胆固醇结石病人肝脏SRBI及其转录调节因子LRH-1基因表达的研究

目的:研究胆固醇结石病人BI型清除剂受体(scavengerreceptorBtypeI,SRBI)及其转录调节因子肝脏受体类似物1(liverreceptorhomologue1,LRH-1)的表达,以探讨胆固醇结石发病的机制。方法:对20例胆囊胆固醇结石病人和10例无胆石症对照者测定血清脂质、胆汁成分和计算胆汁胆固醇饱和指数。以实时定量PCR法测定肝脏SRBI和LRH-1mRNA的表达量。结果:胆石组胆石平均胆固醇含量(86.68±5.26)%,均为胆固醇结石。胆石组病人血清高密度脂蛋白(HDL)显著低于对照组[(0.86±0.62)mmol/L比(1.42±0.56)mmol/L,P<0.01]。胆石组胆汁胆固醇在总脂中的摩尔百分比和胆固醇饱和指数显著高于对照组[(7.80±2.06)mol%比(5.26±2.80)mol%,P<0.05]。胆石组SRBI基因mRNA表达量与对照组比较显著增高(2.48±0.44比1.00±0.23,P<0.05),胆石组LRH-1表达也高于对照组(2.05±0.29比1.00±0.28,P<0.05)。结论:胆固醇结石病的主要病理生理异常为胆汁胆固醇过饱和。肝脏LRH-1、SRBI表达增高,参与了胆固醇过饱和胆汁形成,并促进了胆固醇结石形成。     

胆囊黏膜ABCG5和ABCG8基因在胆固醇结石病中的作用

目的探讨ABCG5和ABCG8基因在胆囊黏膜中的表达与胆固醇结石病的关系。方法采集28例胆囊胆固醇结石病患者和10例无胆石对照的胆囊黏膜和胆汁、胆石。测定胆汁胆固醇、胆汁酸和磷脂含量;Real-time PCR测定胆囊黏膜中ABCG5和ABCG8的表达量。结果胆石组中胆固醇摩尔百分比和饱和指数均较对照组显著升高(P<0.01);ABCG5和ABCG8的表达呈显著正相关(r=0.55,P<0.01),胆石组中ABCG5和ABCG8的mRNA表达分别是对照组的2.8倍(P<0.01)和1.9倍(P<0.05)。结论胆固醇结石病患者的胆囊黏膜ABCG5和ABCG8基因表达增高,限制了胆囊上皮对胆固醇的吸收,使胆汁过饱和状态得以维持。     

胆固醇结石病人肝脏胆小管侧膜ATP基因表达差异的研究

目的:本研究旨在测定比较胆石病人与对照组肝脏胆小管侧膜转运蛋白表达差异,以探讨胆石病发生的分子生物学机制。方法:研究包括20例胆囊胆固醇结石病人和11例无胆石症的对照。测定血清胆固醇和甘油三酯、胆汁胆固醇、胆汁酸和磷脂含量,采用Carey表计算胆汁胆固醇饱和指数。实时定量PCR法测定肝脏胆小管侧膜转运蛋白(ABCG5、ABCG8、ABCBll和ABCB4)mRNA的表达量。结果:胆石组血清胆固醇低于对照组(P<0.05)。胆石组胆汁胆固醇摩尔百分比和胆固醇饱和指数较对照组显著升高(P<0.01)。胆石组肝脏胆小管侧膜胆固醇转运蛋白ABCG5和ABCG8表达高于对照组,且后者差异具有统计学显著性(ABCG5:31.44±3.17Vs25.72±3.27,ABCG8:27.53±3.06vs17.81±2.23)。ABCBll和ABCB4表达在两组间差异无显著性。结论:本研究显示,胆石病主要病理生理异常为胆汁胆固醇过饱和,与肝脏胆小管侧膜胆固醇转运蛋白ABCG5和ABCG8的mRNA表达增加有关。     

