单一酶试剂快速测定血清鸟嘌呤脱氨酶

本文介绍用单一酶试剂测定血清鸟嘌呤脱氨酶,并进行了实验探讨.批内CV 为2.14～2.72%,批间CV 为4.81～5.01%,Km 为1.2×10~(-2)mmol/L.本法采用0.27mmol/L 的底物浓度为Km 的22.5倍.最适pH8.0,光吸收峰为550nm 波长.76名正常成年人血清乌嘌呤脱氨酶活性(?)±SD 为4.28±1.87U/L.32例早期急性肝炎患者血清鸟嘌呤脱氨酶活性除2例正常外,其他均显著高于正常人,(?)±SD 为33.72±11.87U/L(P<0.001)。     

血清碱性磷酸酶连续监测法

本文参照国际临床化学联合会推荐的测定血清碱性磷酸酶活性的参考方法,对碱性磷酸酶连续监测法的某些实验条件进行了探讨。比较了几种常用基质缓冲液的优缺点,测得AMP 缓冲液的最适浓度为0.9mol/L;最适pH 范围10.4～10.6;磷酸对硝基酚的米氏常数(Km)为1.126±0.18mmol/L。本法批内变异系数2.06～2.36%,批间变异系数2.74%;成人正常参考值((?)±SD):30℃时为74.7±15.1u/L,37℃时为90.7±17.4u/L。本法简便、准确、快速,不受脂血、溶血样本的干扰,适用常规操作。     

脑脊液白细胞计数和蛋白浓度升高是儿童急性淋巴细胞白血病的独立危险因素

本研究的目的是了解测定儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的脑脊液(CSF)蛋白浓度和白细胞计数对患者中枢神经系统情况和预后是否能提供参考信息。作者研究随机儿童ALL患者160例,平均追踪72个月(25-143个月),CSF蛋白浓度为0.144.3g/L,平均0.26g/L,其中>0.45g/L者20例,5年存活率为18%,<0.45g/L者5年存活率为63%(P>0.05)。CSF白细胞计数为0-528×10~6/L,平均1×10~6/L,其中>10×10~6/L者10例,5年存活率为13%,其余患儿5年存活率为60%(P<0.001)。作者把患儿分为3组:Ⅰ组133例,CSF蛋白浓度≤0.45g/L,白细胞计数≤10×10~6/L,CSF中无原始淋     

测定尿酸的一种简易酶比色法

本文介绍一种实用的尿酸酶比色法测定体液中尿酸含量。本法尿酸酶的用量仅为一般尿酸酶比色法的1/10,血清用量50μl,尿酸浓度在178.6～714.3μmol/L 范围内呈良好线性关系,批内CV3.0%(n=13,尿酸浓度545.1μmol/L)及4.47%(n=10,尿酸浓度233.5μmol/L),回收率98.3%,本法同ENI 公司尿酸试剂盒对照45例无显著性差异(P>0.05)。本法采用酶试剂干燥管,保存时间长,使用方便。尿酸标准采用定值血清可较长时间稳定。     

高血压心肌纤维化的发病机制:成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1的表达状况

目的:研究成年大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)在血管紧张素Ⅱ刺激下单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotaxia protein-1,MCP-1)表达情况,探讨高血压合并心脏损害的可能机制。 方法:成年大鼠CFs体外培养,在不同浓度血管紧张素Ⅱ不同作用时间刺激下,应用免疫蛋白印迹法和ELISA法分别测定细胞中和培养上清中MCP-1的含量。 结果:①在细胞内和培养上清中均有MCP-1表达。②随着血管紧张素Ⅱ、刺激浓度的增加和刺激时间的延长,细胞内和上清中MCP-1的表达量也逐渐增加。在1×10~(-11),1×10~(-9),1×10~(-8),1×10~(-7),1×10~(-6)mol/L的血管紧张素Ⅱ作用下,上清中MCP-1的含量分别为(1.60±0.21),(3.18±0.15),(4.70±0.22),(9.18±0.52),(8.75±0.42)μg/L,与对照组(1.13±0.09)μg/L比较,除1×10~(-11)mol/L组外,差异均有显著性意义(t=26.21～39.67,P<均0.05)。③在1×10~(-7)mol/L的血管紧张素Ⅱ作用下,3,6,12和24h MCP-1的表达量分别为(2.13±0.31),(3.25±0.20),(5.28±0.50)和(9.18±0.52)μg/L,与空白对照组(1.13±0.09)μg/L比较差异均有显著性意义(t=6.93～34.11,P均<0.05)。 结论:成年大鼠CFs的MCP-1的表达对血管紧张素Ⅱ的刺激有浓度和时间依赖性。CFs的MCP-1的表达可能参与高血压时     

