矽肺患者肺泡灌洗液的肿瘤坏死因子检测和促成纤维细胞生长能力的研究

对５６例矽肺中尉得支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）及ＢＡＬＦ中肺巨噬细胞（ＡＭ）无血清培养上清液中ＴＮＦ含量进行了检测，同时探讨了它们对人胚肺成纤维细胞（ＦＢ）增殖活性的影响，结果表明：ＢＡＬＦ中可疑矽肺上ＴＮＦ含量高于其它各种期矽肺，随着期别增加而减少，ＡＭ上清液中ＴＮＦ含量ＩＩ期高于Ｉ期，ＢＡＬＦ和ＡＭ上清液促ＦＢ增殖活性与ＴＮＦ含量高低有一定关系，随着ＴＮＦ浓度增高而增高，但不成平行关系，这可能     

血小板激活因子对人胚肺成纤维细胞生长的调节

我们曾检测了矽肺患者体内ＰＡＦ（血小板激活因子）的含量，结果表明矽肺病人血浆ＰＡＦ含量升高，提示ＰＡＦ参与矽肺的发生发展。为了解ＰＡＦ对ＦＢ（成纤维细胞）的生长、调节作用，本研究采用体外细胞学研究的方法研究ＰＡＦ对ＦＢ生长的影响，结果表明ＰＡＦ能有效地促进ＦＢ的增殖、它与其它细胞因子如ＴＮＦ、ＩＬ－１等井同调控ＦＢ的增殖和胶原的生成。     

煤尘刺激肺泡巨噬细胞对人胚肺成纤维细胞的作用

目的了解煤尘对肺成纤维细胞增殖的影响。方法采用不同浓度煤尘刺激兔肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）,观察其上清液对体外培养的人胚肺成纤维细胞（ＨＥＬＦ）的作用,测定ＨＥＬＦ的增殖程度、培养液上清中羟脯氨酸（Ｈｙｐ）含量,了解胶原合成能力。结果空白对照、ＰＡＭ、煤尘组和阳性对照组（二氧化硅）ＨＥＬＦ的增殖程度均数分别为０．２８５、０．３６８、０．３９８、０．７６８,Ｆ＝９３．９２,Ｐ＜０．０１。其中２００ｍｇ／Ｌ煤尘作用于ＰＡＭ后,其上清液对ＨＥＬＦ有显著刺激增殖作用（Ｐ＜０．０１）;１００、２００ｍｇ／Ｌ煤尘对ＨＥＬＦ的增殖率分别为９．７４％、１７．００％。１００ｍｇ／Ｌ组Ｈｙｐ含量为（３０．３９±０．２７）ｍｇ／Ｌ,明显高于ＰＡＭ对照组［（２７．５８±１．４６）ｍｇ／Ｌ］,Ｐ＜０．０５。结论一定浓度煤尘体外作用于ＰＡＭ,可刺激成纤维细胞增殖,同时伴有胶原合成能力的增加。     

矽肺相关蛋白的纯化,鉴定及其促成纤维细胞增殖作用

目的分离、鉴定与矽肺发生、发展过程相关的几种蛋白质,并测定其促成纤维细胞增殖的活性。方法采用高压液相色谱技术包括凝胶过滤柱层析、离子交换柱层析、反相Ｃ４高压液相色谱柱层析,分别对矽肺大鼠肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）、肺泡巨噬细胞冻融物（ＡＭＥ）及其条件培养液（ＡＭＣＭ）进行分离纯化,并通过Ｎ末端氨基酸序列的测定来鉴定这些蛋白质。结果（１）染尘２１天后,矽肺大鼠ＢＡＬＦ中白蛋白含量明显升高;（２）从ＢＡＬＦ、ＡＭＥ和ＡＭＣＭ中除纯化到相对分子质量为１５４００的溶菌酶外（其刺激成纤维细胞增殖的活性为１４０％）,还纯化到一种新的具有明显促成纤维细胞增殖的细胞因子（Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｐｒｏｍｏｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ,ＦＧＰＦ）,其最适作用浓度为２．０～６．０μｇ／ｍｌ。结论巨噬细胞分泌的ＦＧＰＦ和溶菌酶在矽肺纤维化过程中可能有重要作用。     

