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1.
生物治疗是目前国内外治疗恶性肿瘤常规方法即手术治疗、化疗和放疗之外的一种新型疗法.过继性细胞免疫治疗(adaptive cellular immunotherapy,ACI)是生物治疗的一种,它是一种通过将具有抗肿瘤活性的、能直接或间接介导抗肿瘤效应的免疫细胞输注肿瘤宿主体内进行肿瘤治疗的方法[1].对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病变及骨髓净化都具有良好效果[2].细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK细胞)是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞,具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广等优点[3-4],已广泛应用于临床,但疗效差异很大,原因可能与制备CIK细胞的方法、所使用细胞因子的种类和剂量密切相关.本研究拟采用3种方法制备CIK细胞,并比较用这3种方法制备的CIK细胞的生物学特性及其杀瘤活性,为制备高活性的CIK细胞提供方法,以提高CIK细胞临床应用的疗效. 相似文献
2.
细胞因子诱导的杀伤细胞的研究进展 总被引:1,自引:1,他引:0
正常人或患者外周血、骨髓单个核细胞中定期加入IFN-γ、IL-1、IL-2、CD3mAb经2-4W的诱导可获得大量的新型肿瘤杀伤细胞—细胞因子诱导的杀伤细胞CIK,此细胞增殖旺盛杀伤活性高。CIK在体内和体外都具有非MHC限制抗肿瘤活性,在临床上已经用于治疗多种恶性肿瘤表现出强大的杀瘤活性,是一种很好的免疫治疗方法。 相似文献
3.
目的:研究不同激活方式对CIK细胞(Cytoline-induced killer cells,CIK)体外扩增的影响。方法:使用植物血球凝集素(pHYTOHEMAGGLUTININ,PHA)或抗CD3单抗刺激细胞增殖,从脐血单个核细胞定向诱导CIK细胞,用乳酸脱氢酶(LDH)分析法分析细胞毒活性,用流式细胞分析法对不同培养条件下CIK细胞的纯度进行分析。结果:使用抗CD3 mAb刺激生成的CIK细胞在扩增能力、纯度和细胞毒性方面都优于使用PHA刺激生成的CIK细胞。在细胞因子和有丝分裂原加入3d后,将其洗脱,但仍加入IL-2,有利于提高细胞的扩增能力。另外,使用包被的方法将抗CD3 mAb固定在孔板上比悬浮加入效果好。结论:这一结果对于CIK细胞的大量扩增和临床应用具有指导意义。 相似文献
4.
目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)的生物学特性。方法:健康人非贴壁单个核细胞用含IFN-γ、IL-1β、IL-2、CD3单抗诱导CIK细胞。以LAK细胞作为对照。流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测细胞表型特征;乳酸脱氢酶释放法分析细胞毒活性。结果:诱导2周后,CIK细胞的增殖率达到高峰,CD3+细胞占95%以上;第3周细胞生长进入平台期。诱导15d时,CD3+CD56+NKT亚群占16.5%,比例在2-4周区间内无明显变化。LAK细胞增殖缓慢,显著低于同期CIK细胞增殖率(P<0.01)。不同效:靶比例CIK细胞对肝癌细胞BeL-7402的特异性溶解率显著高于LAK细胞(P<0.01)。免疫细胞化学染色结果显示,CIK细胞高度表达HLA-DR和CD54抗原,NKT细胞体积较CD3+CD56-细胞略大,细胞表面有大量伪足。结论:CIK细胞具有高度增殖能力,其体外杀瘤活性明显优于LAK细胞。诱导14-21d,CIK细胞增殖率和CD3+CD56+阳性细胞率均达到高峰,此时期的CIK细胞适合临床应用。 相似文献
5.
