人胎盘CD133+细胞具有高增殖潜能集落形成细胞特性

目的 通过对人胎盘CD133+细胞群中高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)检测与生物学特性的分析,证明人胎盘存在早期造血干/祖细胞(HSPC). 方法 采用机械法制备人胎盘组织(PT)单细胞悬液,用Histopaque-1007分离出单个核细胞(MNC),经磁式分选(MACS)富集CD133+细胞,培养28 d后观察HPP-CFC集落形成能力,用流式细胞仪(FCM)对分选的细胞组份和HPP-CFC进行表型分析,实验全程用脐带血(UCB)作平行比较分析. 结果 培养28 d后,PT-CD133+与UCB-CD133+细胞组份分别扩增了266和362倍,前者低于后者(P<0.01);PT-CD133+与UCB-CD133+细胞中HPP-CFC分别为(32.4±11.2)/5×103、(17.7±5.7)/5×103,前者形成的HPP-CFC数量明显高于后者(P<0.01);PT.CD133+、UCB-CD133+细胞培养至28 d时,除UCB-CD133+组的CD133+CD34-亚群比例无明显改变外,CD133+CD34+、CD133-CD34+和CD133+CD34-(PT-CD133+组)亚型均比培养前减少. 结论 人胎盘组织CD133+细胞中存在HPP-CFC,说明胎盘CD133+细胞群中存在早期HSPC.     

槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖诱导流产孕小鼠子宫组织中CD4+/CD8+ T细胞的影响

目的 探讨小鼠子宫组织中CD4⁺ 和CD8⁺ T细胞在早期胚胎丢失中的意义，研究槲皮素和乙酸龙脑酯对细菌脂多糖（LPS）诱导流产小鼠的保胎效果和对母胎界面免疫平衡的调节作用。 方法 采用LPS尾静脉注射，制造小鼠流产模型，孕4～7d分别口服不同保胎药物，用药前后检测各组（n=10）小鼠子宫组织CD4⁺/CD8⁺T细胞亚群的变化。 结果 LPS促流产后，小鼠子宫壁CD4+T细胞数量显著增多（P<0.01），CD8⁺ T细胞无明显变化（P>0.05），CD4⁺/CD8⁺比值显著升高（P<0.01）。预先口服保胎药物能不同程度抑制LPS的作用。其中以槲皮素和乙酸龙脑酯联合使用组的保胎效果最为明显，CD4^+/CD8⁺比值下降，较LPS流产模型组差异极显著（P<0.01）。 结论 小鼠子宫组织CD4^+/CD8⁺比值升高与早期胚胎丢失关系密切，槲皮素和乙酸龙脑酯能够调节小鼠子宫局部的免疫微环境，从而起到一定的促孕保胎作用。     

粒细胞集落刺激因子动员对供者外周血细胞树突状细胞亚群的影响

目的：研究粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员对外周血单个核细胞（PBMNC）中树突状细胞（DC）亚群及其功能的影响。方法：以CD34^-Lin^- HLA-DR⁺细胞群设门4色荧光分析方法检测25例无关供者G-CSF动员前、后外周血细胞DC亚群；ELISA检测其血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4活性，并分析DC₁/DC₂（CD11c⁺CD123^- /CD11c^-CD123⁺）比值与CD34⁺细胞含量的相关性。结果：G-CSF动员后, 供者PBMNC 的DC₁/DC₂比值显著低于动员前（P<0.05）；DC₁/DC₂与CD34⁺细胞含量呈负相关（r=-0.438, P<0.05），CD34⁺细胞/MNC≥0.4%时， DC₁/DC₂倒置；而血清相关细胞因子IL-12p40、IL-10、IFN-γ、IL-4水平无显著改变（P>0.05）； DC₂ HLA-DR表达上调而CD83不表达。结论： G-CSF动员后，供者外周血CD34⁺细胞数量增加的同时，DC₂数量也增加，这些DC₂尽管HLA-DR表达上调，但仍处前体细胞状态，不直接分泌或调节Th2细胞分泌免疫抑制因子。     

