NR1反义抑制剂对局灶性脑缺血作用的初步研究

目的探讨NR1反义寡核苷酸对局灶性脑缺血的治疗作用。方法于大鼠大脑中动脉闭塞后2小时、24小时分别经侧脑室注射磷酸缓冲液(PBS)、错义寡核苷酸(MSODN)及反义寡核苷酸(ASODN),然后在不同时间点进行神经功能缺损评分,术后第5天进行Nissl染色、TTC染色及梗死体积比测定。结果各组局灶性脑缺血的神经功能缺损评分无显著性差异;反义寡核苷酸治疗组的梗死体积比显著低于单纯缺血组;反义寡核苷酸治疗组海马各区神经元损伤轻,神经元丢失相对较少。结论局灶性脑缺血后侧脑室注入NR     

NR_1反义抑制剂对局灶性脑缺血作用的初步研究

目的　探讨NR1反义寡核苷酸对局灶性脑缺血的治疗作用。方法　于大鼠大脑中动脉闭塞后2小时、2 4小时分别经侧脑室注射磷酸缓冲液 (PBS)、错义寡核苷酸 (MSODN)及反义寡核苷酸 (ASODN) ,然后在不同时间点进行神经功能缺损评分 ,术后第 5天进行Nissl染色、TTC染色及梗死体积比测定。结果　各组局灶性脑缺血的神经功能缺损评分无显著性差异 ;反义寡核苷酸治疗组的梗死体积比显著低于单纯缺血组 ;反义寡核苷酸治疗组海马各区神经元损伤轻 ,神经元丢失相对较少。结论　局灶性脑缺血后侧脑室注入NR1反义寡核苷酸 ,可以减轻缺血脑组织病理学损害 ,具有脑保护作用。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体1反义抑制剂治疗局灶性脑缺血作用机制的实验研究

目的 探讨N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NMDAR1）反义抑制剂（ASODN）治疗急性脑梗死的作用机制。方法 采用Koizumi‘s线栓法制作可复流MCAO大鼠模型。40只8-12月龄健康，雄性Wistar大鼠随机分为4组；（1）MCAO组；（2）MCAO PBS组；（3）MCAO MSODN组；（4）MCAO ASODN组。实验各组分别于MCAO后2h,24h经侧脑室注射给药，MCAO后第5天处死动物。取脑组织进行NMDAR1免疫组织化学及NMDAR1mRNA原位杂交检测。检测结果经CMIAS图像分析系统进行定量分析。结果 （1）ASODN治疗组NMDAR1阳性细胞在海马CA1区，CA3区及DG区的数密度，光密度显著低于MCAO组；（2）ASODN治疗组NMDAR1mRNA阳性细胞在海马各区及大脑皮层的数密度，光密度与MCAO组无显著差异。结论 NMDAR1反义抑制剂可能主要作用于NMDAR1基因的蛋白翻译过程（胞浆机制），抑制缺血后神经元NMDAR1的产生。下调NMDAR1的数量及功能，减轻缺血后迟发性神经元坏死。达到脑保护作用。     

藻酸双酯钠对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内钙离子浓度的影响

目的探讨藻酸双酯钠(polysacchridesulfate,PSS)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡的保护机制.方法经大鼠颈内动脉将一线栓插入右侧大脑中动脉1.5 h后再灌注24 h制成局灶性脑缺血再灌注大鼠模型;在再灌前30 min或再灌后5 h经腹腔给予不同剂量的藻酸双酯钠或赋形剂;用流式细胞术测量受损脑组织神经元内钙离子浓度及凋亡率,同时观察大鼠的神经功能缺损评分.结果藻酸双酯钠治疗组神经功能缺损较非治疗组明显减轻,相应的藻酸双酯钠治疗组细胞内钙离子浓度增高受抑、细胞凋亡减少;不同时间点给药组间上述指标亦有显著性差异.结论藻酸双酯钠可以减轻脑组织神经元再灌注损伤和抑制神经元凋亡;抑制受损神经元胞内钙离子浓度增高是其保护作用的可能机制.     

