慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞特异产生γ-干扰素的研究

目的:研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血单个核细胞(PBMC)经HBV表面抗原(HBsAg)刺激后产生γ-干扰素(IFN-γ)的免疫反应.方法:选择免疫清除期、免疫耐受期慢性乙肝患者和HBsAb阳性健康体检者各10例,Ficoll分离液法分离PBMC,用HBsAg刺激培养.利用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ的含量;用酶联免疫斑点实验(ELISPot)检测PBMC中IFN-γ产生细胞的频率;用流式细胞术检测PBMC中IFN-γ+的细胞亚群.结果:经HBsAg刺激培养后,免疫耐受组PBMC产生IFN-γ含量、IFN-γ产生细胞的频率明显低于正常对照组、免疫清除组(均P<0.05),免疫清除组则明显高于正常对照组(P<0.05).免疫清除组、正常对照组PBMC中IFN-γ+的细胞亚群以CD4-CD8+、CD4-CD8-细胞为主,且免疫清除组高于正常对照组;免疫耐受组仅CD4-CD8-表达IFN-γ,且低于另两组.结论:免疫清除期与免疫耐受期慢性乙肝患者PBMCs经HBsAg刺激后产生IFN-γ的免疫反应不同.     

SLE患者外周血Tc1/Tc2与CD4/CD25双阳性细胞关联性分析

目的分析SLE患者外周血CD8淋巴细胞分泌的细胞因子与CD4/CD25双阳性细胞反应格局与疾病的关联性.方法用三色免疫荧光单细胞染色法检测了11例SLE患者外周血CD8T细胞分泌的细胞因子与CD4/CD5双阳性细胞的表达.结果所检测11例SLE患者中有3例表现为Tc0,即同时分泌IFN-γ和IL-4的Tc细胞.4例以分泌IFN-γ为主,为Tc1,4例以分泌IL-4为主,为Tc2.同时测定了SLE病人与正常对照组CD4/CD25双阳性细胞群发现CD4/CD25双阳性细胞群在活动期SLE中显著低下[(17.54±4.11%)%,而对照组为(35.42±3.30)%].结论SLE患者外周血中CD8亚群表现为异质性,且与CD4/CD25双阳性细胞有关.至于其在SLE发病中的意义正在进一步研究中.     

母乳细胞免疫功能的测定与孕产妇健康教育

[目的]测定母乳细胞免疫功能，探讨母乳喂养对新生儿的免疫保护作用。[方法]应用APAAP桥联酶标法及双抗体夹心ELISA法测定不同时期母乳中T淋巴细胞(CD3^ 、CD4^ 和CD8^ 细胞)数目及活化的单个核细胞分泌γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素8(IL-8)的水平，并进行比较。[结果]初乳中CD3^ 、CD4^ 和CD8^ 细胞的数目及单个核细胞分泌IFN-γ和IL-8的水平高于过渡乳和成熟乳。[结论]母乳尤其是初乳可向婴儿传递大量的免疫活性细胞和分泌的细胞因子。母乳喂养可提高新生儿抗感染免疫能力，护理时应做好孕产妇健康教育，大力提倡母乳喂养．提早初次哺乳时间。     

自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞的制备和特性研究

目的 制备自身失活型慢病毒载体为基础的鼠基因工程调节性T细胞(Treg细胞),检测其表型变化,并观察其增殖能力及免疫抑制能力.方法 构建含鼠Foxp3基因及内部核糖体进入位点序列(IRES)和绿色荧光蛋白基因(GFP)的双顺反子自身失活型慢病毒载体.采用脂质体转染法将慢病毒载体三质粒转染293T细胞,经共培养法感染免疫磁珠分离的小鼠CD4+CD25-T细胞,流式细胞术(FCM)检测基因转染效率及细胞Foxp3、CD25、GITR、CTLA-4的表达,CCK-8法、ELISA法检测其增殖、免疫抑制能力及细胞因子分泌的变化.结果 成功构建了慢病毒表达质粒pXZ208-IRES-GFP、pXZ208-Foxp3-IRES-GFP,包装的重组慢病毒滴度达106IU/ml.以pXZ208-IRES-GFP为阴性对照组,共培养法感染CD4+CD25-T细胞,实验组细胞Foxp3、CD25、CTLA-4、GITR表达升高.在抗CD3ε单抗、抗原呈递细胞存在条件下,实验组细胞增殖能力及IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的分泌均低于阴性对照组(P<0.01);且该细胞可显著抑制CD+CD25-T细胞的增殖.结论 成功构建了自身失活型慢病毒载体介导的鼠基因工程Treg细胞;基因工程Treg细胞具有与CD4+CD25+Treg细胞相似的表型及低增殖性和免疫抑制性.     