细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞的大容量扩增与杀伤活性观察 总被引:34,自引:0,他引:34
建立大容量细胞因子诱导杀伤(Cytokine-inducedkiller,CIK)细胞培养方法,观察CIK细胞回输后对患者细胞免疫功能的影响。采用1000ml培养袋大量扩增患者自体CIK细胞,用MTT法检测CIK细胞杀伤活性,比较回输前后患者外周血单个核细胞(PBMNC)对靶细胞的杀伤活性及其毒副作用。结果表明大容量培养法使自体CIK细胞扩增总量达1.6×1010以上,回输CIK细胞使患者PBMNC的杀伤活性明显增加,未出现毒副作用。因此CIK细胞大容量扩增方法在治疗肿瘤微小残留病变上有着良好的临床应用前景。 相似文献
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目的研究人胸腺球蛋白(TG)在临床治疗级培养体系中,对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)增殖、免疫细胞表型和细胞毒作用的影响。方法分离11例健康正常人外周血单个核细胞(PBMC),γ干扰素预处理;1 d后,TG或CD3 mAb刺激;随后,每3 d补充IL-2等添加物,培养至21 d。台盼蓝拒染法计数细胞总数和活力;流式细胞术分析CD3、CD4、CD8、CD16/CD56和NK细胞活化/抑制受体表达情况以及CD25+Foxp3+调节T细胞(Treg)的变化;乳酸脱氢酶释放法检测细胞毒活性。结果 TG和CD3 mAb均能刺激CIK细胞生长,但CD3 mAb作用弱于TG。培养7 d,2组CIK细胞中,CD3+CD16+CD56+细胞、CD3-CD16+CD56+细胞及NK细胞活化/抑制受体表达均出现一过性减少;培养14 d,开始恢复,并持续增加至21 d;在7 d、14 d和21 d等3个检测点,CD3 mAb组的三者均低于TG组(P0.05),而且,细胞毒活性也低于TG组。值得注意的是,培养7 d,Treg一过性增加,且TG组明显高于CD3 mAb组(P0.05);另外,在整个培养期间,2组CIK细胞中,CD3+CD4+细胞持续减少,而CD3+CD8+细胞在7 d,即迅速增加,并维持该水平至21 d,这种改变在2组间无差异。结论 TG能选择性地促进CIK细胞中主要效应细胞增殖、分化和成熟,提高其细胞毒活性,因此,其具有替代CD3 mAb用于制备临床级CIK细胞制品的可行性;CD3 mAb和TG培养体系均可一过性地扩增负相调控细胞Treg,剔除或减少Treg可能有助于提高主要效应细胞产率。 相似文献
7.
目的:研究-80℃冰箱直接冻存对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)杀伤活性的影响。方法采用非程序降温方法-80℃冰箱冻存CIK,于冻存后6、12、18周复苏,通过LDH释放法分别测定其对K562细胞的杀伤活性,与新鲜未经冻存的CIK的杀伤活性进行比较。结果:未冻存的CIK在培养至第11天时,有较多贴壁成团细胞,而冻存后复苏培养的CIK贴壁成团细胞较少。比较各组细胞杀伤活性,冻存6、12周后复苏的CIK与未冻存的CIK,对K562细胞的杀伤活性无显著性差异(P>0.05),冻存18周后复苏的CIK的杀伤活性与未冻存的CIK对K562细胞的杀伤活性有显著性差异(P<0.05)。结论:采用-80℃冰箱直接冻存CIK,在12周内复苏应用于临床治疗较好。 相似文献
8.
背景:细胞因子诱导的杀伤细胞的培养多采用体积分数10%的血清,但关于血清体积分数对其生长特性的影响少有报道。
目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞在不同血清体积分数培养液中的增殖情况。
方法:分别配制血清体积分数为10%,20%和30% +重组人白细胞介素2等细胞因子的完全培养液培养人细胞因子诱导的杀伤细胞,使用流式细胞仪分析血清体积分数对细胞周期的影响,通过MTT法检测细胞因子诱导的杀伤细胞在不同血清体积分数培养液中的增殖,并观察细胞因子诱导的杀伤细胞的生长状态。
结果与结论:细胞因子诱导的杀伤细胞在体积分数10%血清培养液中增殖速率和增殖指数均最低,在体积分数30%血清培养液中最高,3组细胞的不同时间点的增殖速率差异均有显著性意义(P < 0.05或P < 0.01)。结果证实,体外培养的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖具有血清体积分数依赖性,高血清体积分数培养液的促细胞因子诱导的杀伤细胞增殖效应明显。 相似文献
9.