转JAK2基因脐血CD34+细胞体外扩增与生物学特性研究

目的： 探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和转基因细胞的生物学特征。方法: 构建逆转录病毒载体MGI-F₂JAK2，内含有JAK2基因的功能催化区和2个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(F36v，F₂)。应用MiniMACS磁珠分选系统纯化分离脐血CD34⁺细胞，用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD34⁺细胞。转染后的CD34⁺细胞在IMDM培养体系中，将细胞分为AP20187组;FL组；TPO组；AP20187+FL+TPO (AFT) 组。对扩增后的细胞定期检测基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养、染色体核型分析和裸鼠致瘤实验。结果: 分选的CD34⁺细胞纯度>91%，基因转移率为49.32%±6.21%；只有AP20187+FL+TPO组可以使转基因的脐血CD34⁺细胞大量增殖，扩增至第8周时细胞数达10⁹，CD34⁺细胞GFP的阳性率由基线水平逐渐上升并于第8周时达到90%以上；细胞表型为CD33⁺、CD61⁺、Gly-A⁺部分阳性；CD38⁺、HLA-DR⁺强阳性；CD2、CD7、CD19接近阴性。扩增的CD34+细胞可分别形成BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix并以CFU-GM集落为主。扩增后CD34⁺细胞检测染色体核型正常，裸鼠实验无致瘤特性。结论: 转染JAK2 基因的人脐血CD34⁺细胞协同FL和TPO细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞，对今后研究细胞信号转导、造血调控以及开展干细胞和基因治疗都有潜在的应用价值。     

类风湿关节炎CD4+CD28-T细胞与淋巴细胞凋亡的相关性研究

目的: 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血CD4⁺CD28^-T细胞比例与淋巴细胞凋亡异常的相关性。方法: 采用流式细胞术三色分析法检测50例患者和50例健康志愿者的外周血淋巴细胞中CD4⁺CD28^-T细胞比例;通过加入PHA孵育检测RA病人外周淋巴细胞和正常对照的淋巴细胞对激活诱导细胞死亡(AICD)易感性差异;分析CD4⁺CD28^-T细胞比例与外周血淋巴细胞凋亡率的相关性。结果: RA组CD4⁺CD28^-T细胞比例的均数明显高于健康对照组(7.79%±3.52% vs 1.89%±1.78%,P<0.05)。RA组病人外周血淋巴细胞的AICD凋亡率低于健康对照组(11.38%±5.73% vs 19.46%±6.32%,P<0.05)。Spearman相关分析结果显示CD4⁺CD28^-T细胞比例与外周血淋巴细胞AICD凋亡率负相关(r=-0.433,P<0.01)。结论: RA患者外周血中CD4⁺CD28^-T细胞比例增多,活化淋巴细胞生存期延长,这可能参与RA的发病机制。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠CD34+/CD45+细胞在脊髓全横断大鼠模型中的存活及迁移

目的:探讨CD34⁺/CD45⁺细胞移植入脊髓全横断大鼠模型后的存活、迁移及分布情况。方法:体外培养绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠骨髓细胞，经CD34、CD45单克隆抗体鉴定后移植入脊髓全横断大鼠模型脊髓横断处尾侧，分别在术后24 h、48 h、1周、2周、4周和8周行左心腔内灌注，取出脊髓，连续切片（片厚 10 μm），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，并观察荧光细胞的分布范围；用免疫组化法检测CD34⁺/CD45⁺细胞的存活。 结果:脊髓横断处头尾两侧均可见绿色荧光细胞，且多分布于灰质中，散在或聚集成片；免疫组化法可见切片中有CD34⁺/CD45⁺细胞散在。 结论: CD34⁺/CD45⁺细胞可在脊髓全横断大鼠模型的脊髓中存活，并可迁移至脊髓横断处头侧，且随时间的延长迁移距离有所增加。     

