高浓度葡萄糖对人胰岛β细胞凋亡影响的分子机制

目的　初步探讨高浓度葡萄糖对人胰岛 β细胞凋亡的影响及其分子机制。　 方法　分离培养人胰岛细胞 ,并分为对照组、高糖组和高糖 氨基胍组 ,3 7℃ ,5 %CO2 培养 72h ,测定培养液上清液中胰岛素、一氧化氮 (NO)、还原性谷胱甘肽 (GSH)水平。原位末端核苷酸标记法 (TUNEL)和胰岛素免疫组化双染色法及ELISA法检测胰岛 β细胞凋亡 ,RT PCR检测胰岛细胞p5 3、Bcl 2和胰岛素基因启动转录因子 1 (PDX 1 )mRNA表达水平。　结果　高糖组胰岛 β细胞凋亡小体富计因子(1 91± 0 6 9)、β细胞凋亡率 (1 4 8% )、NO〔(1 82 3± 1 5 5 ) μmol/L〕和 p5 3mRNA(0 3 0 6± 0 0 3 9)表达水平均显著高于高糖 氨基胍组〔分别为 1 1 9± 0 3 3、6 8%、(1 5 4 2± 1 9 7) μmol/L、0 1 3 9±0 0 6 9,P <0 0 1〕和对照组〔分别为 1 0 6± 0 2 6、4 2 %、(1 1 7 3± 2 1 7) μmol/L、0 1 2 5± 0 0 1 5 ,P <0 0 5〕 ,而胰岛素释放量、GSH、bcl 2mRNA和PDX 1mRNA表达水平则显著低于高糖 氨基胍组(P <0 0 5 )和对照组 (P <0 0 5 )。　结论　高浓度葡萄糖可通过诱导人胰岛 β细胞凋亡及PDX 1表达降低使胰岛素分泌减少 ,其机制与高糖状态下胰岛 β细胞抗氧化能力降低引起NO介导的p5 3高表达和PDX 1低表     

不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响

胰岛素生物合成与胰岛素mRNA水平密切相关，通过检测胰岛细胞中胰岛素mRNA水平，可观察β细胞的功能状态。胰岛素基因表达受营养物质、神经递质、内分泌激素、细胞因子等调控，葡萄糖则是其主要生理调节剂。本实验旨在探讨各种不同浓度葡萄糖对大鼠胰岛β细胞胰岛素基因表达的影响，从而阐明非生理浓度葡萄糖在胰岛β细胞功能损害中的作用。     

间歇性高血糖对胰岛β细胞功能和凋亡的影响

目的 观察间歇性高血糖和持续性高血糖对糖尿病大鼠胰岛β细胞功能和凋亡的影响.方法 雄性GK大鼠22只,随机分为持续高血糖组(HG)、波动性高血糖组(FG),11只Wistar大鼠作为正常对照组(NG).FG组每天定时腹腔注射超短效胰岛素类似物诺和锐并错时给予葡萄糖,造成1d中血糖浓度大幅度波动模型.HG和NG组给予生理盐水注射.制模6周后,进行葡萄糖耐量试验及胰岛素释放试验以评估胰岛β细胞的功能.以免疫组化染色及形态测量半定量分析胰岛素表达,TUNEL法观察胰岛细胞的凋亡并计数胰岛中β细胞凋亡率.结果 (1)FG组空腹血糖及糖负荷后15、30、60、120 min血糖均显著高于HG组(均P<0.01),FG组葡萄糖曲线下面积(AUCg)也高于HG组[(1 012.14±82.62对813.60±56.70)ng·ml~(-1)·h~(-1)·10~4,P<0.01];糖负荷后15、30、60、120 min胰岛素水平、胰岛素曲线下面积/葡萄糖曲线下面积(AUCi/AUCg)及15 min胰岛素增值/血糖增值(Δ115'/ΔG15')较HG组降低[(0.55±0.18对0.95±0.28,0.43±0.17对0.85±0.21,0.47±0.11对0.76±0.16,0.58±0.13对1.08±0.26)ng/ml;(9.56±2.53对21.36±4.16)×10~(-7);(3.95±3.45对27.02±8.62)×10~(-7),均P<0.05].(2)FG组胰岛素染色阳性面积、胰岛素染色阳性率和积分光密度均低于HG组(均P<0.05).(3)FG组β细胞凋亡率显著高于HG组[(24.17±7.25对16.55±5.11)%,P<0.01].结论 波动性高血糖可能较持续性高血糖对胰岛β细胞功能的损害更加明显,β细胞凋亡增加可能是血糖波动导致胰岛功能改变的机制之一.     