局灶性脑缺血后海马各区NMDAR表达的实验研究

目的：观察局灶性脑缺血对N－甲基－D－天门冬氨酸受体（NMDAR）及NMDARmRNA表达的影响。方法：采用线栓法制作可复流脑中动脉闭塞大鼠模型。30只雄性大鼠随机分为3组;正常组、假手术组和大脑中动脉闭塞（MCAO）组。MCADO后第5天处死动物,取脑组织进行NR1免疫组化及NR1mRNA原们杂交检测。结果（1）正常组海马各区均有NR1阳性细胞伯分布,其中海马CA3区、DG区分布较多;MCAO组NR1阳性细胞在海马CA1区、CA3区及DG区的数密度、光密度较正常组高;（2）正常组海马各区均有极少量的NR1mRNA阳性细胞分布,MCAO组NR1mRNA阳性细胞在海马CA1区、CA3区的数密度、光密度均较正常组有显著性增高。结论：大鼠海马各区都存在着NR1及NR1mRNA不同程度的表达,MCAO后NR1及NR1mRNA的表达水平上调。     

海风藤对局灶性脑缺血治疗作用的实验研究

目的 :探讨海风藤提取物对老龄大鼠局灶性脑缺血的治疗作用。方法 :建立光化学诱导的老龄大鼠局灶性脑缺血模型 ,利用TTC染色、HE染色、TUNEL标记、原位分子杂交观察海风藤提取物对缺血灶大小、血脑屏障、缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞及p5 3基因表达变化的影响。结果 :海风藤治疗组大鼠局灶性脑缺血后血脑屏障破坏明显减轻 ,缺血灶周围坏死细胞、凋亡细胞及P5 3阳性细胞的数量较未干预组显著减少 ,梗死灶直径也有减少的趋势。结论 :海风藤具有抵抗缺血后神经细胞DNA损伤、减轻迟发性神经元死亡及神经细胞坏死、发挥缺血性脑保护作用。     

白芍总甙对局灶性脑缺血大鼠脑组织炎症信号表达的影响

目的观察白芍总甙对局灶性脑缺血(Focal Cerebral ischemic,FCI)大鼠脑组织Toll样受体4(TLR4)基因表达的作用。方法参照longa等方法制成大鼠局灶性大脑中动脉梗死(MCAO)模型,将80只SD雄性大鼠随机分为假手术组,溶剂组,白芍总甙低、高两个剂量组,采用RT-PCR法检测缺血灶周围脑组织TLR4基因表达水平。结果生理盐水组TLR4基因相对表达均明显高于假手术组(P<0.01);白芍总甙中高剂量组TLR4相对表达量明显低于生理盐水组(P<0.01)。结论生理盐水组大鼠缺血灶周围脑组织TLR4基因高表达,白芍总甙对TLR4表达有抑制作用,这可能是其抗炎作用的机理之一。     

PS-1反义寡核苷酸对大鼠脑缺血损伤的影响

目的　探讨脑缺血损伤时早老素 1 (PS 1 )基因的表达与神经细胞变性、丢失及骨架改变的关系。方法　向脑缺血大鼠侧脑室注入PS 1反义寡核苷酸以阻断脑组织PS 1基因的表达 ,并用生理盐水、PS 1正义、错义寡核苷酸为对照。观察脑组织病理学改变 ,采用原位杂交及免疫组织化学技术对脑内阳性神经元平均面积、积分光密度及形态的改变进行对比研究。结果　PS 1反义寡核苷酸可有效地阻断脑组织PS 1基因的表达 ,导致动物对脑缺血耐受性下降 ,表现为脑组织损害加重 ,毛细血管间隙增大 ,皮质及海马区阳性神经元数目减少 ,平均面积及积分光密度显著下降 ;部分细胞固缩 ,细胞骨架蛋白破坏呈嗜银性改变。结论　PS 1基因在脑缺血时起脑保护作用 ,如果抑制PS 1表达 ,则加重缺血性损伤 ,导致神经元结构改变 ,神经细胞内嗜银样变和突起迂曲以及神经细胞丢失 ,提示PS 1基因在阿尔茨海默病 (AD)中的作用机制值得进一步探讨     

