铅抑制NF-kB、Bcl-2蛋白表达诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的 研究醋酸铅对人肾小管上皮细胞系HK-2细胞NFJeB、Bcl-2表达的影响及与细胞凋亡的关系.方法 体外培养HK-2细胞分为0、2.5、5、10、20 μmol/L醋酸铅组,分别染毒72 h,应用间接免疫荧光-流式细胞术检测HK-2细胞NF-kB、Bel-2蛋白表达的改变,用Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡.结果 随着染铅剂量增加HK-2细胞NF-KB、Bcl-2蛋白表达逐步降低,NF-kB与Bcl-2降低显著相关(r＝0.71,P＜0.01);细胞凋亡率随着铅剂量增加而增加,在5、10、20μmol/L铅组与对照组比较差别有统计学意义(P＜0.01);细胞凋亡率与NF-kB、BcI-2蛋白表达呈明显负相关(r＝-0.625,P＜0.01;r＝0.709,P＜0.01).结论 醋酸铅能下调HK-2细胞.NF-kB、Bcl-2基因的表达,这可能是其诱导HK-2细胞凋亡的途径之一.     

氟对大鼠肾脏NF-κB相关蛋白及mRNA表达影响

目的探讨细胞核转录因子-κB(NF-κB)在慢性氟中毒大鼠肾脏损伤机制中意义。方法原位末端转移酶标记法(TUNEL)及流式细胞学检测肾组织细胞凋亡率;免疫组化和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测肾组织p50、p65、IκBα和Bcl-2、Bax蛋白及mRNA表达。结果肾小管上皮细胞中p50和p65阳性表达强度分别为(134.65±9.71)、(113.62±10.49)、(105.30±8.00)和(119.74±5.17)、(111.90±6.90)、(101.71±9.31),核阳性细胞数随染氟增加而逐渐减少;IκBα表达[(152.67±3.36)、(155.75±3.37)、(156.29±3.78)]则呈逐渐增加趋势,差异均有统计学意义(P<0.05));与对照组比较,Bcl-2蛋白表达强度逐渐降低,Bax蛋白则逐渐升高(P<0.05);肾组织中mRNA表达与蛋白表达水平一致;凋亡细胞数随染氟增加逐渐增加(P<0.05);p65、p50及IκBα与Bcl-2/Bax比值呈相关性(r=0.696、0.720、-0.435,P<0.05)。结论 NF-κB相关基因表达减少引起的肾小管上皮细胞凋亡是慢...     

醋酸铅对人肾小管上皮细胞凋亡及Caspase-3的表达影响

目的探讨醋酸铅对人肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡作用及Caspase-3活性的影响。方法醋酸铅(5、10、20μmol/L)染毒HK-26、12、24、48h后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖。经铅(5、10、20μmol/L)染毒24h后细胞免疫化学法、RT-PCR和Western Blotting检测Caspase-3的转录与表达。结果与空白对照组相比,不同浓度的铅均不同程度的抑制了HK-2的增殖(P﹤0.01)。细胞免疫化学法、RT-PCR和Western Blotting结果显示醋酸铅组的Caspase-3转录与表达升高。结论醋酸铅可促进人肾小管上皮细胞的凋亡,Caspase-3参与了凋亡过程。     

NF-κBp65对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的 探讨核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达影响。 方法 将肺泡上皮细胞分为4组,依次为对照组、感染组、干扰组、阴性对照组(NC组),其中感染组、干扰组和NC组用肺炎链球菌处理细胞,干扰组和NC组分别为转染NF-κB p65小干扰RNA(siRNA NF-κB p65)和阴性对照序列(siRNA control)后的细胞,对照组不做处理。ELISA法检测细胞培养液上清中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-6(IL-6)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞中NF-κB p65水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。 结果 感染组和NC组NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显高于对照组,而IL-10水平明显低于对照组(P<0.01)。干扰组细胞中NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于感染组(P<0.01),而IL-10水平明显高于感染组(P<0.01)。 结论 NF-κB p65能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达,作用机制可能与Cleaved Caspase-3、Bax水平有关。     

