阻断抗体对人视网膜胶质细胞黏附于胶原凝胶的作用分析

研究证实视网膜胶质细胞存在于特发性黄斑裂孔眼视网膜前膜上。人视网膜胶质细胞能收缩的特性亦已被证明，且该特性被认为是引起特发性黄斑裂孔的病理机制。     

人视网膜神经胶质细胞原代培养

采用组织消化培养法培养山人视网膜神经胶质(retinal glia,RG)细胞，用免疫组织化学技术对细胞进行鉴定，显示培养细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)，S-100染色阳性。结合透射及扫描电镜观察，证实为人视网膜神经胶质细胞。 （中华眼底病杂志，1995，11：247-249）     

人视网膜胶质细胞的原代培养与鉴定方法

背景 人视网膜胶质细胞在视网膜增生性疾病的研究中有重要作用,以往研究者已成功地培养了人视网膜胶质细胞,但方法学有待进一步改进以达到细胞收获量更大的目的. 目的 建立快速、收获量大且纯度高的视网膜胶质细胞的培养方法,对目标细胞的抗原表达特点进行分析. 方法 取正常人角膜移植供体眼球分离视网膜组织,采用质量分数2％胰蛋白酶和质量分数0.133％胶原酶Ⅵ用二步法消化获取人视网膜胶质细胞,用含质量分数10％胎牛血清的人内皮细胞培养液,其中添加内皮细胞生长因子(β-ECGF)和肝素钠,对分离的细胞进行体外培养,培养皿用纤维黏连蛋白(FN)包被以促进人视网膜胶质细胞贴壁.观察收获的目标细胞的形态特征,采用活体显微镜下形态学观察、常规组织学观察法观察目标细胞的生长,同时采用免疫组织化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白(Vimentin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、S-100、CD34、Ⅷ因子在细胞中的表达以鉴定目标细胞. 结果 应用胰蛋白酶、胶原酶二步消化法可成功获取人视网膜胶质细胞,原代培养的细胞72 h贴壁,第9～10天细胞达到融合状态呈花瓣状;常规组织学观察显示细胞核呈鲜亮蓝色,细胞质(盘膜)呈淡红色,培养细胞GFAP、Vimentin呈强阳性表达,NSE、S100、CD34、Ⅷ因子相关抗原表达呈阴性反应. 结论 应用胰蛋白酶、胶原蛋白酶消化法以及利用10％胎牛血清的人内皮细胞培养基,添加生长因子和肝素钠,并用FN包被培养皿进行体外培养可达到快速、大量分离和纯化人视网膜胶质细胞的目的,鉴定结果提示培养的目标细胞为人视网膜胶质细胞,其形态与以往报道的有所不同,具体特点尚需进一步研究.     

视网膜小胶质细胞与糖尿病视网膜病变的关系

小胶质细胞是视网膜组织中来源于髓系祖细胞并具有免疫活性的一类细胞.正常情况下小胶质细胞处于静息状态,对周围环境起免疫监视作用;组织发生病变时,小胶质细胞活化,参与免疫与炎症反应,一方面可对病变组织起保护与修复作用,另一方面也可加重组织的损伤.小胶质细胞活化是糖尿病视网膜病变的神经病理学特征之一,提示其在病变中发挥重要功能.本文就视网膜小胶质细胞的生物学特性、作用及其活化与糖尿病视网膜病变的关系作一综述.     