血管内皮祖细胞的体外扩增特性研究

目的:探讨血管内皮祖细胞(EPCs)在体外扩增特性。方法:利用磁性活化细胞分选系统(MACS)系统富集CD34⁺细胞,在相同条件下与同批的单个核细胞(MNC)、CD34⁺和CD34^-混和细胞进行对照培养,比较EPCs体外扩增效果。另外研究血管内皮生长因子(VEGF)和传代培养对细胞分化、扩增动力学和细胞凋亡的影响。应用细胞免疫化学和流式细胞术对细胞定性定量分析。结果:MNC培养、CD34⁺和CD34^-细胞混和培养明显高于CD34⁺细胞单独培养EPCs扩增率(P＜0.05),一旦细胞形成线索样结构行传代培养明显低于未传代的细胞凋亡(P＜0.05)。VEGF对细胞凋亡(P＞0.05)无明显影响,这些分化的EPCs免疫细胞化学染色CD34、vWF、KDR、CD31阳性,并且吞噬乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)。培养7d流式细胞检查CD34⁺、AC133^＋分别占贴壁(AT)细胞的68.2%±6.3%(n=6)、57.2%±9.8%(n=6)。结论:MNC培养、CD34⁺和CD34^-细胞混和培养提高了EPCs扩增率,早传代使凋亡率明显降低。VEGF对EPCs体外扩增无明显影响。     

应激状态下大鼠胃壁细胞H+-K+-ATP酶活性测定及电镜酶细胞化学研究

目的：探讨应激状态下大鼠胃壁细胞H⁺-K⁺-ATP酶活性及电镜酶细胞化学染色的变化。方法:将24只SD大鼠随机分为对照组、应激组和应激+奥美拉唑（OM）组，采用水浸-束缚应激（WRS）动物模型，检测胃粘膜溃疡指数（UI）和壁细胞H⁺-K⁺-ATP酶活性，观察壁细胞超微结构变化及H⁺-K⁺-ATP酶细胞化学染色结果。结果:应激组胃粘膜UI和壁细胞H⁺-K⁺-ATP酶活性明显高于对照组（P<0.01和P<0.05），而应激+OM组UI和H⁺-K⁺-ATP酶活性明显低于应激组（P<0.01）；电镜下对照组壁细胞呈静息状态，应激组壁细胞内分泌小管密集呈激活状态，而应激+OM组分泌小管明显扩张，绒毛稀少；酶细胞化学染色显示对照组壁细胞的分泌小管和顶部质膜有少量黑色点状酶反应产物沉积，应激组壁细胞的分泌小管可见多量的、密集分布的黑色点状酶反应产物，而应激+OM组分泌小管上几乎无反应产物沉积。结论:应激状态下大鼠胃壁细胞H⁺-K⁺-ATP酶活性升高，且与壁细胞超微结构改变相一致，提示胃酸是应激性溃疡发生的重要因素之一。     

α1胸腺肽对胸腺细胞发育和成熟的影响

目的:探讨α₁胸腺肽对胸腺细胞发育的影响。方法:测定CD4⁺CD8⁺胸腺细胞群的比例及 5-FU和胸腺肽处理组在CD4^-CD8^-胸腺细胞群上Hh信号的Smo分子(增生反应的潜在阴性调节者)的表达效果来估价胸腺肽对胸腺细胞成熟和发育的影响。结果:发现α₁胸腺肽在30μg/kg的低剂量下显示活性。流式细胞仪分析根据CD4^-CD8^-胸腺细胞上Hh信号的Smo分子的表达确定α₁胸腺肽在此剂量加快了胸腺细胞的成熟。结论:α₁胸腺肽能加快CD4^-CD8^-胸腺细胞向CD4⁺ CD8⁺阶段的发展。     

人源化NOD/SCID小鼠免疫细胞的动态变化与鉴定

目的： 比较脐血干细胞与单个核细胞移植NOD/SCID鼠所建立的人源化SCID模型，分析人源化淋巴细胞重建。方法： 磁珠分选法分离脐血中CD34⁺细胞，淋巴细胞分层液分离脐血单个核细胞，分别经尾静脉输入NOD/SCID小鼠。每隔2周采血至10周，流式细胞术动态检测人源淋巴细胞CD45、CD19、CD3抗原。第10周处死小鼠收集外周血、骨髓、胸腺组织，RT-PCR检测模型鼠组织中人β₂M基因及RAG2基因。结果： 两种类型细胞移植均可重建人源免疫细胞，人源淋巴细胞表达水平均在第8周达高峰。骨髓中人源淋巴细胞表达水平明显高于外周血。RT-PCR在外周血与骨髓检测到人β₂M基因及RAG2基因标志。结论： CD34⁺细胞移植重建人源化NOD/SCID免疫系统模型效果要好于脐血单个核细胞。人源T淋巴细胞在模型鼠骨髓中分化成熟。     

