（NS）组和苯甲酸雌二醇（estradiol benzoate，EB）组，每组15只。用药前和刚药后第5天分别测定血清中ALT、AST、ALP、TBA水平，同时观察肝脏形态学变化，并应用RT—PCR和Western blot分别检测肝脏FXR、CYP7A1两者mRNA和蛋白的表达。结果EB组用药后各血清生化指标比用药前显著升高（P〈0．01），NS组用药前后无明显变化（P〉0．05）；EB组孕鼠肝脏出现肝内胆汁淤积表现，NS组肝脏形态结构正常；EB组FXR和CYP7A1两者的mRNA和蛋白表达均显著高于NS组（P〈0．01）。结论EB诱导的ICP孕鼠肝脏FXR及CYP7A1表达均增加，说明存在胆汁酸合成自身反馈调节障碍，导致胆汁酸合成增加，这可能是ICP发病机制之一。     

双酚A对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响及机制

目的观察双酚A(bisphenol A,BPA)对大鼠未成年Leydig细胞睾酮合成的影响,探讨糖皮质激素受体(GR)、11β羟类固醇脱氢酶(11β-HSD)及类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR)蛋白表达的改变及意义。方法雄性SD大鼠24只,随机均分成4组:正常对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。低剂量组、中剂量组及高剂量组予出生后第21天起分别给予不同剂量[(2.4μg/(kg.d)、1mg/(kg.d)、200mg/(kg.d)]的双酚A灌胃至出生后第35天。正常对照组给予等容积的玉米油灌胃。实验结束时处死大鼠,测量大鼠体重、睾丸重量,光镜及电镜下观察睾丸Leydig细胞的形态学改变,酶联免疫吸附测定法检测血清睾酮浓度,Western-blotting法检测睾丸Leydig细胞GR、11β-HSD及StAR的蛋白表达。结果高剂量组Leydig细胞线粒体肿胀明显。低剂量组大鼠血清睾酮下降(P<0.05)。低剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达升高(P<0.05),中剂量和高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞GR蛋白表达明显降低(P<0.01),高剂量组大鼠睾丸Leydig细胞11β-HSD蛋白及StAR蛋白表达降低(P<0.05)。结论双酚A可以干扰大鼠未成年Leydig细胞的睾酮合成,GR、11β-HSD及StAR的蛋白表达改变可能是其重要机制。