Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb抑制由IL-23诱导PBMC IFN-γ的产生

目的：探讨重组人白介素23（IL-23）诱导正常人PBMC IFN-γ的产生，细胞亚群和调节因素。方法：正常人PBMC在不同条件下与IL-23进行培养，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养液中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪，分析IL-23诱导PBMC IFN-γ表达的细胞亚群。结果：IL-23呈剂量依赖性诱导PBMC IFN-γ产生，并可与IL-2协同诱导IFN-γ的产生。细胞亚群分析的结果表明，IL-23诱导高表达CD56^＊NK细胞产生IFN-γ，对CD4^＊和CD8^＊T细胞无明显作用。Th2细胞因子和抗IL-12受体β1 mAb（IL-12Rβ1）抑制IL-23诱导IFN-γ产生。结论：IL-23可直接作用于CD3^＊CD56^＊NK细胞，诱导产生IFN-γ。Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb抑制IL-23诱导IFN-γ产生，提示可以用于由IL-23引起自身免疫病的治疗。     

细胞因子直接诱导正常人CD4^＋T细胞产生几-17和IFN-γ

目的：探讨细胞因子（IL-23、IL-2和IL-15）对正常人外周血单个核细胞（PBMC）和CD4^＋T细胞IL-17产生的诱导作用和调节因素。方法：将正常人PBMC和纯化的CD4^＋T细胞在不同条件下与IL-23、IL-2和IL-15进行培养，采用ELISA法检测细胞培养液中IL-17和IFN-1的水平；采用酶联免疫斑点试验（ELISPOT）在单个细胞水平上检测IL-17和IFN-γ产生细胞的频率。结果：IL-23可诱导PBMC产生IL-17和IFN-γ；Th2细胞因子和抗IL-12受体B1（IL-12Rβ1）mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生。IL-2和IL-15均可诱导IL-17和IFN-γ产生，并与IL-23具有共同诱导作用。IL-12可诱导PBMC产生大量的IFN-γ，但不产生IL-17。进一步研究表明，IL-23、IL-2和IL-15可直接诱导纯化的CD4^＋T细胞产生IL-17和IFN-γ。结论：IL-23、IL-2和IL-15可直接作用于正常人CD4^＋T细胞诱导其产生IL-17和IFN-γ；Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生。为探讨自身免疫性疾病等的发生机制和治疗提供了新的靶点。     

细胞因子直接诱导正常人CD4+T细胞产生IL-17和IFN-γ

目的:探讨细胞因子(IL-23、IL-2和IL-15)对正常人外周血单个核细胞(PBMC)和CD4 T细胞IL-17产生的诱导作用和调节因素。方法:将正常人PBMC和纯化的CD4 T细胞在不同条件下与IL-23、IL-2和IL-15进行培养,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-17和IFN-γ的水平;采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)在单个细胞水平上检测IL-17和IFN-γ产生细胞的频率。结果:IL-23可诱导PBMC产生IL-17和IFN-γ;Th2细胞因子和抗IL-12受体β1(IL-12Rβ1)mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生。IL-2和IL-15均可诱导IL-17和IFN-γ产生,并与IL-23具有共同诱导作用。IL-12可诱导PBMC产生大量的IFN-γ,但不产生IL-17。进一步研究表明,IL-23、IL-2和IL-15可直接诱导纯化的CD4 T细胞产生IL-17和IFN-γ。结论:IL-23、IL-2和IL-15可直接作用于正常人CD4 T细胞诱导其产生IL-17和IFN-γ;Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生。为探讨自身免疫性疾病等的发生机制和治疗提供了新的靶点。     

环孢素A对小鼠Th17细胞分化的影响

目的：观察在抗CD3单克隆抗体（mAb）＋rIL-23刺激的条件下，环孢素A（CsA）对Th17细胞分化的影响。方法：小鼠脾淋巴细胞分别使用抗CD3mAb、抗CD3mAb＋rIL-23及抗CD3mAb＋rIL-23＋不同浓度的CsA刺激后，用ELISA检测IL-17和IFN-7的水平，并用流式细胞仪在单个细胞水平上检测产生IL-17的T细胞亚群。结果：单独抗CD3mAb能诱导少量的IL-17产生，加入IL-23后呈剂量依赖的方式明显增加IL-17的产生。CsA对抗CD3mAb＋rIL-23诱导的Th17细胞分化呈剂量依赖性的抑制作用。CsA不仅抑制早期Th17的分化，当细胞激活48小时后，CsA对Th17细胞的分化仍有抑制作用。CsA除了抑制Th17细胞分化外，对IFN-7和IL-2的产生也有抑制作用。此外，T细胞亚群分析的结果表明IL-17主要由CD4＋T细胞产生，而CD8＋T细胞几乎不产生IL-17。结论：CsA可以抑制Th17细胞的分化，进一步阐明了CsA免疫抑制及抗炎作用的机制，为临床上应用CsA提供科学理论和实验依据。     