降钙素基因相关肽对大鼠局灶性脑缺血保护作用的研究

线栓法建立大鼠局灶脑缺血动物模型，定量研究降钙素基因相关肽（CGRP）对大鼠局灶脑缺血体积的影响。结果：模型建立前1小时使用CGRP预防性治疗可明显减小脑缺血体积，与对照组比较减幅达54％（P＜0．01）；模型建立后2小时CGRP治疗组脑缺血体积仅比对照组减少12％（P＞0．05）。提示：CGRP对缺血神经组织有保护作用，但治疗时间窗较短。     

局灶性脑缺血大鼠脑内NMDA受体活性变化的研究

目的 本文旨在研究局灶性脑缺血时,大鼠脑内NMDA受体的活性变化。方法 线栓法阻塞大鼠大脑中动脉制成局灶性脑缺血模型。以[3H]TCP为配套,采用放射自显影观察NMDA受体的活性变化。结果 缺血1h、2h和4h组缺血侧纹状体、皮层损伤区[3H]TCP结合位点密度显著高于非缺血侧（P＜0．05）,缺血1h即达峰值（P＜01）。三组[3H]TCP结合位点密度增高区域面积均明显大于梗死区面积（I1、I2P＜0．01;I4P＜0．05）。结论 局灶性脑缺血可引发NMDA受体活性迅速持续升高。梗死区周围的半暗带内,NMDA受体处于持续激活状态。     

香港远志提取物对局灶性脑缺血大鼠脑保护作用与作用机制

目的探讨香港远志提取物对局灶性脑缺血大鼠脑保护作用与机制。方法线栓法制备SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,随机分4组:假手术组、模型组及治疗A、B组。治疗组按设定方式给药,假手术组、模型组给1%吐温溶液。观察术后24h神经功能缺损评分(NBDS)、脑梗死体积(IV)、血清神经元烯醇化酶(NSE)及神经元凋亡、Bcl-2、Bax表达。结果与假手术组比较,模型组和治疗组NBDS、IV、NSE、神经元凋亡及Bcl-2、Bax显著增高、Bcl-2/Bax显著降低(P<0.05)。与模型组比较,治疗组NBDS、IV、NSE及神经元凋亡、Bax显著降低、Bcl-2、Bcl-2/Bax显著增高(P<0.05),治疗组间数据亦有显著差异(P<0.05)。结论香港远志提取物预处理,对局灶性脑缺血大鼠脑神经有保护作用,机制可能是促进Bcl-2、抑制Bax表达,上调Bcl-2/Bax比值,阻止神经元凋亡。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体1反义抑制剂治疗急性脑梗死的实验研究

Ｎ -甲基 -Ｄ -天冬氨酸受体 (ＮＭＤＡＲ)是由ＮＲ1、ＮＲ2Ａ～ 2Ｄ亚单位组成的异聚体 ,其中ＮＲ1亚单位是ＮＭＤＡＲ的功能单位。ＮＭＤＡＲ是缺血性脑损伤的主要介导因素。我们将ＮＲ1亚单位的反义抑制剂 ,经侧脑室 2次给药 ,用于再灌注大脑中动脉闭塞 (ＭＣＡＯ)大鼠的急性期治疗 ,探讨ＮＲ1反义抑制剂对急性脑梗死的治疗作用。材料和方法 :健康雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 6 0只 ,体重 2 80～30 0ｇ,随机分为 6组 :(1)正常组 ;(2 )假手术组 ;(3)ＭＣＡＯ组 ;(4)ＭＣＡＯ 磷酸缓冲液 (ＰＢＳ)组 ;(5 )ＭＣＡＯ 错义寡核苷酸 (ＭＳＯＤＮ)组…     

