辛伐他汀通过氧化应激诱导K562细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响,探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:不同浓度辛伐他汀处理K562细胞,Annexin V-FITC/PI双染法检测辛伐他汀对K562细胞凋亡的影响.辛伐他汀处理K562细胞48 h,流式细胞仪检测活性氧(Reactive oxygen species,ROS)浓度,免疫组织化学法测定突变P53蛋白表达.RT-PCR测定c-junmRNA表达.结果:Annexin V-FITC/PI双染法检测结果显示,5、10、20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞48-72h能诱导其凋亡.辛伐他汀作用K562细胞后,与对照组比较,处理组细胞内ROS明显升高.辛伐他汀处理K562细胞后突变P53蛋白表达明显下调,c-jun mRNA 表达上调.结论:辛伐他汀改变K562细胞内氧化还原状态,细胞氧化应激,下调突变P53蛋白表达,上调c-jun 表达诱导K562细胞凋亡.     

辛伐他汀裸鼠体内诱导K562细胞凋亡的分子机制

目的:探讨不同剂量的辛伐他汀处理裸鼠体内K562细胞的信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的分子机制.方法:体外培养K562细胞并经皮下接种Balb/c-nu/nu裸小鼠K562细胞,构建裸小鼠的K562细胞动物模型.采用缺口末端标记技术TUNEL法检测辛伐他汀诱导K562细胞早期凋亡的变化.采用RT-PCR检测K562细胞中Ras分子和PI3K-AKT信号通路的n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞凋亡,并随剂量的增加凋亡率逐渐增高(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起n-ras,pi3k,akt1,nf-κb1 mRNA的表达差异(P＜0.01).结论:辛伐他汀能够引起参与K562细胞凋亡的Ras 分子和PI3K-AKT信号通路的基因变化,从一定的角度说明辛伐他汀在体内能够诱导K562细胞凋亡.     

辛伐他汀通过Caspase-12活化途径诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 探讨Caspase-12在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用.方法 在K562细胞培养液中分别加入毒胡萝卜素(阳性对照组)和辛伐他汀10、20、30μmol/L(辛伐他汀组)培养72 h,采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2 抖浓度,RT-PCR检测GRP78、Calpain基因mRNA表达水平,Western blot检测GRP78、Caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白水平.结果 10、20、30μmol/L辛伐他汀作用K562细胞72 h后,细胞出现典型的凋亡形态,凋亡率分别为12.41%士0.32%、19.08士0.26%、23.41士0.36%;细胞内Ca2 浓度增加,荧光强度分别为43士2.9、54士2.7、64士2.6:GRP78、Calpain基因mRNA表达上调;Western blot检测显示:Caspase-3,-6,-7,-9,-12剪切活化,GRP78表达增强.结论 Caspase-12作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡.     

活性氧与谷胱甘肽在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时的变化及机制探讨

目的:研究辛伐他汀(simvastatin)诱导K562细胞凋亡过程中细胞内活性氧与谷胱甘肽的变化及凋亡中发生的时间顺序,以探讨辛伐他汀诱导K562凋亡的机制.方法:20μmol/L浓度辛伐他汀处理K562细胞,48 h光学显微镜观察细胞形态学.12、24、48、72 h MTT法检测细胞活力,荧光染料流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内活性氧,化学比色法检测细胞内谷胱甘肽.结果:辛伐他汀作用K562细胞48 h后出现典型的凋亡形态学改变;12、24、48、72h细胞抑制率为0、(19.02±O.92)%、(56.4±3.20)%、(74.4±5.54)%,K562细胞生长被抑制;细胞凋亡率升高为:(2.55±0.25)%、(6.1±0.35)%、(14.15±O.42)%、(30.70±O.65)%;活性氧的荧光强度升高为:1.61±0.15、13.1±1.54、10.0±1.05、8.10±0.87,与不同时间的对照组相比较均显著升高(P<0.05).细胞内谷胱甘肽含量为:274.7±11.5、262.5±9.8、272.4±1O.5、(357.2±16.8)mg/gprot,与不同时间的对照组相比较均显著降低(尸<0.05 o结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内发生了氧化还原体系失衡,它可能是细胞凋亡的早期上游事件.     