环孢素A抑制正常人外周血记忆CD4~＋T细胞产生IL-22的实验研究

目的探讨环孢素A（CsA）是否能够抑制正常人CD4＋T细胞产生白细胞介素22（IL-22）。方法使用密度梯度离心法制备正常人外周血单个核淋巴细胞（PBMCs）,加入PMA＋Inomycin刺激细胞后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测正常人外周血PBMCs中产生IL-22的T细胞亚群,以及IL-17-IFN-γ-IL-22＋CD4＋T细胞亚群（Th22）;PMA＋Inomycin刺激正常人PBMCs,同时加或不加环孢素A（CsA）后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测IL-22＋CD4＋T细胞和IFN-γ＋CD4＋T细胞的比例,以及IL-22＋CD4＋T细胞表达记忆表型分子CD45RO情况。结果正常人外周血中产生IL-22的T细胞以CD4＋T细胞为主,且存在仅分泌IL-22,不分泌IL-17和IFN-γ的Th22亚群;CsA以剂量依赖方式抑制CD4＋T细胞产生IL-22和IFN-γ;CsA抑制外周血PBMCs中记忆CD4＋T细胞产生IL-22。结论 CsA能抑制正常人外周血中记忆CD4＋T细胞产生IL-22。     

人外周血和扁桃体中Tfh细胞与其他Th细胞亚群之间的关系

目的比较观察人外周血和扁桃体Tfh细胞的表型以及与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。方法分离正常人PBMC及扁桃体单个核细胞,利用anti-CD3+anti-CD28或PMA+ionomycin刺激后,采用ELISA和流式细胞术(FCM)检测其细胞因子的产生,分析Tfh与Th1、Th17、Th22细胞亚群之间的关系。结果与PBMC中CD4+T细胞不同,扁桃体CD4+T细胞高表达CXCR5和CD45RO,低表达CCR7和CD62L;与PBMC中CD4+T细胞相比,扁桃体CD4+T细胞IL-21和IL-17产生水平较高,IFN-γ产生水平较低,IL-22水平无显著差异;外周血和扁桃体CD4+T细胞中均存在一定比例的IL-21+IL-17+双阳性、IL-21+IL-22+双阳性、IL-21+IFN-γ+双阳性细胞,IL-21单阳性细胞在扁桃体CD4+T细胞中所占比例明显高于外周血;外周血和扁桃体CD4+CXCR5+细胞除表达IL-21外,还表达IL-17、IL-22和IFN-γ。结论扁桃体中存在较多数量的Tfh细胞,大多数Tfh细胞是不同于Th1、Th17和Th22的细胞亚群。     

CD4+效应T细胞的新成员——Th17细胞

在抗原的刺激下，初始CD4^＋T细胞被诱导分化为效应或调节T细胞，传统上CD4^＋效应T细胞因产生的细胞因子的不同被分为两个亚群：Th1细胞——主要促进细胞内感染的病原体的清除，由IL-12诱导分化，产生的主要细胞因子是IFN-γ；和Th2细胞——主要促进寄生虫感染的清除（如蠕虫），由IL-4诱导分化，主要产生IL-4、IL-5、IL-13。     

IL-12对BALB/c小鼠Th17细胞的分化的影响

目的: 观察细胞因子IL-12对Th17细胞分化的影响.方法: 小鼠脾淋巴细胞经抗CD3单克隆抗体(mAb)和不同浓度的重组小鼠IL-12刺激, 3 d后使用ELISA方法观察培养物上清液中IL-17的产生情况.并使用细胞内细胞因子染色的方法, 通过流式细胞术观察CD3 mAb和重组小鼠IL-12刺激对Th1和Th17细胞分化的影响.结果: Th17细胞不分泌IFN-γ、 IL-5、 IL-10等细胞因子, 不表达Foxp3, 是一个独立的细胞亚群.不同浓度的重组小鼠IL-12可以诱导抗CD3 mAb 的T细胞分泌IFN-γ, 并向Th1细胞方向分化.同时, IL-12可以抑制活化的T细胞分泌IL-17, 抑制T细胞向Th17细胞分化.结论: IL-12可以抑制Th17细胞的分化.     

