富血小板纤维蛋白修复牙种植体周围骨缺损的研究

采用牙种植术将36颗牙种植体植于6只杂种犬双侧下颌缺牙区,同时在种植体近中造3.5 mm×3.5 mm×3.5mm的骨缺损,然后填入β-TCP/PRF混合物、β-TCP,另设空白对照组(不做任何处理)于各骨缺损区,分别于种植术后4、8、12周各处死2只犬,行大体、X线及组织学观察各个时期各组骨缺损区的成骨情况。植入的36颗种植体无脱落,无明显不良并发症发生。β-TCP/PRF混合物是一种良好的骨修复材料,具有促进新骨形成的作用,有利于骨组织的愈合。     

葛根素体外影响骨生长的形态学研究

【目的】从组织学和形态学的角度综合考察葛根素在体外对骨吸收和骨形成的影响。【方法】16d胎龄雌性小鼠尺骨在含有葛根素的BGJb培养基中旋转培养4 8h后,测量骨总长和骨干长度;HE染色,光镜下计数破骨细胞和肥大软骨细胞。【结果】当葛根素浓度为10 -6～10 -4mol/L时,长骨总长均比对照组显著增加;破骨细胞减少,肥大软骨细胞增加。【结论】葛根素在体外可抑制骨吸收,促进骨形成。     

失重或模拟失重对骨形成影响的研究进展

随着航天事业的飞速发展,航空旅游甚至太空移民将不再是幻想,太空失重环境对人体健康影响的研究也显得越发重要。中长期飞行的失重环境会对机体多个器官系统产生影响,其中以心血管系统和骨骼系统影响最明显。本文根据近年来国内外相关领域的研究,主要就微重力环境对间充质干细胞增殖分化及成骨细胞形成、周期及功能等方面的影响作一简要综述。     

重组人甲状旁腺激素(1-34)对体外培养成骨细胞骨形成的作用

目的 体外观察重组人甲状旁腺激素[recombinant human parathyroid hormone（1-34）,rhPTH（1-34）]对成骨细胞骨形成的刺激作用。方法采用酶消化法分离获得大鼠成骨细胞,间隙加药方法给予rhPTH（1-34）,观察药物对成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。结果 10^-12～10^-8mol／L浓度对成骨细胞的增殖、分化和矿化功能均显示刺激作用。10^-11～10^-8mol／L浓度组的MTT、ALP的A值及矿化结节形态计量结果与对照组比较,具有显著性增加（P〈0．05）,增加率以10^-9mol／L浓度组为最高,并呈剂量一效应关系。结论 rhPTH（1-34）对体外培养成骨细胞的增殖、分化和矿化功能具有明显促进作用。     

复合阿伦磷酸钠骨水泥对成骨细胞的影响

目的：研究不同阿伦磷酸钠含量的骨水泥对成骨细胞的影响，确定复合阿伦磷酸钠骨水泥的细胞毒性。方
法：根据阿伦磷酸钠含量不同分成6组，在50 g Cemex®XL骨水泥粉末中分别加入0，10，50，100，500，1 000 mg阿伦
磷酸钠，依次命名为G0~G5组。通过电镜观察各组成骨细胞样MG-63的黏附能力，MTT比色法测定吸光度值，碱性磷
酸酶试剂盒测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase activity，AKP)活性，Annexin-V-FITC凋亡检测试剂盒测定凋亡率，相差
显微镜观察骨矿化情况。结果：各组MG-63细胞黏附能力良好；与G0组相比，G1~G4组抑制细胞凋亡，G5组促进细
胞凋亡和抑制细胞增殖(P<0.05)；各组特异性碱性磷酸酶活性、骨矿化能力差异无统计学意义(P>0.05)。结论：在50 g
骨水泥粉末中加入阿伦磷酸钠不超过500 mg对成骨细胞无毒性。     