血清碱性磷酸酶连续监测法及其实验条件的探讨

参考国际临床化学联合会正式推荐方法,使用国产仪器和试剂连续监测血清碱性磷酸酶活性,对其实验条件进行了探讨。测得反应最适 pH 为10.0,DEA 缓冲液的最适浓度为0.8～1.0mol/L,4—NPP 的 Km 为1.26×10~(-3)mol/L,选择4—NPP 终浓度为19.05mmol/L,0.95～2.0mmol/L 的 Mg~(2 )对酶活性反应时间为5min。批内CV 为2.40%～3.96%,批间 CV 为3.28%～4.66%,和 Beckman 试剂盒比较两者显著相关(r=0.9762),98例健康成人参考值为93.8±21.4((?)±s)u/L。方法简便,快速准确,适合基层实验室推广应用。     

白细胞减少症的治疗

白细胞减少症的概念白细胞减少症(简称白减)是指周周血中的白细胞低于4×10~9/L(多数在2×10~9/L～3×10~9/L),分类基本正常,或显示粒细胞比例略低的状态,预后良好。粒减是指血液中粒细胞绝对值低于1.8×10~9/L,儿童低于1.5×10~9/L,婴儿低于1×10~9/L。当白细胞在2     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用,为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法:实验皮肤标本来源于2002-07/2003-07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者,取冗余全层皮肤组织,患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞,实验分为异搏定组:包括1×10-3,1×10-4,1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9,1×10-10mol/L组,分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液;氢化可的松组:在细胞培养孔中加入2mL浓度为1×10-7mol/L氢化可的松的培养液;对照组:在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0.005的新生牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色;细胞增殖状况测定应用3氚标记的胸腺嘧啶掺入法;观察细胞增殖抑制率[抑制率(I%)=(阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值)/阴性对照每分钟脉冲数值],取各例样本的平均值。结果:①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果:对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖,24h达到高峰,48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应:各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用,其中1×10-6mol/L异搏定与1×10-7mol/L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异(t=0.135,P=0.896>0.05)。③浓度为1×10-6mol/L异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应:氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(60.67±18.94)%比(-19.69±21.26)%,(10.89±11.61)%,(37.03±12.17)%,q=10.867,6.732,3.197;P<0.05];异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6,12,48h时[(51.42±15.30)%比(-16.83±16.90)%,(1.09±11.62)%,(17.41±13.41)%,q=10.566,7.791,5.265;P<0.05];在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松(t=2.423,P=0.042<0.05)。结论:不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用,异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

慢性充血性心力衰竭患者血浆游离肉碱浓度的测定及临床意义

目的探讨测定慢性充血性心力衰竭 (CHF)患者血浆游离肉碱浓度的临床意义。方法用放射性同位素酶化学法测定 40例 CHF患者和 3 0例正常人的血浆游离肉碱浓度。结果 CHF患者血浆游离肉碱浓度 [(4 6.48± 1.3 3 ) μmol/L]明显低于正常人血浆游离肉碱水平 [(5 5 .3± 11.19) μmol/L,P<0 .0 5 ]。心功能 级组比心功能 、 级组的血浆游离肉碱浓度更低 ,前者为 (3 5 .76± 5 .61)μmol/L,后者分别为 (5 0 .2 4± 9.3 2 ) μmol/L 和 (4 9.81± 12 .2 3 ) μmol/L;左室射血分数 (L VEF)≤ 40 %组血浆游离肉碱浓度较L VEF>40 %组低 ,分别为 (3 8.96± 9.0 6) μmol/L和 (4 9.71± 10 .77) μmol/L,两组比较有显著性差异 (P<0 .0 1)。经 L-肉碱 3 g/d静脉滴注治疗 10天后 ,伴随 CHF患者心功能改善 1～ 2级后 ,血浆游离肉碱浓度显著升高至 (10 0 .2 7± 5 6.2 3 )μmol/L (P<0 .0 1)。结论放射性同位素酶化学法测定血浆游离肉碱浓度灵敏、精确、可靠且重复性好。 CHF患者血浆游离肉碱浓度随心衰程度的加重而降低 ,提示 CHF患者存在能量代谢的紊乱 ,可能与体内肉碱缺乏有关 ,补充外源性 L -肉碱后 CHF患者心功能得以明显改善 ,血浆游离肉碱浓度亦随之升高 ,CHF患者补充适量的外源性肉碱是有效的代谢治疗方法之一     