霉酚酸对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞细胞因子分泌及Th亚群的影响

目的研究霉酚酸（mycophenolic acid,MPA）对系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）细胞因子分泌及Th细胞亚群的作用。方法分离SLE患者及健康对照的外周血单个核细胞（PBMCs）,加入MPA或对照药物地塞米松（DEX）培养48h,用ELISA法测培养上清中IL-10、IL-12及IFN-γ的水平,用三色流式细胞术检测培养细胞中CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^-T细胞、CD4^＋IFN-γ^-IL-10^＋T细胞及CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^＋T细胞百分率。结果①MPA可使SLE患者PBMCs培养上清中IL-10、IL-12及IFN-γ的分泌显著降低,而DEX却使IL-10分泌水平增高。②MPA可降低SLE患者培养的PBMCs中CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^-T、CD4^＋IFN-γ^-IL-10^＋T及CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^＋T细胞比率,而DEX在使CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^＋T细胞亚群比率增高的同时,却使CD4^＋IFN-γ^＋IL-10^-T细胞亚群的比率降低。结论MPA可抑制SLE患者PBMCs细胞因子分泌,并降低SLE患者外周血培养的PBMCs中Th亚群比率。     

绿脓杆菌制剂与IL-12在诱导人NK细胞IFN-γ产生中的协同作用

探讨绿脓杆菌制剂(piliated Pseudomonas Aeruginosa,PPA)与IL-12协同诱导人PBMC和NK细胞IFN-γ的产生。分离健康人PBMC和纯化NK细胞分别与培养液、PPA、IL-12或PPA+IL-12共同培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测无细胞培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析PPA和IL-12诱导IFN-γ产生的淋巴细胞亚群。结果显示,单独应用亚适剂量的IL-12或PPA刺激人PBMC或纯化NK细胞,不能诱导或只能诱导低水平IFN-γ的产生。当PPA和IL-12共同与人PBMC或纯化NK细胞孵育后,PPA呈时间和剂量依赖性与IL-12协同诱导PBMC和纯化NK细胞产生大量IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,PPA和IL-12协同诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。PPA与IL-12协同促进NK细胞IFN-γ的产生,提示PPA和IL-12能直接刺激NK细胞发生免疫应答。     

人外周血CD4~+ IL-21~+记忆T细胞的特征

目的:探讨人外周血中白细胞介素21(IL-21)的产生细胞及其特征。方法:分离人外周血单个核细胞(PBMC),分为不刺激或anti-CD3(OKT3)、OKT3+anti-CD28、PMA+ionomycin刺激四个组,流式细胞术(FCM)检测产生IL-21的细胞亚群。PMA+ionomycin刺激PBMC、纯化CD4+、CD4+CD45RA-、CD4+CD45RA+细胞、脐带血单个核细胞(CB-MC),FCM分析产生IL-21细胞的表型特征和IL-21与Th1、Th2、Th17和Th22细胞因子之间的关系。结果:与OKT3、OKT3+anti-CD28相比,PMA+ionomycin能诱导最高量的IL-21产生。产生IL-21的主要细胞为CD4+T细胞,少数CD8+T细胞。CD4+IL-21+T细胞表达CD45RO,不表达CD45RA,其中部分细胞表达CCR6、CCR7或CXCR5。CD4+CD45RA-细胞表达IL-21远高于CD4+CD45RA+细胞。进一步研究表明,PBMC产生IL-21,而CBMC不产生。此外,大约24%的CD4+IL-21+细胞表达IFN-γ,小于10%CD4+IL-21+细胞表达IL-4、IL-17或IL-22。结论:人PBMC在多克隆刺激的条件下,可以诱导IL-21的产生。产生IL-21的主要细胞亚群具有记忆CD4+T细胞的表型。其中一部分CD4+IL-21+T细胞的表型独立于Th1、Th2、Th17和Th22细胞亚群。     

CD4+CD25+调节性T细胞在约氏疟原虫感染早期作用机制的实验研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在约氏疟原虫感染早期的免疫调节机制。方法用抗CTLA-4 mAb和抗CD25 mAb分别与约氏疟原虫感染早期的小鼠脾细胞共同培养后,以ELISA法检测其培养上清的IL-10、TGF-β1及IFN-γ的含量。结果与抗CTLA-4 mAb共同培养后,脾细胞上清中IL-10的水平明显降低,但TGF-β1和IFN-γ水平未出现有意义的变化;与抗-CD25 mAb共同培养后,IL-10、TGF-β1和IFN-γ水平均未出现有意义的变化,但IL-10水平有一定的降低趋势。结论约氏疟原虫感染早期,IL-10可能是介导CD4^＋CD25^＋调节性T细胞参与免疫调节的关键性细胞因子,CD4^＋CD25^＋调节性T细胞可能通过CTLA-4发挥免疫抑制作用。     