胆囊黏膜ABCG5和ABCG8与胆囊胆固醇息肉关系的研究

目的:研究胆囊黏膜ABCG5和ABCG8的基因表达与胆囊胆固醇息肉发病的关系.方法:收集63例因胆囊疾患而行腹腔镜胆囊切除术患者的胆石、胆汁及部分胆囊黏膜组织,其中胆囊胆固醇息肉32例,胆囊胆固醇结石18例,对照13例(胆囊腺瘤6例,非胆固醇胆囊结石7例),分别测定胆石胆固醇含量,胆汁胆固醇、胆汁酸、磷脂的浓度,实时定量PCR检测胆囊黏膜ABCG5和ABCG8的mRNA表达.结果:胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数较对照组明显增高(P<0.01),结石组胆囊黏膜ABCG5和ABCG8的表达量较息肉组和对照组显著增高,息肉组和对照组ABCG5和ABCG8的表达量差异无统计学意义(P>0.05).结论:胆囊黏膜ABCG5/ABCG8 mRNA的相对低水平表达,可能是导致胆囊胆固醇息肉发病的重要因素之一.     

胆固醇结石病人与正常人胆囊胆汁的蛋白质表达谱比较分析

目的 比较分析胆日同醇结石病人与正常人胆囊胆汁蛋白表达谱的差异,为阐明胆石成因提供实验依据.方法 提取胆固醇结石病人和正常人胆囊胆汁总蛋白,构建相应的双向电泳蛋白质表达谱,应用lmageMaster图像分析软件获得差异蛋白点信息.结果 胆固醇结石病人与正常人胆囊胆汁总蛋白浓度分别为(6.4824±0.3403)mg/ml和(2.3156±0.3064)mg/ml(P<0.01).两组组内蛋白质平均匹配点数分别为465±71和407±85,平均匹配率为71.70%和68.38%,组间269个蛋白质点相互匹配,匹配率为61.70%.胆固醇结石组蛋白表达谱显著差异点34个,16个表达上调,18个表达下调.结论 初步建立了胆固醇结石病人和正常人胆囊胆汁蛋白表达谱.发现两者存在差异蛋白质点,为筛选胆石形成关键调控子提供基础.     

胆结石小鼠肝脏核受体基因LRH-1及其调控基因SRBI的表达

目的:探讨胆固醇结石(GS)小鼠肝脏的核受体基因——肝核受体类似物1(LRH-1)及其调控基因BⅠ型清道夫受体(SRBI)的表达。方法:C57BL/6小鼠40只,均为雌性,10周龄,体重30~35 g。20只为一组,分别予以正常饮食(对照组)及高脂饮食(胆石组)喂养10周后处死。病理切片检查小鼠胆囊壁细胞组织学改变,实时定量PCR法测定肝脏LRH-I及SRBI的表达量。Western blot方法测定肝脏上述基因蛋白的表达量。结果:胆结石小鼠胆囊壁细胞呈现炎性改变。胆石组小鼠LRH-I mRNA及蛋白表达均高于对照组(P0.01),SRBI mRNA及蛋白表达量较对照组升高(P0.01)。结论:小鼠肝脏LRH-1基因的表达异常与胆囊胆固醇结石形成有关,同时SRBI的表达可能与结石形成有关,共同促进了小鼠胆结石的形成。     

基因芯片法检测胆囊胆固醇结石病人肝脏羧肽酶E的表达

目的:利用基因芯片和实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)分析胆囊胆固醇结石病人肝脏中羧肽酶E(carboxypeptidase E,CPE)的mRNA表达,探讨CPE与胆囊胆固醇结石形成可能相关的分子机制。方法:检测病人的血清总胆固醇、三酰甘油以及胆石、胆汁成分测定。正常肝细胞株(HL-7702)为共同参照,用含10 000个cDNA克隆的芯片对8份肝脏标本样品(包括6例胆囊结石和2例无胆囊结石对照)进行基因表达谱对比分析;通过实时PCR验证阳性结果。结果:有效表达基因6 068个,与正常对照组比较,胆固醇结石病人的肝脏有67条差异表达基因,其中CPE基因呈下调表达,经实时PCR验证与芯片筛选结果一致。进一步比较另12例胆固醇结石病人和8例对照组的肝脏组织CPE表达,CPE在胆囊胆固醇结石病人肝脏中的表达也显著低于对照组(39.52±6.21比124.50±36.36,P<0.05)。结论:肝脏CPE表达下降可能与胆囊胆固醇结石的形成有关。     