硒酸酯多糖对人乳腺癌细胞株（BCaP—37）生物学作用的研究

为探讨硒酸酯多糖的抗肿瘤机理，用细胞培养技术、图像细胞分析技术（ＩＣＭ）和ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ方法检测，经硒酸酯多糖作用后中国人乳腺癌细胞株（ＢＣａＰ－３７）的增殖、细胞周期、总ＤＮＡ含量、细胞核面积以及表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）、癌基因Ｃ－ｅｒｂＢ２ｍＲＮＡ的表达水平。结果发现，硒酸酯多糖（３．０～１２０ｍｇ／Ｌ）对ＢＣａＰ－３７增殖有抑制作用，且有时间和剂量依赖效应。经硒酸酯多糖（１５ｍｇ／Ｌ、６０ｍｇ／Ｌ）处理４天的细胞，在图像细胞分析反映细胞增殖能力的指标中，细胞核面积均显著低于对照组。６０ｍｇ／Ｌ硒酸酯多糖处理的细胞其ＥＧＦＲ、Ｃ－ｅｒｂＢ２ｍＲＮＡ表达水平受到明显抑制。提示硒酸酯多糖能抑制乳腺癌细胞增殖，其机理可能是对ＥＧＦＲ，Ｃ－ｅｒｂＢ２ｍＲＮＡ表达水平的调节。     

22种抗生素对肺炎克雷伯菌肺炎亚种抑菌浓度的研究

用ＡＭＳ法测定２２种抗生素对１０５株ＫＰＰ的抑菌浓度，结果显示ＣＩＰ的抑菌浓度为０．６４ｍｇ／Ｌ，ＧＥＮ、ＴＯＢ、ＡＭＩ、ＣＦＸ、ＩＭＩ、ＣＦＴ、ＣＦＳ、ＣＦＵ、ＣＥＴ、ＴＥＰ、ＣＦＺ、ＣＦＰ为１．０８～９．９５ｍｇ／Ｌ，ＡＺＴ、ＣＦＡ、ＰＩＰ、ＴＩＡ、ＡＭＰ、ＭＥＺ为１０．１７～３７．０５ｍｇ／Ｌ，ＮＩＴ为９０．９６ｍｇ／Ｌ，ＴＩＣ为１５８．１９ｍｇ／Ｌ，ＣＡＲ为３５５．８６ｍｇ／Ｌ。在痰液与粪便分离的ＫＰＰ中，ＭＥＺ、ＮＩＴ、ＴＩＣ对痰液分离菌的抑菌浓度明显高于粪便分离菌（Ｐ＜０．０５），其他１９种抗生素无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。     

Ge—132对人乳癌细胞株BCaP—37的生物学作用

应用细胞培养技术，分子杂交的Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ法和图像细胞分析技术（ＩＣＭ），研究Ｇｅ—１３２对人乳癌细胞株ＢＣａＰ—３７的生物学作用。细胞生长曲线的结果显示，Ｇｅ—１３２的３个实验组（１０．０ｍｇ／Ｌ，１００．０ｍｇ／Ｌ，２００．０ｍｇ／Ｌ）对细胞的生长没有显著抑制作用，并对细胞的毒性作用很小。基因检测显示，高浓度Ｇｅ—１３２（２００．０ｍｇ／Ｌ）对癌基因Ｃ—ｅｒｂＢ，和癌相关基因ＥＧＦＲ ｍＲＮＡ的表达具有抑制作用。ＩＣＭ的四项指标显示，Ｂ和Ｃ两实验组（１０．０ｍｇ／Ｌ，２００．０ｍｇ／Ｌ）ＤＩ值呈异倍体。表现为恶性细胞的特征，两组核面积显著低于对照组（Ｐ＜０．０ｌ）：Ｃ组的Ｓ期百分比显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。综合评价ＩＣＭ各项指标发现，Ｇｅ—１３２（２００．０ｍｇ／Ｌ）对细胞的增殖有一定抑制作用。     