核因子-κB、p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的探讨核因子κB(NFκ-B),p53及Bcl-2在铅诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法应用细胞培养、流式细胞术、RT-PCR、Western Blot的方法分析NFκ-B、p53、Bcl-2基因的表达情况,研究醋酸铅诱导PC12细胞凋亡及其分子机理。结果PC12细胞经不同浓度醋酸铅(100、200和400μmol/L)处理24h后,用流式细胞仪检测其凋亡率(n=3),铅组凋亡率明显高于对照组,改变呈剂量依赖性。差异有显著性(P<0.05)。RT-PCR结果显示NFκ-B p65 mRNA、p53 mRNA转录水平随铅剂量升高而升高(P<0.05),两基因表达的改变呈剂量依赖性。Western Blot结果显示,表明随着铅浓度的增加,Bcl-2蛋白表达逐渐降低。结论铅诱导PC12细胞凋亡的这种效应可能与增强NFκ-B及p53基因的活性、降低Bcl-2基因的活性有关。     

白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的实验研究

目的研究白蛋白诱导肾小管上皮细胞凋亡的机制。方法用去脂的小牛血清白蛋白(BSA)20 mg/m l加入培养的肾小管上皮细胞(PTECS),分别培养2、6、12、24 h。凝胶电泳迁移率(EMSA)方法检测NF-κB活性;RT-PCR方法检测骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率。并进行相关性分析。结果BSA 20 mg/m l在2、6、12、24 h均可诱导体外培养的PTECS凋亡率增加,刺激PTECS内NF-κB活性增加、骨桥蛋白mRNA表达上调;上述结果与空白组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。经相关性分析,NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达水平与细胞凋亡率变化呈正相关(r=0.9375、0.9746,P<0.05)。结论白蛋白可能通过刺激NF-κB活性和上调骨桥蛋白表达而诱导肾小管上皮细胞凋亡。     

NF-κB与自身免疫介导、细胞凋亡的血液病

NF-κB是在成熟B细胞和浆细胞中发现的一种蛋白,它与免疫球蛋白κ轻链基因增强子的B位点结合,调控免疫球蛋白κ轻链的转录,命名为核转录因子κB(NF-κB)。近年来,NF-κB是一个研究热点。研究发     

氟伐他汀对白蛋白诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性及OPNmRNA表达的影响

目的探讨氟伐他汀对白蛋白诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性及OPNmRNA表达的影响。方法培养的肾小管上皮细胞为空白对照;对照组加去脂的小牛血清白蛋白(BSA)30 mg/m l共同培养;干预组先加不同浓度氟伐他汀或同一浓度不同时限,半小时后再加入BSA 30 mg/m l,EMSA法及RT-PCR检测各组NF-κB活性及OPNmRNA表达的变化。结果氟伐他汀在不同浓度及时限均可抑制白蛋白诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB活性及OPNmRNA表达,呈剂量与时限依赖性。结论氟伐他汀可抑制白蛋白诱导的肾小管上皮细胞内NF-κB的活性及OPNmRNA的表达。     

NF-κB在砷诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2表达中的作用

目的观察NF-κB核转录因子在砷诱导人正常膀胱上皮细胞(SV-HUC-1)环氧化酶-2(COX-2)表达中的作用。方法在细胞培养液中加入不同浓度的NaAsO2,24 h后提取细胞总RNA和核蛋白,用RT-PCR和Westernblot方法分别分析COX-2 mRNA表达和NF-κB蛋白水平;选择COX-2高表达的NaAsO2处理组,再用NF-κB抑制剂(PDTC)处理,观察COX-2 mRNA表达水平的变化。结果 4、8μmol/L NaAsO2处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);4μmol/L NaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平也显著提高,高于对照组,而10μmol/LNaAsO2处理组细胞NF-κB蛋白水平低于对照组(P<0.05);同时用4μmol/L NaAsO2和PDTC共同处理细胞后,COX-2 mRNA表达水平降低,显著低于单纯用4μoml/L NaAsO2处理细胞的COX-2 mRNA表达水平(P<0.05)。结论低剂量的砷能够诱导人正常膀胱上皮细胞COX-2 mRNA和NF-κB蛋白表达水平的增高,砷诱导的核转录因子NF-κB活化在砷诱导的COX-2...     