不同浓度葡萄糖对小鼠胰岛β细胞株NIT-1增殖、分泌功能和凋亡的影响

目的探讨小鼠胰岛β细胞株NIT-1呈最佳增殖和分泌功能培养环境的葡萄糖浓度。方法将NIT-1细胞随机分为1、2、3、4、5、6组,分别用含5.6、7.8、11.1、16.7、22.5、27.6 mmol/L葡萄糖浓度的10%胎牛血清RP-MI1640培养基培养5 d。MTT法检测各组NIT-1细胞增殖情况;放射免疫分析法检测各组NIT-1细胞胰岛素分泌水平;免疫荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 3组细胞呈最高增殖状态,之后4组～6组呈浓度依赖性抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,且呈时间依赖性;3组胰岛素呈最高分泌状态,之后4组～6组呈浓度依赖性抑制细胞分泌,且呈时间依赖性。结论 11.1 mmol/L葡萄糖浓度是小鼠NIT-1细胞具有最佳增殖和分泌功能的培养环境;葡萄糖浓度〉11.1 mmol/L可抑制小鼠NIT-1细胞的增殖和分泌功能,并呈时间浓度依赖效应诱导细胞凋亡。     

高浓度葡萄糖对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因表达的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖培养条件对牛视网膜血管周细胞凋亡及凋亡调节基因Bel-2、Bax表达的影响,探讨Bcl-2、Bax对周细胞凋亡的调控.方法 在体外培养第3代近融合的视网膜血管周细胞中加入不同浓度的葡萄糖(5.5 mmol/L、15.0 mmol/L、25.0 mmol/L和35.0mmol/L)孵育6 d后,应用MTT方法检测高糖下牛视网膜周细胞增殖情况,TUNEL法特异性标记凋亡细胞,免疫组化染色法和RT-PCR测定Bcl-2、Bax基因的表达. 结果 周细胞在高浓度葡萄糖培养下,细胞增殖受抑制,呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率分别为(28.4±0.8)%、(40.4±0.9)%与(50.2±0.6)%.高浓度葡萄糖培养呈剂量依赖性促周细胞凋亡(r=0.959,P＜0.01)和凋亡调节基因Bax的表达(蛋白水平r=0.966,P＜0.01;mNRA水平r=0.874,P＜0.01)及抑制凋亡调节基因Bcl-2的表达(蛋白水平r=-0.964,P＜0.01;mNRA水平r=-0.912,P＜0.01);周细胞的凋亡率与Bax/Bcl-2比率呈正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 高浓度葡萄糖培养以剂量依赖的方式促进周细胞凋亡,Bcl-2、Bax基因表达的改变参与了细胞凋亡的调控.     

高葡萄糖诱导的胰岛β细胞NIT-1细胞凋亡的拉曼光谱变化

目的探讨拉曼光谱在高葡萄糖诱导胰岛β细胞NIT-1细胞凋亡的变化,为研究细胞凋亡探索新路径。方法按不同葡萄糖浓度及不同培养时间将NIT-1胰岛β细胞分成6组。AnnexinV/PI染色流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率及激光光镊拉曼光谱仪检测细胞拉曼光谱,比较各组凋亡率及分析光谱信息。结果高糖培养组细胞凋亡率较对照组高,并且随着培养时间的延长高糖培养组的凋亡率逐渐增加（P〈0.05）,培养4 d后漂浮在培养基中的细胞大多数处于晚期凋亡状态。随着高糖培养时间的延长,拉曼光谱中代表蛋白质含量的1 001/cm峰峰面积及代表核苷酸含量的1 337/cm峰峰面积逐渐降低（P〈0.05）。结论高糖可以诱导NIT-1细胞凋亡,且凋亡率随诱导时间的延长而增加。拉曼光谱可以反映凋亡细胞内蛋白质与核苷酸含量的降低。     

葡萄糖诱导人血管内皮细胞凋亡及其对bax和bcl-2表达的影响

目的　探讨糖尿病 (DM)状态下葡萄糖 (Glu)对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)凋亡的影响及其分子机制。　方法　细胞凋亡用吖啶橙 (AO)荧光染色、原位末端标记 (TUNEL)法、流式细胞仪分析检测。同时行bcl 2和bax免疫细胞化学染色和定量分析。　结果　高浓度Glu( 2 0mmol/L、4 0mmol/L)能够诱导HUVEC凋亡 ,且呈浓度和时间依赖性。高糖 ( 2 0mmol/L)培养HUVEC 72h后bax表达的MOD×area值由 387± 97升至 136 9± 2 2 5 (P <0 .0 1) ,对照组和高糖组bcl 2染色的MOD×area分别为 15 0± 36和 186± 76 ,两者间差异无显著意义 (P >0 .0 5 )。　结论　DM状态下高血糖能诱导内皮细胞凋亡 ,其机制可能与bax基因表达上调有关。     