山莨菪碱防治急性肺损伤及其机理探讨

为探讨山莨菪碱（ＡＤＭ）防治内毒素性急性肺损伤（ＡＬＩ）的效果及其分子机制,采用动物随机分成正常对照组（ＮＳ）,内毒素损伤组（ＬＰＳ）和山莨菪碱组（ＡＤＭ）,分别观察肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）的ＷＢＣ分类及计数,血浆及ＢＡＬＦ中ＴＮＦ浓度,Ｐ６５表达。结果显示血浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和ＢＡＬＦ浓度变化在注射ＬＰＳ后各时点,ＡＤＭ组与ＬＰＳ组相比较,ＴＮＦ浓度增高明显减少（Ｐ〈０．０１）;注射ＬＰＳ５     

3种煤尘细胞毒性与其成纤维细胞效应的关系

采用ＳＥＭ／ＥＤＸＳ和ＸＰＤ检测不同变质期３种煤尘的化学元素和矿物成分．将不同浓度的煤尘作用于大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ），测定粉尘－ＡＭ上清液中ＰＧＥ２、ＭＤＡ、ＬＤＨ含量和细胞存活率。将煤尘和标准石英作用过的粉尘－ＡＭ上清液，再作用于成纤维细胞。选用３Ｈ－ＴｄＲ同位素掺入法、ＭＴＴ法和放射自显影法，检测２ＢＳ细胞的增殖能力；对二甲氨基苯甲酸法测定２ＢＳ细胞胶原合成；在透射电镜下，观察２ＢＳ细胞超微结构变化．并测算其粗面内质网的扩张程度．结果显示：３种煤尘细胞毒性大小顺序Ａ＞Ｍ＞Ｆ，并不与其致纤维化效应强弱的顺序（Ｆ＞Ａ＞Ｍ）相一致。这可能与其矿物成分有关。     

染石英及石棉尘大鼠肺灌洗液SDS-PAGE测定

目的探讨尘肺发病机理。方法采用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）技术对染石英（２５ｍｇ／只）或石棉尘（５ｍｇ／只）大鼠支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）进行了测定,并在光镜下观察天狼星红染色肺组织Ⅰ、Ⅲ型胶原分布情况。结果染石英不同时间大鼠ＢＡＬＦ中存在５条分子量分别为９０,６６,６０,２５,１４ＫＤ的蛋白质条带。染石棉大鼠ＢＡＬＦ仅有一条带,分子量为６６ＫＤ。染石英两周时,大鼠肺组织细胞纤维性结节中即有少量Ⅰ型胶原沉积,２个月时Ⅰ型胶原明显增加、粗大。石棉组３个月时肺间质中有Ⅰ型胶原存在。两组均未见明显Ⅲ型胶原。结论染石英大鼠ＢＡＬＦ中不同分子量蛋白质的出现可能对矽肺的发生有一定的促进作用     

单核细胞株在矽肺体外研究中的应用

目的 探索具有肺泡巨噬细胞特性的人血单核细胞株（ＴＨＰ－１细胞）在矽肺发生机制体外研究中的应和。方法 观察二氧化硅（ＳｉＯ２）刺激ＴＨＰ－１细胞或佛波酯（ＰＭＡ）诱导分化的ＴＨＰ－１细胞培养上清液对成纤维细胞（ＣＨＬ）增殖和核仁组成区相关的嗜银蛋白（Ａｇ－ＮＯＲｓ）形成,肺泡上皮细胞（ＣＣＬ－６４）迁移以及大鼠矽肺样病变发生的影响。同时对ＰＭＡ诱导分化的ＴＨＰ－１细胞受ＳｉＯ２刺激的化学发光进行研     