成骨细胞的体外培养及其生物学特性

目的 :建立体外分离、培养兔和人成骨细胞的生物学模型 ,并对其生物学特性进行观察。方法 :抽取新西兰兔骨髓 ,采用全骨髓法培养 ;人髂骨松质骨经胰酶消化获得成骨细胞 ,以 1× 10 6 / ml的细胞浓度进行培养 ,约10 d左右得到贴壁生长的单层细胞。随后传代培养 ,对所获得的细胞进行生物学特性观察。 结果 :获得的细胞呈多种形态 ,有长短不一、粗细不均、互相连接的胞浆突起 ,细胞可相互重叠呈复层生长 ,并形成钙结节。经连续传代 ,细胞形态与功能不变 ,具有典型成骨细胞的生物学特性。结论:无论采用兔骨髓基质细胞全骨髓法 ,还是人松质骨经胰酶消化法均能在体外培养出大量高纯度成骨细胞 ,方法简便、易行 ,为成骨细胞复合生物降解材料移植修复骨缺损奠定了基础 ,而且培养的成骨细胞可作为生物学模型 ,供干预研究使用。     

骨组织工程中成骨细胞与细胞因子的研究

构建携带细胞因子和成骨细胞的组织工程化人工骨研究是骨组织工程研究的热点之一。本文综述了组织工程化人工骨构建中细胞因子的作用。以及成骨细胞的来源,分离和培养等的研究现状,并分析了各种细胞因子的相互作用及相关细胞因子转基因的研究进展。     

他汀类药物对成骨细胞功能的影响

目的验证不同浓度的辛伐他汀对人类成骨细胞(OB)功能表达和体外成骨能力的影响,研究雌激素促进成骨作用的机制及剂量效应关系.方法取成人的髂骨松质骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,获得松质骨中的成骨细胞,进行纯化和培养.在此基础上添加不同浓度的辛伐他汀(1×10-10,1×10-9,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×5-5mol/L)并进行培养.用生化法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,用放射免疫法测定细胞培养液中骨钙素(OC)和细胞间质的钙含量.结果辛伐他汀对成骨细胞ALP活性和骨钙素分泌的影响均呈正相关,即各浓度辛伐他汀对ALP活性、骨钙素的分泌和成骨细胞的成骨能力均有刺激作用,并与辛伐他汀剂量呈正相关.结论辛伐他汀能增加成骨细胞的ALP活性和骨钙素的产生,提高成骨细胞的成骨能力.     

Repairing cartilage defects using chondrocyte and osteoblast composites developed using a bioreactor

Background  Articular cartilage injury is a common disease, and the incidence of articular wear, degeneration, trauma and sports injury is increasing, which often lead to disability and reduced quality of life. Unfortunately repair of articular cartilage defects do not always provide satisfactory outcomes.

Methods  Chondrocyte and osteoblast composites were co-cultured using a bioreactor. The cartilage defects were treated with cell-β-tricalcium phosphate (β-TCP) composites implanted into osteochondral defects in dogs, in vivo, using mosaicplasty, by placing chondrocyte-β-TCP scaffold composites on top of the defect and osteoblast-β-TCP scaffold composites below the defect.

Results  Electron microscopy revealed that the induced chondrocytes and osteoblast showed fine adhesive progression and proliferation in the β-TCP scaffold. The repaired tissues in the experimental group maintained their thickness to the full depth of the original defects, as compared with the negative control group (q=12.3370, P <0.01; q=31.5393, P <0.01).

Conclusions  Perfusion culture provided sustained nutrient supply and gas exchange into the center of the large scaffold. This perfusion bioreactor enables the chondrocytes and osteoblasts to survive and proliferate in a three-dimensional scaffold.

     

唇腭裂患者髂骨髓质骨中成骨细胞的计数分析

目的:初步探讨成骨细胞在不同年龄唇腭裂患者髂骨髓质骨中的存在数量情况。方法:将唇腭裂手术患者按年龄分为3组:9～11岁组25例,12～18岁组33例,18岁以上组22例。将患者术中剩余的髂骨髓质骨制成HE染色切片,在显微镜下计数成骨细胞。结果:各年龄组患者中均未见大量成片聚集的细胞群,仅观察到散在的成骨细胞,数量较少。各年龄组间的成骨细胞计数无统计学差异。结论:不同年龄患者的成骨细胞数没有统计学差异。在静态髂骨中没有差异的成骨细胞数量,在成骨这个动态过程中,各年龄组是否表现出差异,还需进一步研究。     