内毒素诱导大鼠胰岛细胞凋亡作用

目的：探讨内毒素（LPS）对大鼠胰岛细胞凋亡作用的机制。方法：观察腹腔注射2mg/kg LPS的大鼠血清胰腺NO含量动态变化,用原位杂交方法检测胰岛细胞诱生型一氧化氮合酶（iNOS)mRNA;采用单细胞凝胶电泳和DNA凝胶电泳技术,分析外源硝普钠（NO供体）和LPS离体条件下对胰岛细胞的损伤。结果：注射PLS 6h,大鼠血清NO水平明显升高并持续到3天,胰腺NO含量6h升高,12h达峰值,24h恢复至正常,胰岛细胞iNOS mRNA表达,6h开始升高,12h明显增强,体外试验显示。外源NO明显引起胰岛细胞NDA断裂,出现慧星尾和凋亡梯状带,并呈剂量依赖关系,高浓度NO（60mmol/L SNP)胰岛细胞DNA随机降解,LPS离体条件下,对胰岛细胞损伤作用不明显,结论：内毒素通过整本作用刺激炎症 细胞浸润胰岛并诱导iNOS表达,产生NO介导胰岛细胞凋亡和功能损害。     

糖尿病胰岛β细胞凋亡病因学机制

“凋亡”一词的原意是“falling off”,指在一定的生理和病理条件下 ,细胞遵循自身的规律按部就班地走向死亡的过程。细胞凋亡是以一种与细胞有丝分裂完全相反的方式来调节细胞群体相对恒定的重要机制。胰岛β细胞凋亡参与了糖尿病的发病过程。一、1型尿糖病 β细胞凋亡的病因学机制1型糖尿病是一种自身免疫性疾病 ,导致了胰岛β细胞选择性破坏。1型糖尿病早期以胰岛内巨噬细胞和 T细胞浸润为特征。巨噬细胞是最早出现的炎性细胞 ,几乎可以完全吞噬胰岛β细胞。巨噬细胞和 T细胞均能分泌促炎性细胞因子 ;白介素 (IL- 1β)足以抑制 β细胞…     

胰岛B细胞功能的检测方法及其临床意义

测定B细胞分泌功能对了解糖尿病的发生，发展，预测糖尿病的预后非常必要，其方法主要分为检测葡萄糖刺激，非糖物质刺激的胰岛素分泌以及B细胞分泌其他物质的功能。葡萄糖刺激的方法有高葡萄糖钳夹技术，口服及静脉葡萄糖耐量试验。非糖物质刺激的方法有精氨酸，胰升糖素，甲苯磺丁脲刺激试验。另外，可用于检测的B细胞分泌的其他物质有胰岛素原，C肽，胰淀粉样多肽。在评价B细胞功能的同时需进行胰岛素敏感性参数校正，以获得较高的精确性。     

Bcl-X基因转录后剪切方式改变在大鼠胰岛细胞凋亡中的作用

目的　探明 Bcl- x基因在大鼠胰岛细胞凋亡时剪切方式的变化及其该基因在胰岛细胞凋亡中的作用。方法　应用 TUNEL法检测长期高糖培养时大鼠胰岛细胞凋亡 ,应用半定量多重 RT- PCR(SQ- RT- PCR)检测了胰岛细胞凋亡时 Bcl- x基因 m RNA的表达变化情况 ;同时观察小剂量 STZ所致的糖尿病大鼠胰岛 Bcl- x基因 m RNA的表达变化。结果　 2 5 .5 m M葡萄糖浓度体外培养 14天较 5 .5 m M和 11.1m M葡萄糖浓度培养 ,胰岛细胞凋亡百分率明显增加 ,分别为 31.5± 4 .5 % ,15 .4± 3.0 % ,17.4± 4 .8% ;P <0 .0 1。细胞凋亡百分率变化的同时伴有 Bcl- x基因转录后剪切方式的改变 ,表现为 Bcl- x S m RNA表达明显增加 ;低剂量 STZ所致的糖尿病大鼠胰岛 Bcl- x S m RNA表达明显增加 ,Bcl-x L与 Bcl- x S比率明显减少。结论　长期高糖可以诱导大鼠胰岛细胞凋亡 ,Bcl- x基因剪切方式的改变所致的 Bcl- x L/Bcl- x S比率的变化在高糖和 STZ所致的胰岛细胞凋亡中起重要作用     