二氧化硅刺激肺成纤维细胞间隙连接功能下调的研究

目的　探索矽肺发病过程中二氧化硅(SiO     

嗜银蛋白在矽肺纤维化过程中的意义

目的探索ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ１细胞（具有肺泡巨噬细胞特性的人血单核细胞株）上清液对中国仓鼠肺成纤维（ＣＨＬ）细胞核仁组成区相关的嗜银蛋白（ＡｇＮＯＲｓ）形成及其增殖的关系。方法通过５个系列浓度（０、５０、１００、２００和５００μｇ／ｍｌ）的ＳｉＯ２刺激ＴＨＰ１细胞培养上清液作用于ＣＨＬ细胞,采用综合改良ＡｇＮＯＲｓ染色技术,观察其ＡｇＮＯＲｓ形成并计数;四唑盐（ＭＴＴ）比色法检测ＣＨＬ细胞的增殖。结果随ＳｉＯ２浓度增大,ＣＨＬ细胞ＡｇＮＯＲｓ颗粒均数、颗粒分散度以及ＭＴＴ分析Ａ５７０ｎｍ值均相应增大,呈良好的剂量反应关系,并和ＳｉＯ２尘的肺泡巨噬细胞（ＰＡＭ）的细胞毒性指数呈高度负相关（ｒ＝－０．９６８,Ｐ＜０．０１）。结论ＳｉＯ２刺激的ＴＨＰ１细胞上清液可以引起肺成纤维细胞ＡｇＮＯＲｓ含量的改变,并与成纤维细胞的增殖和ＳｉＯ２尘ＰＡＭ细胞毒性相一致。     

矿物粉尘诱导的肺泡巨噬细胞因子对肺成纤维细胞作用的研究

了解矿物粉尘诱导的肺泡巨噬细胞因子在肺纤维化中的作用。方法用肺泡灌洗法获取兔ＡＭ，经体外培养，取其上清注，分别用同位素掺入法和四甲基偶氮唑盐比色法测定上清液中肿瘤坏死因子和白细胞介素的活性，并将此上清液与人胚肺成纤维细胞培养，用氟－胸腺嘧啶     

SiO2刺激肺泡上皮细胞间隙连接功能下调的研究

目的探索矽肺发病过程中,SiO2对肺泡上皮细胞增殖和间隙连接通讯功能(GJIC)的影响.方法不同剂量的SiO2刺激SD大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)培养上清液,作用于正常貂肺泡上皮细胞株CCL-64细胞.用四唑盐(MTT)法测定CCL-64细胞增殖(以A570nm值表示);采用激光扫描共焦显微镜(LSCM,LeicaTCS SP)用荧光光漂白后再恢复(FRAP)技术测定CCL-64细胞GJIC功能[以荧光扩散率K(×10-3/s)]表示.结果体积分数为5%的SiO2刺激的PAM上清液能诱导CCL-64细胞增殖(F=9.679,P＜0.01),并抑制CCL-64细胞间GJIC功能(F=20.587,P＜0.01).在50～500 μg/mlSiO2范围内,随SiO2浓度增加,两者均呈良好的剂量依赖性关系(GJICr=-0.943,P＜0.05;增殖r=0.891,P＜O.05).结论SiO2刺激PAM培养上清液可以抑制肺泡上皮细胞的GJIC功能,并诱导细胞增殖.推论肺泡上皮细胞GJIC功能下调在SiO2介导的肺泡上皮组织损伤中有重要的作用.     

二氧化硅致肺成纤维细胞连接蛋白Cx43定位的改变

目的：研究SiO2刺激肺泡巨噬细胞（PAM）培养基上清液对肺成纤维细胞连接蛋白Cx43定位的影响,以深入探索SiO2抑制肺成纤维细胞间隙连接通讯（GJIC）的作用水平。方法：用0－500μg/ml SiO2刺激PAM和佛波酯（TPA）诱导分化的THP－1（TPA－primed THP-1,pTHP-1）细胞（具有PAM特性的人血单核细胞株）的培养上清液对培养的中国仓鼠肺成纤维细胞（GHL）作用24h,采用间接免疫荧光细胞化学法和激光共聚焦扫描显微镜（LCSM）进行连接蛋白Cx43定位的测定。结果：正常对照线相邻细胞连接处有明亮的斑片状标记,聚集分布连接成线;SiO2刺激PAM和pTHP-1细胞培养上清液作用的CHL细胞连接处标亡斑点逐渐减少,Cx43蛋白标记斑点出现在胞浆内,呈无特异性定位状态;随着SiO2剂量的增加,细胞内Cx43蛋白标记斑点向细胞核聚集。结论：SiO2刺激PAM和pTHP-1细胞培养上清液可以改变肺成纤维细胞Cx43蛋白的定位。推测SiO2抑制成纤维细胞GJIC功能可能与细胞连接蛋白Cx43的内移有关。     