胆固醇结石患者肝脏核受体基因表达的研究

目的研究胆囊胆固醇结石患者肝脏的核受体基因：肝脏X受体α（liver Xreceptor α，LXRα、法尼醇受体（farnesoid X receptor，FXR）、人类固醇异生物受体（steroid xenobiotic receptor，SXR）及肝受体同类物1（liver receptor homolog 1，LRH-1）的表达，探讨胆固醇结石病的发病机理。方法27例胆囊胆固醇结石患者（胆石组），男6例，女21例，平均年龄（52．44&#177;1．92）岁。10例无胆石症的胆囊息肉患者为对照（对照组），男6例，女4例，平均年龄（47．10&#177;2．73）岁。测定胆石胆固醇成分及血清脂类成分：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-ch）、载脂蛋白（Apo）B和ApoA1和胆汁脂类成分（胆固醇、磷脂和胆汁酸），并计算胆汁总脂和胆汁胆固醇饱和指数。实时定量PCR法测定肝脏LRH-1、FXR、SXR及LXRα基因的表达量。结果胆石组血清中HDL—ch浓度明显低于对照组[（0．93&#177;0．05）mmol／L vs（1．33&#177;0．09）mmol／LD，P〈0．001；ApoA1浓度也低于对照组[（1．19&#177;0．05）g／L vs（1．36&#177;0．06）g／L]，P〈0．05；血清ApoB、TC和TG2组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。胆石组胆汁呈胆固醇过饱和（胆固醇过饱和指数：1．17&#177;0．02 vs 0．79&#177;0．10，P〈0．001）；胆汁胆固醇摩尔百分比浓度较对照组升高[（7．96&#177;0．39）mol％vs （5．26&#177;0．89）mol％]，P〈0．01；胆汁总脂较对照组明显下降[（104．72&#177;10．51）g／L vs （154．24&#177;14．20）g／L]，P〈0．05；胆汁中胆汁酸和磷脂成分2组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。胆石组LRH-1表达高于对照组（14．18&#177;1．80 vs 7．22&#177;2．22），P〈0．05，LXRα、FXR和SXR表达2组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论人类肝脏LRH-1的表达增高与胆囊胆固醇结石形成有关。     

胆固醇结石病人胆囊黏蛋白基因表达差异的研究

目的研究胆固醇结石病人胆囊黏蛋白基因表达差异,以探讨胆石病发生的分子生物学机制。方法对21例胆囊收缩功能良好的胆囊胆固醇结石病人和12例无胆石的对照组,采用RT-PCR 法测定胆囊 MUC1,MUC2,MUC3,MUC4,MUC5AC,MUC5B,MUC6 mRNA 的表达,以GAPDH 作为内参照。结果胆石组胆囊 MUC1,MUC5AC,MUC5B 和 MUC6表达增高(胆石组 vs对照组:MUC1:67.17±14.06vs36.84±10.00,P>0.05;MUC5AC:90.33±10.24vs53.51±9.38,P<0.05;MUC5B:175.19±7.21vs107.54±23.19,P<0.01;MUC6:71.62±14.36vs44.29±12.35,P>0.05)。MUC3表达在两组间差异无统计学意义。本研究在两组间均未检测到 MUC2和 MUC4基因表达。结论胆囊黏蛋白特别是 MUC5表达增加是胆石病的另一个发病因素。     

胆囊黏膜ABCA1的表达和胆囊胆固醇息肉发病关系的研究

目的：研究ABCA1在胆囊黏膜的表达及其表达与胆囊胆固醇息肉发病的关系。方法：收集因胆囊疾患而行腹腔镜胆囊切除术病人的胆石、胆汁、胆囊黏膜及胆囊壁全层组织共计42例,其中胆囊胆固醇息肉15例,胆囊胆固醇结石15例,对照组12例（胆囊腺瘤5例,非胆固醇胆囊结石7例）。分别测定胆石胆固醇含量、胆汁胆固醇、胆汁酸、磷脂的浓度;实时PCR定量检测胆囊黏膜ABCA1、LXRα、RXRα的mRNA表达：胆囊壁全层组织做病理切片;免疫组化显示ABCAl蛋白在胆囊黏膜的表达．结果：胆固醇息肉组胆汁胆固醇饱和指数为1．0±0．2,较对照组胆固醇饱和指数0．6±0．3明显增高,其差别有统计学显著性（P〈0．01）。免疫组化显示ABCA1在胆囊黏膜上皮细胞有明显表达。息肉组、结石组和对照组胆囊黏膜ABCAI、LXRa、RXRα mRNA相对表达量比较,各组之间差异无统计学意义。结论：胆囊黏膜ABCA1的表达可能并不是导致胆囊胆固醇息肉发病的重要原因。     