IL-17和IFN-γ在红内期间日疟原虫感染者外周血T细胞亚群中的表达

目的：观察分析间日疟原虫感染患者外周血T细胞亚群中分泌IL-17和IFN-γ的细胞的表达水平。方法采用流式细胞术检测分析患者组（PV）和健康对照组（HD）外周血CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD8-和γδT细胞中分泌胞内因子IL-17、IFN-γ的细胞的百分比。结果在所有检测的细胞亚群中,分泌IFN-γ的CD3＋CD8-和γδT细胞在其所属亚群中所占比例明显高于健康对照组,分泌IL-17的γδT细胞的比例明显高于健康对照组。结论本研究对于理解机体抗疟原虫的细胞免疫的功能状态具有一定意义。     

银屑病患者外周血树突状细胞功能的体外研究

目的研究寻常型银屑病患者外周血树突状细胞(DC)激活及促进T淋巴细胞分化的功能。方法用体外培养细胞法培养DC,流式细胞术检测DC细胞表面标志,ELISA法检测培养细胞上清中IL-12、IL-4、IFN-γ和IL-1β的含量。结果银屑病患者DC与正常人相比,其细胞表面标志CD83和CD86表达率明显升高(P<0.001),分泌IL-12明显增多(P<0.05),IL-4和IL-1β分泌明显减少(P<0.001),IFN-γ分泌无差异。结论寻常型银屑病患者外周血DC的抗原提呈能力和激活T淋巴细胞的功能增强,而且促进TH0向TH1分化的能力增强。     

肾癌患者外周血Th1/Th2和Tc1/Tc2细胞因子的表达

目的检测不同临床分期肾癌患者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞中细胞因子的表达水平,分析Th1/Th2及Tc1/Tc2漂移对肾癌发生和转移的临床意义。方法用流式细胞仪检测60例不同分期肾癌患者和40例正常对照者外周血CD4+T细胞、CD8+T细胞分泌的IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-6和IL-10的表达水平。结果与正常对照组相比,无症状型肾癌患者各细胞因子的表达无明显差异,而局限型患者Th1、Tc1类细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平降低(P<0.01),局部进展型和转移型肾癌患者Th1、Tc1类细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α分泌水平明显下降(P<0.01);而Th2、Tc2类细胞因子IL-4、IL-6(P<0.05,P<0.01)分泌水平升高。结论 Th1/Th2偏移和Tc1/Tc2偏移促进了晚期肾肿瘤的进展和转移。T淋巴细胞亚群改变导致免疫功能失调,使肿瘤细胞发生免疫逃逸。     

全血和外周血单个核细胞检测IL-17和IFN-γ的比较

目的通过比较全血标本和外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素17(IL-17)和γ-干扰素(IFN-γ)的检测率,为今后检测外周血中IL-17的相关试验中有没有必要分离PBMC提供依据。方法采集健康成年人外周血,密度梯度离心法分离PBMC,收集中性粒细胞(PMN)和自体血浆。流式细胞仪和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组中IL-17和IFN-γ。结果 PBMC+PMN组、PBMC+血浆组、PBMC+PMN+血浆组和全血组中CD3+T细胞中分泌IL-17细胞的比例(分别为0.30%,0.26%,0.55%,1.25%)与PBMC组(0.10%)比较,差异有统计学意义(P0.05);各组γδT细胞中分泌IL-17细胞的比例(分别为2.18%,1.20%,3.87%,7.28%)与PBMC组(0.44%)比较,差异有统计学意义;CD3+CD8+T细胞中分泌IL-17细胞的比例(分别为0.29%,0.24%,0.42%,2.63%)与PBMC组(0.14%)比较,差异有统计学意义;CD3+CD8-T细胞中分泌IL-17细胞的比例(分别为0.52%、0.48%、0.91%、0.93%)与PBMC组(0.19%)比较,差异有统计学意义(P0.05)。全血中IL-17浓度(109.90±38.68)pg/mL也明显高于PBMC中IL-17浓度(37.06±6.45)pg/mL,差异有统计学意义(P0.05)。结论与分离出的PBMC相比,全血标本更有利于提高IL-17和IFN-γ的检出率。     