血管紧张素Ⅱ对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子与活性的影响

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人皮肤成纤维细胞增殖活性及人α1(Ⅰ)原胶原基因启动调控序列的作用。方法用组织块法原代培养人皮肤成纤维细胞并进行传代培养作为本研究的模型细胞。①采用四甲基偶氮唑盐(MTT)掺入法测定经不同浓度血管紧张素Ⅱ处理24 h后成纤维细胞的增殖情况。②构建含长短不一的人α1(Ⅰ)原胶原基因5'侧翼区序列与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体pCOLH11.5、pCOLH12.5,用FUGENE 6将重组体转染至人皮肤成纤维细胞,ELISA法测定不同浓度血管紧张素Ⅱ作用24 h后,转染有重组体的成纤维细胞的CAT表达量。结果①在1×10-9~1×10-5mol/L血管紧张素Ⅱ处理24 h后,各浓度组成纤维细胞增殖值与对照组之间不存在剂量依赖关系(P>0.05)。②2种重组体转染成纤维细胞,并经血管紧张素Ⅱ处理24 h后,转染细胞的CAT相对表达量测定:pCOLH12.5组与对照组之间,较高浓度组(1×10-5mol/L)与较低浓度组(10×10-6mol/L)之间存在显著差异(P<0.05),且存在剂量依赖关系,pCOLH11.5组与对照组之间不存在明显差异(P>0.05)。结论血管紧张素Ⅱ在1×10-9~1×10-5mol/L浓度范围内,对所研究的模型细胞———人皮肤成纤维细胞增殖不存在剂量依赖关系。血管紧张素Ⅱ对胶原基因启动序列pCOLH12.5具有正性调控作用,并存在剂量依赖关系。     

垂体腺苷环化酶激活肽对原代培养海马神经元氧化损伤的保护作用

目的:在原代培养的大鼠海马神经元上观察不同浓度垂体腺苷环化酶激活肽-38对活性氧所致神经元氧化损伤的保护作用,为垂体腺苷环化酶激活肽-38的神经保护作用提供依据。方法:实验于2001-09/2002-03在解放军总医院老年医学研究所神经生物学研究室完成。取新生1～3d的SD大鼠海马进行神经元原代培养,将细胞随机分成5组:对照组,活性氧组,1×10-8mol/L,1×10-10mol/L和1×10-12mol/L垂体腺苷环化酶激活肽-38组。分别用次黄嘌呤(mmol/L)/黄嘌呤氧化酶(U/L)1.0/200,1.5/150,2.0/200,2.0/300,3.0/300处理细胞诱导氧化损伤模型,选择次黄嘌呤2.0mmol/L/黄嘌呤氧化酶200U/L作为最终的活性氧浓度,进一步观察垂体腺苷环化酶激活肽-38的神经保护作用。采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定神经元存活率,光学显微镜下照像,利用计算机图像分析软件分析神经元的形态改变,应用荧光素JC-1染色-激光流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位,利用反转录-聚合酶链反应法半定量天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的mRNA水平。结果:①细胞存活率分别为:对照组77.8%,次黄嘌呤1.0mmol/L/黄嘌呤氧化酶200U/L活性氧组62.5%,次黄嘌呤1.5mmol/L/黄嘌呤氧化酶150U/L活性氧组50.1%,次黄嘌呤2.0mmol/L/黄嘌呤氧化酶200U/L活性氧组48.4%,次黄嘌呤2.0mmol/L/黄嘌呤氧化酶300U/L活性氧组25.3%,次黄嘌呤3.0mmol/L/黄嘌呤氧化酶300U/L活性氧组28.9%。与对照组比较,神经元的存活率随着培养液中活性氧浓度的增加而呈显著下降趋势(P<0.01)。②活性氧不仅能引起培养神经元的存活率下降(P<0.01),还能导致神经元出现神经退行性变样的形态学损伤,包括细胞皱缩,突起脱落、突起数减少[对照组(2.6±0.6)个,活性氧组(0.5±0.2)个,P<0.01],多极神经元百分率下降(对照组为32.6%,活性氧组为10.1%,P<0.01),同时,也能引起神经细胞的线粒体膜电位显著下降(对照组为40,活性氧组为12.3,P<0.01)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3mRNA水平增加(对照组为0.13%,活性氧组为3%,P<0.01)。③预先给予1×10-8mol/L,1×10-10mol/L和1×10-12mol/L的垂体腺苷环化酶激活肽-38能显著改善活性氧引起的神经退行性损伤和线粒体膜电位下降(P<0.05或P<0.01),抑制天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3的表达(P<0.01),其中,1×10-8mol/L垂体腺苷环化酶激活肽-38的神经保护作用最强(P<0.01)。结论:活性氧可直接损伤培养的神经元,导致神经元出现形态学退行性改变和神经元存活率下降,形态学改变和死亡率增高与线粒体功能下降和神经细胞核内凋亡基因表达均有关。垂体腺苷环化酶激活肽-38具有明显的抗氧化损伤和神经保护作用,并且这种保护作用具有浓度依赖性。     

