实验诱发树驹肝癌过程中细胞凋亡及其相关基因、p53突变位点的研究

目前对肝细胞癌（HCC）的研究一般为手术切除的肝癌组织，并用癌旁肝组织作为对照肝组织。这些研究只能观察癌形成时或形成后的基因表达状况，不能动态观察在肝细胞癌变过程中一些基因的表达状况。而以往利用动物模型研究不同诱癌阶段的基因改变，也通常是在不同诱癌阶段分批处死动物获取所需的组织，故也只能从群体上而不能从个体上动态观察基因表达情况。     

肝癌组织中p53基因的突变

目的：对23例原发性肝细胞肝癌组织中p53基因的5～8四个外显子可能发生的点突变进行检测分析。方法：通过聚合酶链反应／单链构象多态性分析技术。结果：13例（56.50％）癌变组织中检测到点突变的发生，第7及5外显子的突变率分别高达47.83％、43.47％，11例癌变组织中同时出现两个外显子以上的多位点突变。结论：提示p53基困的突变在原发性肝细胞肝癌中可能是细胞内一系列基因调变至癌过程中的一个关键。同时，p53基因第5外显子可能存在突变热点。     

细胞凋亡相关基因APG诱导肝癌细胞凋亡实验研究

ＰＧ基因是Ｂｃｌ 2家族中一员 ,与Ｂｃｌ 2家族的广泛氨基酸同源性主要表现在高度保守的ＢＨ1和ＢＨ2 结构域。ＡＰＧ过表达能够对抗Ｂｃｌ 2抑制细胞凋亡的活性 ,在促凋亡因素的刺激下Ｂｃｌ 2 /ＡＰＧ的比值将决定细胞的生与死。本研究旨在研究ＡＰＧ基因转染ＨＣＣ 92 0 4细胞能否诱导该细胞发生凋亡 ,从而探讨ＡＰＧ基因成为肿瘤基因治疗靶基因的潜在可能性。1　材料与方法1 1　细胞系和细胞培养 :人肝癌细胞系ＨＣＣ 92 0 4为启东肝癌研究所建立。在 5 0ｍｌ/Ｌ胎牛血清的Ｅａｇｌｅ’ｓ培养液中培养 ,ＨＣＣ 92 0 4细胞系的ｐ5 3基因…     

胃癌组织中凋亡相关基因Survivin、Bax、p53的表达及其相关性研究

目的探讨凋亡抑制基因生存素蛋白（Survivin）在胃癌组织中表达的临床意义，及其与Bax、p53蛋白表达的相关性分析。方法应用免疫组织化学链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（SABC法），检测25例正常胃黏膜组织及100例胃癌组织中的Survivin、Bax、p53的表达。结果25例正常胃黏膜组织中Survivin呈阴性表达，而100例胃癌组织中81例呈阳性表达，阳性率为81．0％，差异有统计学意义（P〈0．01）。Survivin基因表达与胃癌组织分化程度、临床分期及淋巴结转移呈正相关。Bax在胃癌组织中的表达率（17．0％）显著低于正常胃黏膜组织中的表达（48．0％），P〈0．01；胃癌组织中Bax与Survivin蛋白表达呈负相关P〈0．05；Survivin与p53蛋白表达呈正相关，P〈0．05。结论胃癌组织中Survivin高表达导致凋亡抑制在胃癌的发生发展中可能起重要作用。Survivin基因的异常表达提示胃癌预后不良。p53基因突变导致凋亡异常可能与其对Survivin表达调控失识关系更为密切，Bax表达下调与Survivin表达上调可能共同在胃黏膜癌变和癌变后的恶性演进过程中起重要作用，三者联合检测有望作为预警胃癌发生和转移的病理生物学标志。     

肝癌细胞转染野生型p53基因稳定表达后肝癌细胞出现自发凋亡

肝癌细胞转染野生型ｐ５３基因稳定表达后肝癌细胞出现自发凋亡＊张晓东１王文亮１穆峰２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２第四军医大学唐都医院胸外科）关键词肝肿瘤细胞凋亡ｐ５３基因转染中图号Ｒ７３－３１目的进一步探讨ｐ５３基因与细胞凋亡（ａｐｏ...     