癌症患者的T淋巴细胞亚群免疫功能的研究

目的为研究癌症患者的T细胞亚群及细胞因子的分泌情况。方法分离癌症患者与健康人外周血单个核细胞,用流式细胞仪测定外周血CD4 和CD8 细胞,同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定其血清细胞因子IFN-γ和IL-4的含量。结果癌症患者组的CD4 细胞比例偏低(P<0·05),CD8 细胞比例明显偏高(P<0·01),CD4 /CD8 比值倒置,低于对照组(P<0·01)。IFN-γ的水平低于对照组,而IL-4无差异。T细胞亚群Th1/Th2比值与对照组差异有统计学意义(P<0·05)。结论癌症患者T淋巴细胞的免疫功能存在不同程度的低下。     

特发性血小板减少性紫癜患者T淋巴细胞亚群及IL-2、IFN-γ、IL-4检测的临床意义

目的检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者T淋巴细胞亚群及白细胞介素(IL)-2、IL-4、γ-干扰素(IFN-γ)的水平与外周血血小板的关系及意义。方法采用ITP患者和正常人的血清用改良碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)桥联酶免疫法检测T细胞亚群(CD3、CD4、CD8),用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果ITP患者CD3、CD4、IL-2、IFN-γ的水平明显减少,IL-4、CD8水平增高,与正常对照组相比差异均有显著性。结论ITP患者T细胞亚群比例失衡即CD4/CD8比例降低,IFN-γ和IL-2降低,IL-4升高,使机体体液免疫亢进,抗血小板抗体(PAIg)增多,导致外周血血小板减少。     

支气管哮喘患者外周血PD-1，IFN-γ，IL-4与Th细胞及T细胞亚群水平表达的临床意义研究

目的　探讨支气管哮喘患者外周程序性死亡受体1（programmend cell death protein l, PD-1）、干扰素-γ（intorferon-γ,IFN-γ）、白细胞介素-4（interleukin-4,IL-4）与辅助性T细胞（helper-T cell, Th细胞）及T细胞亚群水平表达的临床意义。方法　选取2019年9月～2020年9月就诊于西安国际医学中心医院的80例哮喘患者为研究组,另以同期在该院体检的80例健康成人为对照组,采用肺功能仪检测两组研究对象的肺功能指标;ELISA法检测两组研究对象血清PD-1,IFN-γ和IL-4水平;单克隆抗体间接免疫荧光法检测两组研究对象外周血Th细胞和T淋巴细胞亚群占比,比较两组以上指标差异并分析其临床意义。结果　与对照组相比,研究组肺功能指标FEV1和FEV1/预计值百分比（fevl%pred）、血清PD-1和IFN-γ水平、外周血Th1细胞占比、Th1/Th2比值、CD8+水平以及CD4+/CD8+比值均显著降低,血清IL-4表达水平和外周血Th2细胞及CD4+水平占比均显著升高,差异均有统计学意义（t=3.221~19.847,均P＜0.01）,而两组CD3+水平无显著差异（t=1.132,P=0.259）。结论　支气管哮喘发作伴随着患者血清PD-1水平降低以及IL-4水平增高,从而抑制了Th1细胞产生IFN-γ,并使得Th1/Th2和CD4+/ CD8+平衡状态破坏,各细胞及细胞因子相互制约、相互调节,构成复杂的调节网络,对哮喘的诊断治疗有重要意义。     