人视网膜星形胶质细胞发育及起源的研究

背景 视网膜星形胶质细胞是视网膜主要的神经胶质细胞,其起源及演变过程一直是国内外研究的热点和难点. 目的 探讨人胚胎眼视网膜星形胶质细胞的起源及发育.方法 收集33例自愿终止妊娠的流产人胚胎眼标本,其中8 ～12孕周者20例,15～ 17孕周者2例,19～ 23孕周者4例,25～ 28孕周者4例,30 ～32孕周者3例.对眼球壁切片进行常规组织病理学检查以观察不同胚龄人视网膜发育的形态学变化,分别采用免疫组织化学法及免疫荧光法动态观察不同胚龄人视网膜星形胶质细胞起源位点及发育过程中胶质纤维酸性蛋白( GFAP)表达的变化.结果 人胚6～7周视杯处于视网膜分层发育阶段,9周时视杯内层原无细胞层出现分化不成熟的圆短梭形细胞;胚龄15周时视网膜主要层次可见,分化的细胞增加,但未发现GFAP阳性细胞;胚龄19周视网膜可见梭形细胞从返折部原始神经上皮迁出,并可见这些细胞中GFAP呈阳性表达;胚龄25～ 26周后极部视网膜可见GFAP表达阳性的梭形细胞,这些细胞围绕视网膜血管分布,与血管壁联系密切,邻近锯齿缘处的视网膜内层可见表达GFAP的星形或梭形细胞与睫状体非色素上皮相连,但锯齿缘稍后与赤道区之间并未见GFAP阳性细胞;胚龄28周,视网膜星形胶质细胞呈典型的星状,其突起伸达视网膜内网状层. 结论 人视网膜星形胶质细胞至少存在3个起源位点,即血管前体细胞/周皮细胞、视盘旁原始神经上皮及邻近锯齿缘的睫状体无色素上皮.     

抗增生药物对人视网膜神经胶质细胞伯抑制作用

目的 寻找抑制视网膜、玻璃体内细胞增生的有效药物;明确抗增生药物秋水仙碱、道诺霉素和５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）对体外培养的人视网胶质（ｒｅｔｉｎａｌ ｇｌｉａ,ＲＧ）细胞的作用。方法 用ＭＴＴ法测定秋水仙碱（０．５～１６．０ｕｇ／ｍｌ）、道诺霉素（０．１～３．２ｕｇ／ｍｌ）和５－Ｆｕ（０．５～１６．０ｕｇ／ｍｌ）对体外２人ＲＧ细胞的作用。结果 秋水仙碱（１．０～１６．０ｕｇ／ｍｌ）、道诺霉素（０．２     

视网膜下液体对人视网膜神经胶质细胞生长的刺激作用与PVR关系

研究了２８例孔源性视网膜脱离患者视网膜下液（ＳｕｂｒｅｔｉｎａｌＦｌｕｉｄＳＲＦ）对人视网膜神经胶质细胞（ＲｅｔｉｎａｌＧｌｉａｌＲＧ）生长的刺激作用。结果表明：所有标本通常具有刺激ＲＧ细胞增殖能力，但存在较大范围的活动性，增殖率范围在基线上３６．４～１８１．８％，ＳＲＦ促ＲＧ细胞增殖能力与ＰＶＲ程度呈平行关系，ＰＶＲ在Ｃ级以上，促ＲＧ细胞增殖活力显著性加强（Ｐ＜０．０１）。     

在人羊膜上培养牛视网膜神经胶质细胞的初步探讨

目的　研究在具有完整基底膜的人羊膜上培养牛视网膜神经胶质 (RG)细胞的可能性。方法　用常规培养液进行原代及传代牛RG细胞的培养 ,并以GFAP及S 10 0染色进行免疫组化鉴定。取第 3代或第 4代牛RG细胞 ,以 1 0× 10 5/mL密度接种于羊膜基底膜面进行培养 ,并进行上述同样的鉴定。结果　 ( 1)原代RG细胞GFAP及S 10 0染色阳性细胞分别为 86 2 %和 83 5 % ,传代RG至第 3代时GFAP及S 10 0染色阳性细胞百分数明显增加 ,分别为 92 8% ,90 3 %。 ( 2 )培养的牛RG细胞的羊膜基底膜面大部分细胞阳性着色 ,其GFAP和S 10 0染色阳性细胞分别为 91 4%和90 1%。结论　牛RG细胞可以在人羊膜基底膜面生长。     

星形胶质细胞与糖尿病视网膜病变

视网膜星形胶质细胞分布于神经元与毛细血管之间。在发育过程中,星形胶质细胞的成熟需要血管内皮细胞的诱导。视网膜星形胶质细胞参与血-视网膜屏障的形成,并对其功能进行调控;通过表达谷氨酸转运体参与谷氨酸代谢;通过产生的钙振荡对神经元细胞的活动进行调节;调节大分子物质在胶质细胞间的扩散。此外,星形胶质细胞还具有神经元营养保护功能。糖尿病视网膜病变(DR)发生时,视网膜星形胶质细胞的数量减少,其标志物GFAP的表达量减少、谷氨酸代谢能力减弱、COX-2表达、AR和VEGF表达量增加。由此可以推论:视网膜星形胶质细胞是神经元与血管细胞活动的桥梁。对星形胶质细胞的研究有助于揭示DR中神经元病变与血管病变之间的相互关系。     