烯醇化酶活性测定的三种方法及其评价

本文介绍烯醇化酶总活性测定的三种方法,并作简要评价.直接分光光度法.最适pH7.4,Km4～7×10~(-5)mol/L,适用于层析液中酶活性的检测.PK-LDH 偶联法和PK-HK-G6PD 偶联法均适用于血清烯醇化酶活性的测定.前者工具酶较少,空白反应低,精密度较好,更适用于常规工作.30名健康人血清烯醇化酶总活性为17.7±7.75U/L。     

α-干扰素治疗原发性嗜酸粒细胞增多综合征获得持久缓解

男性,30岁。1987年9月劳累后出现呼吸困难和发热,发现斑丘疹,右下肺叶浸润、肝脾肿大和嗜酸粒细胞增多综合征(HES),嗜酸粒细胞(E_0)20×10~9/L。口服强的松40mg/d降至E_00.9×10~9/L,强的松减量后又复发上升。1988年5月血红蛋白(Hb)91g/L,白细胞(WBC)36.7×10~9/L,E_013.2×10~9/L,血小板(BPC)57×10~9/L,骨髓增生明显活跃,     

一种新的全酶法测定1,5-脱水葡萄糖醇

目的建立一种测定血清中1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)的方法,辅助诊断糖尿病。方法经葡萄糖激酶(GK)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)偶联系统使血清中葡萄糖彻底转化为不与呋喃糖氧化酶(PROD)反应的6-磷酸葡萄糖酸内酯,以PROD氧化1,5-AG,生成1,5-脱水果糖和H2O2,后者用Trinders反应进行比色测定。结果该方法在550μmol/L以内线性良好。高值(455.5μmol/L)、中值(215.8μmol/L)和低值(15.1μmol/L)批内变异系数(CV)分别为0.61%、0.84%和1.70%,批间CV分别为1.12%、2.00%和2.70%。平均回收率为101.6%。本法与微柱法相关性良好(r=0.999 8)。用本法对100名健康者测定1,5-AG水平为(161.9±40.2)μmol/L,呈正态分布。参考值范围(x±1.96s)为83.1~240.7μmol/L,无性别、年龄差异。结论该法简便、快速、灵敏、准确和稳定,可用于糖尿病的及时诊断与监控,适合于各类实验室常规应用。     

人红细胞溶血物Ca~(2+)-ATP酶活力测定及其在心律失常患者的初步观察

本文介绍直接溶血比色测定人红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力的方法,批内变异系数为2.1～14%。30名正常人红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力为44.1±9.9μmol Pi/gHb/h(±SD).63例SVT(室上性快速型心律失常)病人红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力为67.5±18.2μmol Pi/gHb/h。本法具有设备要求简单,操作简便,易于普及的特点。本文结果提示SVT病人发病时,红细胞总Ca~(2+)和红细胞膜Ca~(2+)-ATP酶活力均明显高于正常人,推测心肌内可能也有类似的变化,细胞内Ca~(2+)增高可诱发SVT。     