微小核糖核酸155对不稳定性心绞痛患者CD4+T淋巴细胞的调控作用

目的 探讨微小核糖核酸-155 (miRNA-155)对不稳定性心绞痛(UAP)患者外周血CD4 +T淋巴细胞的调控作用,从而阐明miRNA-155在UAP发病中的作用机制。方法 选取住院的UAP患者21例,同时以疑似不典型冠心病症状而冠脉造影正常的住院患者18例作为对照组。采用实时定量PCR检测外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155表达水平,酶联免疫法检测血清干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)表达水平。免疫磁珠法分选10例UAP患者外周血CD4 +T淋巴细胞,将分离的细胞分为对照组、miRNA-155组和miRNA-155抑制物组。对培养的细胞进行干预后,流式细胞术检测辅助性T细胞Th1和Th2数量,实时定量PCR及蛋白免疫印迹法检测IFN-γ受体α(interferon gamma receptor alpha,IFN-γRα)、T细胞表达T盒(T-box expressed in T cells,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA-binding protein 3,GATA-3)的mRNA及蛋白表达,酶联免疫法检测细胞培养液上清IFN-γ、IL-4的表达。结果 UAP患者外周血CD4+T淋巴细胞miRNA-155与血清IFN-γ表达较对照组差异具有统计学意义(P＜0.01),且miRNA-155的表达与血清IFN-γ呈显著正相关(r=0.842,P＜0.01)。与对照组比较,体外培养CD4 +T淋巴细胞miRNA-155组Th1数量、T-bet mRNA及蛋白、培养液上清IFN-γ表达显著增加,IFN-γRα蛋白表达降低,差异具有统计学意义(均P ＜0.01);Th2数量、GATA-3、IFN-γRα的mRNA、GATA-3蛋白表达及培养液上清IL-4无明显改变(均P＞0.05);miRNA-155抑制物可有效地阻断miRNA-155的上述作用。结论 miRNA-155主要通过影响Th1细胞的分化和功能,参与对CD4 +T淋巴细胞的调控,在UAP发病机制中具有重要的作用。     

IL-23在单纯疱疹病毒Ⅱ型致病中的作用

目的 探讨IL-23在单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)致病机制中的作用.方法 应用ELISA法检测HSV病毒感染复发患者外周血IL-23、IL-12、IFN-γ、IL-14、IL-10水平,以及细胞培养液中IFN-γ水平,流式细胞仪检测记忆性CD4+T细胞表达IFN-γ的水平,同时设立健康对照组进行比较.结果 生殖器疱疹复发患者(RGH)组血清IL-23、IL-12、IFN-γ水平明显低于健康对照组,IL-14、IL-10水平明显高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01);IL-23剂量依赖性诱导患者单个核细胞(PBMC)产生IFN-γ,并刺激记忆性CD4+T细胞表达IFN-γ.结论 IL-23等Th1型细胞因子在RGH患者体内水平低下,Th1/Th2平衡失调,机体不能有效抑制病毒,是导致病情反复的重要原因;IL-23可能在体内同样刺激T细胞产生IFN-γ,发挥抗病毒效力.     

人脐带源间充质干细胞体内外移植的免疫学特征

背景：部分体外实验证实人脐带源间充质干细胞具有同种异体的免疫耐受特性,然而对其体内研究尚处于异种异体之间,且结果及机制缺少统一性。目的：培养人脐带源间充质干细胞,通过体内外试验分析其移植免疫学特性。方法：应用组织块贴壁法提取人脐带源间充质干细胞,通过体外淋巴细胞混合反应检测其同种异体免疫耐受作用;应用流式细胞仪检测体内行人脐带源间充质干细胞移植前后患者血液中CD4、CD8浓度及比值变化,并通过ELISA方法对比体外淋巴细胞混合培养前后血液、培养上清及体内移植前后患者血液中白细胞介素2,10、γ-干扰素的浓度变化。结果与结论：体内外实验中,混合淋巴细胞反应前后血浆及细胞上清中的细胞因子浓度变化呈相似趋势：白细胞介素10较反应前上升（P〈0.05）,γ-干扰素较反应前下降（P〈0.05）。人脐带源间充质干细胞移植后患者T细胞亚群中CD4＋/CD8＋比值较移植前轻度下降。说明人脐带源间充质干细胞具有同种异体免疫耐受及免疫调节作用。     