Bcl-2/Bax基因在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时的表达变化

目的观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时Bcl-2/Bax变化,探讨Bcl-2/Bax与细胞凋亡之间关系。方法 20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞24、48和72h;流式细胞技术检测细胞凋亡率;免疫组织化学法检测细胞色素C,RT-PCR技术检测Bcl-2/Bax基因。结果 20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48和72h,细胞凋亡率变化分别是（6.1±0.4）%,（14.2±0.4）%,（30.7±0.6）%;胞浆内细胞色素C显著高于对照组（P〈0.05）;抑凋亡基因Bcl-2显著降低,促凋亡基因Bax显著升高（P〈0.05）。结论辛伐他汀能诱导K562细胞凋亡,Bcl-2/Bax比值降低可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡机制之一。     

P53途径在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用

目的 探讨辛伐他汀处理后的P53通路和细胞周期的分子水平变化,以说明P53途径在辛伐他汀抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡中的作用.方法 体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞仪检测辛伐他汀作用后的细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测P53通路和细胞周期相关基因的变化.采用免疫组化LDP法检测P21蛋白变化的水平.结果 辛伐他汀能使K562细胞停滞在G0/G1期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数P53通路基因和细胞周期相关基因出现差异表达.P21蛋白随药物作用时间的延长,表达上调.结论 P53通路可能在辛伐他汀诱导的K562细胞增殖抑制和凋亡发生的过程中起重要作用.     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF-κB通路的分子变化

目的:探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NF-κB信号通路的分子变化,以说明辛伐他汀是否依赖NF-κB信号通路参与K562细胞凋亡发生.方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞,接种于18只BALB/c-nu/nu裸小鼠皮下,构建移植瘤模型.随机分为3组,每组6只.对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml,两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml(0.05 mg)和0.4 ml(0.08 mg).均隔日注射,连续6次.采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化,RT-PCR检测K562细胞中NF-κB信号通路IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的差异表达.结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡,且高剂量组凋亡率高于低剂量组(P＜0.01);不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKK-β、IκB-α、NF-κB1 mRNA的表达下调(P＜0.01).结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡,可能与NF-κB通路基因的表达下调有关.     

辛伐他汀诱导裸鼠体内K562细胞凋亡过程中NF κB通路的分子变化

目的：探讨辛伐他汀在裸鼠体内引起的K562细胞NFκB信号通路的分子变化，以说明辛伐他汀是否依赖NFκB信号通路参与K562细胞凋亡发生。方法:体外培养慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞，接种于18只BALB/cnu/nu裸小鼠皮下，构建移植瘤模型。随机分为3组，每组6只。对照组腹腔注射生理盐水0.2 ml，两个处理组分别注射0.2 g/L的辛伐他汀0.25 ml（0.05 mg）和0.4 ml（0.08 mg）。均隔日注射，连续6次。采用TUNEL法检测K562细胞早期凋亡的变化，RTPCR检测K562细胞中NFκB信号通路IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的差异表达。结果:不同剂量的辛伐他汀能够诱导裸鼠体内K562细胞发生明显的凋亡，且高剂量组凋亡率高于低剂量组（P<0.01）;不同剂量的辛伐他汀能够引起 IKKβ、IκBα、NFκB1 mRNA的表达下调（P<0.01）。结论:辛伐他汀可诱导K562细胞凋亡，可能与NFκB通路基因的表达下调有关。     

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制.方法:常规培养细胞24h,20 μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技...     

土贝母诱导K562细胞凋亡

目的:探讨土贝母诱导分化K562细胞的作用机制.方法:将土贝母制剂加入到在体外培养的K562细胞中,观察K562细胞增殖水平,并检测土贝母制剂作用前后细胞对噻唑蓝还原能力,同时应用流式细胞仪测定K562细胞增殖周期.结果:土贝母制剂对K562细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;K562细胞增殖G0/G1期细胞比率明显增加,S期细胞比率明显减少.结论:土贝母制剂能阻止K562细从G0、G1期向S期转化,抑制K562细胞增殖,促进K562细胞凋亡.     

大鼠创伤性脑损伤后诱导型NOS阳性表达与神经细胞凋亡的关系

目的：探讨大鼠创伤性脑损伤(TBI)后诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达和神经细胞凋亡的关系。方法：将健康SD大鼠随机分为假手术组、伤后24h组、伤后72h组、伤后168h组。采用iNOS免疫组化技术，研究大鼠创伤性脑损伤后iNOS的表达变化及其细胞定位，采用凋亡细胞原位缺121末端标记法(TUNEL)，观察大鼠在创伤性脑损伤后不同时点的神经细胞凋亡情况。结果：大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区iNOS活性明显升高，伤后72hiNOS阳性表达最明显，伤后168h仍有表达。大鼠创伤性脑损伤后24h大脑损伤区周围皮质和海马区神经细胞凋亡明显增多，伤后72h增多最明显，可持续168h。结论：TBI后损伤区周围皮质和伤侧海马的iNOS阳性细胞呈高表达并与神经细胞的凋亡呈同步变化，推测iNOS的表达可能参与了TBI后的继发性神经细胞凋亡。     