c—fos反义寡核苷酸对谷氨酸处理培养海马神经元的保护作用

目的 :探讨反义寡核苷酸c fos对谷氨酸处理培养海马神经元的保护作用。方法 :应用MTT法 (四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 )检测c fos反义寡核苷酸在不同浓度和时间对谷氨酸处理原代培养海马神经细胞的光密度值。结果 :c fos反义寡核苷酸在不同浓度和时间下对谷氨酸处理原代培养海马神经细胞光密度值均有增加。结论 :c fos反义寡核苷酸对谷氨酸毒性损伤的培养海马神经元有保护作用     

小剂量NOS抑制剂对局灶性脑缺血病理改变影响的研究

目的 研究NO在局灶性脑缺血再灌流过程中对病理改变的影响，并探讨其机制。方法 利用光、电镜及TUNEL法观察了NNLA干预后局灶脑缺血大鼠脑组织的病理学改变。结果 缺血、再灌流1d时光镜下皮质、海马区均可见神经细胞呈坏死样改变；电镜下半影区神经细胞的改变仅见于核染色质凝集(类似凋亡小体)和小胶质细胞核变形，以细胞凋亡为主；小剂量给予NNLA干预后坏死和凋亡的病理改变均较手术对照组轻。TUNEL显示与病理改变结果一致。结论 局灶性脑缺血后，调节NO生成量在适当范围，可以达到保护、防止神经细胞进一步损伤的目的。     

Caspase-3反义寡核苷酸抗凋亡作用的研究

目的 研究caspase-3反义寡核苷酸对6-OHDA诱导大鼠中脑多巴胺神经元凋亡的保护作用.方法 向四组SD大鼠的中脑黑质部位注入反义、错义、正义寡核苷酸及NS,然后再注入6-OHDA,取中脑做连续切片,原位杂交及免疫组化检测黑质caspase-3的表达及TH的表达,原位末端标记法(Tunel)检测黑质细胞的凋亡.结果 反义组Tunel阳性细胞数为82±8.6,方差分析显示反义组阳性细胞数显著性低于其他各组(P＜0.05);反义组手术侧TH阳性细胞数为168.6±11.4,与对侧阳性细胞比值为63%±11.3%,显著性高于其余各组(P＜0.05).结论 有效阻断caspase-3的表达可减轻6-OHDA诱导的多巴胺神经元凋亡,caspase-3可作为保护性治疗帕金森病的靶点.     

替米沙坦对局灶性脑缺血再灌注大鼠c-fos表达和神经保护

目的 研究不同剂量血管紧张素I受体拮抗剂替米沙坦对大鼠脑缺血再灌注的神经保护作用.方法 60只大鼠随机分为4组,假手术组、生理盐水对照组、小剂量替米沙坦治疗组2 mg/(kg·d)、大剂量替米沙坦治疗组10 mg/(kg·d).通过线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO),记录神经功能缺损评分、监测血压、梗死面积、c-fos的表达.结果 小剂量替米沙坦组平均动脉压较对照组适度下降,大剂量组则较为剧烈.小剂量替米沙坦组脑梗死体积小于对照组(P<0.05),而大剂量组与对照组相比变化不大(P>0.05).各组大鼠神经功能随时间推移逐渐恢复,但各组恢复程度不同,治疗组较对照组神经功能恢复明显较好(P<0.05).c-fos的表达随损伤好转逐渐降低,应用替米沙坦干预后c-fos表达较对照组减少,且小剂量替米沙坦组减少更明显.结论 小剂量替米沙坦可以提供降低血压之外的神经保护作用,其机制可能为减少c-fos表达,抑制缺血损伤后神经凋亡.大剂量替米沙坦无明显神经保护作用.     