强直性脊柱炎外周血Th17细胞的检测及意义

目的探讨Th17细胞在强直性脊柱炎(AS)患者外周血中的水平及意义。方法取20例AS患者(分AS病情稳定组及活动组各10例)和健康人外周血单个核细胞(PBMC)、免疫磁珠分选CD4+T细胞,用或不用非特异性刺激剂(anti-CD3、anti-CD28),然后加佛被酯/离子霉素,经固定/透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术检测CD4+T细胞内白细胞介素-17(IL-17)、γ-干扰素(IFN-γ)、及IL-6水平。结果免疫磁珠分选CD4+T细胞纯度达90%以上。AS病情活动组IL-17表达水平较病情稳定组和健康对照组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。用anti-CD3、anti-CD28刺激后,CD4+T细胞IL-17胞内表达水平较无刺激有一定的增加。AS患者CD4+T细胞IFN-γ胞内表达水平呈现与IL-17表达相似的特点。结论 AS患者外周血CD4+T细胞胞内IL-17和IFN-γ呈高表达,提示分泌IL-17的Th17细胞和分泌IFN-γ的Th1细胞共同参与了AS发病过程。     

Dectin-1 diversifies Aspergillus fumigatus-specific T cell responses by inhibiting T helper type 1 CD4 T cell differentiation

Pulmonary infection of mice with Aspergillus fumigatus induces concurrent T helper type 1 (Th1) and Th17 responses that depend on Toll-like receptor/MyD88 and Dectin-1, respectively. However, the mechanisms balancing Th1 and Th17 CD4 T cell populations during infection remain incompletely defined. In this study, we show that Dectin-1 deficiency disproportionally increases Th1 responses and decreases Th17 differentiation after A. fumigatus infection. Dectin-1 signaling in A. fumigatus-infected wild-type mice reduces IFN-γ and IL-12p40 expression in the lung, thereby decreasing T-bet expression in responding CD4 T cells and enhancing Th17 responses. Absence of IFN-γ or IL-12p35 in infected mice or T-bet in responding CD4 T cells enhances Th17 differentiation, independent of Dectin-1 expression, in A. fumigatus-infected mice. Transient deletion of monocyte-derived dendritic cells also reduces Th1 and boosts Th17 differentiation of A. fumigatus-specific CD4 T cells. Our findings indicate that Dectin-1-mediated signals alter CD4 T cell responses to fungal infection by decreasing the production of IL-12 and IFN-γ in innate cells, thereby decreasing T-bet expression in A. fumigatus-specific CD4 T cells and enabling Th17 differentiation.     

结核多肽特异性细胞内因子多色流式分析

目的建立能同时检测CD3、CD4、CD8表型及胞内因子IFN-γ、IL-4、TNF-α的多色胞内细胞因子染色流式细胞术;评价六条结核特异性多肽的性能。方法将结核患者组及健康对照组的PBMC,用结核特异性多肽或PMA刺激培养后,通过胞内细胞因子流式检测术,收集荧光标记阳性的淋巴细胞等;从而确定各亚群IFN-γ、IL-4、TNF-α阳性细胞的数量及百分率,得出两组间及各多肽间的性能差异。结果 1.各多肽均能刺激活化结核患者PB-MC产生IFN-γ等细胞因子,但百分率较低;IFN-γ及IL-4多数小于1%,而TNF-α则在大约10%左右。与对照组比较,IFN-γ及TNF-α的均值分别高1-12倍或1-3倍,IL-4＋/CD4＋T淋巴细胞活化率的倍数较小,而IL-4＋/CD8＋的倍数则较大;2.不同多肽刺激产生细胞内因子的比较：除多肽H256与H210活性能刺激CD4＋亚群分泌更多IFN-γ外,其余各多肽刺激产生因子的性能无统计学差异;3.对于IFN-γ及IL-4因子,各多肽均无CD4＋或CD8＋亚群差异,但各多肽均可刺激CD8＋细胞亚群产生更多TNF-α;4.双阳性（IFN-γ及TNF-α阳性）多功能T细胞分析,经多克隆刺激剂（PMA）活化后,IFN-γ＋/CD4＋及IFN-γ＋/CD8＋T细胞分别有83.0%及79.9%（均值）为双阳性细胞,而经多肽刺激后则为68.1%及65.7%（均值）。结论多色流式胞内因子染色能很好地检测特异性多功能细胞;所用的6条多肽均能活化结核特异性淋巴细胞产生细胞因子,但细胞因子的活化率较低。     