胆结石小鼠肝脏核受体基因LRH-1及其调控基因CYP7A1的表达

目的:探讨胆固醇结石(GS)小鼠肝脏的核受体基因——肝核受体类似物1(liver receptor homolog 1,LRH-1)及其调控基因胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7-αhydroxylase,CYP7A1)的表达。方法:雌性C57BL/6小鼠40只,分为2组,每组20只,分别予以正常饮食、高脂饮食喂养10周后处死。病理切片检查小鼠胆囊壁细胞组织学改变,实时定量PCR法测定肝脏LRH-1及CYP7A1表达量。Western Blot方法测定肝脏上述基因蛋白的表达量。结果:胆结石小鼠胆囊壁细胞呈现炎性改变。胆石组小鼠LRH-1 m RNA及蛋白表达均高于对照组(P0.01),CYP7A1 m RNA及蛋白表达量较对照组升高(P0.01)。结论:啮齿动物肝脏LRH-1和CYP7A1的表达异常与胆囊胆固醇结石形成有关,可能共同在小鼠胆结石形成中发挥作用。     

胆囊结石病人小肠胆固醇吸收相关基因表达的初步研究

目的 该研究通过分析胆石病人小肠胆固醇吸收相关基因的表达情况探讨小肠胆固醇吸收的遗传凶素在胆石病发生中的作用.方法 研究包括10例胆囊结石病人和7例无胆石症的对照.实时定量PCR法测定近段空肠黏膜胆固醇吸收相关基因mRNA的表达量.结果 胆石组小肠胆固醇吸收相关基因的mRNA表达量与对照组没有统计学差异(NPCIL1:1.15±0.60 vs 0.80±0.29;ABCG5:3.11±2.70 vs 1.92±1.38;ABCG8:3.65±2.08 vs 2.85±1.33;ACAT2:0.30±0.25vs 0.20±0.16;MTTP:12.35±8.10 vs 8.22±5.74,P>0.05).结论 胆石病人小肠胆固醇吸收相关基因表达差异不是胆石病发生的主要遗传因素.     

胆囊结石病胆囊排空与缩胆囊素受体基因表达关系的研究

目的探讨胆石病患者缩胆囊素（ＣＣＫＡ）受体基因表达及其与胆囊排空功能的关系。方法２０例单纯胆囊结石病患者和１０例健康正常人,术前用Ｂ超测定胆囊排空功能,另以８例因意外死亡无胆囊结石患者胆囊标本为测定ＣＣＫＡ受体基因表达的正常对照。ＣＣＫＡ受体ｍＲＮＡ表达的测定用ＲＴＰＣＲ方法。结果胆石病组胆囊排空功能明显异常。胆石病组ＣＣＫＡ受体ｍＲＮＡ表达量（０６３３±０１６７）明显低于对照组（０９４４±０２３０）（Ｐ＜００１）;在胆石病患者中,收缩减弱组的ｍＲＮＡ表达（０５４４±０１２４）又明显低于收缩正常组（０７６８±０１３１）（Ｐ＜００５）,且ＣＣＫＡ受体ｍＲＮＡ表达的变化与胆囊排空率呈显著正相关（ｒ＝０９２５,Ｐ＜００１）。结论胆石病患者胆囊ＣＣＫＡ受体ｍＲＮＡ表达降低,此降低的基因表达与胆石病胆囊排空功能损害有关。     

胆囊结石病人成纤维细胞生长因子-19的血浆含量及胆囊黏膜表达特点

目的:检测胆囊结石病人成纤维生长因子-19(fibroblast growth factor-19,FGF-19)的血浆含量及其在胆囊黏膜的表达量,探讨FGF-19与胆囊舒张收缩功能的关系。方法:对27例胆囊结石病人(男9例,女18例,平均年龄48.5岁),采用实时定量PCR法检测胆囊黏膜FGF-19 mRNA的表达量。采用酶联免疫吸附法测定空腹及脂餐后1.5 h、3.0 h血浆FGF-19的含量。B超检查胆囊收缩功能。结果:按脂餐后1.5 h胆囊排空率(ejection fraction,EF)将胆石病人分为胆囊收缩正常组(EF>60%,n=5),收缩减弱组[EF(30~60)%,n=15]和未收缩组(EF<0.05。结论:部分胆石病人存在胆囊收缩和舒张功能障碍。血浆FGF-19含量变化可反映胆囊收缩和舒张功能异常。     