血细胞分离机采集干细胞效果观察

目的探讨Amicus血细胞分离机的MNC程序采集外周血干细胞的效果。方法用Amicus血细胞分离机的MNC程序采集健康供者和肿瘤患者外周血干细胞;供者给予G-CSF动员,患者采用化疗加G-CSF动员。用流式细胞仪检测CD34~+抗原表达细胞数。供患者共采集了53次,处理(8±2)个循环,处理抗凝全血(11420±2401)ml,时间(236±28)min,抗凝剂(957±195)ml。结果采集CD34+细胞(235.26±298.53)×10~6,MNC的采集效率为(53.05±39.03)%;患/供者采集前外周血CD34~+计数>0.04×10~9/L(n=28),采集CD34~+细胞为(4.94±4.57)×10~6/kg;而当患/供者采集前外周血CD34~+计数<0.04×10~9/L(n=25),采集CD34~+细胞为(1.07±0.64)×10~6/kg;所采集的干细胞制品中血小板含量为(5.57±4.26)×10~(10)/袋。单采后患/供者Plt、Hb、Hct分别下降14.79%,12.21%和12.23%,所有程序没有观察到严重的副反应。结论Amicus血细胞分离机的MNC采集程序能安全地采集到血小板含量低、高产量的异体和自体CD34~+细胞。     

Annexin V FITC/PI流式细胞术检测姜黄素诱导的肝星状细胞凋亡

目的:探讨Annexin V FITC/PI流式细胞术在检测姜黄素诱导的肝星状细胞(HSC)凋亡中的应用。方法:不同浓度姜黄素作用肝星状细胞株HSC-T6 24h,用Annexin V FITC/PI流式细胞术检测HSC凋亡。结果:姜黄素浓度为10μmol/L时,早期凋亡细胞开始增多,至30μmol/L时,坏死细胞开始增多,随姜黄素浓度增高,各组凋亡细胞随之增多。0、10、20、30、40μmol/L5组的凋亡率分别是(3.81±0.64)%、(6.52±1.88)%、(11.61±2.79)%、(52.03±4.38)%、(87.11±12.62)%,与0μmol/L组比较,20、30、40μmol/L3组的凋亡率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Annexin V FITC/PI流式细胞术可定量检测姜黄素诱导的HSC早期凋亡。     

全自动酶法测定血清总和游离卡尼汀浓度及临床应用

目的　建立自动化测定血清总和游离L 卡尼汀浓度的酶分光光度法 (CAT BTND)。方法　对卡尼汀酯水解条件及 pH和L 卡尼汀乙酰基转移酶浓度等反应条件作最佳化研究 ,同时对该法进行方法学评估 ,并用该法测定了 119名正常人的血清样本。结果　该法最低检出限为 4 81μmol/L ,线性范围可达 150 μmol/L(r =0 999)。批内和批间的平均CV分别为游离卡尼汀 5 52 %和5 90 % ,辛酯卡尼汀为 5 78%和 6 14 %。平均回收率为 98 5%和 98 4%。在胆红素≤ 12 0 μmol/L ,血红蛋白≤ 7g/L和抗坏血酸≤ 50 0 μmol/L的情况下 ,对测定结果无显著性影响。正常参考范围 :成人 :男 (3 2名 )总卡尼汀 (48 5± 17 7) μmol/L ,游离卡尼汀 (3 9 2± 14 2 ) μmol/L ,卡尼汀酯 (9 3±5 3 ) μmol/L ;女 (3 1名 )总卡尼汀 (42 7± 17 3 ) μmol/L ,游离卡尼汀 (3 2 4± 18 0 ) μmol/L ,卡尼汀酯(10 5± 5 5) μmol/L。儿童 (年龄 9～ 12岁 ) :男 (3 1名 )总卡尼汀 (57 3± 19 3 ) μmol/L ,游离卡尼汀(45 1± 14 4) μmol/L ,卡尼汀酯 (12 3± 10 4) μmol/L ;女 (2 5名 )总卡尼汀 (59 4± 15 7) μmol/L ,游离卡尼汀 (46 6± 12 6) μmol/L ,卡尼汀酯 (12 8± 7 8) μmol/L。 结论　该法正确快速 ,可作为L 卡尼汀缺乏症     

700例儿童血小板参考值调查

本文调查700例学龄前3～6岁健康儿童的血小板参考值: 男355例171±46.16×10~9/L,范围90～302×10~9/L。女345例176±47.78×10~9/L,范围89～320×10~9/L 男女之间无显著性差异(P>0.05),故确定其参考值范围为89～320×10~9/L。     

墨西哥低剂量、高效抗胸腺细胞球蛋白治疗重型再障贫血的经验

20例重型再障贫血(SAA)全血细胞减少持续15天以上.经骨髓活检证实增生低下(有核细胞增生<25%),并符合以下二项标准:中性粒细胞<0.5×10~9/L,纠正网织红细胞<10×10g~9/L和血小板数<20×10~9/L.