免疫磁性细胞系统分离筛选和荧光标记骨髓干细胞亚群Thy-1low Lin- Sca-1+的研究

目的：探讨免疫磁性细胞分选系统（MACS）分离纯化骨髓干细胞亚群Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺和绿色荧光蛋白（CFDASE）标记它的效果。方法：收集小鼠股骨骨髓细胞，用MACS系统，通过3步分选步骤选择Thy-1^low Sca-1⁺细胞，去除Lin⁺细胞，得骨髓干细胞亚群Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺，流式细胞仪分析其纯度，计算回收率；用CFDASE与Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺细胞共孵育标记。结果：MACS分选Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺细胞纯度和回收率高分别为72.36%和82.43%；CFDASE标记强度高。结论：MACS系统能有效分选骨髓干细胞亚群Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺；CFDASE能对Thy-1^low Lin^- Sca-1⁺细胞进行有效标记。     

Th17细胞联合CD3+CD8-IL-21+T细胞升高与宫颈癌发生发展的关系

目的: Th17细胞在免疫调节中起重要作用,而IL-21与Th17在分化调节和功能行使上密切相关。本研究旨在探讨Th17在宫颈癌发生发展中的作用。方法: 选取37例宫颈癌患者、25例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者和18例健康志愿者作为研究对象,用流式细胞分析术检测外周血中Th17细胞及CD3⁺CD8^-IL-21⁺T细胞的比例。分析两者与临床病理指标之间的关系。结果: 与健康对照组相比,Th17细胞及CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞比例(占淋巴细胞百分比)在CIN组(P<0.01,P<0.05)及宫颈癌组(P<0.01,P<0.05)均明显升高。此外,2种细胞的比例都与临床分期有关,在晚期宫颈癌组明显升高(均P<0.05),并且有淋巴结转移组或脉管浸润组都明显高于相对应的无转移组(P<0.01, P<0.05)或无浸润组(均P<0.01)。此外,在健康对照组和宫颈癌组,Th17与CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞呈正相关,CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞的比例还与肿瘤大小有关(P<0.01)。结论: Th17和CD3⁺CD8^-IL-21⁺ T细胞在宫颈癌患者外周血中的比例上调,在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。     

胆红素对大鼠急性肺损伤形成过程中氧自由基以及caspase-3表达的影响

目的： 探讨胆红素对抗急性肺损伤（ALI）形成的可能机制。方法: 健康雌性Wistar大鼠(190-210 g) 30只，随机分为生理盐水对照组、脂多糖（LPS）致ALI模型组、胆红素干预组。检测肺组织匀浆中羟自由基（OH^-）、过氧化氢(H₂O₂)和超氧阴离子自由基（O₂^·）含量以及肺组织中caspase-3表达的变化。结果: ①ALI模型组肺组织匀浆OH^-、H₂O₂、O₂^·含量及肺组织中caspase-3表达显著高于生理盐水对照组（均P<0.05）。②胆红素干预组肺组织匀浆OH^-、H₂O₂、O₂^·及肺组织中caspase-3表达明显高于ALI正常大鼠（均P<0.05），但少于ALI模型组（均P<0.05）。结论: ①胆红素能在一定程度上减少肺内凋亡细胞数量。②胆红素能减少ALI大鼠肺组织OH^-、H₂O₂、O₂^·水平。③ Caspase-3表达的变化有促脂多糖性肺损伤细胞凋亡作用。     

脐带血AC133+细胞体外扩增及生物学特性的研究

目的研究脐带血穴UCB雪AC133 细胞体外扩增及其生物学特性,动态观察AC133 细胞的免疫表型变化,以了解AC133 抗原与CD34抗原的关系。方法将从新鲜UCB标本中纯化的AC133 细胞接种于无血清无基质的悬浮体系,分别于培养0、7、10、14天检测扩增潜能、免疫表型和集落形成等指标。结果①自早期的AC133 CD34-、AC133 CD34 、CFC-HPP、CFU-GEMM、AC133 及CD34 细胞群至各系定向祖细胞等各阶段造血干/祖细胞穴HSPC雪均得到持续显著的扩增;②AC133 和CD34 细胞的比例随培养时间的延长而迅速降低,AC133 细胞在CD34 细胞中的比例亦明显下降穴从99%降至50%雪,但同一时点AC133/CD34亚群比例均呈现出AC133 CD34-相似文献   