肝细胞生长因子受体反义寡核苷酸对胶质瘤细胞的作用

近期的研究认为肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体c-Met信号通路的激活对肿瘤发生、生长和侵袭起着关键的作用,而选择性地阻滞肿瘤细胞的信号通路,控制肿瘤的增殖和侵袭是当前的研究热点,这也是研究肿瘤信号通     

缺血后处理对局灶性脑缺血大鼠的脑保护作用

目的 探讨缺血后处理(isehemic postconditioning,IP)对局灶性脑缺血大鼠的脑保护作用.方法 36只SD大鼠采用开颅机械闭塞法建立局灶性脑缺血模型后,随机分为2组(n=18),IP组阻断大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)15 min后开放双侧的颈总动脉(bilateral common carotid arteries,bCCAs)15 s,夹闭15 s,反复3次,然后开放bCCAs进行永久性灌注;非IP组阻断MCA 15 min后直接开放bCCAs进行永久性灌注.分别于术前1 d,术后30 d内在各时间点行行为学检测,并以正常大鼠为空白对照.于再灌后2 d、14 d时各组随机取6只检测脑梗面积.结果 IP组大鼠在各时间点行为学检测结果均优于非IP组;再灌注2 d、14 d时IP组脑梗面积均显著小于非IP组(P＜0.001),IP组再灌注2 d和14 d的脑梗面积无统计学差异(P=0.724).结论 IP可改善局灶性脑缺血大鼠的神经功能,降低脑梗面积.     

胰岛素对局灶性脑缺血再灌注损伤的作用

目的　观察胰岛素对脑缺血再灌注损伤的治疗作用。方法　制备易卒中型肾血管性高血压大鼠（ Ｒ Ｈ Ｒ Ｓ Ｐ） ,用线栓法复制大脑中动脉阻塞（ Ｍ Ｃ Ａ Ｏ） ,造成缺血６ ｈ 再灌注１８ ｈ ,术后立即及６ 小时后即时使用胰岛素,测定神经功能障碍评分及脑梗死体积的变化。结果　胰岛素可使神经功能障碍评分显著减低,梗死灶体积及其占全大脑体积比值,两半球体积差值显著减小。结论　胰岛素能减轻脑缺血再灌注损伤,早期用药效果更好。     

多聚凝胶介导IGF-IR反义寡核苷酸治疗体内胶质瘤的实验研究

目的探讨反义寡核苷酸阻断IGF-IR基因表达对裸鼠移植胶质瘤的抑制作用。方法首先建立胶质瘤裸鼠移植模型,随机分为4组:空白对照组、多聚凝胶组、正义核酸组和反义核酸组,反义核酸组在瘤内注射多聚凝胶包裹的反义寡核苷酸,其他每组均作相应的瘤内注射处理。利用多聚凝胶缓释反义寡核苷酸的作用,观察肿瘤的抑制情况、肿瘤病理和IGF-IR表达结果。结果反义核酸组用反义核苷酸开始治疗后的第1周、第2周和第3周,肿瘤的生长速度明显减慢,与空白对照组相比,抑制率分别为65.2%、76.38%和69.6%;而多聚凝胶组和正义核酸组肿瘤生长速度与空白对照组相比无明显差异,其抑制率在各时间点均低于10%。肿瘤的组织病理发现多聚凝胶组、正义核酸组如同空白对照组(野生型),肿瘤细胞密集分布,呈明显的恶性增殖表现,而反义核酸组肿瘤细胞稀疏,可见部分细胞呈凋亡改变,细胞染色质浓聚边缘化。在空白对照组(野生型)、多聚凝胶组和正义核酸组IGF-IR蛋白均呈高表达,而反义核酸组IGF-IR的表达明显减弱。结论IGF-IR的反义寡核苷酸对体内胶质瘤的生长具有明显的抑制作用,并能诱导部分肿瘤细胞凋亡。因此,IGF-IR可作为胶质瘤基因治疗的靶。