人,狗,兔视网膜神经胶质细胞的原代培养

目的 了解同一方法能否培养不同哺乳动物的视网膜神经胶质细胞（ＲＧＣ）。方法 用酶消化法培养人,狗,兔的ＲＧＣ;根据细胞生长特点,电镜和免疫组织化学对照细胞进行鉴定。结果 培养细胞贴壁生长,形态不规则,生长周期较长（４周）电镜下可见细胞内均含有特征性中间丝（直径８～１０ｎｍ）免疫组化显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）和波纹蛋白阳性,证实为ＲＧＣ,结论酶消化法是一种获取ＲＧＣ的可靠方法,用同一     

Cytotoxic effects of antiproliferative agents on human retinal glial cells in vitro

Purpose: Proliferative vitreoretinopathy (PVR) is characterizedby the formation of cellular membranes on the detached retina and also in the vitreous. Glial cellscan be found in epiretinal and subretinal membranes from eyes with PVR, proliferative diabeticretinopathy (PDR), idiopathic macular pucker, uveitis and other diseases affecting theretina. Proliferation and contraction of glial cells appears to play a role in the pathogenesisof PVR. This study is designed to inspect the effectiveness of harringtonine, as well as colchicine,daunomycin and fluorouracil, against cellular proliferation of cultured human retinal glial cellsthat might be involved in the retinal and/or vitreous proliferation. Methods: Cultures of human retinal glial cells were preparedusing the enzyme digesting method. Cells that had been in culture for 2–5 passages were usedin this study. Harringtonine (0.063 g/ml 2.0 g/ml), colchicines(0.5 g/ml 16.0 g/ml), daunomycin (0.1 g/ml 3.2 g/ml) and 5-fluorouracil(0.5 g/ml 16.0 g/ml) were added to cultures of human retinal glial cellsand the proliferation rates of the cells were measured by the MTT method. Results: Harringtonine at the dosage of 0.063 g/mlinduced suppression of cellular growth, but the changes were not statistically significant (p > 0.05).At a dosage ranging from 0.125 g/ml to 2.0 g/ml, harringtonine significantly suppressedcellular growth according to the test (p < 0.01). Likewise, other antiproliferativeagents inhibited cellular growth significantly at a dosage from 1.0 g/ml to 16.0 g/ml(colchicine), 0.2 g/ml to 3.2 g/ml (daunomycin) and 1.0 g/ml to 16.0 g/ml(5-fluorouracil), but not at 0.5 g/ml (colchicine), 0.1 g/ml (daunomycin) and0.5 g/ml (5-fluorouracil). The ID₅₀ were 0.33 g/ml (harringtonine), 3.11 g/ml (colchicine), 0.79 g/ml (daunomycin) and 5.23 g/ml (5-fluorouracil), respectively.Conclusions: Harringtonine was extremely effective ininhibiting human retinal glial cell proliferation, like other antiproliferative drugs such as colchicine,daunomycin and 5-fluorouracil. Harringtonine, therefore, may be a candidate for further studies regardingthe treatment of experimental PVR.     

多焦视网膜电图在视网膜病变中的应用

目的探讨和评价多焦视网膜电图(ERG)对视网膜病变的应用价值。方法应用VERIS4.0视诱发反应图像系统检测了11例(11眼)特发性黄斑裂孔,24例(25眼)视网膜脱离和15例(30眼)视网膜色素变性的多焦ERG。测试野的水平视角为±26.6°,垂直视角为±22.1°,采用Burian-Allen接触镜电极,在8min(分16段)记录103个视网膜部位的反应。结果与正常年龄组相比较,特发性黄斑裂孔,于1～2环N     