干扰素-α联合GM－CSF诱导慢性髓性白血病细胞向树突状细胞分化

目的：研究干扰素-α（IFN-α）对慢性髓性白血病（CML）骨髓单个核细胞来源的树突状细胞（DCs）发育的影响。 方法： 12例初发慢性期CML患者的骨髓单个核细胞，分别与含如下细胞因子,RPMI-1640培养液共育：rhGM-CSF 1×106U/L联合rhIFN-α 2×106U/L（IFN-α组）、rhGM-CSF 1×10⁶U/L联合rhIL-4 5×10⁵U/L（IL-4组）、单用rhGM-CSF 1×10⁶U/L和单用rhIFN-α 2×106U/L，培养7 d；于第8-10 d，部分孔加入rhTNF-α 5×10⁴U/L。形态学（Wright染色、倒置显微镜）、免疫学（CD80、CD86、CD83、CD1a、HLA-DR）检测；磷脂酰丝氨酸（PS）转位检测 DCs凋亡情况；荧光原位杂交（FISH）对1例CML进行细胞遗传学分析；混合淋巴细胞反应（MLR）检测刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。 结果： CML骨髓单个核细胞经上述细胞因子诱导7 d后，IFN-α组和IL-4组均呈现树突状细胞的典型形态；免疫学鉴定，IFN-α组DCs CD80、CD86、CD83、HLA-DR的表达显著高于IL-4组（P<0.05），经5×104U/L rhTNF-α作用后，两组DCs CD80、CD86、CD83、HLA-DR进一步上调，其中IFN-α组DCs CD80、CD86、CD83、HLA-DR的表达显著高于IL-4组（P<0.05）；经FISH证实来源于白血病细胞；两组DCs均具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力，IFN-α组刺激淋巴细胞增殖的能力明显高于IL-4组(P<0.05)。 结论： IFN-α可促进CML骨髓单个核细胞来源的树突状细胞的分化、活化。这可能是IFN-α在CML中的治疗机制之一。     

CD34+细胞的心肌细胞分化潜能研究

目的:了解粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员的CD34+细胞的心肌细胞分化潜能。方法:用异丙肾上腺素(ISO)复制急性心肌梗死大鼠动物模型,于3 h后用G-CSF动员骨髓造血干细胞进行心肌梗死动物模型的“自身干细胞移植”,用免疫组化和HE染色方法检测动物模型心梗区的CD34⁺细胞浸润以及心肌细胞再生情况。结果:用ISO后24 h,G-CSF处理组大鼠心梗区可见大量CD34⁺单个核细胞浸润,并有CD34⁺的新生心肌细胞生长,2周后疤痕组织不明显;而对照组心梗坏死区有大量以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,无CD34+细胞浸润及新生心肌细胞生长,2周后出现较大量的疤痕组织。结论:G-CSF动员CD34⁺细胞具有向心肌细胞分化的潜能,用G-CSF 动员造血干细胞的“干细胞自身移植”,可治疗急性心肌梗死。     

IL-1β、TNF-α和IFN-γ引起的大鼠胰岛细胞凋亡及牛磺酸的影响

目的： 观察白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和γ-干扰素（IFN-γ）引起胰岛细胞凋亡、胰岛素分泌、Bcl-xL和Bax蛋白表达变化及其牛磺酸的影响。方法： 应用体外单层培养Wistar大鼠胰岛细胞，分别检测IL-1β、TNF-α和 IFN-γ对胰岛细胞凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中NO^-₂/ NO^-₃含量及NOS活性、胰岛素分泌、Bcl-xL和Bax表达的影响，并进一步观察牛磺酸的作用。结果： IL-1β、TNF-α和 IFN-γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加，DNA明显片段化，同时NO^-₂/ NO^-₃含量和NOS活性亦明显升高，胰岛素分泌明显降低, Bcl-xL表达下降和Bax表达增强（P<0.01）；牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用（P<0.01），并有一定的剂量依赖性。结论：牛磺酸能够改善IL-1β、TNF-α和 IFN-γ诱导的胰岛细胞凋亡，其机制可能与抑制NOS活性从而减少NO的生成以及下调Bax/Bcl-xL比例有关。     