Visfatin转基因对胰岛β细胞功能和活性的影响

目的 探讨Visfatin基因过表达对胰岛β细胞增殖、凋亡、细胞周期和胰岛素释放的影响.方法 将MIN6细胞分为对照组、绿色荧光蛋白转染组和Visfafin转染组,对照组以空质粒、绿色荧光蛋白转染组以荧光蛋白质粒、Visfatin转染组分别以2、5、10 mg/L Visfatin质粒转染细胞,40、60 h后收集细胞,采用实时聚合酶链反应和Western blot法检测Visfatin mRNA和蛋白表达,应用噻唑蓝法及流式细胞仪检测细胞增殖、凋亡和周期,运用酶联免疫法检测葡萄糖刺激的胰岛素释放.采用单因素方差分析进行统计学分析.结果 与对照组相比,2、5、10 ms/L Visfatin质粒转染40 h及5 mg/L Visfatin质粒转染60 h后细胞增殖率分别升高1.60、1.87、1.75、1.51倍(t值分别为4.98、13.52、11.02、6.14,均P<0.05).棕榈酸诱导的细胞凋亡率降低,与对照组和绿色荧光蛋白转染组相比,质粒转染组细胞凋亡率分别降低42%、48%(F值分别为4.58、6.12,均P<0.05).与对照组相比,Visfatin质粒转染40 h后G_0/G_1期细胞减少12.3%,S期细胞增加13.2%(F值分别为5.25、6.23,均P<0.05).与对照组相比,质粒转染组细胞基础胰岛素分泌无改变,葡萄糖刺激后胰岛素释放有所增加,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Visfatin可促进胰岛β细胞增殖,抑制胰岛β细胞凋亡,对细胞周期有调节作用.     

The effects of islet cell surface antibodies on the metabolic function of mouse islet B cells in vitro

Immunoglobulin (Ig) fractions from the plasma of a group of newly diagnosed insulin-dependent diabetes mellitus (type 1) patients and a set of control subjects were assessed for their effects on isolated mouse islet function. It was found that Igs from type 1 patients caused a significant inhibitory effect on insulin secretion when incubated with mouse islets as compared with controls (25.6±2.9 pg islet^–1 h^–1 vs 44.7±7.7 pg islet^–1 h^–1,P<0.05). The plasma samples from which the Igs were obtained were then tested for the presence of antibodies to the mouse islet cell surface (ICSA). Four of the nine patients were positive for ICSA, and plasma samples from eight control subjects were all negative. ICSA-positive samples appeared to have the greatest inhibitory effect on insulin secretion when compared with their respective controls (53.3±7.0 pg insulin islet^–1 min^–1 vs 30.9±3.7 pg insulin islet^–1 min^–1,P<0.05). In contrast, it was also found that ICSA-positive Ig fractions had no significant effect on glucose oxidation when co-incubated with mouse islets as compared with the controls (11.3±2.3 pmol islet^–1 h^–1 vs 11.2±2.9 pmol islet^–1 h^–1). These studies suggest that Igs from newly diagnosed type 1 patients containing ICSA may impair insulin secretion from isolated mouse islets by mechanisms which do not involve the inhibition of B-cell glucose metabolism.     

紫外线照射对果蝇凋亡相关基因reaper、grim、hid表达的影响

目的探讨紫外线照射对果蝇凋亡相关基因reaper(rpr),grim,hid表达的影响。方法收集8 h内羽化果蝇,雌雄分开培养至10日龄,紫外线照射0,0.5,1,1.5,2 h。提取果蝇总RNA,运用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测各组果蝇rpr、grim、hid基因的表达。结果对照组果蝇rpr、grim、hid基因表达较弱,照射后rpr、grim、hid基因的表达量呈现先增后减的趋势。结论紫外线照射可增加果蝇凋亡相关基因rpr,grim,hid的表达,可能是其诱导细胞凋亡的分子机制之一,但照射达到一定时间,基因表达减弱,可能是其引起衰老的原因。     