槲皮素对SiO_2介导人胚肺成纤维细胞增殖及TGF-β1表达的影响

目的探讨槲皮素抗硅肺纤维化的作用机制。方法以支气管肺泡灌洗法收集硅肺患者AM,在体外用含有SiO2(50μg/ml)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养18h,然后收集培养的AM上清液,加入低、中、高浓度槲皮素(10、20和40μmol/L)作为刺激上清。用组织贴块法获取培养HELF,与刺激上清液共同孵育后,MTT法检测HELF增殖情况,免疫细胞化学法检测HELF中TGF-β1的表达。结果 (1)各槲皮素组能抑制HELF增殖,并且浓度愈大抑制作用愈强,三组与SiO2+AM组(0.620±0.096)相比、中浓度组(0.406±0.070)和高浓度组(0.334±0.050)与AM组(0.490±0.064)相比差异有显著性(P<0.01)。(2)三种浓度槲皮素均能降低HELF中TGF-β1的表达,与SiO2+AM组(0.542±0.095)相比差异有显著性(P<0.05),与AM组(0.394±0.109)和空白对照组(0.314±0.066)比较差异无显著性。结论槲皮素对硅肺纤维化有一定的防治作用。     

蛋白激酶C抑制剂对温石棉诱导肺成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨蛋白激酶Ｃ（ＰＣＫ）信号通路在温石棉诱导的肺泡巨噬细胞因子致人胚肺成纤维细胞（ＨＥＰＦ）增殖中的作用。方法 采用体外细胞培养技术,用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）颜色反应法检测温石棉处理兔肺泡巨噬细胞（ＡＭ）的上清液刺激ＨＥＰＦ增殖和ＰＫＣ抑制剂对其产生的影响,同时设空白对照、正常对照（未加粉尘处理的ＡＭ培养上清液）、阴性对照（标准ＴｉＯ２）和阳性对照（标准ＳｉＯ２）。结果 温石棉处理ＡＭ２４ｈ后的培养上清液再处理ＨＥＰＦ４８ｈ,ＨＥＰＦ增殖,且与粉尘浓度存在显著的剂量－效应关系（ｒ＝０．６７１８,Ｐ〈０．０１）;１００ｕｇ／ｍｌ温石棉染尘组ＨＥＰＦ的净增殖率达４０．５６％,是正常对照组的２．６５倍,高于标准ＳｉＯ２组和标准ＴｉＯ２组。１００ｕｇ／ｍｌ粉尘处理ＡＭ的培养上清液的稀释程度与其促使ＨＥＰＦ增殖的     

ERK1/2通路在AcSDKP抑制PDGF诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)1/2通路在N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)抑制血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用.方法 取新生Wistar大鼠20只,获得原代及传代培养的肺成纤维细胞.实验分为:(1)对照组(含体积分数为0.4%的胎牛血清的DMEM组);(2)PDGF组;(3)PD98059+PDGF组(25 μmol/L PD98059+10 ng/ml PDGF);(4)AcSDKP+PDGF组(1x10-8mol/L AcSDKP+10 ng/ml PDGF).采用噻唑蓝(MTT)法检测肺成纤维细胞的代谢活力,免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的改变;采用Western blot法检测ERK1/2及磷酸化-ERK1/2蛋白表达的改变.结果 与对照组相比,PDGF组大鼠肺成纤维细胞代谢活力增强,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达增强,磷酸化-ERK1/2蛋白表达增高,差异均有统计学意义(P<0.05).AcSDKP+PDGF组细胞代谢活力明显低于PDGF组,免疫细胞化学法检测结果 显示,AcSDKP+PDGF组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达分别为PDGF组的69.3%和67.2%.Western blot法检测结果 显示,AcSDKP+PDGF组细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达分别为PDGF组的92.4%和78.0%,磷酸化-ERK1/2蛋白表达为PDGF组的83.5%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ERK1/2通路在AcSDKP抑制PDGF诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成中发挥了重要作用.