EGFR反义寡核苷酸对人视网膜神经胶质细胞迁移的影响

目的:观察表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对人视网膜神经胶质(retinal glial,RG)细胞迁移的影响。方法:人视网膜神经胶质细胞的原代培养,用脂质体(Li-pofectin)作为载体将修饰型EGFR ASODN转染RG细胞后,采用Murphy细胞计数方法评价反义寡核苷酸对人RPE细胞体外迁移的影响。结果:脂质体介导EGFR反义寡核苷酸组与对照组比较,细胞迁移活性受到明显抑制(P<0.05),转染24h后抑制率63.27%。结论:EGFR ASODN能够抑制人RG细胞迁移。     

猪视网膜色素上皮细胞的体外培养与鉴定

目的建立猪视网膜色素上皮（RPE）细胞体外分离、纯化培养体系并进行鉴定,为研究RPE细胞的功能及治疗相关眼底疾病提供细胞来源。方法采用胰蛋白酶消化法获取猪RPE细胞进行原代及传代培养,倒置显微镜观察细胞生长过程及形态变化并计算生长数据,角蛋白和RPE65蛋白抗体免疫细胞化学染色鉴定细胞。结果用胰蛋白酶消化法分离培养的猪RPE细胞生长良好,表现为多边形和梭形两种形态,原代细胞胞浆内含有丰富的色素颗粒,传代细胞内色素颗粒较原代细胞少。免疫组织化学法证实RPE细胞均为鼠抗人角蛋白染色阳性。结论培养的细胞可作为体外猪RPE细胞的来源,体外分离、纯化和培养猪RPE细胞的成功,为RPE细胞功能和相关视网膜疾病的深入研究提供了细胞来源。     

胚胎和生后大鼠视网膜干细胞在体内和体外的分化差异

目的 研究胚胎和生后大鼠视网膜干细胞（RPCs）在体内和体外的分化.方法 取胚胎18 d和生后2周SD大鼠视网膜,分别用悬浮法及贴壁法培养.传至第1代后转入分别含10 ng/ml睫状神经营养因子（CNTF）、20 ng/ml表皮生长因子（EGF）、10 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、10%视黄酸、10%胎牛血清的DMEM：F12中进行诱导分化,贴壁后2、3、5、6 d的细胞及胚胎18 d,生后1、3、5、7、14 d的大鼠视网膜切片分别行nestin、vimentin、opsin及GFAP的二步法免疫组织化学染色.结果 大鼠的RPCs在悬浮时呈球状生长,nestin染色阳性,悬浮培养传至第1代,贴壁培养传至第5代.CNTF、bFGF、EGF及视黄酸组在培养至6 d时可呈神经元样细胞改变,有轴突,但持续出现nestin阳性.生后2周的RPCs无法诱导成opsin阳性细胞.结论 RPCs可在体外培养并传代,其在分化过程中形态学的改变先于功能学变化.光感受器细胞的体外诱导较困难.     

特发性黄斑裂孔患者玻璃体术后黄斑结构和中央凹视网膜厚度变化

目的：分析特发性黄斑裂孔患者接受23G玻璃体手术治疗后黄斑结构的修复情况,以及视力和黄斑中央凹视网膜厚度的变化。

方法：将2016-06/2017-12在我院进行择期手术的单眼特发性黄斑裂孔患者85例85眼纳入研究,其中男37例,女48例,平均年龄64.7±10.1岁。所有患者均接受23G玻璃体切割术,应用OCT观察术后黄斑裂孔闭合情况; 应用OCT观察术前和术后1、3、6mo黄斑中央凹视网膜厚度的变化; 观察术前和术后1、3、6mo患者最佳矫正视力的变化。

结果：术后所有患者获得良好的黄斑裂孔闭合。术后3、6mo时所有患者平均最佳矫正视力显著高于术前和术后1mo(P<0.05); 术后6mo平均最佳矫正视力显著高于术后3mo,差异有统计学意义(t=7.983,P=0.037)。术后1mo黄斑中央凹视网膜厚度显著高于术前和术后3、6mo(P<0.05); 术后3、6mo的黄斑中央凹视网膜厚度显著低于术前(P<0.05)。