BACKGROUND:As the existence of tumor stem cells, it is difficult to completely eliminate tumors in clinic.
OBJECTIVE:To explore the tumor-killing effect of gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells.
METHODS:Side population cells from human gastric cancer cell lines were isolated, and tumor antigen was prepared by freeze thawing method. After coculture with dendritic cells, dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells, gastric cancer cell antigen, and gastric cancer stem cell antigen, killing rates of gastric cancer cells were detected using MTT assay. Expression rate of CD83, a mature dendritic cell surface marker, was also detected.
RESULTS AND CONCLUSION:The CD83 expression level and killing rate of gastric cancer cells were both significantly lower in the gastric cancer stem cell antigen group than the other groups (both P < 0.05). These results indicate that gastric cancer stem cells as antigen to stimulate dendritic cells combined with cytokine-induced killer cells can promote the proliferation of gastric cancer cells and elevate the ability to killing gastric cancer cells. 相似文献
10.
目的细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced-killer,CIK)进行临床免疫治疗能够杀伤肿瘤细胞,将MDR1基因转入CIK细胞,观察其是否产生耐药性并且保持其肿瘤杀伤活性.方法用Ficoll密度梯度离心法获得外周血单个核细胞,分别加入IFN-γ,CD3Mab,IL-2,IL-1等细胞因子体外培养获得CIK细胞.在细胞呈对数生长期时,采用电穿孔方法将多药耐药基因PHAMDR质粒转入细胞.转染后72h提取细胞总RNA,RT-PCR鉴定耐药基因表达;流式细胞仪方法检测细胞膜泵蛋白P-gp.四唑蓝比色法(MTT Assay)检测转基因CIK细胞对阿霉素和秋水仙碱的耐药性,同时检测转染前后CIK细胞对人类乳腺癌细胞系(MCF7)的杀伤活性变化.结果转染后CIK细胞出现MDR1基因的转录产物mR-NA;流式细胞仪检测,转染后的CIK细胞表达耐药蛋白P-gp,阳性细胞约为21%.阿霉素对转染后CIK细胞的IC50为0.11mg/ml,转染后CIK细胞对阿霉素的耐受性较转染前CIK细胞(IC50为0.0024mg/ml)增强了45.8倍;秋水仙碱对转染后CIK细胞的IC50为1.34ng/ml,转染后耐受性较转染前CIK细胞增强了11.35倍(IC50为0.118ng/ml).比较转染前后CIK细胞对MCF7肿瘤细胞的杀伤活性无显著性差异(P>0.05).结论用电穿孔方法可以成功地将MDR1基因转入CIK细胞,并使其表现出多药耐药性,转染前后细胞杀伤活性无变化. 相似文献
11.
目的:探索同一来源脐血树突状细胞(DCs)对细胞因子诱导杀伤(CIK)、自然杀伤(NK)细胞杀伤活性和CIK细胞上CD45RO表达的影响。方法:通过细胞因子组合诱导、扩增脐血来源的DCs、CIK和NK细胞,杀伤效应细胞分为两组:A组为接受DCs共孵育6d刺激的CIK、NK细胞,B组为未接受任何刺激的CIK、NK细胞,了解DCs对相应效靶比下CIK、NK细胞杀伤K562、HL-60细胞株细胞毒活性的影响;通过流式细胞术检测两组CIK细胞上CD45RO、CD45RA的表达率。结果:随着效靶比的升高,脐血CIK、NK细胞对肿瘤细胞株的杀伤力增加。在20∶1、10∶1效靶比下,A组CIK、NK细胞对HL-60的杀伤率分别为76.77%±5.76%、55.87%±2.09%,B组为61.14%±3.72%、49.96%±1.51%,A组对HL-60的杀伤明显高于B组;在20∶1效靶比下,A组对K562的杀伤明显高于B组;而在10∶1效靶比下两组之间的杀伤活性未见显著差异;A组CIK细胞上CD45RO表达率显著高于B组。结论:DCs与CIK、NK细胞共孵育可提高CIK、NK细胞的细胞毒活性及增加CIK细胞上CD45RO的表达。 相似文献
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Only in recent years,attentions have been drawn to the significance of expressing killer cell inhibitory receptors(KIR)in T cells.KIRs specifically bind to the corresponding region of the MHC class I molecules and transmit negative signals to prevent cytotoxity of T cells.When the ligands of KIRs are missing,the lysis of the target cells can‘t be avoided.Perhaps the existence of KIRs is the main mechanism for preventing T cells from attacking autologous tissues.The recognition mechanism of the interaction between the KIR^ donor T cells and the recipient‘s MHC class I molecule expressing tissue cells might shed light on the establishment of the immunotolerance for the prevention of allo-graft rejection and graft-versus-host disease. 相似文献
13.