卵巢癌细胞凋亡与端粒酶活性、p53突变的相关性研究

目的　研究卵巢癌组织中细胞凋亡与凋亡调控因子———端粒酶活性、p5 3突变之间的关系。方法　TRAP -ELISA法半定量测定卵巢癌组织的端粒酶活性 ;流式细胞计量术 (flowcytometry ,FCM)分析细胞凋亡率(Apo)、S期细胞比率 (SPF)、p5 3突变蛋白阳性率。结果　①随着临床分期、病理分级的升高及淋巴结转移 ,Apo、SPF均显著增加 (P <0 .0 1、P <0 .0 1、P<0 .0 5 ) ,直线相关分析显示二者中度相关 (r =0 .6 5 ,P <0 .0 1)。②随着临床分期、病理分级的升高及淋巴结转移 ,端粒酶阳性率、阳性程度及p5 3突变蛋白阳性率均显著增加 (端粒酶活性比较为 :P <0 .0 5 ,P <0 .0 1,P <0 .0 1;p5 3突变蛋白阳性率比较为 :P <0 .0 1,P <0 .0 5 ,P <0 .0 5 )。③随着端粒酶活性增高 ,p5 3突变蛋白阳性率、Apo、SPF均显著增加 (P均 <0 .0 1)。④p5 3突变蛋白阳性率与Apo无明显相关性 (r =0 .2 7,P >0 .0 5 ) ,与SPF轻度相关 (r =0 .38,P <0 .0 1)。结论　端粒酶和p5 3突变都可通过调节细胞凋亡与增殖来调控卵巢癌的恶性行为及转移潜能。卵巢癌早期 ,二者都促使细胞增殖失控导致肿瘤发生 ;随着肿瘤进展 ,p5 3调节凋亡与增殖的作用减弱 ,而端粒酶的作用渐强。联合检测可从不同的分子生物学角度评价卵巢癌的恶性行为及转移潜     

野生型p53基因提高肝癌细胞化疗药物敏感性的实验研究

目的:研究野生型p53(wtp53)提高肝癌细胞化疗药物敏感性的作用.方法:采用p53基因型不同的三种人肝癌细胞株HepG2 (部分wtp53)、Hep3B(p53-/-)和 PLC/PRF/5(mtp53),观察携wtp53基因的重组腺病毒联合化疗药物争光霉素(bleomycin,bleo)、丝裂霉素(mitomycin, mito)或甲氨蝶呤(methotrexate, meth)对肝癌细胞的杀伤效应.结果:HepG2、Hep3B和 PLC/PRF/5分别耐受600 μg/ml bleo、100 μg/ml mito或1 000 μg/ml meth,但转入wtp53基因后再使用上述质量浓度范围的化疗药物,则肝癌细胞出现了明显的被杀伤效应.结论:wtp53基因能提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性,wtp53基因联合化疗药物治疗可望开辟克服肝癌耐药的新途径.     

肝癌细胞凋亡相关基因分析

目的 克隆肝癌细胞凋亡相关基因。分析已知基因同源的cDNA序列，探讨三氧化二砷（As2O3)诱导肝癌细胞凋亡的分子机制。方法 用As2O3诱导人肝癌HCC-9204细胞凋亡，应用抑制性消减杂效技术克隆凋亡细胞中的差异表达cDNA，测序并与Genebank中的已知基因序列进行同源性比较。结果 克隆到18个与已知基因高度同源的cDNA序列，包括与抗氧化损伤，线粒体跨膜运输，细胞骨架系统相关的基因，细胞凋亡相关核蛋白PHLDA1基因，核糖体蛋白L37基因，溶酶体ATP酶基因以及与Ibd1,SMT3,DKFZP434J154pro-tein等基因高度同源的序列。结论 As2O3诱导的肝癌细胞凋亡后，大量基因表达上调，这些基因大多与As2O3处理肝癌细胞后的应激反应和细胞凋亡有关，提示细胞凋亡是一个有多基因参与调控的复杂过程。     