大剂量吡哆醇对大鼠睾丸一氧化氮合酶和细胞凋亡的影响

[目的]为探讨大剂量吡哆醇(PN)对睾丸结构和功能损害的分子机制,研究其对睾丸一氧化氮合酶 (NOS)和细胞凋亡的影响。[方法]实验采用吖啶橙荧光染色法显示睾丸细胞DNA和RNA,黄递酶(NADPH- d)组织化学法显示睾丸细胞NOS,采用原位缺口平移技术检测睾丸生精细胞凋亡的数目。[结果]与对照组相比,注射PN 3 d,大鼠睾丸间质细胞NOS反应活性明显增强,睾丸生精细胞凋亡数目(38．41±8．20)较相应对照组(11．39±4．86)明显增多,差异有显著性(P<0．01)。[结论]提示大剂量PN腹腔注射后,大鼠睾丸细胞NOS活性和凋亡细胞数目明显增加,这些变化可能是PN损害睾丸结构和功能的分子机制之一。     

自分泌一氧化氮对人肝癌细胞Bel-7402增殖及凋亡的影响

目的：观察人肝癌细胞Bel-7402自分泌的一氧化氮对其增殖及凋亡的影响。方法：MTT法观察L-精氨酸（L-Arg）及内毒素（LPS）联合L-Arg对细胞增殖的影响,免疫组化法检测iNOS在细胞中的表达,TUNEL法观察NO对细胞凋亡的影响。结果：低浓度L-Arg对细胞增殖有促进作用,高浓度抑制细胞增殖。LPS使iNOS表达增强,协同L-Arg抑制细胞增殖。高浓度NO促进细胞凋亡。结论：低浓度NO促进细胞增殖,高浓度NO抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

NOS/NO和HO/CO系统及药物干预在实验性兔动脉粥样硬化进程中的作用

目的探讨动脉粥样硬化进程中一氧化氮合酶/一氧化氮（NOS/NO）和血红素加氧酶/一氧化碳（HO/CO）系统的变化、相互关系以及辛伐他汀对该系统的影响。方法16只家兔予以高胆固醇饮食喂养8周,停用高胆固醇饮食后,随机分为辛伐他汀组（n=8）和模型组（n=8）。辛伐他汀组喂饲辛伐他汀进行药物干预,继续给予普通饲料喂养8周;同时设正常对照组（n=8）,给予普通饲料喂养16周。然后取静脉血和主动脉组织,分别用沉淀漂浮酶联法、Chalmers A H、硝酸还原酶法测定各实验组血中TC、TG、LDL、HDL、CO、 NO含量,免疫组织化学方法测定主动脉组织中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血红素加氧酶 1（HO 1）的表达水平;并比较两组间各项参数的差异。结果8周末与对照组比较,模型组血脂水平明显升高,血清NO含量明显降低,血浆CO水平明显升高（P均＜0.01）。16周末与模型组比较,辛伐他汀组血浆TC、TG、LDL明显下降（P＜0.01）,HDL和血清NO含量明显升高（P＜0.01）,血浆CO水平明显降低（P＜0.01）,HO-1及iNOS表达明显减少（P＜0.01）。结论动脉粥样硬化进程中,HO/CO和NOS/NO系统显示出互补及代偿性调节作用,辛伐他汀可以通过下调HO/CO和NOS/NO系统而延缓动脉粥样硬化进程。     

顺铂致大鼠肾皮质一氧化氮生成量增多及水飞蓟素-葡甲胺盐对其影响

少量多次给大鼠腹注顺铂（ＣＰ）及经口给予水飞蓟素葡甲胺盐（ＳＢＭＧ）预处理后给予ＣＰ,观察血尿素氮（ＢＵＮ）含量、肾皮质一氧化氮（ＮＯ）含量及一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性等指标的经时变化。结果发现,ＣＰ可诱导ＮＯＳ活性增高,ＮＯ生成量增多;ＣＰ所致的ＢＵＮ含量与ＮＯ含量的时相变化趋势基本一致,揭示ＮＯ可能在ＣＰ所致肾损害中起重要作用。ＳＢ可使ＢＵＮ含量与ＮＯ含量降至对照组水平,表明ＳＢ可有效地预防ＣＰ所致的肾损害,该预防作用可能与ＳＢ降低ＮＯ生成量有关     