凋亡相关基因在非小细胞肺癌组织中表达的研究

目的　探讨ｂｃｌ２ 、ｂａｘ、Ｆａｓ、ＦａｓＬ凋亡相关基因在非小细胞肺癌中表达及与肿瘤临床病理学的关系。方法　采用免疫组织化学方法检测４５ 例非小细胞肺癌中ｂｃｌ２、ｂａｘ、Ｆａｓ 和ＦａｓＬ的表达。结果　２３ 例（５１ ％）ｂｃｌ２ 阳性,３８ 例（８４％ ）ｂａｘ 阳性（ Ｐ＜ ０－０１） ,二者之间表达无明显关系,但Ｆａｓ 与ＦａｓＬ之间表达呈正相关（Ｐ＜０－０１） 。ｂｃｌ２ 蛋白表达率随肿瘤期别进展而降低（ Ｐ＜ ０－０５） ,ｂａｘ 蛋白在低分化癌中表达减少（Ｐ＜０－０５） ,ＦａｓＬ在肺腺癌细胞中表达较高（Ｐ＜ ０－０１） 。ｂｃｌ２ 和ｂａｘ 蛋白同时表达阳性与肺癌ＴＮＭ 分期显著相关（Ｐ＜０－０５） ,ｂｃｌ２ 蛋白单一表达与细胞分化有关（ Ｐ＝０－０３３）。结论ｂｃｌ２、ｂａｘ、Ｆａｓ 和ＦａｓＬ可能通过不同途径参与了非小细胞肺癌组织中细胞凋亡的调节,并在肿瘤的发生与发展中发挥重要作用。     

大鼠胰岛与睾丸细胞共移植诱导同种胰岛移植免疫豁免

目的　探究大鼠胰岛与睾丸细胞共移植后睾丸细胞Fas配体表达能否对胰岛移植物提供免疫豁免作用。方法　将同种大鼠胰岛及睾丸细胞移植于糖尿病受体,观察移植物存活情况,并体外检测睾丸Sertoli细胞对活化淋巴细胞的抑制作用以及移植物内淋巴细胞凋亡情况。结果　单纯移植胰岛组移植胰岛平均存活期为(6±1)天。睾丸细胞和胰岛细胞共移植,当睾丸细胞数量为5×10     

胰岛素对初发2型糖尿病患者胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗的影响

目的观察胰岛素对初发2型糖尿病患者胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗的影响。方法将120例空腹血糖≥11．1mmol／L的初发2型糖尿病患者随机分为胰岛素组、格列齐特组、二甲双胍组和吡格列酮组，在饮食及运动治疗的基础上，给予不同的药物治疗3个月，比较各组治疗前后空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（PBG2h）、糖化血红蛋白（HbAlc）、胰岛素糖负荷后曲线下面积（AUCi）、C肽糖负荷后曲线下面积（AUCcp）、胰岛素分泌指数（Homa-β）和胰岛素抵抗指数（Homa-IR）的变化。结果12W治疗后，胰岛素组的胰岛素AUC0-30min、C肽AUC0-30min、Homa-β水平均高于3个口服降糖药组，差别具有统计学意义（P〈0．05）；且在治疗后胰岛素组的Homa—IR低于格列齐特组（P〈0．05），而与二甲双胍组和吡格列酮组无显著性差异。结论对初发2型糖尿病患者，早期胰岛素治疗比常规的口服降糖药可更好地改善胰岛β细胞功能和胰岛素抵抗。     

补肾方对老年人T细胞凋亡相关基因群转录的调控模式研究

目的　观察补肾复方对老年人 T细胞凋亡及其相关基因群 m RNA表达的调控作用模式。方法　老年人 44例 ,采取补肾方和安慰剂随机分组 ,双盲给药 ;采用 TUNEL标记的流式细胞仪检测分析各组 T细胞凋亡的百分率 ;采用荧光实时定量 PCR技术分析各组 T细胞凋亡相关促凋亡基因 (Fas、Fas L、TNFR1、Bax)及抗凋亡基因 (TNFR2、bcl- 2 )的转录情况。结果　补肾组 T细胞凋亡率比安慰剂组明显降低 (P<0 .0 1 ) ,Fas L、TNFR1基因 m RNA表达明显降低 (P<0 .0 5) ,bcl- 2基因 m RNA表达显著增高 (P<0 .0 5)。结论　补肾方对老年人 T细胞部分促凋亡基因的转录具有负调控作用 ,同时上调抗凋亡基因的转录 ,这种协同作用模式是补肾方下调老年人 T细胞过度凋亡的分子机制之一。