COX-2、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及意义

目的 探讨环氧合酶2(COX-2)、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及比较与癌旁组织不同的凋亡情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(KT-PCR)检测NF-κB、COX-2和survivin在肺腺癌组织mRNA的表达,western blot技术检测其蛋白的表达,流式细胞仪检测凋亡情况.结果 肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivin mRNA表达水平显著高于癌旁组织,(P＜0.05),肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivin蛋白表达显著高于癌旁组织(P＜0.05).癌旁组织的凋亡率为7.84±1.02%,显著高于对照组2.51±0.35(P＜0.05).结论 肺腺癌中NF-κB的高表达与COX-2的高表达有关,COX-2和survivin的高表达抑制组织凋亡,其可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用.     

COX-2、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及意义

目的探讨环氧合酶2(COX-2)、NF-κB和survivin在肺腺癌组织中表达及比较与癌旁组织不同的凋亡情况。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测NF-κB、COX-2和survivin在肺腺癌组织mRNA的表达,westernblot技术检测其蛋白的表达,流式细胞仪检测凋亡情况。结果肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivinmRNA表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05),肺腺癌组织中COX-2、NF-κB和survivin蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.05)。癌旁组织的凋亡率为7.84±1.02%,显著高于对照组2.51±0.35(P<0.05)。结论肺腺癌中NF-κB的高表达与COX-2的高表达有关,COX-2和survivin的高表达抑制组织凋亡,其可能在肺腺癌的发生发展中起重要作用。     

亚砷酸钠对HaCaT细胞NF-κB蛋白表达的影响

目的 研究不同浓度亚砷酸钠（NaAsO2）对人角质形成细胞株（HaCaT）核转录因子（NF-κB）蛋白表达的影响及其与活性氧（ROS）及过氧化物酶（CAT）的关系。方法 用流式细胞仪检测细胞内ROS水平，用紫外速率直接法测定CAT活性，用蛋白印迹（western blot）方法检测NF-κB蛋白表达。结果 从2．5μmol／L组开始。细胞内ROS水平增高，且呈剂量一反应关系；5μmol／L以上组CAT活性明显下降，5μmol／L以上组NF-κB表达减弱（P〈0．05）。结论 砷诱导HaCaT细胞氧化应激，抑制NF-κB蛋白的表达。     

NF-κB1在体外乙醇诱导损伤肝细胞中的表达及意义

目的 建立乙醇诱导肝细胞损伤的体外模型,探讨核因子NF-κB1(p65)在乙醇诱导肝细胞损伤中的表达及意义.方法 体外培养人正常肝细胞L02株,以不同浓度乙醇诱导肝细胞损伤,检测细胞上清液中转氨酶的含量,免疫组织化学法观察细胞中NF-κB1蛋白的表达强度及定位,实时定量PCR检测NF-κB1mRNA表达水平.结果 乙醇染毒40、60、80、100 mmol/L组天门冬氨酸氨基转移酶(AST)表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);80、100 mmol/L组谷氨酸转氨酶(GGT)的表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);免疫细胞化学随着乙醇剂量增加,胞浆内胞核内NF-κB1的表达逐渐增加;实时定量PCR检测40、60、80、100 mmol/L组NF-κBlmRNA表达量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 NF-κBI参与了体外酒精性肝细胞损伤的发展过程.     