高三尖杉酯碱诱导K562和CML细胞凋亡及分化的实验研究

目的 明确三尖杉酯碱（HHT）治疗慢性粒细胞性白血病（CML）的机理。方法 应用细胞长曲线、克隆形成能力、细胞内血红蛋白含量测定、细胞形态,结合DNA凝胶电泳、流式细胞仪等方法,观察HHT对K562细胞株及CML慢性期细胞的作用方式。进一步用RT－PCR方法研究bcr-abl、c-myc 、max基因在转录水平的改变。结果 低浓度HHT抑制K562细胞的克隆形成能力并使K562细胞内血红蛋白含量增加;0.1umol /L 及以上浓度HHT可诱导K562细胞及CML细胞凋亡;细胞周期分析发现细胞阻滞于G1期。c-myc基因在加药24h开始下凋; bcr-abl和max基基的表达未见明显改变。结论 低浓度HHT可抑制K562 细胞增殖并诱导其向红系分化;超过一定“ 阈浓度”HHT可诱导K562细胞和CML慢性期细胞凋亡;HHT可通过抑制c-myc/max 表达来阻 滞细胞周期。     

冷冻对心肌合成一氧化氮的影响

目的:观测心肌局部冷冻对心肌合成一氧化氮(NO)的影响,探讨冷冻阻滞心脏传导的机理.方法:采用液氮(-60℃±2℃)冷冻心肌,并用温生理盐水复温,在冷冻时加入L-精氨酸和美兰,观测心肌中NO及一氧化氮合酶(NOS)的含量.结果:心肌冷冻后NO和NOS的含量均下降,但左右房心肌NO的含量未见差异.L-精氨酸组在冷冻时、复温时及冷冻复温时持续滴注L-精氨酸,心肌NO含量分别为(107.4±15.1)、(109.6±15.7 )、(121.8±18.4)nmol/g高于未加L-精氨酸组[(86.8±13.2)nmol/g],且以冷冻前加入并持续滴注组最为明显;美兰组在冷冻时、复温时及冷冻复温时持续滴注美兰,心肌NO分别为(62.3±11.2)、(64.7±11.0)、(42.8±10.6)nmol/g低于未加美兰组[(86.8±13.2)nmol/g],以冷冻前加入并持续滴注组最为明显.冷冻后血液中NO含量未见改变(P>0.05).结论:心肌冷冻后心肌中NO含量减少.     

牛磺酸对阿霉素心脏毒性与心肌NOS表达的影响

目的探讨牛磺酸(Tau)对阿霉素(Adr)心脏毒性与心肌一氧化氮合酶(NOS)表达的影响.方法将26只新西兰纯种兔随机分成3组(对照组、阿霉素组和牛磺酸治疗组),用药后测定3组动物的心输出量(CO)、左心室收缩压(LVSP)和左心室舒张末压(LVEDP),并取心肌组织作HE染色及组化染色进行图像定量分析.结果与对照组比较,阿霉素组CO、LVSP显著降低,LVEDP显著增高(均P＜0.01);经牛磺酸治疗后,治疗组CO和LVEDP显著回升或下降(均P＜0.01);阿霉素组和牛磺酸治疗组的心肌NOS光密度(OD)值均较对照组显著升高(P＜0.01),而治疗组又较阿霉素组显著升高(P＜0.01).结论阿霉素能使心肌组织NOS表达增强及释放NO的量增加,参与心肌损伤过程;牛磺酸对阿霉素导致的心肌损伤有保护作用.     

枸杞多糖对人白血病K562细胞株凋亡作用的基础研究

目的 探讨枸杞多糖（LBP-X）抑制人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞增殖的作用机制,研究LBP-X对K562细胞凋亡的影响,探讨LBP-X与三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡的剂量对应关系.方法 用LBP-X、As2O3处理K562细胞,四氮甲唑蓝（MTT）比色法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例.结果 LBP-X对K562细胞的IC50约为227.50 μg/ml,经LBP-X作用后,K562细胞呈现凋亡的形态学改变.流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为8.43%-57.92%.结论 LBP-X对K562细胞有抑制作用,并能诱导其发生凋亡.LBP-X对K562细胞的效能和效价强度约为As2O3的1/1 000.