蛋白酶激活受体-1,2在小鼠急性移植物抗宿主病模型中的表达

目的 研究蛋白酶激活受体-1,2(PAR-1,2)在小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型中的表达.方法 建立小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后aGVHD模型,并用同基因HSCT小鼠作为对照.观察小鼠aGVHD表现;实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白印迹和免疫组织化学法检测移植小鼠各种组织中PAR-1,2在基因和蛋白水平的表达.结果 allo-HSCT小鼠在移植后18～28 d出现了典型的aGVHD临床和病理表现.PAR-1基因在allo-HSCT组小鼠的皮肤、肝脏和小肠组织中的相对表达量较对照组显著增高(皮肤:0.039±0.013和0.008±0.002,P<0.01;肝脏:0.165±0.084和0.017±0.006,P<0.01;小肠:0.215±0.109和0.016±0.009,P<0.01);PAR-2基因在allo-HSCT组小鼠的肝脏和小肠组织中表达较对照组增高(肝脏:0.010±0.003和0.003±0.002,P<0.01;小肠:0.006±0.002和0.003±0.002,P<0.05);PAR-1,2基因在其余器官组织中的表达与对照组比较,差异无统计学意义.PAR-1,2在蛋白水平的表达与基因表达的检测结果一致.免疫组织化学染色显示PAR-1,2主要在aGvHD靶器官的上皮细胞和内皮细胞中表达增强.结论 PAR-1,2表达增高很有可能参与异基因造血干细胞移植后aGVHD的病理生理过程.     

新疆维吾尔族ABCG8和NPC1L1基因多态性与胆囊结石病的关系

目的:研究新疆维吾尔族ATP结合盒G8(ABCG8)基因和尼曼-匹克C1样1蛋白(NPC1L1)基因单核苷酸多态性与胆囊结石病的关系。方法:采集43例新疆维吾尔族胆囊结石病人和96例无胆结石对照病人的外周静脉血,提取基因组DNA。用实时定量PCR的等位基因分型法确定ABCG8基因T400K、Y54C、D19H和NPC1L1基因-762 TC、1679 CG的基因型。结果:在所有病人中,NPC1L1基因1679 G在胆石组与对照组中的分布无统计学差异(32.6%比26.6%,P=0.306);但在女性胆石组中,1679 G频率明显高于对照组(36.7%比19.4%,P0.05)。NPC1L1基因-762 TC位点以及ABCG8基因3个位点在两组间的分布无差异。结论:携带NPC1L1基因1679 G等位基因可能与新疆维吾尔族女性胆石病发病存在相关性。     

The breast cancer resistance protein transporter ABCG2 is expressed in the human kidney proximal tubule apical membrane

The Breast Cancer Resistance Protein (BCRP/ABCG2) is a transporter restricting absorption and enhancing excretion of many compounds including anticancer drugs. This transporter is highly expressed in many tissues; however, in human kidney, only the mRNA was found in contrast to the mouse kidney, where the transporter is abundant. In bcrp/abcg2((-/-)) mice, the expression of two sterol transporter genes, abcg5 and abcg8, was strongly increased in the kidney, perhaps as a compensatory mechanism to upregulate efflux. We found using immunohistochemical analysis clear localization of BCRP/ABCG2 to the proximal tubule brush border membrane of the human kidney comparable to that of other ABC transporters such as P-glycoprotein/ABCB1, MRP2/ABCC2, and MRP4/ABCC4. Hoechst 33342 dye efflux from primary human proximal tubule cells was significantly reduced by the BCRP/ABCG2 inhibitors fumitremorgin C and nelfinavir. Our study shows that in addition to other apical ABC transporters, BCRP/ABCG2 may be important in renal drug excretion.     

Caspase-3和Caspase-8基因沉默保护大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.