人肠道正常粘膜组织与外周血中记忆性IL-22~+T淋巴细胞频率及表型的比较

目的比较人肠道正常粘膜组织与外周血中IL-22+T淋巴细胞的频率及其表型特征。方法分离人肠道正常粘膜与外周血中单个核细胞,anti-CD3+anti-CD28刺激后,采用流式细胞术(FACS)检测IL-22的产生及其与IFN-γ、IL-17的关系,分析IL-22+T淋巴细胞CD45RO,CD62L,CCR7,CCR6,CCR10,CCR4等表面分子的表达。结果与anti-CD3+anti-CD28刺激外周血中CD4+和CD8+T淋巴细胞产生少量的IL-22(0.6%;0.57%)相比,肠道粘膜CD4+T细胞产生大约3.15%的IL-22,CD8+T淋巴细胞产生4%左右的IL-22。此外,肠道粘膜CD4+和CD8+T细胞中存在一群产生IL-22并独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17的细胞亚群。肠道粘膜IL-22+T细胞表达较高比例的CD45RO,其中部分细胞表达CCR7,而较少表达CD62L。进一步研究表明,肠道粘膜CD4+IL-22+和CD8+IL-22+T细胞表达较高水平的CCR10(55.3%;73.9%),部分细胞表达CCR6或CCR4。结论人肠道正常粘膜组织中IL-22主要由效应型或中央型记忆T细胞产生,部分IL-22+T细胞独立于Th1、Th17,Tc1、Tc17细胞亚群。     

青藤碱对红斑狼疮患者外周血T细胞的抑制作用及机制探讨

目的：观察青藤碱（SIN）对系统性红斑狼疮患者T细胞功能的影响，探讨其免疫抑制作用机理。方法：分离SLE患者的PBMCs，加入anti-CD3及不同浓度SIN，以ELISA和流式细胞仪方法分析青藤碱对T淋巴细胞活化和Th1／Th2细胞因子产生的影响。结果：SIN可抑制SLE患者外周血T细胞产生IFN-γ、IL-2和IL-4。SIN能够显著降低CD4^＋T和CD8^＋T细胞表面活化分子CD69和CD25的表达。结论：SIN可通过抑制T细胞的活化及细胞因子的分泌，发挥免疫抑制作用。     

Th17细胞:一种新的效应CD4+T细胞亚群

当CD4^＋T细胞被激活以后，通过不同的分化途径获得特定的生物学功能。根据产生细胞因子和生物功能的不同，传统上将CD4^＋T细胞分为Th1和Th2细胞亚群。Th1细胞产生IFN-1和IL-2，通过活化巨噬细胞清除胞内病原微生物并介导迟发型变态反应；Th2细胞产生IL-4、IL-5和IL—13，介导由嗜酸性粒细胞引起的炎性反应，清除细胞外病原微生物并参与变态反应。IFN-γ和IL-4相互拮抗，调控着Th1和Th2细胞的扩增和功能。     

流式细胞术检测CFSE标记人T细胞亚群增殖反应

目的探讨应用流式细胞术和活细胞荧光染料CFSE检测T淋巴细胞各亚群增殖反应的方法学。方法人外周血单个核细胞（PBMC）经CFSE染色后,分别用植物凝血素（PHA）、CD3 mAb和结核杆菌抗原（Mtb-Ag）刺激,加IL-2扩增后,用流式细胞术检测活化增殖后T细胞各亚群的比例,并用ModFit软件分析各亚群的增殖动力模型。结果PHA和CD3 mAb主要活化总T细胞,CD8^＋T细胞的增殖优于CD4^＋T细胞,但CD4^＋T细胞前4代细胞明显多于CD8^＋T细胞。Mtb-Ag主要刺激γδT细胞增殖。结论以CFSE标记淋巴细胞,结合流式细胞术可有效检测出不同T细胞亚群对不同刺激剂的增殖反应以及增殖动力学变化。     