脓毒症大鼠调节性T细胞凋亡对辅助性T细胞漂移的影响及血必净注射液的干预作用

目的 探讨脓毒症大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡对辅助性T细胞(Th)漂移的影响及血必净注射液的干预作用.方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、血必净组,每组8只.行盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.于第3日采用免疫磁珠法分选各组CD4+CD25+Treg并培养12 h,用流式细胞仪检测Treg凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)的分泌量;再将CD4+CD25+ Treg与CD4+CD25-T细胞1∶1共培养,刀豆素A刺激68 h,ELISA检测Th1、Th2、Th17分泌的γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-17水平.结果 正常组Treg凋亡率[(12.03±0.89)%]与假手术组[(9.48±2.17)%]比较差异无统计学意义;模型组Treg凋亡率[(5.87±0.44)%]明显低于正常组和假手术组;而血必净组的Treg凋亡率[(27.29±2.48)%]显著高于其他各组(P均<0.01).Foxp3、CTLA-4表达和IL-10分泌量随Treg凋亡率增加而减少,相关系数(r)分别为-0.878(P=0.042)、-0.877(P=0.042)、-0.743(P=0.010).与正常组比较,模型组IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值均明显升高[IFN-γ:(254.70±44.88)ng/L比(0.68±0.78)ng/L,IL-4:(8.82±0.61)ng/L比(3.48±0.98)ng/L,IFN-γ/IL-4比值:30.28±4.87比0.23±0.30,P均<0.01];而血必净组IFN-γ[(491.54±84.28)ng/L]和IFN-γ/IL-4比值(45.31±8.01)均显著高于模型组(P<0.01和P<0.05);各组间IL-17水平无明显差异(P均>0.05).结论 脓毒症时Treg凋亡率增加可减轻对效应T细胞的抑制功能,血必净注射液能有效促进脓毒症Treg凋亡,介导Th2向Th1漂移.     

IL-2、IL-7和IL-15联合对T细胞的体外扩增效应

为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞（DC）和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr释放测定及ELISPOT试验分别测定不同培养条件下细胞的增殖程度、IFN-γ分泌细胞的频率、抗原特异性T细胞的杀伤活力、细胞的凋亡状态和分化能力。结果显示：T细胞在周期性刺激后,用CD3/28微珠的短期扩增效应最好,但多轮刺激后联合应用IL-2,IL-7和IL-15对细胞的扩增最强。Cr释放试验表明,CD3/28微珠扩增的T细胞不具有杀伤活力,高浓度IL-2诱导的T细胞杀伤活性最强,其次为联合应用IL-2,IL-7和IL-15。ELISPOT显示不同培养条件诱导出的分泌IFN-γ的T细胞频率从高到低依此为高浓度IL-2〉联合应用IL-2,IL-7和Il-15〉低浓度的IL-2〉CD3/28微珠。细胞表型分析显示高浓度IL-2和联合应用IL-2,IL-7和Il-15扩增的细胞含有较高比例的CD3＋CD8＋T细胞。对细胞的凋亡测定表明联合应用IL-2,IL-7和IL-15获得的T细胞的存活率最高,处于凋亡早期的细胞比例最低。细胞增殖试验显示联合应用IL-2,IL-7和IL-15扩增的细胞分化能力最强。结论：本研究建立了一种快速有效地体外扩增T细胞的方法,其中联合应用IL-2,IL-7和IL-15对T细胞的扩增最显著,获得的T细胞存活率最高,分化能力最强,该细胞同时也含有较高频率的IFN-γ分泌细胞且表现出较强的杀伤活力。