《Human immunology》2015,76(5):385-391
Cytokine-induced killer (CIK) cells represent a heterogeneous cell population, including a large majority of CD3+CD56+ cells, a relatively minor fractions of typical T cells (CD3+CD56−), and natural killer (NK) cells (CD3−CD56+). In order to elucidate the tumor killing mechanism of these three subpopulations of CIK cells, this review summarized the concordances and differences among CD3+CD56+ CIK cells, CD3−CD56+ NK cells and CD3+CD56− T cells to the following aspects: the effects of cell surface molecules, mechanisms of tumor killing, and clinical applications of these cells in immunotherapy. NK cells can be classified into CD56brightCD16− NK cells, which produce cytokines in response to monokine co-stimulation, and the CD56dimCD16+ NK cells, which contribute to lysing susceptible target. Also, the immunity of NK cells is mainly regulated by several immune-receptors, such as ACR, ICR, NCR and KIRs. T cells require TCR and co-stimulatory molecules for initiation of T cell activation. The CD3+CD56+ CIK cells co-express with T-cell marker CD3 and NK cell marker CD56 to appear the most potent cytotoxicity and high impact on adoptive cellular immunotherapy. These CIK subpopulations share some similar tumor killing mechanisms. LFA-1 not only mediates the binding of NK cells to target cells through its ligand ICAM-1 to localize actin accumulation but also acts as a co-stimulatory receptor on NK cells. LFA-1 also functions as co-stimulatory receptor for T cells to transmit intracellular signals from the TCR to LFA-1. Furthermore, cytotoxic effect of CD3+CD56+ CIK cells is blocked by antibodies directly against LFA-1 and its counter receptor, ICAM-1. Clinically, antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) is shown in both NK cells and T cells for tumor killing while dendritic cells are another main regulator for the activation of three subpopulations. In summary, CD3+CD56+ CIK cells have dual-functional capability as T-cell subsets which acquire NK cells function and reserve TCR-mediated specific cytotoxicity. Meanwhile, CIK cells play important roles in tumor immunology. It paves the way to more effective immunotherapies for various tumors. 相似文献
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小鼠子宫uNK细胞的分离及其特性研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:建立小鼠子宫淋巴细胞分离方法,并初步观察小鼠子宫uNK细胞的特性。方法:分别用机械法和酶消化法制备单细胞悬液分离小鼠子宫淋巴细胞,用二色或三色荧光标记技术检测子宫uNK细胞的比例及相关特征。结果:机械法分离淋巴细胞技术相对稳定、纯度较高;酶消化法未降低DX5 细胞所占的比例,但酶的消化过程容易使淋巴细胞活化水平升高,表现为活化分子CD69的表达上调。子宫中存在大量的uNK细胞(NK1.1 CD3-或DX5 CD3-细胞),小鼠怀孕早期和中期,uNK细胞占子宫淋巴细胞的比例随着怀孕天数的增长而增长,到怀孕的第10天达到高峰(uNK细胞比例达到48.74%),之后比例开始迅速下降。结论:成功建立了小鼠子宫uNK细胞分离方法,子宫uNK细胞作为重要的天然免疫淋巴细胞,可能参与妊娠子宫对半同种异体胚胎的保护性免疫反应。 相似文献