脑膜瘤中凋亡相关基因Survivin和p53的表达研究

目的探讨凋亡相关基因Survivin和p53在脑膜瘤中的表达及其相互关系。方法应用免疫组化SP法,检测86例脑膜瘤组织、15例正常脑膜组织中凋亡相关基因Survivin、p53蛋白的表达,并统计学分析两者之间的关系。结果Survivin在正常脑膜组织和脑膜瘤组织中阳性表达率为0%和61.6%,两者比较具有显著性差异（P﹤0.001）。Survivin表达阳性率在脑膜瘤II级（76.5%）和I级（48.2%）之间、III级（93.3%）和I级之间差异具有统计学意义（P﹤0.05和P﹤0.01）。p53在正常脑膜组织和脑膜瘤组织表达的阳性率为0%和36.1%,两者比较具有显著性差异（P﹤0.05）。p53表达阳性率在脑膜瘤II级（52.9%）和I级（20.4%）之间、III级（73.3%）和I级之间差异具有统计学意义（P﹤0.05和P﹤0.001）。Survivin与p53蛋白表达共阳性27例,共阴性29例,呈显著正相关（rs=0.687,P﹤0.01）。结论（1）Survivin和p53在脑膜瘤中的表达与其恶性程度明显相关;（2）Survivin基因过度表达和抑癌基因p53失活在脑膜瘤的发生和恶化中起协同作用;（3）Survivin将是脑膜瘤免疫治疗理想和有效的靶基因。     

脑膜瘤中凋亡相关基因Survivin和p53的表达研究

目的探讨凋亡相关基因Survivin和p53在脑膜瘤中的表达及其相互关系。方法应用免疫组化SP法,检测86例脑膜瘤组织、15例正常脑膜组织中凋亡相关基因Survivin、p53蛋白的表达,并统计学分析两者之间的关系。结果Survivin在正常脑膜组织和脑膜瘤组织中阳性表达率为0%和61.6%,两者比较具有显著性差异(P﹤0.001)。Survivin表达阳性率在脑膜瘤II级(76.5%)和I级(48.2%)之间、III级(93.3%)和I级之间差异具有统计学意义(P﹤0.05和P﹤0.01)。p53在正常脑膜组织和脑膜瘤组织表达的阳性率为0%和36.1%,两者比较具有显著性差异(P﹤0.05)。p53表达阳性率在脑膜瘤II级(52.9%)和I级(20.4%)之间、III级(73.3%)和I级之间差异具有统计学意义(P﹤0.05和P﹤0.001)。Survivin与p53蛋白表达共阳性27例,共阴性29例,呈显著正相关(rs=0.687,P﹤0.01)。结论(1)Survivin和p53在脑膜瘤中的表达与其恶性程度明显相关;(2)Survivin基因过度表达和抑癌基因p53失活在脑膜瘤的发生和恶化中起协同作用;(3)Survivin将是脑膜瘤免疫治疗理想和有效的靶基因。     

p53抑癌基因与细胞凋亡

细胞凋亡和ｐ５３基因都是２０年来特别是近１０年来细胞生物学和分子生物学研究的热点。它们之间的相互关系以及它们与肿瘤发生和发展之间的关系亦是肿瘤研究工作者关心的主要问题之一。目前，对ｐ５３抑癌基因的研究仍在不断的深入，而对细胞凋亡的研究则已成为肿瘤细胞生物学的一个重要组成部分［１］。由于各种实验资料的积累，使人们对细胞凋亡与ｐ５３抑癌基因的相互关系有了一定的了解，现结合国外有关资料作一综述。１　细胞凋亡的主要形态学特点　　在细胞的正常发展过程中，细胞的分裂、生长、分化和最终死亡都是受到高度调节的。…     