NF-κB在香烟烟雾凝集物诱导人支气管上皮细胞IL-8表达中的作用

目的研究核因子κB(NF-κB)在香烟烟雾凝集物(CSC)诱导人支气管上皮细胞IL-8表达中的作用。方法利用IL-8促进子上NF-κB结合位点突变的BEAS-2B细胞株(IL-8mNF-κB-BEAS-2B细胞)和野生型BEAS-2B细胞株(IL-8 WT BEAS-2B细胞,其IL-8促进子上含有完整的NF-κB结合位点),经7.5%CSC处理后,用荧光定量PCR方法检测处理后细胞荧光素酶基因(luciferase,fLCF)mRNA水平的变化,并用荧光素酶报告基因活性检测试剂盒检测处理后细胞的荧光素酶活性大小。结果 7.5%CSC处理2种BEAS-2B细胞后,IL-8 WT BEAS-2B细胞的fLCF mRNA表达量和荧光素酶活性均高于IL-8mNF-κB-BEAS-2B细胞(P<0.001),其中fLCF mRNA表达量是IL-8mNF-κB-BEAS-2B细胞的1.32倍(P<0.001)。结论 NF-κB转录因子通过参与炎症因子IL-8表达,促进吸烟导致的呼吸系统炎症反应。     

马钱子碱中毒肾小管上皮细胞Bcl-2和Caspase-3表达的观察

以60只Wistar大鼠制作马钱子中毒模型,应用免疫组织化学方法研究大鼠肾小管上皮细胞中毒后Bcl-2与Caspase-3蛋白表达的变化规律.大鼠在中毒后肾小管上皮细胞Bcl-2与Caspase-3蛋白阳性表达数均高于正常对照组,Bcl-2与Caspase-3在1 d后出现表达,2～3 d达高峰,5 d和7 d两种蛋白表达逐渐下降.提示Bcl-2与Caspase-3参与了马钱子中毒的病理生理过程.     

NF-κB和PKC在膀胱癌中的表达及意义

目的 研究NF-κB与膀胱癌分级、分期、复发及转移的关系，以及NF-κB和PKC的关系。方法 采用免疫组化SP法检测NF-κB和PKC在膀胱移行细胞癌石蜡包埋标本54例和正常对照标本13例的表达。结果 NF-κBP65和PKC在54例膀胱癌中的阳性表达率分别为88．9％、81．5％。NF-κB阳性表达率随膀胱癌分级、分期的增高有降低趋势，而随复发及转移的增多而增高。NF-κBP65和PKC在膀胱癌中的表达具有正相关性。结论 NF-κB可能在膀胱癌早期起促进作用。有望作为评价膀胱癌恶性度、肿瘤进展的指标。PKC在NF-κB的激活过程中有可能发挥促进作用。     

氯化镉对人肾小管上皮细胞线粒体功能及PGC-1α蛋白表达的影响

目的探讨氯化镉(CdCl_2)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)线粒体功能、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子α(PGC-1α)蛋白表达的影响,以及CdCl_2致HK-2细胞线粒体氧化损伤的机制。方法体外培养HK-2细胞,以0、10、20、30、40、50和60μmol/L CdCl_2干预24 h后收集细胞,MTT法观察细胞活力;Mito SOXTM活细胞荧光染色观察线粒体中活性氧(ROS)生成情况,多功能酶标仪测定线粒体中呼吸链复合物Ⅲ活性,流式细胞仪分析线粒体膜电位变化;Western blot法检测CdCl_2对HK-2细胞总蛋白中PGC-1α表达的影响。结果与对照组相比,当CdCl_2浓度增加到20、60μmol/L作用24 h后HK-2细胞存活率下降为(77.60±0.82)%和(41.97±1.22)%(P0.01);并呈剂量依赖性引起线粒体呼吸链复合物Ⅲ的活性下降和线粒体ROS增多(P0.05),JC-1单体阳性率的比值分别为对照组的1.51、1.58、1.72、2.41和3.47倍(P0.01);而细胞总蛋白中PGC-1α蛋白的表达随氯化镉剂量的增加而减少(P0.05)。结论氯化镉可通过抑制PGC-1α蛋白表达,抑制线粒体呼吸链复合物Ⅲ的活性,促进线粒体ROS生成,诱导线粒体膜电位下降,导致对HK-2细胞的毒性损伤。     