二水磷酸氢钙涂层镁锌合金体内降解和新骨形成的研究

目的 研究二水磷酸氢钙涂层镁锌合金在体内的降解规律及其对新骨形成的影响.方法 72只新西兰大白兔均于左侧股骨髁钻孔,随机植入二水磷酸氢钙涂层镁锌合金棒(实验组,n=24)或镁锌合金棒(镁锌合金对照组,n=24)或聚乳酸棒(聚乳酸对照组,n=24).术前1 d及术后第1天和第1、2、5、10周时,检测实验组和镁锌合金对照组动物血清Mg~(2+)浓度.术后第3、6、12、18周时,植入处X线摄片检查;摄片后三组分别处死6只动物,采集并制备肝、肾组织标本,HE染色后观察组织病理学改变.术后18周时,行股骨髁组织切片HE染色和品红苦味酸染色,观察植入物降解情况并比较骨矿物质沉积率.结果 二水磷酸氢钙涂层组与镁锌合金对照组术前及术后各时间点的血清Mg~(2+)浓度比较,差异均无统计学意义(P>0.05).术后3周时,X线摄片观察发现镁锌合金对照组植入物旁有气泡产生.三组肝、肾组织学检查均未见明显异常.与两对照组相比,实验组骨矿物质沉积率较高,植入物的降解速度较慢.结论 二水磷酸氢钙涂层镁锌合金体内降解时间延长,生物相容性更优良.     

二水磷酸氢钙涂层镁锌合金体内降解和新骨形成的研究

目的 研究二水磷酸氢钙涂层镁锌合金在体内的降解规律及其对新骨形成的影响。方法 72只新西兰大白兔均于左侧股骨髁钻孔,随机植入二水磷酸氢钙涂层镁锌合金棒(实验组,n=24)或镁锌合金棒(镁锌合金对照组,n=24)或聚乳酸棒(聚乳酸对照组,n=24)。术前1 d及术后第1天和第1、2、5、10周时,检测实验组和镁锌合金对照组动物血清Mg2+浓度。术后第3、6、12、18周时,植入处X线摄片检查;摄片后三组分别处死6只动物,采集并制备肝、肾组织标本,HE染色后观察组织病理学改变。术后18周时,行股骨髁组织切片HE染色和品红苦味酸染色,观察植入物降解情况并比较骨矿物质沉积率。结果 二水磷酸氢钙涂层组与镁锌合金对照组术前及术后各时间点的血清Mg2+浓度比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。术后3周时,X线摄片观察发现镁锌合金对照组植入物旁有气泡产生。三组肝、肾组织学检查均未见明显异常。与两对照组相比,实验组骨矿物质沉积率较高,植入物的降解速度较慢。结论 二水磷酸氢钙涂层镁锌合金体内降解时间延长,生物相容性更优良。     

骨髓基质细胞体外成骨的实验研究

目的 研究骨髓基质细胞体外培养的成骨能力,为细胞移植修复骨缺损提供一条新途径。方法 取新西兰大白兔股骨大转子处骨髓,进行体外培养,纯化,10－14天后进行转代。培养后的细胞经倒置显微镜,透射地镜,钙染色,碱性磷酸酶染色等方法进行观察。结果 培养纯化后的细胞呈梭形,多角形,电镜显示具有分泌功能旺盛的结构,碱性磷酸酶染色强阳性,培养3－4周后,能形成钙结节。细胞在体外能多次传代,维持成骨表型。结论 骨髓基质细胞在体外培养纯化后,骨与成骨细胞相似的形态结构和生物学特性,能形成钙化的骨样组织。     

同种异体成骨细胞-煅烧骨复合物动物体内植入

目的 观察同种异体煅烧骨－成骨细胞复合物植入动物体内后成骨性能。方法 以牛松质骨制成煅烧骨（TBC）为载体，培养兔骨膜成内细胞（POB）构建复合物，把该复合物移植到BALB／c裸鼠皮下和兔臀部肌袋内，以单纯TBC植入做为对照，28d后取材，制成不脱钙组织切片、HE染色。结果 裸鼠实验组TBC材料内部：成纤维细胞大量增生。细胞排列紧密，形态多样，有的已变为软骨细胞，TBC表面有排列成行的成骨细胞环绕。组织间有散在淋巴细胞浸润。同时可见片状类骨质。兔子实验组TBC材料内部有结缔组织及细小血管长入，孔内充满软骨细胞并可软骨组织钙化、崩裂、成骨现象、有片状骨组织形成；而单纯TBC对照组孔隙内有大量结缔组织及细小血管长入，未见骨组织形成。结论 将TBC－POB材料植入体内后，成骨细胞能存活并产生软骨组织和骨组织。     

诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的 明确大鼠骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)在体外全骨髓培养条件下的生物学特性及其向成骨细胞分化的能力,探索更为简便有效的BMSCs体外培养方法.方法 提取大鼠原代BMSCs,用酠EM完全培养基和成骨诱导条件培养基体外培养,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态;台盼蓝活细胞计数绘制细胞生长曲线;ALP检测试剂盒检测ALP含量变化和von Kossa染色检测细胞矿化结节,以判断细胞是否向成骨细胞分化.结果 全骨髓培养法在体外培养的大鼠原代BMSCs贴壁生长,呈梭形或多角形;使用Dex-SaMEM向成骨诱导后的BMSCs具有与成骨细胞在体外培养时相似的特征,倍增时间延长;合成ALP能力显著增强(P<0.05),von Kossa染色出现阳性的棕褐色或棕黑色团块的钙化结节.结论 全骨髓培养法取材方便,经成骨诱导培养的BMSCs表现出成骨细胞的形态特征和生物学特性,该方法可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法.     

人骨髓成骨细胞培养法的改良及其体外成骨能力

目的：探讨简便、易行的人达成骨细胞体外培养方法,研究骨髓基质在体外培养条件下的成骨能力。方法：抽取人骨髓组织,梯度离心后置于含１００ｍＬ／Ｌ小牛血清的ＤＭＥＭ培养液中,培养２４小时换液,稳定伟代后改用含地塞米松和β－甘油磷酸钠的条件增大２液,用倒置显微镜观察、组织化学染色、四环素荧光标记等方法进行观察。结果：传代细胞４天～５天即可传代,在条件培养液中２ＷＫ形成多层结构,并聚集成黑色结节。培养细胞Ａ     

淫羊藿甙对成骨细胞凋亡的影响

目的 通过研究淫羊藿甙对体外培养的成骨细胞凋亡的影响,探讨淫羊藿甙防治骨质疏松的可能机制.方法 采用酶消化法和机械分离法获得新生SD大鼠成骨细胞,取第四代细胞随机分为,雌二醇组(1×10-8 mmol/l),淫羊藿甙低剂量组(1 ng/ml),中剂量组(10 ng/ml),高剂量组(100 ng/ml)对照组,经药物处理48 h后,用TUNEL和扫描电镜的方法检测成骨细胞的凋亡.结果 与对照组相比较,淫羊藿甙各剂量组的凋亡指数均下降(P<0.05),其中淫羊藿甙中剂量组的凋亡指数下降明显,差异有高度统计学意义(P<0.01);扫描电镜显示淫羊霍甙各组的凋亡细胞较对照组减少,尤以淫羊霍甙中剂量组最少.结论 淫羊藿甙可以通过抑制成骨细胞的凋亡,促进骨形成,减少骨吸收,从而发挥抗骨质疏松的作用.     

复合干细胞生物陶瓷在裸鼠异位成骨中的评价

目的 研究h-BMP-2基因转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)在复合煅烧骨、β-TCP或直接植入裸鼠股部后的成骨能力。方法 通过影像学、组织学和形态计量学等方法,观察未经诱导、OS液诱导和h-BMP-2基因转染BMSCs在复合煅烧骨,或多孔β-TCP后植入裸鼠皮下,或直接制成细胞悬液注入,在4、8、12周诱导成骨和材料降解情况。结果 在裸鼠皮下,单纯生物陶瓷不能诱导成骨,而复合了未诱导、OS液诱导和h-BMP-2基因转染BMSCs的生物陶瓷均能成骨,成骨量为h-BMP-2基因转染组>OS液诱导组>未经诱导组(P<0.05),B-TCP可随骨长入而降解;注入裸鼠肌肉的OS液诱导的和h-BMP-2转染的BMSCs均能诱导成骨,而未经诱导MSCs则不能成骨。结论 复合人BMP基因转染BMSCs的β-TCP是一种理想的骨修复材料。     

骨髓基质细胞的体外培养和分化诱导

目的 :建立一种简单可靠的骨髓基质细胞 (BMSc)向成骨细胞转化的体外培养方法 ,探讨骨髓基质细胞向成骨细胞转化的机理。 方法:将兔 BMSc悬液进行体外培养 ,进行形态学观察和组织学检测。 结果:传代培养细胞的碱性磷酸酶 (AL P)阳性率达 80 %以上 ,表现为成骨细胞形态并形成钙结节。结论:地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素 C可促进 BMSc分化为成骨细胞 ,BMSc的分化和增殖是两个对立的状态。