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目的:比较胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式对小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为胰岛素分泌细胞的诱导效果方法:应用胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、β细胞素(betacellulin)、激活素A(activin A)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和尼克酰胺(nicotinamide),分别以胚胎体、胚胎体-细胞单层和细胞单层3种细胞培养方式诱导小鼠ES细胞30 d后,应用RT-PCR、双硫腙(DTZ)染色和免疫组化检测分化细胞胰岛素表达,以流式细胞仪检测胰岛素阳性细胞百分比结果:3种细胞培养方式诱导的分化细胞均可见DTZ染色和胰岛素免疫组化染色阳性细胞,RT-PCR检测到胰岛素和其它一些胰岛相关基因mRNA表达,胚胎体-细胞单层方式胰岛素mRNA表达最强,胚胎体方式次之,细胞单层方式最弱。胚胎体-细胞单层方式的胰岛素阳性细胞百分比高于胚胎体方式(P<0.01),后者又高于细胞单层方式(P<0.01)结论:采用胚胎体-细胞单层方式诱导可更好促进小鼠ES细胞分化为胰岛素分泌细胞。 相似文献
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背景:根据神经再生的特点,作为再生支架的许旺细胞完整性十分重要,因此神经的深低温保存最重要的是保存许旺细胞的结构和活性。
目的:使用不同方法复温深低温保存的兔肢体,通过对比其神经组织的微观形态学变化,得到一种对深低温保存复合组织中的神经组织损伤较小的复温方法。
方法:取40个新西兰大白兔后肢,随机分为空白组、快速复温组、慢速复温组、对照组。空白组不进行任何处理,对照组给予保护剂灌注,快速复温组、慢速复温组给予保护剂灌注后采用梯度化降温处理并保存于液氮中72 h,而后慢速复温组采用梯度化复温断肢,快速复温组将断肢直接放入37 ℃水浴中快速复温。复温后的各组肢体切取胫神经,采用光镜、电镜、免疫荧光、共聚焦显微镜进行观察对比,结果用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。
结果与结论:通过光镜、电镜、免疫荧光、共聚焦显微镜观察对比,空白组与对照组比较差异无显著性意义,快速复温组、慢速复温组两组均有不同程度的神经纤维断裂,轴突破坏以及线粒体肿胀,与空白组、对照组两组比较差异有显著性意义,快速复温组与慢速复温组比较,快速复温组显著优于慢速复温组。结果说明,深低温保存的兔断肢,快速复温方法对复合组织中的神经组织损伤较小。 相似文献
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细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokin induced killer cells,CIK细胞)因具有体外增殖倍数高、抗瘤谱广、杀瘤活性强、副作用极小等特点而受到关注。研究表明,CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤作用是LAK细胞的100倍[1]。CIK细胞过继性免疫治疗是肿瘤治疗中的一项新技术,目前已逐步在临床上应用,因此,制订科学、严格的技术规范对该技术的正确使用及推广意义重大。但迄今国内还没有关于CIK细胞培养和临床应用的统一技术规范。无锡旺庄医院生物治疗中心参考国家食品药品监督管理局1999年制订的《新生物制品审批办法》和美国FDA 1998年制订的《人体细胞治疗和基因治疗指导原则》,结合数年的CIK细胞临床应用经验,制订出我们的CIK细胞临床应用技术规范,现介绍如下,供同行切磋和讨论,以期促成全国性统一技术规范的早日制定。 相似文献
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目的 观察应用细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合白细胞介素2(IL-2)治疗恶性胸腔积液的疗效.方法 收集2009年7月至2013年7月于本院肿瘤科就诊的恶性胸腔积液患者50例,随机数字表法分为治疗组(n=24)和对照组(n=26).胸腔积液引流净后,治疗组胸腔灌注CIK细胞联合IL-2,连续3d;对照组灌注IL-2联合顺铂,隔日1次,连续3次.治疗4周后评价疗效和不良反应.结果 治疗组有效率87.50%(21/24),完全缓解率54.17%(13/24);对照组有效率57.69%(15/26),完全缓解率42.31%(11/26).与对照组比较,治疗组的完全缓解率、有效率均增加(均P<0.05).不良反应比较显示,治疗组发热的发生率较高,而对照组胸痛、胃肠道反应、骨髓抑制的发生率较高(均P< 0.05).与治疗前比较,治疗后两组患者的Karnofsky评分均增加(均P<0.05).结论 CIK细胞联合IL-2胸腔灌注治疗恶性胸腔积液不良反应小,疗效确切. 相似文献