编码Na-K-2Cl的基因缺陷小鼠出现听觉和平衡功能障碍及内耳形态异常

目的： 培育突变型纯合子NKCC1^-/-、杂合子NKCC1^+/-及野生型NKCC1^+/+小鼠，将这3种基因型小鼠作为实验平台，研究NKCC1离子通道(Na-K-2Cl,co-transporter)在耳蜗听觉平衡功能中的作用，并观察不同基因型小鼠的内耳形态特征。方法： 利用同窝生各个基因型小鼠NKCC1^-/-（突变纯合子）、NKCC1^+/-（杂合子）和NKCC1^+/+（野生型）为实验对象，采用听觉脑干反应(ABR)和耳蜗内电位(EP)检测技术，对各基因型小鼠的听觉功能和EP进行检测；同时利用光学显微镜观察不同基因型小鼠的内耳形态变化。结果： NKCC1^+/+野生型小鼠听力正常，ABR检测的click短音阈值为［（23.13±3.78）dB,SPL］；EP为(98±16)mV。NKCC1^+/-杂合子小鼠听力低于同窝生的NKCC1^+/+野生型小鼠，ABR检测其Click短音阈值为［（38.49±12.29）dB,SPL］，EP为(78±7)mV。NKCC1^+/+和NKCC1^+/-小鼠ABR的阈值均值在各个频率的差异显著(P<0.01)；两者EP的均值差异也显著 (P<0.05)。NKCC1^-/-突变型纯合子小鼠呈现全聋，ABR各个频率在100 dB均无反应，其EP接近消失（4 mV±6 mV）。NKCC1^-/-突变型纯合子小鼠表现出听觉功能丧失和旋转为主的平衡失调。光镜下NKCC1^+/+野生型小鼠和NKCC1^+/-杂合子小鼠的耳蜗解剖结构无明显异常；NKCC1^-/-突变纯合子小鼠的耳蜗出现前庭膜塌陷、内淋巴腔缩小而致中阶完全消失，并有血管纹萎缩、Corti器缺失、螺旋神经节萎缩；且球囊和椭圆囊膜迷路失去正常结构并出现塌陷等病理改变。结论: NKCC1离子通道在内耳K⁺循环和维系内耳正常听觉平衡功能中起重要作用。NKCC1通道的缺失或功能受限，均可导致耳蜗内淋巴K⁺负荷水平，进而影响耳蜗的听觉平衡功能。     

细胞因子诱导的杀伤细胞的生物学特性研究

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的生物学特性。方法:健康人非贴壁单个核细胞用含IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以LAK细胞作为对照。流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测细胞表型特征;乳酸脱氢酶释放法分析细胞毒活性。结果:诱导2周后,CIK细胞的增殖率达到高峰,CD3⁺细胞占95％以上;第3周细胞生长进入平台期。诱导15d时,CD3⁺CD56⁺NKT亚群占16.5％,比例在2-4周区间内无明显变化。LAK细胞增殖缓慢,显著低于同期CIK细胞增殖率(P＜0.01)。不同效:靶比例CIK细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性溶解率显著高于LAK细胞(P＜0.01)。免疫细胞化学染色结果显示,CIK细胞高度表达HLA-DR和CD54抗原,NKT细胞体积较CD3⁺CD56^-细胞略大,细胞表面有大量伪足。结论:CIK细胞具有高度增殖能力,其体外杀瘤活性明显优于LAK细胞。诱导14-21d,CIK细胞增殖率和CD3⁺CD56⁺阳性细胞率均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用。     

肺癌干细胞中存在容积激活氯通道

目的: 研究肺癌干细胞中是否存在容积激活氯通道。方法: 用免疫磁珠法分选非小细胞肺癌细胞系A549中CD133⁺细胞,用流式细胞术检测其纯度。用全细胞膜片钳记录CD133⁺细胞中是否存在容积激活氯电流。结果: 本实验中免疫磁珠法分选出的CD133⁺肺癌干细胞,流式细胞术检测其纯度为92.14%;在22/40(55%) CD133⁺细胞上记录到容积激活氯电流。结论: CD133⁺肺癌干细胞中存在容积激活氯通道。