人外周血卡介苗(BCG)特异性中央型和效应型记忆CD4+T细胞的特征

目的：探讨正常人外周血BCG特异性记忆T细胞的特征。方法：分离PPD^-和PPD^＋正常人PBMCs，与BCG进行培养，采用ELISA法检测细胞培养上清液中IFN-γ的水平，ELISPOT法检测分泌IFN-γ的细胞数，利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测细胞表面分子及细胞内因子IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果：当BCG刺激后，PPD^＋正常人PBMCs不产生或只产生少量的IFN-γ，而PPD^＋者IFN-γ产生的量和细胞数均明显增加（P〈0．05）。流式细胞检测分析的结果表明，当BCG刺激后，主要是CD4^-而非CD8^＋T细胞表达IFN-γ和IL-2，两者相比具有显著差异。在CD4^＋T细胞中单独产生IFN-γ的细胞占大多数，其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞，只产生IL-2的细胞占少数。此外，85％～95％以上的CD4^＋IFN-γ^＋T细胞为CD45RO^＋，其中60％以上的细胞为CCR7^＋，其余的为CCR7^-。同样地，80％～95％左右的细胞为CD62L。。结论：BCG可以诱导抗原特异性记忆CD4^＋T细胞的产生，其中大多数为中央型记忆CD4^＋T细胞，少数为效应记忆CD4^＋T细胞，提示其在预防和控制结核分枝杆菌感染中发挥重要作用。     

SARS-CoV S DNA疫苗诱导特异性T细胞及相关细胞因子的特性研究

目的 小鼠经皮下SARS-CoV S DNA疫苗免疫后，研究其特异性T细胞及相关细胞因子的特性。方法SARS-CoV S DNA疫苗免疫BALB／c小鼠后，获取淋巴细胞悬液。经S抗原多肽刺激后，采用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ／的水平，利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果 当S混合多肽刺激后，DNA疫苗免疫小鼠的淋巴细胞产生大量的IFN-γ，与对照鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）。细胞亚群分析的结果表明，IFN-γ^＋和IL-2^＋的CD4^＋T细胞百分率明显高于CD8^＋T细胞。单独产生IL-2的细胞占大多数，其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞，只产生IFN-γ的细胞很少。结论 SARS-CoV S DNA疫苗免疫小鼠后可以诱导抗原特异性CD4^＋和CD8^＋T细胞的产生。     

IL-12体外促进慢性乙型肝炎患者PBMC IFN-γ的产生

目的：探讨体外IL-12对慢性乙型病毒性肝炎患者细胞免疫功能的影响，为临床治疗慢性乙型病毒性肝炎提供理论依据。方法：慢性乙型肝炎患者PBMCs与HBsAg、HBsAg＋IL-12、HBcAg或HBcAg＋IL-12孵育后，利用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清中IFN-γ的含量；用酶联免疫斑点实验（ELISPOT）在单个细胞水平上检测PBMCs中IFN-γ产生细胞的频率；用流式细胞记数仪（FACS）检测PBMCs中IFN-γ^＋的细胞亚群。结果：当乙肝患者PBMCs与HBsAg或HBcAg孵育后，只有少数病例发生反应，产生低水平的IFN-γ。当IL-12加入细胞培养后，能显著地增加HBsAg或HBcAg诱导IFN-γ的产生；分泌IFN-γ的细胞频率显著增加；IFN-γ^＋的细胞主要包括CD8^＋T细胞和非T细胞。结论：IL-12体外能增强慢性乙型肝炎患者的细胞免疫应答。     

系统性红斑狼疮病人外周血Th细胞和Tc细胞IFN-γ及IL-4表达水平与疾病的关系

目的：观察SLE病人体内Th1／Th2及Tc1／Tc2比例失衡及其与疾病的关系。方法：SLE病人（活动期病人15例，稳定期病人20例）及正常人20例外周全血经PMA（20ns／ml）和离子霉索（ionomyein，1μmol／L）刺激4小时后，采用四色流式细胞术检测CD3^＋CD8^＋T细胞（主要为Th细胞）及CD3^＋CD8^＋T细胞（Tc细胞）胞浆内IFN-γ及IL-4的表达水平。血清抗dsDNA抗体检测采用ELISA法、血清免疫球蛋白和尿蛋白含量测定采用免疫速率散射比浊法。结果：SEE活动期病人Th细胞中IFN-γ的阳性百分率明显低于稳定期病人及正常人，Tc细胞中IFN-γ的阳性百分率明显低于正常人；IL-4的阳性百分率各组问无明显差异。稳定期病人仅Tc细胞IFN-1的百分率明显低于正常人。血清抗dsDNA抗体（＋）病人Th和Tc细胞IFN-γ的阳性百分率明显低于抗dsDNA（-）病人；免疫球蛋白（IgG，IgA，IgM中任何一种）异常增高的病人Th及Tc细胞中虽IL-4的阳性百分率无变化，但平均荧光强度明显高于免疫球蛋白水平正常的病人。Th及Tc细胞中IFN-γ和IL-4的表达水平与尿蛋白含量无明显关系。结论：SLE病人体内存在1型及2型细胞因子的异常表达，并与疾病活动程度存在一定的关系，值得进行深入研究。