马兜铃酸对人肾小管上皮细胞转分化和凋亡作用的体外实验研究

目的　探讨马兜铃酸 (AA)对人类肾小管上皮细胞 (HKC)转分化和凋亡的影响。方法将不同浓度的AA(5、10、2 0和 4 0mg/L)分别加入HKC细胞培养液中培养 4 8h ,应用下列方法观察HKC细胞转分化 :间接免疫荧光法检测HKC细胞角蛋白和波形蛋白的表达 ,免疫组化双染色技术测定HKC细胞E 钙黏连蛋白和α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达 ,流式细胞技术测定HKC细胞表达α SMA阳性百分率 ;应用Giemsa染色、TUNEL反应和琼脂糖凝胶电泳观察HKC细胞凋亡 ,流式细胞技术测定HKC细胞凋亡的百分率。结果　 10mg/L的AA作用于HKC细胞 4 8h后角蛋白、E 钙黏连蛋白表达减弱 ,波形蛋白表达增强 ,HKC细胞表达α SMA阳性率 (14 .17± 0 .6 1) %比无血清对照组的 (3.5 7± 0 .5 2 ) %显著增高。 4 0mg/L的AA作用HKC细胞 4 8h后细胞凋亡 (5 3.4 % )比无血清对照组 (2 % )显著增高。 5和 2 0mg/L的AA未能引起HKC明显凋亡或转分化。结论　较低浓度 (10mg/L)的AA对HKC细胞有轻度的促转分化作用 ,较高浓度 (4 0mg/L)的AA作用 4 8h后引起多数HKC细胞凋亡 ,AA的上述作用可能与马兜铃酸肾病的发病机制有关。     

亚砷酸钠对正常人类皮肤角质形成细胞蛋白激酶B及其下游信号因子IκB和NF-κB蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人角质形成(HaCat)细胞蛋白激酶B(PKB/Akt)及其下游信号因子IκB和NF-κB蛋白表达的影响。方法 HaCat细胞分别暴露于终浓度为0(对照)～100μmol/L的亚砷酸钠溶液6 h。采用Alamar Blue还原法检测细胞活力,采用Western Blot法检测细胞磷酸化Ak(tp-Akt)、磷酸化IκB(p-IκB)及胞核和胞浆中核转录因子NF-κB的蛋白表达水平。结果各浓度亚砷酸钠染毒组HaCat细胞内p-Akt、p-IκB蛋白以及胞核中NF-κB蛋白表达水平均显著升高,细胞活力和胞浆中NF-κB蛋白表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,HaCat细胞内p-Akt、p-IκB蛋白以及胞核中NF-κB蛋白表达水平呈逐渐上升的趋势,细胞活力和胞浆中NF-κB蛋白表达水平呈逐渐下降的趋势。结论亚砷酸钠可使HaCat细胞活力明显下降;诱导HaCat细胞Akt蛋白的磷酸化活化,进而诱导其下游信号因子IκB磷酸化及核转录因子NF-κB入核表达。     

川芎嗪对糖基化终产物诱导人视网膜色素上皮细胞表达核因子-κB的影响

目的研究川芎嗪对糖基化终产物(AGEs)诱导人视网膜色素上皮细胞(RPE)表达核因子-κB(NF-κB)的影响。方法应用免疫组化法检测不同浓度AGEs作用下RPE中NF-κB的表达、同一浓度AGEs作用于RPE不同时间NF-κB的表达、不同浓度川芎嗪对AGEs作用下RPE中NF-κB的表达的影响。结果随着AGEs浓度的增加,RPE中NF-κB的表达逐渐增加,以100mg/L最为明显;AGEs作用24 h时,RPE中NF-κB的表达较高;随着川芎嗪浓度的增加,AGEs作用下的RPE中NF-κB的表达逐渐降低。结论AGEs可诱导RPE中NF-κB的表达,川芎嗪可对抗这一作用,且具有浓度依赖性。