结论：应用23G玻璃体切除术治疗特发性黄斑裂孔具有较高的裂孔成功闭合率,患者的视力明显提高。     

EGFR反义寡核苷酸对人视网膜神经胶质细胞增生的影响

目的 观察表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR)反义寡核苷酸（antisense oligonucleotide,ASODN)对人视网膜神经胶质（retinal glial,RG)细胞增生的影响。方法 人视网膜神经胶质细胞的原代培养，用脂质体（Lipofectin)作为载体将修饰型EGFR ASODN转染RG细胞后，MTT法测细胞增生活性（吸光度A值）的变化。流式细胞仪观察细胞周期的变化。结果 EGFRASODN转染RG细胞后，细胞的增生活性降低，对RG细胞生长增生的抑制率约为46.5%，进入S期的细胞减少。结论 EGFRA-SODN能够抑制人RG细胞增生。     

视网膜下液致视网膜色素上皮细胞和神经胶质细胞增殖过程中PKC活性的变化

目的:研究视网膜下液(SRF)能否引起体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)和神经胶质(RG)细胞发生增殖及在其增殖过程中是否出现蛋白激酶 C 的激活和转位, 来探讨RPE 和 RG 细胞增殖与其细胞中 PKC 信号系统变化的关系以及 PKC 抑制剂的作用。方法:实验对象为体外培养的 RPE 和 RG 细胞;刺激因素为提取 PVR 分级是 B、C 级两级患者的 SRF 和来自角膜移植后的供体眼球所提供的正常玻璃体成分;PKC 特异激活剂佛波酯(PMA)为阳性对照;DMEM 培养液作为空白对照。用 3H- 胸腺嘧啶脱氧核苷(3H- TdR)掺入法测定各自的RPE 和 RG 细胞增殖情况。用 B、C 级 SRF、正常玻璃体成分、PMA、DMEM 培养液分别在不同的时间刺激 RPE 和 RG细胞, 通过细胞裂解和离心获取细胞质和细胞膜蛋白粗提液,用同位素 32P 标记和液体闪烁计数法检测细胞质和细胞膜 PKC 活性水平。选用 PKC 抑制剂地喹氯铵预处理各组细胞后,再分别观察各组 RPE 和 RG 细胞中 PKC 活性表达水平及增殖情况。结果:用 B、C 级 SRF 和 PMA 处理过的 RPE 细胞出现高增殖;SRF 和 PMA 都可以激活 RPE 和 RG 细胞质中的 PKC,并使其由胞质向胞膜转位,但 SRF 作用于 RPE 和 RG 细胞时,胞膜上 PKC 活性峰值出现的时间较 PMA 明显延长。其中,B 级 SRF 作用于 RPE 和 RG 细胞时,胞膜上 PKC 活性峰值出现的时间较 C 级长且峰值低,增殖程度也低;正常玻璃体成分和 DMEM 培养液组没有出现 PKC 活性变化和高增殖。用 PKC 特异抑制剂预处理各组细胞后,没有出现PKC 活性和细胞增殖的改变,组间无显著性差异,P>0.05。结论:SRF 可促进 RPE 和 RG 细胞增殖,RPE 和 RG 细胞中的 PKC 是以激活和转位方式参与细胞增殖的过程;使用PKC 特异抑制剂可阻止此过程发生。     

吲哚菁绿对人视网膜色素上皮细胞的影响

目的　研究吲哚菁绿 (ICG)对培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞的影响 ,为黄斑裂孔手术中ICG着染并剥除视网膜内界膜寻求合适的质量浓度和作用时间。方法　以质量浓度分别为 2 0、1 0、0 5、0 2 5mg/mLICG分别作用于培养的人RPE细胞 ,用四唑盐比色法 (MTT)、电镜及免疫组织化学方法从形态、功能方面观察RPE细胞的损伤。结果　 ( 1)MTT检测ICG对RPE细胞活性的抑制与时间无关 (F =1 96,P =0 173 3 ) ,与质量浓度有明显相关性 (F =80 96,P =0 0 0 0 1)。ICG质量浓度小于或等于 0 5mg/mL时 ,RPE细胞活性与阴性对照组无明显差异 (P >0 0 5 )。( 2 )电镜观察以上质量浓度ICG对RPE细胞形态均有损伤 ,以变性为主 ,表现为细胞器肿胀且与质量浓度呈正相关。( 3 )以上 4种质量浓度ICG作用RPE细胞后 ,各组细胞增殖核抗原 (PCNA)表达与阴性对照组无明显差异 (P >0 0 5 )。结论　质量浓度≤ 0 5mg/mL时ICG可安全地着染视网膜内界膜。