肝癌组织中p53基因及其下游基因的研究进展

80年代Knudson首先提出肿瘤抑癌基因的概念 ,与此同时 ,p5 3被发现。大量研究表明 :p5 3基因在许多肿瘤中都有很高的突变率 ,是迄今为止发现的突变率最高、涉及范围最广的抑癌基因之一。抗癌基因主要有以下功能[1,2 ] :诱导终末分化 ;维持基因稳定 ;触发衰老 ,诱导细胞程序性死亡 ;调节细胞生长 ;抑制蛋白酶活性 ;改变DNA甲基化酶活性 ;调节组织蛋白酶活性 ;调节血管形成 ;促进细胞间联系。癌基因受内外多种因子等的激活 ,使细胞生长分化失控 ,增强了细胞瘤性转化的可能性 ,当抗癌基因失活时 ,进一步加剧了细胞瘤性转化 ,最终导致了细胞癌…     

p53抑癌基因与细胞凋亡

细胞凋亡和p53基因都是20年来特别是近10年来细胞生物学和分子生物学研究的热点.它们之间的相互关系以及它们与肿瘤发生和发展之间的关系亦是肿瘤研究工作者关心的主要问题之一.目前,对p53抑癌基因的研究仍在不断的深入,而对细胞凋亡的研究则已成为肿瘤细胞生物学的一个重要组成部分[1].由于各种实验资料的积累,使人们对细胞凋亡与p53抑癌基因的相互关系有了一定的了解,现结合国外有关资料作一综述.     

喉癌p53基因点突变研究

目的 探讨喉癌组织p53基因点突变的频率、特征。方法 选用P53蛋白表达阳性的喉癌标本22例，正常喉组织2例，采用聚合酶链反应－限制性内切酶片段长度多态性（PCR－RFLP）、单链构象多态性（SSCP）及DNA直接测序法分析p53基因第7外显子第249位密码子的点突变。结果 在22例喉癌中有3例发生突变，分别位于248、250及254密码子，表现 为碱基C的丢失和A→T颠换，但无249密码子突变。结论 在喉癌中p53基因第7外显子的第249位密码子的突变可能并不常见。     

喉癌p53基因点突变研究

目的　探讨喉癌组织 p5 3基因点突变的频率、特征。方法　选用 P5 3蛋白表达阳性的喉癌标本2 2例 ,正常喉组织 2例 ,采用聚合酶链反应 -限制性内切酶片段长度多态性 (PCR- RFL P)、单链构象多态性 (SSCP)及 DNA直接测序法分析 p5 3基因第 7外显子第 2 49位密码子的点突变。结果　在 2 2例喉癌中有 3例发生突变 ,分别位于 2 48、2 5 0及 2 5 4密码子 ,表现为碱基 C的丢失和 A→ T颠换 ,但无 2 49密码子突变。结论　在喉癌中 p5 3基因第 7外显子的第 2 49位密码子的突变可能并不常见     

p53基因在茉莉酸甲酯诱导HepG2细胞凋亡过程中表达变化的实验研究

目的探讨p53基因在茉莉酸甲酯诱导HepG2细胞凋亡过程中的表达变化.方法 RT-PCR检测HepG2细胞中p53mRNA表达,免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白表达.结果 MeJA作用HepG2细胞48h后：p53 mRNA表达水平明显下降（P〈0.01）;p53蛋白表达水平明显降低（P〈0.01）.结论 MeJA通过下调mtp53及其蛋白的表达,相对增加了wtp53的比例,使细胞周期相关蛋白的表达发生改变,引起细胞周期阻滞和细胞凋亡,从而发挥抗肝癌作用.     

大鼠肝癌变中p53点突变及其蛋白表达的研究

目的 研究大鼠肝癌变中突变型P53蛋白（mP53）的表达及p53基因第6外显子点突变。方法 通过DEN诱发的启动模型和肝癌模型,应用免疫组化、MDT－PCR－SSCP和直接测序技术分别研究mP53表达和53基因第6外显子点突变。结果 mP53阳性细胞仅见于癌前个别肝细胞增生结节中,8／18例（44．44％）肝细胞癌呈mP53阳性;8例mP53阳性肝癌中仅有1例（12．50％）被检出p53基因第6外显子发生点突变,即第208位密码子第1碱基G→G填换。结论 在DEN诱发的启动模型和肝癌模型中p53基因突变可发生于大鼠肝癌变之癌前及肝癌形成阶段,且第6外显子突变率低。